基于HIF-1α/VEGF-α信号通路探讨南续益母颗粒抑制胶原诱导型关节炎小鼠滑膜血管翳生成的作用机制

目的基于缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子α(VEGF-α)信号通路探讨南续益母颗粒(南蛇藤、续断、益母草、红景天等)抑制胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠滑膜血管翳生成的作用机制。方法将40只DBA/1雄性小鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg·kg^(-1))和南续益母颗粒组(12.33 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其余小鼠采用二次免疫法复制CIA小鼠模型。二次免疫后,南续益母颗粒组灌胃给药,每日1次,连续30 d;甲氨蝶呤组每3 d灌胃1次,连续30 d。采用关节炎指数(AI)评分评估小鼠关节炎症程度;采用HE染色法观察小鼠踝关节滑膜病理变化;番红固绿染色法观察小鼠踝关节软骨及骨质结构变化;Micro-CT三维重建观察小鼠踝关节骨皮质表面变化;采用全自动生化分析仪检测小鼠血清C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)水平;免疫组化法检测小鼠踝关节滑膜中血小板-内皮细胞黏附分子1(CD31)、HIF-1α、VEGF-α的表达。结果各组小鼠之间的血清AST、ALT、BUN、CR、RF水平无明显变化(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的踝关节及足面明显肿胀,活动度明显受限,AI评分显著升高(P<0.001),血清中的炎症指标CRP水平显著升高(P<0.001);踝关节可见显著滑膜增生(P<0.001)和炎性浸润(P<0.001),血管数量显著增加(P<0.001),踝关节可见显著软骨侵袭和骨破坏(P<0.001);踝关节骨质出现明显局灶性侵蚀,骨表面失去光滑及完整性,部分关节融合呈强直状;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达显著上调(P<0.001)。与模型组比较,甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠的踝关节及足面红肿均有改善,小鼠关节活动度基本正常,AI评分显著下降(P<0.01);甲氨蝶呤组小鼠血清CRP水平明显下降(P<0.05),南续益母颗粒组小鼠血清CRP水平有一定程度下降,但差异无统计学意义(P>0.05);甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠踝关节的滑膜增生和炎性浸润均明显减轻(P<0.05),血管数量显著减少(P<0.01,P<0.001),软骨侵袭明显改善(P<0.05),骨破坏程度明显减轻(P<0.05,P<0.01);踝关节骨质破坏程度明显减轻,骨表面轻度粗糙,小部分存在局灶性侵蚀;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论南续益母颗粒能够显著改善CIA模型小鼠关节肿胀症状及其病理变化,抑制踝关节滑膜血管翳形成,其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF-α信号通路激活相关。

青藤碱对胶原诱导型关节炎免疫抑制作用的机制研究

为证实青藤碱(SINO)抗关节破坏的作用,揭示其可能的作用途径,采用牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射。足肿后随机分为造模加生理盐水组、造模加雷公藤多苷(TG)治疗组和造模加SINO治疗组,容积法每天测量后肢肿胀度。给药后第35天,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价四肢关节骨侵蚀和关节间隙变化;取足趾关节和腹股沟淋巴结,HE染色,评价病理情况;培养原代滑膜细胞,放免法检测培养上清IL-6,RT-PCR检测IL-6 mRNA表达。结果显示,SINO和TG可明显抑制关节肿胀,骨侵蚀和关节间隙变化(P<0.01);抑制CIA大鼠滑膜增生、软骨破坏、淋巴结生发中心反应和髓索浆细胞浸润(P<0.01);降低滑膜细胞IL-6 mRNA和蛋白水平。提示SINO和TG具有抑制关节炎症和关节破坏的作用,其作用机制可能是减少IL-6的产生,抑制B细胞的激活和分化。

不同艾灸距离对Ⅱ型胶原诱导型关节炎疗效的影响

背景:有研究表明艾灸能够改善类风湿关节炎的关节症状、降低炎症反应,但艾灸操作缺乏标准。艾灸距离成为影响艾灸疗效的因素之一。目的:对比不同艾灸距离治疗类风湿关节炎的疗效差异,探索最佳灸距。方法:将40只雄性SD大鼠随机分出8只作为对照组,其他32只均造模处理。建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎模型大鼠,分别按不同艾灸距离1,2,3 cm灸"肾俞(BL23)"及"足三里(ST36)"穴,每日灸1次,每个穴位10 min,每个疗程为6 d,各疗程间休息1 d,总共干预3个疗程,同时设置模型组。结果与结论:(1)一般情况及炎性反应情况:模型组大鼠除体质量外,足趾容积、关节炎评分、血清白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平较对照组显著升高(P<0.01),艾灸干预后上述各指标艾灸各组较模型组均明显降低(P<0.01),并且艾灸1,2 cm组优于艾灸3 cm组(P<0.01);(2)踝关节组织学变化:模型组可见关节腔变窄、关节腔内可见炎细胞及血管翳形成,艾灸1,2,3 cm组可见中度炎细胞浸润,血管翳较少;(3)结果说明,艾灸在改善关节功能、调节免疫方面具有一定作用,可下调白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α的水平,减轻滑膜增生。艾灸距离为1或2 cm时,可提高艾灸的效果。

薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠RORγt、Foxp3的影响

目的探讨薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠的治疗作用及其机制。方法选用DBA1/J小鼠建立鸡Ⅱ型胶原诱导型关节炎小鼠模型(CIA),将造模成功的小鼠采用随机数字表法分为CIA模型组、薯蓣皂苷组、雷公藤多苷组,另设正常对照组,药物组于初次免疫后第21天开始灌胃给药,对照组和模型组给相同体积溶媒。初次免疫第35天处死小鼠,无菌取腹股沟淋巴结制成单细胞悬液,用实时荧光定量PCR技术检测Th17、Treg细胞特异性转录因子RORγt、Foxp3的表达情况。结果模型组与对照组相比,RORγt显著升高(P<0.05);2药物组与模型组相比RORγt显著下降(P<0.05);与模型组相比,薯蓣皂苷组Foxp3显著升高(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可以调节Th17、Treg细胞特异转录因子RORγt、Foxp3的平衡。

淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用

目的观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清破骨细胞分化因子(receptor activator of NFκB-ligand,RANKL)和护骨素(osteoprotegerin,OPG)的影响及对骨破坏的保护作用。方法除正常组(8只)外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型。选取关节炎指数(arthritis index,AI)≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周5mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20mg/(kg·d)灌胃,均连续给药4周。每周记录大鼠AI评分。给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平。结果给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻。结论淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关。

胶原诱导型关节炎大鼠的关节影像学特点

目的旨在分析CIA X线片四肢关节的破坏特点,揭示CIA大鼠关节破坏的规律,为规范评分方案提供依据。方法采用П型胶原和弗氏完全佐剂皮下注射清洁级Wistar大鼠,造模成功(每批10只,共3次)后第35天行全身X线钼靶照片,以正常组作为对照、每只大鼠评价96块骨破坏(erosion)和100个关节间隙(joint space narrowing,JSN);处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜增生和软骨破坏的情况。结果造模成功后CIA大鼠关节出现明显的红肿,活动受限;HE病理显示,CIA关节存在明显的中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,滑膜增生,纤维组织增生,软骨破坏;X线片分析结果显示:①广泛性骨质疏松,边缘性骨质侵蚀,关节间隙狭窄或增宽,部分踝关节间隙消失,关节相互融合甚至骨性强直。②67%的骨出现erosion,JSN影响为78%,关节破坏以中、重度为主;③远端、近端趾间关节和踝关节发病率高,损害严重,掌趾关节发病率低,破坏较轻。④后肢关节破坏重于前肢(P<0.01),左右肢没有显著性差异(P>0.05)。结论①滑膜是CIA炎症反应启动的主要病灶,与骨交界的滑膜和血管翳造成了CIA的骨质破坏;②CIA影像学表现关节破坏严重,以远端、近端趾间关节和踝关节为主,这些关节可作为评价破坏程度的选择。本研究对于深入CIA关节破坏的病因病理和进一步规范X线片评分方案具有一定意义。

青蒿琥酯对胶原诱导型关节炎大鼠的影响

目的:阐明青蒿琥酯治疗类风湿关节炎的作用及其机制。方法:SPF级Wistar雌鼠,随机分为正常对照、模型组、甲氨喋呤组、青蒿琥酯组,每组各10只。模型组和正常对照组按10 mL/(kg.d)以生理盐水灌胃,MTX剂量为7.6 mg/(kg.w),青蒿琥酯以60 mg/(kg.d)浓度给药。每日测足肿胀度。给药36 d后处死大鼠,取关节滑膜,用免疫组化检测IL-17表达水平。取后肢行X线检查,取左前肢和右后肢第3足趾行关节病理检测。结果:青蒿琥酯可明显抑制胶原诱哥型关节炎模型(CIA)大鼠肿胀、CIA大鼠淋巴细胞、滑膜细胞增生和软骨破坏及IL-17的阳性面积和着色强度。结论:青蒿琥酯能抑制CIA大鼠IL-17的表达,可能是其对RA等自身免疫性疾病产生治疗作用的机理。

非T细胞结合肽(FNS007)对胶原诱导型大鼠关节炎的影响

目的:探讨非T细胞结合肽(FNS007)对大鼠Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,CⅡ)诱导的关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)的影响及可能机制。方法:以牛CⅡ免疫Lewis大鼠诱发CIA模型后,随机分为模型组、FNS007低(0.25 mg/kg)、中(0.5 mg/kg)、高(1.0 mg/kg)剂量组及阳性药(甲氨蝶呤)组,另设空白对照组,尾静脉注射相应药物,隔天一次,空白对照组及模型组大鼠给予溶媒磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered solution,PBS)。实验期间观察踝关节宽度以及爪厚度,关节炎评分。给药后第22天处死大鼠,ELISA法测定血清中TNF-α、IFN-γ和IL-6的水平及抗CⅡ抗体水平;X光分析FNS007对CIA大鼠后爪骨损伤的疗效,并对大鼠踝关节进行组织病理学检查。结果:FNS007高剂量明显抑制CIA大鼠足爪肿胀程度,爪厚度和踝关节宽度明显降低;炎症评分明显降低;血清促炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的含量和抗CⅡ抗体的水平明显降低;X光评分和组织病理评分明显降低。FNS007中剂量和低剂量组的以上指标也有不同程度的改善。结论:FNS007对大鼠CIA具有治疗作用,其机制与其抑制T细胞活化,抑制CIA大鼠体内抗CⅡ的产生,并降低促炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的含量,从而抑制异常免疫反应有关。

沙利度胺与胶原诱导型关节炎大鼠炎症因子的表达

背景：研究表明,多种细胞因子与炎症递质参与类风湿关节炎的致病过程,沙利度胺作为一种免疫调节剂应用于风湿性疾病的治疗。目的：观察沙利度胺对胶原诱导型关节炎大鼠的关节炎症及血浆肿瘤坏死因子α表达的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为4组。除正常对照组外,其余3组多点皮内注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂诱导出关节炎模型。从免疫后第10天开始,正常对照组和单纯造模组大鼠给予蒸馏水灌胃;沙利度胺组给予沙利度胺灌胃;甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤灌胃。实验前及实验7,14,21,28,35,42,60d测定各组的大鼠不同时间点的足爪厚度、血浆肿瘤坏死因子α浓度,进行踝关节病理评分和放射学检查。结果与结论：沙利度胺可以有效减轻胶原诱导型性关节炎大鼠足爪肿胀程度,造模后第28天单纯造模组足爪厚度值大于沙利度胺组（P〈0.05）。与造模组比较,沙利度胺组肿瘤坏死因子α浓度在造模后14d降低（P〈0.05）。沙利度胺组14~60d病理积分均显著低于造模组;沙利度胺组出现骨骼改变的平均时间明显晚于单纯造模组（P〈0.01）,且关节破坏程度较轻。沙利度胺组和甲氨蝶呤组各指标差异无显著性意义。结果证实,沙利度胺可以通过影响肿瘤坏死因子α的表达,抑制滑膜炎症及周围组织破坏,有效减轻胶原诱导型性关节炎大鼠关节的炎症程度。

环瓜氨酸肽对胶原诱导型关节炎大鼠淋巴细胞体外增殖作用的研究

目的观察环瓜氨酸肽(CCP)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠淋巴细胞激活的影响,探讨CCP在类风湿关节炎(RA)发病中的作用。方法建立CIA大鼠模型,分别在建模1、2……8周后,体外分离、培养大鼠脾淋巴细胞,用CCK-8法检测CCP对淋巴细胞增殖反应的影响,并分析CCP特异性T淋巴细胞增殖反应与关节炎症指数、成模时间及抗CCP抗体之间的相关性。结果建模2周后,CCP抗原特异性T细胞即出现明显增殖反应,与0周组大鼠比较,差异有统计学意义(P均<0.01);T细胞增殖反应与病程、关节炎症指数显著相关(P<0.05),与抗CCP抗体水平也显著正相关(P<0.01)。结论 CCP可刺激CIA大鼠脾淋巴细胞的体外增殖,此作用在建模早期即可出现,提示瓜氨酸化抗原可能在早期即参与了RA的发病。

通痹灵对于胶原诱导型关节炎大鼠关节炎及骨质破坏的影响

目的研究通痹灵对于胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎以及骨质破坏的影响。方法采用CIA大鼠动物模型,容积法测量足肿胀度,血小板计数,整体X线片分析骨质破坏情况。结果通痹灵高剂量明显减轻CIA大鼠的关节炎所致的足肿胀和降低血小板总数(P<0.05),通痹灵高剂量和甲氨喋呤高剂量可抑制CIA大鼠骨质破坏(P<0.05)。结论通痹灵可通过降低CIA大鼠血小板总数,减轻关节的炎症,并且具有抑制骨质破坏的作用。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨通痹胶囊对胶原诱导型关节炎治疗机制的研究

目的:基于TLR4/NF-κB信号通路研究通痹胶囊对胶原诱导型关节炎(CIA)的治疗机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤组(0. 01 g/kg)和通痹胶囊低(0. 075 g/kg)、中(0. 150 g/kg)、高(0. 300 g/kg)剂量组,每组8只;使用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠CIA模型;采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测滑膜组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常大鼠相比,模型大鼠关节肿胀度均显著升高,通痹胶囊治疗后关节肿胀度显著降低,模型组滑膜组织增生明显,炎症细胞浸润,关节软骨破坏,通痹胶囊治疗明显改善滑膜组织的增生,降低炎症细胞的浸润;模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平显著升高,通痹胶囊处理后显著降低血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达;与通痹胶囊高剂量组相比,TLR4激动剂处理显著提高血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结论:通痹胶囊可以通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低炎性反应,显著改善CIA症状。

胶原诱导型关节炎模型大鼠血浆血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α表达及反应停的干预效应

目的:观察胶原诱导型关节炎大鼠病程及致病过程中两种重要炎性因子血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α在反应停干预后的影响。方法:实验于2006-01/07在河北医科大学第二医院完成。成年雄性Wistar大鼠112只,体质量140～160g,随机数字表法分为为正常对照组、单纯造模组、反应停治疗组和甲氨蝶呤治疗组,每组28只。除正常对照组外,其余3组多点皮内注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂,诱导出关节炎模型。正常对照组作为阴性对照组每只大鼠背部及尾根部多点皮内注射等量的生理盐水。从免疫后第10天开始,正常对照组和单纯造模组大鼠给予蒸馏水0.5mL/(只·d)灌胃;反应停治疗组给予反应停200mg/(kg·d)灌胃;甲氨蝶呤治疗组给予甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周)灌胃。测定造模后7,14,21,28,35,42,60d不同时间点各组大鼠的足爪厚度、血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子的水平,进行统计学分析。结果:纳入大鼠112只,均进入结果分析。①各组大鼠足爪肿胀程度:实验前各组大鼠之间足爪厚度无显著差异[(5.47±0.14),(5.33±0.10),(5.92±0.24),(5.35±0.23)mm,P>0.05]。与正常对照组比较,单纯造模组、反应停治疗组及甲氨蝶呤治疗组大鼠足爪厚度均于造模后7d开始增高,21d左右达到肿胀高峰,差异有显著性意义[7d:(5.42±0.24),(5.81±0.15),(6.59±0.31),(5.54±0.33)mm;21d:(5.73±0.23),(10.78±0.53),(9.82±0.34),(10.37±0.57)mm,P<0.01]②各组大鼠血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平及两者关系:实验前各组血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平均无显著差异[(2.351±0.208),(2.331±0.213),(2.280±0.171),(2.283±0.125)nmol/L;(1.807±0.094),(1.811±0.099),(1.819±0.101),(1.813±0.090)nmol/L;P>0.05],与正常对照组相比,单纯造模组、反应停治疗组及甲氨蝶呤治疗组大鼠两者水平于造模后7d开始增高,差异具有显著性意义[(2.245±0.234),(2.450±0.026),(2.419±0.069),(2.467±0.032)nmol/L;(1.803±0.099),(2.024±0.049),(2.017±0.101),(2.055±0.056)nmol/L;P<0.05]。两者水平呈直线相关。结论:反应停可以降低关节炎模型大鼠血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子浓度,可以有效减轻其足爪肿胀程度,疗效与甲氨蝶呤相同。

THH对胶原诱导型关节炎小鼠Th17细胞及细胞因子的影响

目的通过观察昆明山海棠(Tripterygium hypoglaucum hutch,THH)对胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠Th17细胞及相关炎性细胞因子的影响,探讨THH治疗类风湿关节炎的相关免疫学机制。方法 30只健康雄性C57BL/6小鼠随机选取10只作为正常对照组,剩余20只用于制备CIA小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、THH治疗组,每组9只。通过观测小鼠体质量、关节炎指数评分、关节肿胀程度及HE染色了解THH治疗情况,利用流式细胞术、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及ELISA观察THH对CIA小鼠Th17细胞及IL-17A的影响,并使用GraphPad软件对结果进行分析。结果CIA模型组小鼠体质量与THH治疗组间无统计学差异;关节炎指数评分及关节肿胀程度CIA模型组均高于THH治疗组;HE染色显示THH治疗组关节炎的炎症较模型组减轻,骨损伤减少。流式结果显示,脾脏Th17细胞比例CIA模型组低于正常对照组(P<0.01),THH治疗组高于CIA模型组(P<0.05)。CIA模型组踝关节及血清中IL-17A表达明显高于正常对照组(P<0.01),THH治疗组中的表达量低于CIA模型组(P<0.05)。结论 THH可通过升高CIA小鼠外周免疫器官Th17细胞比例、降低关节组织及血清IL-17A表达水平,从而减轻关节炎的炎症反应,减少关节骨损伤。

CCK-8对胶原诱导型关节炎小鼠滑膜组织TNF-α、IL-6的影响

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)治疗类风湿关节炎(RA)的可行性及机制。方法 DBA/1J小鼠60只,随机分为CCK-8高、中、低剂量组和对照组各15只。将CII完全乳化液于小鼠尾根部皮内多点注射(100μl/只),第21天再次同剂量追加免疫一次,建立CIA模型。于第二次增强免疫同时,对照组腹腔注射生理盐水100μl/只;CCK-8高、中、低剂量组腹腔分别注射CCK-8 1、5、10 nmol/只,每天注射1次,连续注射7 d。采用酶联免疫反应法检测各组关节滑膜组织TNF-α和IL-6水平。结果 CCK-8各剂量组关节组织TNF-α和IL-6水平均明显低于对照组;中、高剂量组明显低于低剂量组(P均<0.05)。结论 CCK-8能降低CIA小鼠TNF-α和IL-6水平,此可能是其治疗RA的机制之一。

风湿痹痛方对胶原诱导型关节炎大鼠血清细胞因子及滑膜组织Fas/FasL mRNA表达的影响

目的观察风湿痹痛方对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠血清细胞因子及滑膜组织Fas/Fas L m RNA表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法采用大鼠足部皮内注射牛Ⅱ型胶原乳化剂方法建立CIA模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组、雷公藤多苷组和风湿痹痛方低、中、高各剂量组,各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d。观察各组大鼠体质量和关节炎评分;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-15、转化生长因子(TGF)-β1含量;RT-PCR检测滑膜组织Fas、Fas L的m RNA表达。结果与模型组比较,风湿痹痛方中、高剂量组大鼠足部关节炎评分和血清IL-15含量显著降低,TGF-β1含量显著升高(P<0.01),风湿痹痛方高剂量组Fas m RNA表达显著降低,Fas L m RNA表达显著升高(P<0.05)。结论风湿痹痛方对CIA有一定的免疫调节作用,其机制可能是通过调控Fas/Fas L凋亡系统,诱导滑膜组织细胞凋亡,抑制滑膜增生。

脐带间充质干细胞移植对胶原诱导型关节炎大鼠炎性趋化因子表达的影响

目的观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)移植对胶原诱导型关节炎(collagen typeⅡ-induced arthritis,CIA)大鼠模型血清中:血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,初步探讨UC-MSC移植对CIA大鼠炎性趋化因子的调节作用。方法采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型,经大鼠尾静脉注射UC-MSC;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠干预前后血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平变化。结果模型组血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平均明显高于同期空白对照组(P<0.05);经UC-MSC治疗组上述炎症因子水平逐渐降低,至第5周上述指标均接近空白对照组(P<0.05)。结论 CIA大鼠存在免疫功能紊乱,其炎症趋化因子水平显著增高;UC-MSC能下调CIA大鼠炎症趋化因子水平,减轻机体免疫性炎症反应,促进疾病缓解,改善预后。

解毒通络法对胶原诱导型关节炎大鼠炎性因子的作用

目的探讨解毒通络法对类风湿关节炎病理进展中炎性因子的控制作用。方法复制胶原诱导型关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)大鼠模型,随机分为空白对照组,模型对照组,清痹片低剂量组、中剂量组、高剂量组,并以甲氨蝶呤治疗组作为阳性对照组,致炎第21天起每天给药干预。分别于35d和49d各处死一半动物,取踝关节行免疫组化法实验检测转化生长因子β1(TGFβ1)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP-3),比较各组间各炎性因子蛋白表达的差异。结果成功复制CIA模型,模型组TGFβ1、TNFα、IL-1β蛋白表达水平较空白组升高(P<0.01);清痹片各剂量组TGFβ1、TNFα、IL-1β及MMP-3表达水平均低于模型组,且显示出一定的量效关系;清痹片高剂量组TNFα、IL-1β、MMP-3表达水平低于MTX组(P<0.01),清痹片中剂量组与MTX比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论证明活血通络法能明显下调胶原诱导型关节炎病变关节TGFβ1、TNFα、IL-1β及MMP-3水平,减轻炎症症状,控制类风湿关节炎的病理进展。

黄芪桂枝五物汤对胶原诱导型关节炎大鼠的作用机制研究

目的:探讨黄芪桂枝五物汤对胶原诱导型关节炎大鼠的作用机制。方法:选用Wistar大鼠60只,随机分为6组:正常组,模型组,治疗组(HGW低剂量、中剂量、高剂量),阳性对照组(枸橼酸托法替尼),以牛Ⅱ型胶原加弗氏完全佐剂建立胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,测定大鼠经治疗30天后血液流变性;用酶联法测定血清IL-1β、GM-CSF、IL-3的变化。结果:与正常组相比,模型组大鼠造模4周后在30/s、1/s切变率下的全血黏度、200/s血浆黏度、红细胞聚集指数及血清IL-1β均显著升高(P﹤0.01),血清GM-CSF和IL-3显著降低(P﹤0.01);与模型组比较,黄芪桂枝五物汤中、高剂量组在全血黏度、IL-1β水平均显著降低(P﹤0.01或P﹤0.05),GM-CSF、IL-3水平均显著升高(P﹤0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组及CP690550组在200/s、30/s切变率下的全血黏度、红细胞聚集指数水平均显著降低(P﹤0.05),高剂量组在GM-CSF水平与低剂量组之间有显著性差异(P﹤0.05),以200/s切变率下的血浆黏度水平来看,高剂量组治疗效果优于低剂量组。结论:黄芪桂枝五物汤能够改善CIA大鼠关节的炎症反应,其作用机制可能是通过改善血液循环而达到降低炎症反应的,且与剂量有一定关系。

二仙除痹汤对大鼠胶原诱导型关节炎的影响

目的探讨二仙除痹汤对大鼠胶原诱导型关节炎(CIA)的作用及机制。方法取健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组及二仙除痹汤低、高剂量组,除正常组外其余各组建立大鼠CIA模型。二仙除痹汤低、高剂量组于造模后第7日起分别给予二仙除痹汤8、16 g/kg灌胃,每日1次,连续4周。评估发病率及临床积分,观察关节组织病理形态和放射学改变,检测关节组织匀浆上清和血清中促炎细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α以及血清炎症介质前列腺素(PG)E2的含量变化。结果模型组大鼠CIA发病率100%,关节炎最高临床积分8.2,踝关节出现明显的炎症细胞浸润、血管翳形成、软骨和骨破坏等组织病理学变化以及关节间隙狭窄或增宽、关节面虫蚀样破坏等影像学改变,关节和血清中IL-1β、TNF-α、IL-6以及血清PGE2含量明显升高。与模型组相比,二仙除痹汤低、高剂量组可显著降低关节炎的发病率(分别为60%、40%)、临床积分(分别为5.7、3.8)和改善关节组织病理学改变,二仙除痹汤高剂量组还能明显抑制骨破坏程度,降低关节和血清中IL-1β、TNF-α、IL-6及PGE2的含量,二仙除痹汤低剂量组的亦显著抑制血清中IL-1β、IL-6以及关节中IL-6的含量。结论二仙除痹汤能控制大鼠CIA病情的发生发展,其机制可能与对系统和关节局部促炎细胞因子和炎症介质的有效抑制有关。