脐带间充质干细胞移植对胶原诱导型关节炎大鼠炎性趋化因子表达的影响

目的观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)移植对胶原诱导型关节炎(collagen typeⅡ-induced arthritis,CIA)大鼠模型血清中:血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,初步探讨UC-MSC移植对CIA大鼠炎性趋化因子的调节作用。方法采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型,经大鼠尾静脉注射UC-MSC;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠干预前后血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平变化。结果模型组血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平均明显高于同期空白对照组(P<0.05);经UC-MSC治疗组上述炎症因子水平逐渐降低,至第5周上述指标均接近空白对照组(P<0.05)。结论 CIA大鼠存在免疫功能紊乱,其炎症趋化因子水平显著增高;UC-MSC能下调CIA大鼠炎症趋化因子水平,减轻机体免疫性炎症反应,促进疾病缓解,改善预后。

胶原诱导型关节炎大鼠的关节影像学特点

目的旨在分析CIA X线片四肢关节的破坏特点,揭示CIA大鼠关节破坏的规律,为规范评分方案提供依据。方法采用П型胶原和弗氏完全佐剂皮下注射清洁级Wistar大鼠,造模成功(每批10只,共3次)后第35天行全身X线钼靶照片,以正常组作为对照、每只大鼠评价96块骨破坏(erosion)和100个关节间隙(joint space narrowing,JSN);处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜增生和软骨破坏的情况。结果造模成功后CIA大鼠关节出现明显的红肿,活动受限;HE病理显示,CIA关节存在明显的中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,滑膜增生,纤维组织增生,软骨破坏;X线片分析结果显示:①广泛性骨质疏松,边缘性骨质侵蚀,关节间隙狭窄或增宽,部分踝关节间隙消失,关节相互融合甚至骨性强直。②67%的骨出现erosion,JSN影响为78%,关节破坏以中、重度为主;③远端、近端趾间关节和踝关节发病率高,损害严重,掌趾关节发病率低,破坏较轻。④后肢关节破坏重于前肢(P<0.01),左右肢没有显著性差异(P>0.05)。结论①滑膜是CIA炎症反应启动的主要病灶,与骨交界的滑膜和血管翳造成了CIA的骨质破坏;②CIA影像学表现关节破坏严重,以远端、近端趾间关节和踝关节为主,这些关节可作为评价破坏程度的选择。本研究对于深入CIA关节破坏的病因病理和进一步规范X线片评分方案具有一定意义。

淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用

目的观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清破骨细胞分化因子(receptor activator of NFκB-ligand,RANKL)和护骨素(osteoprotegerin,OPG)的影响及对骨破坏的保护作用。方法除正常组(8只)外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型。选取关节炎指数(arthritis index,AI)≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周5mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20mg/(kg·d)灌胃,均连续给药4周。每周记录大鼠AI评分。给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平。结果给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻。结论淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关。

青蒿琥酯对胶原诱导型关节炎大鼠的影响

目的:阐明青蒿琥酯治疗类风湿关节炎的作用及其机制。方法:SPF级Wistar雌鼠,随机分为正常对照、模型组、甲氨喋呤组、青蒿琥酯组,每组各10只。模型组和正常对照组按10 mL/(kg.d)以生理盐水灌胃,MTX剂量为7.6 mg/(kg.w),青蒿琥酯以60 mg/(kg.d)浓度给药。每日测足肿胀度。给药36 d后处死大鼠,取关节滑膜,用免疫组化检测IL-17表达水平。取后肢行X线检查,取左前肢和右后肢第3足趾行关节病理检测。结果:青蒿琥酯可明显抑制胶原诱哥型关节炎模型(CIA)大鼠肿胀、CIA大鼠淋巴细胞、滑膜细胞增生和软骨破坏及IL-17的阳性面积和着色强度。结论:青蒿琥酯能抑制CIA大鼠IL-17的表达,可能是其对RA等自身免疫性疾病产生治疗作用的机理。

通痹灵对于胶原诱导型关节炎大鼠关节炎及骨质破坏的影响

目的研究通痹灵对于胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎以及骨质破坏的影响。方法采用CIA大鼠动物模型,容积法测量足肿胀度,血小板计数,整体X线片分析骨质破坏情况。结果通痹灵高剂量明显减轻CIA大鼠的关节炎所致的足肿胀和降低血小板总数(P<0.05),通痹灵高剂量和甲氨喋呤高剂量可抑制CIA大鼠骨质破坏(P<0.05)。结论通痹灵可通过降低CIA大鼠血小板总数,减轻关节的炎症,并且具有抑制骨质破坏的作用。

沙利度胺与胶原诱导型关节炎大鼠炎症因子的表达

背景：研究表明,多种细胞因子与炎症递质参与类风湿关节炎的致病过程,沙利度胺作为一种免疫调节剂应用于风湿性疾病的治疗。目的：观察沙利度胺对胶原诱导型关节炎大鼠的关节炎症及血浆肿瘤坏死因子α表达的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为4组。除正常对照组外,其余3组多点皮内注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂诱导出关节炎模型。从免疫后第10天开始,正常对照组和单纯造模组大鼠给予蒸馏水灌胃;沙利度胺组给予沙利度胺灌胃;甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤灌胃。实验前及实验7,14,21,28,35,42,60d测定各组的大鼠不同时间点的足爪厚度、血浆肿瘤坏死因子α浓度,进行踝关节病理评分和放射学检查。结果与结论：沙利度胺可以有效减轻胶原诱导型性关节炎大鼠足爪肿胀程度,造模后第28天单纯造模组足爪厚度值大于沙利度胺组（P〈0.05）。与造模组比较,沙利度胺组肿瘤坏死因子α浓度在造模后14d降低（P〈0.05）。沙利度胺组14~60d病理积分均显著低于造模组;沙利度胺组出现骨骼改变的平均时间明显晚于单纯造模组（P〈0.01）,且关节破坏程度较轻。沙利度胺组和甲氨蝶呤组各指标差异无显著性意义。结果证实,沙利度胺可以通过影响肿瘤坏死因子α的表达,抑制滑膜炎症及周围组织破坏,有效减轻胶原诱导型性关节炎大鼠关节的炎症程度。

MicroRNA在胶原诱导型关节炎大鼠中的异常表达及功能分析

目的:类风湿关节炎是一种常见的自身免疫性疾病,微RNA(microRNA,miRNA)可能参与其发病过程。本研究旨在检测胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠中异常表达的miRNA,并对其靶基因进行生物学功能及通路的富集分析。方法:提取实验动物滑膜内总RNA,通过miRNA芯片获得miRNA基因谱,筛选差异表达miRNA并预测其相关靶基因;对差异表达显著的miRNA靶基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果:CIA大鼠模型中有包括rno-miR-6215、rno-miR-709等在内的69个呈显著差异表达的miRNA,其中22个(31.9%)上调和47个(68.1%)下调;GO及KEGG富集分析结果发现上调miRNA的靶基因主要富集于细胞代谢过程,它们可能参与了MAPK和Wnt等信号通路;下调miRNA的靶基因主要富集于神经系统发育,它们可能参与了轴突引导的信号通路。结论:CIA大鼠模型内miRNA呈显著的差异表达,其靶基因可能参与细胞代谢的生物功能及MAPK和Wnt等信号通路。

环瓜氨酸肽对胶原诱导型关节炎大鼠淋巴细胞体外增殖作用的研究

目的观察环瓜氨酸肽(CCP)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠淋巴细胞激活的影响,探讨CCP在类风湿关节炎(RA)发病中的作用。方法建立CIA大鼠模型,分别在建模1、2……8周后,体外分离、培养大鼠脾淋巴细胞,用CCK-8法检测CCP对淋巴细胞增殖反应的影响,并分析CCP特异性T淋巴细胞增殖反应与关节炎症指数、成模时间及抗CCP抗体之间的相关性。结果建模2周后,CCP抗原特异性T细胞即出现明显增殖反应,与0周组大鼠比较,差异有统计学意义(P均<0.01);T细胞增殖反应与病程、关节炎症指数显著相关(P<0.05),与抗CCP抗体水平也显著正相关(P<0.01)。结论 CCP可刺激CIA大鼠脾淋巴细胞的体外增殖,此作用在建模早期即可出现,提示瓜氨酸化抗原可能在早期即参与了RA的发病。

风湿痹痛方对胶原诱导型关节炎大鼠血清细胞因子及滑膜组织Fas/FasL mRNA表达的影响

目的观察风湿痹痛方对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠血清细胞因子及滑膜组织Fas/Fas L m RNA表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法采用大鼠足部皮内注射牛Ⅱ型胶原乳化剂方法建立CIA模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组、雷公藤多苷组和风湿痹痛方低、中、高各剂量组,各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d。观察各组大鼠体质量和关节炎评分;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-15、转化生长因子(TGF)-β1含量;RT-PCR检测滑膜组织Fas、Fas L的m RNA表达。结果与模型组比较,风湿痹痛方中、高剂量组大鼠足部关节炎评分和血清IL-15含量显著降低,TGF-β1含量显著升高(P<0.01),风湿痹痛方高剂量组Fas m RNA表达显著降低,Fas L m RNA表达显著升高(P<0.05)。结论风湿痹痛方对CIA有一定的免疫调节作用,其机制可能是通过调控Fas/Fas L凋亡系统,诱导滑膜组织细胞凋亡,抑制滑膜增生。

黄芪桂枝五物汤对胶原诱导型关节炎大鼠的作用机制研究

目的:探讨黄芪桂枝五物汤对胶原诱导型关节炎大鼠的作用机制。方法:选用Wistar大鼠60只,随机分为6组:正常组,模型组,治疗组(HGW低剂量、中剂量、高剂量),阳性对照组(枸橼酸托法替尼),以牛Ⅱ型胶原加弗氏完全佐剂建立胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,测定大鼠经治疗30天后血液流变性;用酶联法测定血清IL-1β、GM-CSF、IL-3的变化。结果:与正常组相比,模型组大鼠造模4周后在30/s、1/s切变率下的全血黏度、200/s血浆黏度、红细胞聚集指数及血清IL-1β均显著升高(P﹤0.01),血清GM-CSF和IL-3显著降低(P﹤0.01);与模型组比较,黄芪桂枝五物汤中、高剂量组在全血黏度、IL-1β水平均显著降低(P﹤0.01或P﹤0.05),GM-CSF、IL-3水平均显著升高(P﹤0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组及CP690550组在200/s、30/s切变率下的全血黏度、红细胞聚集指数水平均显著降低(P﹤0.05),高剂量组在GM-CSF水平与低剂量组之间有显著性差异(P﹤0.05),以200/s切变率下的血浆黏度水平来看,高剂量组治疗效果优于低剂量组。结论:黄芪桂枝五物汤能够改善CIA大鼠关节的炎症反应,其作用机制可能是通过改善血液循环而达到降低炎症反应的,且与剂量有一定关系。

解毒通络法对胶原诱导型关节炎大鼠炎性因子的作用

目的探讨解毒通络法对类风湿关节炎病理进展中炎性因子的控制作用。方法复制胶原诱导型关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)大鼠模型,随机分为空白对照组,模型对照组,清痹片低剂量组、中剂量组、高剂量组,并以甲氨蝶呤治疗组作为阳性对照组,致炎第21天起每天给药干预。分别于35d和49d各处死一半动物,取踝关节行免疫组化法实验检测转化生长因子β1(TGFβ1)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP-3),比较各组间各炎性因子蛋白表达的差异。结果成功复制CIA模型,模型组TGFβ1、TNFα、IL-1β蛋白表达水平较空白组升高(P<0.01);清痹片各剂量组TGFβ1、TNFα、IL-1β及MMP-3表达水平均低于模型组,且显示出一定的量效关系;清痹片高剂量组TNFα、IL-1β、MMP-3表达水平低于MTX组(P<0.01),清痹片中剂量组与MTX比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论证明活血通络法能明显下调胶原诱导型关节炎病变关节TGFβ1、TNFα、IL-1β及MMP-3水平,减轻炎症症状,控制类风湿关节炎的病理进展。

通痹灵对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

目的探讨中药通痹灵(TBL)抗软骨破坏的作用机制。方法以胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规HE染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以鼠重组白细胞介素-1β(rrIL-1β)体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,培养48h后,收集细胞上清液,用阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)含量;用硝酸酶还原法检测NO的含量。结果①趾关节病理HE切片评价结果显示:通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P<0.05〉;②不同浓度的rrIL-1β(1、10、100、500、1000ng/ml)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01),且呈量效关系;③不同浓度的通痹灵总碱(200、100、50、25mg/L)及地塞米松可明显地抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01)及NO的产生(P<0.01)。结论通痹灵总碱可抑制CIA大鼠趾关节软骨破坏;体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解,其作用途径可能是通过抑制NO的生成来实现的。

川芎嗪对胶原诱导型关节炎大鼠细胞外调节蛋白激酶通路的影响

目的探讨川芎嗪对胶原诱导型关节炎大鼠细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)通路的影响。方法30只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和川芎嗪组,每组10只。对模型组和川芎嗪组大鼠进行胶原诱导型关节炎造模,造模成功后川芎嗪组每日给予川芎嗪(0.1 g/kg),连续灌胃给药28 d;模型组、正常组给予相同体积生理盐水。每周测量3组大鼠的后足体积变化情况,采用HE染色法观察各组大鼠炎性细胞浸润情况,并采用实时荧光定量PCR和ELISA法检测大鼠滑膜组织及血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、血管生成素1(angiopoietin 1,Ang-1)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平,以及采用蛋白质印迹法检测大鼠滑膜组织中ERK通路相关蛋白的表达水平。结果造模后第2周开始,模型组大鼠后足体积显著大于对照组(P<0.05),川芎嗪组大鼠后足体积与模型组同时间点比较显著降低(P<0.05);同时模型组和川芎嗪组大鼠血清和滑膜组织中炎性因子TNF-α、Ang-1、IL-1β及其mRNA表达水平均比对照组大鼠明显升高(P<0.05);川芎嗪组大鼠滑膜组织中VEGF水平相比模型组降低(P<0.05);模型组和川芎嗪组大鼠磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平均升高(P<0.05),但川芎嗪组大鼠p-ERK1/2蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过有效抑制ERK通路,调节胶原诱导型关节炎大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平,缓解关节肿胀症状。

白芍总苷长期给药对胶原诱导型关节炎大鼠和正常大鼠肠道菌群影响的纵向研究

目的纵向观察不同剂量白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)给药12周过程中对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠以及正常大鼠肠道菌群(简称"菌群")的影响,发现白芍总苷长期给药重点调控的菌群及其代谢功能,以探究其通过影响菌群治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的机制。方法将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、正常及模型给药白芍总苷(948、474、158 mg·kg^-1)剂量组。于模型复制后给药0周(给药前)以及给药4、8、12周后收集大鼠粪便样本,利用Illumina Miseq平台进行高通量测序,采用相应软件进行操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)、Alpha多样性指数测定,进行Beta多样性分析、基于图形系统发育分析(graphical phylogenetic analysis,GraPhlAn)、偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis, PLS-DA)与线性判别分析(linear discriminant analysis effect size,LEfSe)等的菌群群落结构相似性分析。同时借助数据库进行菌群不同水平分类学组成分析以及PICRUSt(phylogenetic investigation of communities by reconstructing unobserved states)菌群功能的预测。每组先进行不同时间点上述指标的动态变化分析,再进行各组间扣除相同变化后的比较,筛选出白芍总苷对胶原诱导型关节炎和正常大鼠或2个以上剂量调节作用相同的菌群及菌群代谢功能。结果 (1)白芍总苷3个剂量均可影响胶原诱导型关节炎大鼠菌群OTU的经时变化,仅低剂量可影响正常大鼠该指标的经时变化。(2)白芍总苷中、高剂量影响胶原诱导型关节炎大鼠菌群Alpha多样性指数的经时变化,而3个剂量均不影响正常大鼠该指标的经时变化。(3)综合Beta多样性分析以及GraPhlAn、PLS-DA、LEfSe分析,对胶原诱导型关节炎大鼠菌群的影响白芍总苷低、高剂量强于中剂量,对正常大鼠则白芍总苷中、高剂量强于低剂量。Coprococcus属是白芍总苷给药后胶原诱导型关节炎和正常大鼠共同的优势菌属,Akkermansia、Sutterella、Bacteroides、Parabacteroides、SMB53属是不同剂量白芍总苷给药后共同的菌群差异贡献者。(4)不同剂量白芍总苷对胶原诱导型关节炎大鼠各水平分类学组成分析影响呈剂量依赖性,对正常大鼠则作用相近;白芍总苷低、中剂量对胶原诱导型关节炎和正常大鼠菌群影响均不同,而高剂量对两者的Peptococcaceae科、Coprococcus属影响明显。(5)胶原诱导型关节炎大鼠升高的Biosynthesis of Other Secondary Metabolites菌群代谢功能(以下简称"功能"),可被中剂量白芍总苷降低;3个剂量白芍总苷均明显升高胶原诱导型关节炎大鼠Endocrine System功能,中、高剂量均明显升高Immune System功能,低、高剂量均明显降低Cardiovascular Diseases、Cellular Processes and Signaling功能。高剂量白芍总苷降低正常和胶原诱导型关节炎大鼠中Immune System Diseases功能。结论白芍总苷对胶原诱导型关节炎大鼠的菌群调节作用强于正常大鼠。上述白芍总苷长期给药稳定和重点调节的菌群和菌群代谢功能解释了其对类风湿关节炎的疗效,不同剂量白芍总苷明显影响的菌群和菌群代谢功能不同。

壮药透骨香对胶原诱导型关节炎大鼠的干预效果及作用机制

目的探讨壮药透骨香对类风湿性关节炎大鼠的干预效果及作用机制。方法将70只SD大鼠随机分为空白组10只及胶原诱导型关节炎(CIA)模型组60只。造模21 d后将10只足趾肿胀度较轻的大鼠剔除,将剩余50只大鼠随机分为模型组、雷公藤多苷组及低、中、高剂量透骨香组各10只。雷公藤多苷组给予雷公藤多苷(0. 01 g/kg)灌胃,高、中、低剂量透骨香组分别给予73. 79 g生药/kg、36. 89 g生药/kg、18. 45 g生药/kg透骨香水溶部位灌胃,空白组与模型组分别予以等体积蒸馏水灌胃。灌胃28 d后,计算各组大鼠足趾肿胀度,评价关节炎指数(AI),测定大鼠血清及关节组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果造模21 d后,CIA模型组的足趾肿胀度高于空白组(P <0. 05)。灌胃28 d后,与模型组比较,各干预组大鼠足趾肿胀度降低(P <0. 05),雷公藤多苷组和高剂量透骨香组AI降低(均P <0. 05)。与雷公藤多苷组比较,低、中剂量透骨香组AI升高(均P <0. 05),而高剂量透骨香组AI差异无统计学意义(P> 0. 05),且高剂量透骨香组大鼠AI低于低剂量透骨香组(P <0. 05)。与空白组比较,模型组大鼠血清与关节组织匀浆中TNF-α、IL-1β水平均升高(P <0. 05)。灌胃28 d后,与模型组比较,中剂量透骨香组大鼠的血清TNF-α、IL-1β水平及关节组织匀浆中TNF-α水平均降低,高剂量透骨香组大鼠血清及关节组织匀浆中TNF-α、IL-1β水平降低(均P <0. 05)。结论壮药透骨香水溶部位对CIA大鼠有治疗作用,且高剂量(73. 79 g生药/kg)的透骨香水溶部位效果最佳,其作用机制可能与调节炎症因子TNF-α和IL-1β的表达有关。

成纤维细胞生长因子受体1 抑制剂对胶原诱导关节炎模型大鼠骨破坏的影响

背景:课题组前期的研究表明靶向成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)可能是治疗类风湿性关节炎的有效靶点。目的:探讨FGFR1抑制剂(PD173074)对胶原诱导关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将25只雌性SD大鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、甲氨蝶呤组、PD173074低剂量组、PD173074高剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。造模成功后正常组及模型组大鼠腹腔注射无菌PBS,甲氨蝶呤组药物注射剂量为1.04 mg/kg,PD173074低剂量组和高剂量组药物注射剂量分别为5,20 mg/kg,1次/周。给药4周后取材,观察大鼠临床症状以及关节肿胀情况,踝关节Micro-CT三维重建及分析,观察踝关节病理变化,检测关节周围血管生成情况及核因子κB受体活化因子配体的表达,检测关节滑膜中p-FGFR1、血管内皮生长因子A、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达,观察肝、脾、肾病理变化并计算肝、脾、肾指数。结果与结论:①PD173074能够减轻模型大鼠踝关节临床症状及关节肿胀,延缓骨质丢失,改善骨结构,减轻关节滑膜侵袭以及软骨骨侵蚀,降低关节周围破骨细胞数量,抑制关节滑膜组织中的血管生成,降低核因子κB受体活化因子配体的表达,抑制FGFR1磷酸化蛋白、抗酒石酸酸性磷酸酶和血管内皮生长因子A的蛋白表达。②大鼠肝、脾、肾病理观察表明经过PD173074治疗后无明显的毒副作用。③研究证明了FGFR1抑制剂能够延缓Ⅱ型胶原诱导关节炎模型大鼠关节炎症及骨破坏的进展,并抑制血管的生成。初步验证了PD173074在Ⅱ型胶原诱导关节炎模型中的治疗作用,其可能是通过抑制FGFR1磷酸化发挥作用,为寻找类风湿性关节炎新的治疗靶点提供了方向。

基于HIF-1α/VEGF-α信号通路探讨南续益母颗粒抑制胶原诱导型关节炎小鼠滑膜血管翳生成的作用机制

目的基于缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子α(VEGF-α)信号通路探讨南续益母颗粒(南蛇藤、续断、益母草、红景天等)抑制胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠滑膜血管翳生成的作用机制。方法将40只DBA/1雄性小鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg·kg^(-1))和南续益母颗粒组(12.33 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其余小鼠采用二次免疫法复制CIA小鼠模型。二次免疫后,南续益母颗粒组灌胃给药,每日1次,连续30 d;甲氨蝶呤组每3 d灌胃1次,连续30 d。采用关节炎指数(AI)评分评估小鼠关节炎症程度;采用HE染色法观察小鼠踝关节滑膜病理变化;番红固绿染色法观察小鼠踝关节软骨及骨质结构变化;Micro-CT三维重建观察小鼠踝关节骨皮质表面变化;采用全自动生化分析仪检测小鼠血清C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)水平;免疫组化法检测小鼠踝关节滑膜中血小板-内皮细胞黏附分子1(CD31)、HIF-1α、VEGF-α的表达。结果各组小鼠之间的血清AST、ALT、BUN、CR、RF水平无明显变化(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的踝关节及足面明显肿胀,活动度明显受限,AI评分显著升高(P<0.001),血清中的炎症指标CRP水平显著升高(P<0.001);踝关节可见显著滑膜增生(P<0.001)和炎性浸润(P<0.001),血管数量显著增加(P<0.001),踝关节可见显著软骨侵袭和骨破坏(P<0.001);踝关节骨质出现明显局灶性侵蚀,骨表面失去光滑及完整性,部分关节融合呈强直状;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达显著上调(P<0.001)。与模型组比较,甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠的踝关节及足面红肿均有改善,小鼠关节活动度基本正常,AI评分显著下降(P<0.01);甲氨蝶呤组小鼠血清CRP水平明显下降(P<0.05),南续益母颗粒组小鼠血清CRP水平有一定程度下降,但差异无统计学意义(P>0.05);甲氨蝶呤组和南续益母颗粒组小鼠踝关节的滑膜增生和炎性浸润均明显减轻(P<0.05),血管数量显著减少(P<0.01,P<0.001),软骨侵袭明显改善(P<0.05),骨破坏程度明显减轻(P<0.05,P<0.01);踝关节骨质破坏程度明显减轻,骨表面轻度粗糙,小部分存在局灶性侵蚀;踝关节滑膜CD31、HIF-1α、VEGF-α蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论南续益母颗粒能够显著改善CIA模型小鼠关节肿胀症状及其病理变化,抑制踝关节滑膜血管翳形成,其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF-α信号通路激活相关。

甘草附子汤对胶原诱导性关节炎小鼠Th17和Treg细胞的影响

目的探讨甘草附子汤(Gancaofuzi decoction,GCFZ)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)和调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)失衡的调节作用。方法该研究包括4组小鼠:正常对照组(Control组),模型对照组(CIA组),GCFZ 2.4 g·kg^(-1)组和GCFZ 4.8 g·kg^(-1)组。检测各组小鼠足肿胀度、关节炎指数;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠踝关节组织病理学变化;流式细胞仪检测脾脏Th17和Treg细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清白介素17(interleukin-17,IL-17)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素10(interleukin-10,IL-10)水平。结果与正常组比较,CIA组小鼠关节肿胀明显,关节炎评分显著上升(P<0.05);滑膜侵袭严重,关节软骨和骨破坏显著;Th17细胞百分比上调(P<0.05),Treg细胞百分比下调(P<0.05);血清IL-17、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.05),而IL-10水平无明显差异(P>0.05);与CIA组比较,GCFZ各剂量组小鼠关节肿胀明显缓解,关节炎评分显著降低(P<0.05或P<0.01);滑膜的侵袭以及关节软骨破坏明显减轻。Th17细胞百分比下调(P<0.05),Treg细胞百分比上调(P<0.05);血清IL-17、IL-6和TNF-α水平显著降低,而IL-10水平明显升高(P<0.05)。结论GCFZ对CIA小鼠具有治疗作用,并调节血清中相关的细胞因子水平。潜在机制可能是通过恢复CD_(4)^(+)T淋巴细胞亚群Th17/Treg的失衡来介导的。

大黄素对胶原诱导性关节炎大鼠的骨保护作用:基于抑制铁死亡和降解基质金属蛋白酶

目的探讨大黄素对类风湿关节炎(RA)铁死亡相关信号通路介导的骨保护作用机制。方法除正常组外,使用200μL不完全弗氏佐剂乳化的牛二型胶原构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的类风湿关节炎模型。21 d后分为正常组(Normal)、模型组(Model)、甲氨蝶呤组(MTX,0.2 mg/kg,3次/周)、大黄素(Emo)高(80 mg·kg^(-1)·d^(-1))、低(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,10只/组。记录大鼠造模之后的关节炎评分和足趾体积;使用丙二醛(MDA)试剂盒检测组织MDA含量;用番红固绿染色法、苏木精-伊红染色法对踝关节石蜡切片进行染色,光镜下观察大鼠踝关节组织形态学改变;用免疫组织化学法对踝关节切片的基质金属蛋白酶(MMP)3、13进行染色,光镜下观察大鼠踝关节MMPs的表达;Western blot法检测大鼠踝关节组织中长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白质含量。结果与正常组相比,模型组大鼠的关节炎评分指数、足趾肿胀度增高(P<0.05);软骨表面粗糙,软骨细胞丢失、排列杂乱稀疏;MDA含量和ACSL4的蛋白质含量升高,SLC7A11、GPX4、FTH1的含量降低(P<0.05);踝关节MMP3和MMP13的表达量升高;与模型组相比,MTX组和大黄素(40 mg/kg、80 mg/kg)组的关节炎评分指数、足趾肿胀度降低(P<0.05),软骨表面相对光滑平整,软骨细胞排列整齐,MDA含量升高(P<0.05);MTX组和大黄素高剂量组ACSL4的蛋白质含量降低,SLC7A11、GPX4、FTH1的含量升高(P<0.05)。结论大黄素能有效控制CIA大鼠关节炎症、改善关节骨侵蚀。调节铁死亡相关信号通路ACSL4、SLC7A11、GPX4、FTH1的含量,降低MMP3和MMP13的表达,可能是其抑制RA骨破坏的重要机制和途径之一。

金藤清痹颗粒对胶原诱导性类风湿关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的:观察金藤清痹颗粒对胶原诱导性类风湿关节炎(CIA)大鼠滑膜血管新生的治疗作用并探讨其作用机制。方法:取60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,甲氨蝶呤组,金藤清痹颗粒低、中、高剂量组等6组。以免疫诱导方法建立CIA大鼠模型,每天灌胃1次,空白组和模型组予以等量生理盐水灌胃,共28 d。采用小动物超声影像系统检测各组大鼠右下肢膝关节滑膜增生程度评分与增生面积;酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红染色法观察大鼠关节滑膜病理改变;免疫组织化学法检测大鼠关节滑膜组织血小板-内皮细胞黏附分子31(CD31)与血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)表达水平。结果:与空白组比较,模型组CIA大鼠右膝关节滑膜区域面积和滑膜增生评分显著增加(P<0.01);大鼠关节滑膜组织也出现显著病理性改变;血清炎症介质水平升高,同时CD31、VEGFR2表达也显著升高(P<0.01)。与模型组比较,金藤清痹颗粒各剂量组均能明显减小CIA大鼠滑膜增生面积(P<0.01),金藤清痹颗粒高剂量组大鼠超声滑膜评分显著降低(P<0.01);金藤清痹颗粒中、高剂量可明显改善大鼠关节滑膜组织病理变化,显著降低IL-6、IL-17、TNF-α水平(P<0.01),关节滑膜组织CD31、VEGFR2表达也出现一定程度下降(P<0.01)。结论:金藤清痹颗粒能够通过改善CIA大鼠关节滑膜血管新生抑制类风湿关节炎病理进展,达到减轻关节损伤的作用,其机制可能与抑制炎症介质分泌,降低CD31、VEGFR2表达有关。