成纤维细胞生长因子受体1 抑制剂对胶原诱导关节炎模型大鼠骨破坏的影响

背景:课题组前期的研究表明靶向成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)可能是治疗类风湿性关节炎的有效靶点。目的:探讨FGFR1抑制剂(PD173074)对胶原诱导关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将25只雌性SD大鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、甲氨蝶呤组、PD173074低剂量组、PD173074高剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。造模成功后正常组及模型组大鼠腹腔注射无菌PBS,甲氨蝶呤组药物注射剂量为1.04 mg/kg,PD173074低剂量组和高剂量组药物注射剂量分别为5,20 mg/kg,1次/周。给药4周后取材,观察大鼠临床症状以及关节肿胀情况,踝关节Micro-CT三维重建及分析,观察踝关节病理变化,检测关节周围血管生成情况及核因子κB受体活化因子配体的表达,检测关节滑膜中p-FGFR1、血管内皮生长因子A、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达,观察肝、脾、肾病理变化并计算肝、脾、肾指数。结果与结论:①PD173074能够减轻模型大鼠踝关节临床症状及关节肿胀,延缓骨质丢失,改善骨结构,减轻关节滑膜侵袭以及软骨骨侵蚀,降低关节周围破骨细胞数量,抑制关节滑膜组织中的血管生成,降低核因子κB受体活化因子配体的表达,抑制FGFR1磷酸化蛋白、抗酒石酸酸性磷酸酶和血管内皮生长因子A的蛋白表达。②大鼠肝、脾、肾病理观察表明经过PD173074治疗后无明显的毒副作用。③研究证明了FGFR1抑制剂能够延缓Ⅱ型胶原诱导关节炎模型大鼠关节炎症及骨破坏的进展,并抑制血管的生成。初步验证了PD173074在Ⅱ型胶原诱导关节炎模型中的治疗作用,其可能是通过抑制FGFR1磷酸化发挥作用,为寻找类风湿性关节炎新的治疗靶点提供了方向。

性别差异对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型的影响

目的构建雌性及雄性牛Ⅱ胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,比较性别差异对CIA模型关节及关节外表现的影响。方法选用雌性及雄性SD大鼠并注射牛Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂诱导CIA模型,评估各组大鼠的一般情况、关节炎指数、足肿胀度、血清炎症因子及纤溶酶原激活物抑制剂水平、脾指数、膝关节及踝关节病理、右后足爪骨破坏情况、肺间质病变情况。结果雌性CIA大鼠的关节炎指数在初次免疫后第21天较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05),但两组足肿胀度在观察的任一时间点均无显著差异(P>0.05);雌性CIA大鼠血清肿瘤坏死因子α、白介素1β和脾指数均较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05,P<0.001),纤溶酶原激活物抑制剂水平无显著差异(P>0.05);雌性CIA大鼠膝关节和踝关节病理的炎症细胞浸润及滑膜增生评分较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05),雌性CIA大鼠膝关节软骨损伤及右后足爪骨破坏程度均较雄性显著升高(P<0.05);雌性和雄性CIA大鼠均出现了肺间质炎症细胞浸润及轻度纤维化,但雌性比雄性的肺间质病变更重。结论使用SD大鼠构建的雌性及雄性CIA模型均能兼具关节炎及肺间质病变,但雌性CIA大鼠的病变程度更重,在使用CIA模型进行RA相关研究时应关注性别差异带来的影响。

诃子水提物通过上调PD-1/PD-L1表达调节胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏中细胞的细胞免疫减轻关节炎症

目的研究诃子水提取物(TCWE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠细胞免疫及程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)通路的影响。方法SD大鼠随机分为对照组、CIA组、TCWE处理组、甲氨蝶呤(MTX)处理组,每组15只。除对照组外,其余各组SD大鼠皮下注射Ⅱ型胶原蛋白制备胶原蛋白诱发关节炎(CIA)模型,TCWE组大鼠采用[20 mg/(kg·d)]TCWE处理,MTX组大鼠采用[1.67 mg/(kg·d)]MTX处理。处理14 d后,通过HE染色检查软骨形态,流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞凋亡和调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比率,反转录PCR检测脾脏中的维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒转录因子P3(FOXP3)、PD-1和PD-L1的mRNA表达,免疫组织化学染色检测RORγt、FOXP3的表达和定位。Western blot法检测脾脏淋巴细胞的PD-1和PD-L1的蛋白表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平。结果与CIA组相比,TCWE组和MTX组的软骨和滑膜病变明显减轻,脾脏中的T淋巴细胞凋亡率增加,Treg/Th17细胞比率上调,RORγt的表达降低,FOXP3、PD-1和PD-L1的表达增加。血清IL-17水平降低,血清TGF-β水平升高。结论TCWE处理可能激活脾脏细胞的PD-1/PD-L1通路调节CIA大鼠脾脏中细胞的细胞免疫,减轻软骨损伤。

基于HIF-1α/VEGF-α信号通路探讨南续益母颗粒抑制胶原诱导型关节炎小鼠滑膜血管翳生成的作用机制

目的基于缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子α(VEGF-α)信号通路探讨南续益母颗粒(南蛇藤、续断、益母草、红景天等)抑制胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠滑膜血管翳生成的作用机制。方法将40只DBA/1雄性小鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg·kg^(-1))和南续益母颗粒组(12.33 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其余小鼠采用二次免疫法复制CIA小鼠模型。二次免疫后,南续益母颗粒组灌胃给药,每日1次,连续30 d;甲氨蝶呤组每3 d灌胃1次,连续30 d。采用关节炎指数(AI)评分评估小鼠关节炎症程度;采用HE染色法观察小鼠踝关节滑膜病理变化;番红固绿染色法观察小鼠踝关节软骨及骨质结构变化;Micro-CT三维重建观察小鼠踝关节骨皮质表面变化;采用全自动生化分析仪检测小鼠血清C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)水平;免疫组化法检测小鼠踝关节滑膜中血小板-内皮细胞黏附分子1(CD31)、HIF-1α、VEGF-α的表达。结果各组小鼠之间的血清AST、ALT、BUN、CR、RF水平无明显变化(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的踝关节及足面明显肿胀,活动度明显受限,AI评分显著升高(P<0.001),血清中的炎症指标CRP水平显著升高(P<0.001);踝关节可见显著滑膜增生(P<0.001)和炎性浸润(P<0.001),血管数量显著增加(P<0.001),踝关节可见显著软骨侵袭和骨破坏(P<0.001);踝关节骨质出现明显局灶性侵蚀,骨表面失去光滑及完整性,部分关节融合呈强直状;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达显著上调(P<0.001)。与模型组比较,甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠的踝关节及足面红肿均有改善,小鼠关节活动度基本正常,AI评分显著下降(P<0.01);甲氨蝶呤组小鼠血清CRP水平明显下降(P<0.05),南续益母颗粒组小鼠血清CRP水平有一定程度下降,但差异无统计学意义(P>0.05);甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠踝关节的滑膜增生和炎性浸润均明显减轻(P<0.05),血管数量显著减少(P<0.01,P<0.001),软骨侵袭明显改善(P<0.05),骨破坏程度明显减轻(P<0.05,P<0.01);踝关节骨质破坏程度明显减轻,骨表面轻度粗糙,小部分存在局灶性侵蚀;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论南续益母颗粒能够显著改善CIA模型小鼠关节肿胀症状及其病理变化,抑制踝关节滑膜血管翳形成,其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF-α信号通路激活相关。

程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路激活减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠炎症

目的探索程氏蠲痹汤(JBT)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠治疗的可能机制。方法将雌性SD大鼠分为正常组、CIA模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、不同剂量JBT组、LY294002(PI3K阻断剂)组。评估JBT对实验大鼠治疗前后足趾肿胀度、关节炎指数测定的影响,HE染色检测滑膜组织病变情况,ELISA检测大鼠滑膜组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin-1、P62的mRNA表达水平,Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、mTOR、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、PI3K、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、P62、beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白表达。结果与正常组相比,给药前1 h,其余各组大鼠足趾明显肿胀。与给药前1 h相比,高剂量JBT组、MTX组、LY294002组给药30 d后,采血前2 h足趾肿胀明显缓解。JBT能显著减轻大鼠足趾肿胀度、关节炎指数评分、滑膜组织的破坏。高剂量JBT组大鼠滑膜样本IL-1β、TNF-α水平以及PI3K、AKT、mTOR、P62的mRNA表达水平降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白水平明显降低,beclin-1 mRNA和蛋白表达、LC3B蛋白水平明显升高。结论JBT可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活减轻关节炎症,高剂量JBT的治疗效果与MTX、LY294002的治疗效果相当。

胶原诱导型关节炎模型大鼠血浆血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α表达及反应停的干预效应

目的:观察胶原诱导型关节炎大鼠病程及致病过程中两种重要炎性因子血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α在反应停干预后的影响。方法:实验于2006-01/07在河北医科大学第二医院完成。成年雄性Wistar大鼠112只,体质量140～160g,随机数字表法分为为正常对照组、单纯造模组、反应停治疗组和甲氨蝶呤治疗组,每组28只。除正常对照组外,其余3组多点皮内注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂,诱导出关节炎模型。正常对照组作为阴性对照组每只大鼠背部及尾根部多点皮内注射等量的生理盐水。从免疫后第10天开始,正常对照组和单纯造模组大鼠给予蒸馏水0.5mL/(只·d)灌胃;反应停治疗组给予反应停200mg/(kg·d)灌胃;甲氨蝶呤治疗组给予甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周)灌胃。测定造模后7,14,21,28,35,42,60d不同时间点各组大鼠的足爪厚度、血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子的水平,进行统计学分析。结果:纳入大鼠112只,均进入结果分析。①各组大鼠足爪肿胀程度:实验前各组大鼠之间足爪厚度无显著差异[(5.47±0.14),(5.33±0.10),(5.92±0.24),(5.35±0.23)mm,P>0.05]。与正常对照组比较,单纯造模组、反应停治疗组及甲氨蝶呤治疗组大鼠足爪厚度均于造模后7d开始增高,21d左右达到肿胀高峰,差异有显著性意义[7d:(5.42±0.24),(5.81±0.15),(6.59±0.31),(5.54±0.33)mm;21d:(5.73±0.23),(10.78±0.53),(9.82±0.34),(10.37±0.57)mm,P<0.01]②各组大鼠血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平及两者关系:实验前各组血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平均无显著差异[(2.351±0.208),(2.331±0.213),(2.280±0.171),(2.283±0.125)nmol/L;(1.807±0.094),(1.811±0.099),(1.819±0.101),(1.813±0.090)nmol/L;P>0.05],与正常对照组相比,单纯造模组、反应停治疗组及甲氨蝶呤治疗组大鼠两者水平于造模后7d开始增高,差异具有显著性意义[(2.245±0.234),(2.450±0.026),(2.419±0.069),(2.467±0.032)nmol/L;(1.803±0.099),(2.024±0.049),(2.017±0.101),(2.055±0.056)nmol/L;P<0.05]。两者水平呈直线相关。结论:反应停可以降低关节炎模型大鼠血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子浓度,可以有效减轻其足爪肿胀程度,疗效与甲氨蝶呤相同。

甘草附子汤对胶原诱导性关节炎小鼠Th17和Treg细胞的影响

目的探讨甘草附子汤(Gancaofuzi decoction,GCFZ)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)和调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)失衡的调节作用。方法该研究包括4组小鼠:正常对照组(Control组),模型对照组(CIA组),GCFZ 2.4 g·kg^(-1)组和GCFZ 4.8 g·kg^(-1)组。检测各组小鼠足肿胀度、关节炎指数;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠踝关节组织病理学变化;流式细胞仪检测脾脏Th17和Treg细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清白介素17(interleukin-17,IL-17)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素10(interleukin-10,IL-10)水平。结果与正常组比较,CIA组小鼠关节肿胀明显,关节炎评分显著上升(P<0.05);滑膜侵袭严重,关节软骨和骨破坏显著;Th17细胞百分比上调(P<0.05),Treg细胞百分比下调(P<0.05);血清IL-17、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.05),而IL-10水平无明显差异(P>0.05);与CIA组比较,GCFZ各剂量组小鼠关节肿胀明显缓解,关节炎评分显著降低(P<0.05或P<0.01);滑膜的侵袭以及关节软骨破坏明显减轻。Th17细胞百分比下调(P<0.05),Treg细胞百分比上调(P<0.05);血清IL-17、IL-6和TNF-α水平显著降低,而IL-10水平明显升高(P<0.05)。结论GCFZ对CIA小鼠具有治疗作用,并调节血清中相关的细胞因子水平。潜在机制可能是通过恢复CD_(4)^(+)T淋巴细胞亚群Th17/Treg的失衡来介导的。

胶原诱导型大鼠类风湿关节炎模型的制备

目的探讨改良胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型的制备及鉴定方法;方法将Ⅱ型胶原溶液与等体积完全弗氏佐剂在冰浴状态充分乳化制成Ⅱ型胶原乳剂,将Ⅱ型胶原乳剂注射到大鼠的足跖部皮下,首次免疫一侧一次注入Ⅱ型胶原乳剂0.2 ml,7天后用同样方法加强免疫。造模第21天对观察大鼠的关节炎表现进行关节炎指数评分及组织病理学检查。结果造模组大鼠足跖部出现肿胀,关节明显红肿增粗,活动受限。造模组与正常组关节炎评分比较,P<0.05,两组有显著差异。HE染色,造模组滑膜细胞水肿,有3～5层明显增生,细胞排列不整齐,滑膜组织中有大量的炎性细胞浸润。结论探讨改良的CIA模型能反映类风湿关节炎的临床表现,可以为临床治疗做出理论依据。

青藤碱对胶原诱导型关节炎免疫抑制作用的机制研究

为证实青藤碱(SINO)抗关节破坏的作用,揭示其可能的作用途径,采用牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射。足肿后随机分为造模加生理盐水组、造模加雷公藤多苷(TG)治疗组和造模加SINO治疗组,容积法每天测量后肢肿胀度。给药后第35天,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价四肢关节骨侵蚀和关节间隙变化;取足趾关节和腹股沟淋巴结,HE染色,评价病理情况;培养原代滑膜细胞,放免法检测培养上清IL-6,RT-PCR检测IL-6 mRNA表达。结果显示,SINO和TG可明显抑制关节肿胀,骨侵蚀和关节间隙变化(P<0.01);抑制CIA大鼠滑膜增生、软骨破坏、淋巴结生发中心反应和髓索浆细胞浸润(P<0.01);降低滑膜细胞IL-6 mRNA和蛋白水平。提示SINO和TG具有抑制关节炎症和关节破坏的作用,其作用机制可能是减少IL-6的产生,抑制B细胞的激活和分化。

藏药麻花秦艽醇提物对胶原诱导型关节炎模型小鼠滑膜组织中NF-κBp65表达的影响

目的:考察藏药麻花秦艽醇提物(GSM)对胶原诱导型关节炎(CIA)模型小鼠滑膜组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)表达的影响,为阐明其抗类风湿关节炎(RA)的作用机制提供参考。方法:将40只小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(阳性对照,0.25 mg/kg)和GSM低、高剂量组(25、50 mg/kg,以生药量计),每组8只。除正常组外,其余各组小鼠均于尾根部多点皮内注射鸡Ⅱ型胶原制备CIA模型。自造模当日起,给药组小鼠每天灌胃相应药物1次,正常组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水,连续给药28 d。给药后7、14、21、28、35 d,测定各组小鼠的关节炎指数(AI);给药结束后,测定各组小鼠的脾指数和胸腺指数,采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,苏木精-伊红染色后观察小鼠踝关节滑膜组织病理学变化,并采用Western blot法检测小鼠滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠在给药不同时间后的AI值、脾指数、胸腺指数、血清中炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)以及滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);小鼠踝关节滑膜组织出现细胞排列密集且紊乱、滑膜细胞数量增加、充血等病理学变化。与模型组比较,除GSM低剂量组小鼠在给药7、14 d的AI值降低不显著外,各给药组小鼠其余指标水平均显著降低(P<0.05);各给药组小鼠踝关节滑膜组织的充血程度减轻、炎性细胞数量减少。结论:GSM可能通过降低血清中炎症因子水平,抑制滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达,进一步减轻滑膜炎症而发挥其抗RA的作用。

Ⅱ型胶原蛋白酶诱导SD大鼠膝骨关节炎模型的建立

目的建立Ⅱ型胶原蛋白酶诱导的SD大鼠膝骨关节炎模型。方法将SD大鼠20只随机分为A组和B组,每组10只。分别于第1、4天给予A组大鼠膝关节腔内注射Ⅱ型胶原蛋白酶,予B组大鼠膝关节腔内注射生理盐水进行造模。观察两组大鼠第1、3和7天体重的变化,以及第1、4、7天膝关节直径的变化,测定第7天大鼠处死后脾脏、胸腺重量和脏器系数,HE染色观察光镜下膝关节组织的一般形态。结果造模后,A组的体重呈下降、减少趋势,B组的体重呈上升、增长趋势。造模后第3、7天,A、B组间体重比较差异有统计学意义。A组造模后的膝关节直径明显大于造模前,前后比较差异有统计学意义(P<0.01)。B组造模后的膝关节直径与造模前差异无统计学意义(P>0.05)。A组造模后的膝关节直径大于B组,差异有统计学意义(P<0.01)。关节组织HE染色光镜下观察显示,A组的关节呈早期骨关节炎的表现,而B组的关节组织无骨关节炎的表现。结论Ⅱ型胶原蛋白酶可成功建立SD大鼠早期膝骨关节炎模型。体重、膝关节直径、脾脏和胸腺重量、脏器系数及膝关节组织病理这几个指标有助于此模型生理病理特点的观察。

不同艾灸距离对Ⅱ型胶原诱导型关节炎疗效的影响

背景:有研究表明艾灸能够改善类风湿关节炎的关节症状、降低炎症反应,但艾灸操作缺乏标准。艾灸距离成为影响艾灸疗效的因素之一。目的:对比不同艾灸距离治疗类风湿关节炎的疗效差异,探索最佳灸距。方法:将40只雄性SD大鼠随机分出8只作为对照组,其他32只均造模处理。建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎模型大鼠,分别按不同艾灸距离1,2,3 cm灸"肾俞(BL23)"及"足三里(ST36)"穴,每日灸1次,每个穴位10 min,每个疗程为6 d,各疗程间休息1 d,总共干预3个疗程,同时设置模型组。结果与结论:(1)一般情况及炎性反应情况:模型组大鼠除体质量外,足趾容积、关节炎评分、血清白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平较对照组显著升高(P<0.01),艾灸干预后上述各指标艾灸各组较模型组均明显降低(P<0.01),并且艾灸1,2 cm组优于艾灸3 cm组(P<0.01);(2)踝关节组织学变化:模型组可见关节腔变窄、关节腔内可见炎细胞及血管翳形成,艾灸1,2,3 cm组可见中度炎细胞浸润,血管翳较少;(3)结果说明,艾灸在改善关节功能、调节免疫方面具有一定作用,可下调白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α的水平,减轻滑膜增生。艾灸距离为1或2 cm时,可提高艾灸的效果。

薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠RORγt、Foxp3的影响

目的探讨薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠的治疗作用及其机制。方法选用DBA1/J小鼠建立鸡Ⅱ型胶原诱导型关节炎小鼠模型(CIA),将造模成功的小鼠采用随机数字表法分为CIA模型组、薯蓣皂苷组、雷公藤多苷组,另设正常对照组,药物组于初次免疫后第21天开始灌胃给药,对照组和模型组给相同体积溶媒。初次免疫第35天处死小鼠,无菌取腹股沟淋巴结制成单细胞悬液,用实时荧光定量PCR技术检测Th17、Treg细胞特异性转录因子RORγt、Foxp3的表达情况。结果模型组与对照组相比,RORγt显著升高(P<0.05);2药物组与模型组相比RORγt显著下降(P<0.05);与模型组相比,薯蓣皂苷组Foxp3显著升高(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可以调节Th17、Treg细胞特异转录因子RORγt、Foxp3的平衡。

Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义

目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。

胶原酶诱导的鼠类退行性膝骨关节炎模型应用进展

动物模型为骨关节炎的研究做出了巨大贡献。随着全球老龄化速度加快，退行性膝骨关节炎（kneeosteoarthritis，KOA）的发病率越来越高。

胶原诱导型关节炎大鼠的关节影像学特点

目的旨在分析CIA X线片四肢关节的破坏特点,揭示CIA大鼠关节破坏的规律,为规范评分方案提供依据。方法采用П型胶原和弗氏完全佐剂皮下注射清洁级Wistar大鼠,造模成功(每批10只,共3次)后第35天行全身X线钼靶照片,以正常组作为对照、每只大鼠评价96块骨破坏(erosion)和100个关节间隙(joint space narrowing,JSN);处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜增生和软骨破坏的情况。结果造模成功后CIA大鼠关节出现明显的红肿,活动受限;HE病理显示,CIA关节存在明显的中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,滑膜增生,纤维组织增生,软骨破坏;X线片分析结果显示:①广泛性骨质疏松,边缘性骨质侵蚀,关节间隙狭窄或增宽,部分踝关节间隙消失,关节相互融合甚至骨性强直。②67%的骨出现erosion,JSN影响为78%,关节破坏以中、重度为主;③远端、近端趾间关节和踝关节发病率高,损害严重,掌趾关节发病率低,破坏较轻。④后肢关节破坏重于前肢(P<0.01),左右肢没有显著性差异(P>0.05)。结论①滑膜是CIA炎症反应启动的主要病灶,与骨交界的滑膜和血管翳造成了CIA的骨质破坏;②CIA影像学表现关节破坏严重,以远端、近端趾间关节和踝关节为主,这些关节可作为评价破坏程度的选择。本研究对于深入CIA关节破坏的病因病理和进一步规范X线片评分方案具有一定意义。

淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用

目的观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清破骨细胞分化因子(receptor activator of NFκB-ligand,RANKL)和护骨素(osteoprotegerin,OPG)的影响及对骨破坏的保护作用。方法除正常组(8只)外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型。选取关节炎指数(arthritis index,AI)≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周5mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20mg/(kg·d)灌胃,均连续给药4周。每周记录大鼠AI评分。给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平。结果给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻。结论淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关。

青蒿琥酯对胶原诱导型关节炎大鼠的影响

目的:阐明青蒿琥酯治疗类风湿关节炎的作用及其机制。方法:SPF级Wistar雌鼠,随机分为正常对照、模型组、甲氨喋呤组、青蒿琥酯组,每组各10只。模型组和正常对照组按10 mL/(kg.d)以生理盐水灌胃,MTX剂量为7.6 mg/(kg.w),青蒿琥酯以60 mg/(kg.d)浓度给药。每日测足肿胀度。给药36 d后处死大鼠,取关节滑膜,用免疫组化检测IL-17表达水平。取后肢行X线检查,取左前肢和右后肢第3足趾行关节病理检测。结果:青蒿琥酯可明显抑制胶原诱哥型关节炎模型(CIA)大鼠肿胀、CIA大鼠淋巴细胞、滑膜细胞增生和软骨破坏及IL-17的阳性面积和着色强度。结论:青蒿琥酯能抑制CIA大鼠IL-17的表达,可能是其对RA等自身免疫性疾病产生治疗作用的机理。

非T细胞结合肽(FNS007)对胶原诱导型大鼠关节炎的影响

目的:探讨非T细胞结合肽(FNS007)对大鼠Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,CⅡ)诱导的关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)的影响及可能机制。方法:以牛CⅡ免疫Lewis大鼠诱发CIA模型后,随机分为模型组、FNS007低(0.25 mg/kg)、中(0.5 mg/kg)、高(1.0 mg/kg)剂量组及阳性药(甲氨蝶呤)组,另设空白对照组,尾静脉注射相应药物,隔天一次,空白对照组及模型组大鼠给予溶媒磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered solution,PBS)。实验期间观察踝关节宽度以及爪厚度,关节炎评分。给药后第22天处死大鼠,ELISA法测定血清中TNF-α、IFN-γ和IL-6的水平及抗CⅡ抗体水平;X光分析FNS007对CIA大鼠后爪骨损伤的疗效,并对大鼠踝关节进行组织病理学检查。结果:FNS007高剂量明显抑制CIA大鼠足爪肿胀程度,爪厚度和踝关节宽度明显降低;炎症评分明显降低;血清促炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的含量和抗CⅡ抗体的水平明显降低;X光评分和组织病理评分明显降低。FNS007中剂量和低剂量组的以上指标也有不同程度的改善。结论:FNS007对大鼠CIA具有治疗作用,其机制与其抑制T细胞活化,抑制CIA大鼠体内抗CⅡ的产生,并降低促炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6的含量,从而抑制异常免疫反应有关。