Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型制备

目的:研究建立较为理想的寒湿痹型实验性类风湿关节炎模型。方法:采用不同浓度Ⅱ型胶原和弗氏佐剂联合应用于大鼠足部注射,诱导关节炎;测量大鼠足肿胀度,并计算肿胀率;检测血清唾液酸水平;观察滑膜组织病理学及超微结构变化。结果:低浓度Ⅱ型胶原和完全佐剂组大鼠关节肿势迅猛,近似于佐剂关节炎大鼠模型,高浓度Ⅱ型胶原和不完全佐剂组大鼠关节肿势和缓;各模型组大鼠血清唾液酸水平均高于正常对照组;滑膜组织的病理学变化与类风湿关节炎相符。结论:高浓度的Ⅱ型胶原加不完全佐剂给药组是较为理想类风湿关节炎大鼠模型,中医辩证属寒湿痹症,与之相比较,佐剂关节炎模型接近于湿热痹症。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞微小RNA-146a表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雌性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠50只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方低剂量组(n=10,简称中药1组)、温化蠲痹方中剂量组(n=10,简称中药2组)、温化蠲痹方高剂量组(n=10,简称中药3组)。中药1、2、3组分别给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d、45.8 g/kg·d、68.7 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,提取各组大鼠外周单个核细胞,采用实时定量PCR法检测miRNA-146a表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01);与MTX组比较,中药1、2、3组大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMC miRNA-146a表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠PBMC miRNA-146a表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与MTX比较,中药1、2、3组大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P>0.05);中药1、2、3组比较,大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达升高。中药温化蠲痹方下调CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达无剂量依赖性,其可能通过下调miRNA-146a表达,而调节免疫细胞分化、信号转导等达到治疗CIA的作用。

雷公藤多甙对胶原诱导关节炎大鼠的治疗作用及其作用机制

目的探讨雷公藤多甙对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型,胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascuoar endothelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-1、2、9表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,研究雷公藤多甙治疗RA的可能机制。方法采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型;观察雷公藤多甙治疗后模型大鼠关节肿胀情况,用免疫组化法观察大鼠关节炎症及滑膜微血管密度;用Western blot法检测CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1、2、9的表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS;用Western blot法检测不同浓度雷公藤多甙治疗后CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK的表达。结果 CIA大鼠造模成功,雷公藤多甙治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子及血管新生相关因子表达(P<0.05);免疫组化结果显示雷公藤多甙能抑制CIA大鼠关节滑膜血管新生(P<0.05);不同浓度雷公藤多甙对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,但可降低FLS的p-ERK表达(P<0.05)。结论雷公藤多甙对CIA大鼠抗炎及抑制血管新生的作用可能与调节ERK信号转导通路有关。

温化蠲痹方诱导胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究

目的:研究中药温化蠲痹方诱导胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞凋亡作用。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=10,简称正常组)、造模组,造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。造模成功后随机分为模型组(n=10)、温化蠲痹方组(n=10,简称中药组)、MTX组(n=10)。正常组、模型组、中药组按22.9g·kg-1·d-1剂量分别灌胃生理盐水、温化蠲痹方,均每日1次,MTX组按0.78mg·kg-1·w-1剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用透射电镜和流式细胞术检测大鼠滑膜细胞凋亡。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。透射电镜显示,中药组大鼠滑膜细胞凋亡较模型组大鼠滑膜细胞凋亡明显。流式细胞术检测显示,与正常组比较,模型组大鼠滑膜细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与模型组大鼠比较,中药组和MTX组大鼠滑膜细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:CIA大鼠滑膜细胞凋亡减少,诱导滑膜细胞凋亡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜肿瘤坏死因子-α mRNA的表达及意义

目的观察胶原诱导性关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达,从基因水平探讨TNF-αmRNA在类风湿性关节炎的作用。方法将22只大鼠随机分为正常组和模型组2组,皮下注射Ⅱ型胶原蛋白配合完全弗氏佐剂诱导关节炎模型,采用半定量RT—PCR法测定胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞TNF-αmRNA的表达。结果TNF-αmRNA在正常组有少量表达；25、45d模型组TNF-αmRNA表达明显高于正常组(P＜0．05),45d模型组表达高于25d模型组(P＜0．05)。结论在胶原诱导性关节炎大鼠中TNF-αmRNA的表达随着时间的增加而增设,提示了TNF-α基因表达与关节症状轻重有关,是介导RA炎症发展的主要因素。

祛痹镇痛凝胶膏穴位敷贴对胶原诱导关节炎大鼠关节炎症及牛Ⅱ型胶原抗体的影响

[目的]观察祛痹镇痛凝胶膏穴位敷贴对胶原性关节炎大鼠的治疗作用。[方法]体重100g SD大鼠90只,随机分出空白对照组,其余大鼠注射牛Ⅱ型胶原诱发胶原性关节炎(CIA),再随机分成模型对照组,祛痹镇痛凝胶膏组,基质对照组,阳性对照组,以足跖肿胀度、关节炎指数,血清牛Ⅱ抗体浓度为指标,观察穴位敷贴祛痹镇痛凝胶膏对胶原性关节炎大鼠的疗效。[结果]与模型对照组相比,治疗10天后,祛痹镇痛凝胶膏组和阳性组足跖平均肿胀度有明显差异(P<0.05),祛痹镇痛凝胶膏组关节炎指数有明显降低(P<0.05),阳性组无差异;治疗15天后祛痹镇痛凝胶膏组和阳性对照组足跖平均肿胀度、关节炎指数有极显著差异(P<0.01);治疗15天后祛痹镇痛贴膏组%MPE仅上升了0.09%,阳性对照组%MPE下降了0.05%,而模型对照组、基质对照组分别上升了36.46%,55.40%[结论]祛痹镇痛凝胶膏穴位敷贴对胶原诱导性类风湿性关节炎大鼠的足趾肿胀度、关节炎指数、血清牛Ⅱ型胶原抗体浓度有较好的控制和影响作用,对胶原诱导性大鼠类风湿性关节炎有较好的治疗作用。

腹腔注射三氧化二砷对胶原诱导关节炎大鼠血清炎性趋化因子的影响

目的评估腹腔注射三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠关节症状的改善程度,并观察其对CIA大鼠血清趋化因子的影响并探讨其可能作用机制。方法将28只体质量及鼠龄相当的Wistar大鼠随机分成3组,A组为空白对照组(8只),B、C组(各10只)用牛Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂乳化液2次免疫动物,建立CIA大鼠模型,造模成功后随机分为CIA模型对照组8只(B组)、ATO治疗组8只(C组);ATO治疗组在分组3 d后通过腹腔注射ATO液1周,剂量为每天4 mg/kg,最后l d给8 mg/kg,观察3 d取材,对照组以同样方法给予等容量的0.9%氯化钠注射液。对各组大鼠定期进行关节炎指数(arthritis index,AI)评定、容积法(排水法)测量双后肢的足肿胀度以及四肢关节X线摄片评估关节破坏程度。各组老鼠干预结束后内眦静脉取血,用流式细胞术对各组大鼠血清正常T细胞表达分泌的活性调节蛋白(regulated upon activation,normal T cell expressed and secreted,RANTES)、单核细胞趋化因子(monocyte chemotactic factor,MCP)-1、干扰素γ诱导蛋白10(interferon gamma induced protein 10,IP-10)等趋化因子进行定量测定。应用t检验或对各组应用Kruskl-Wallis H检验进行组间比较。结果腹腔注射ATO液1周后大鼠足肿胀度较同期CIA模型对照组明显改善,差异有统计学意义[(5.13±0.10)ml vs.(8.12±0.15)ml,t=8.73,P=0.000)];关节炎指数显著降低,差异有统计学意义[(2.63±0.92)vs.(6.62±0.91),t=5.21,P=0.020];X线检查显示关节破坏程度减轻。CIA模型对照组血清中RANTES、MCP-1、IP-10均明显高于同期空白对照组,差异有统计学意义[(8 118.89±2 836.14)pg/ml vs.(5 390.24±629.08)pg/ml,χ2=6.35,P=0.012;22 048.2(6 092.53,40 457.13)pg/ml vs.1 211.77(532.35,1 506.94)pg/ml,χ2=11.29,P=0.001;(282.48±273.93)pg/ml vs.(31.96±17.50)pg/ml,χ2=5.84,P=0.016]。ATO治疗组与同期CIA模型组相比上述因子均明显降低,差异有统计学意义[(6 134.76±548.15)pg/ml vs.(8 118.89±2 836.14)pg/ml,χ2=6.79,P=0.033;2 946.08(1 749.84,4 600.94)pg/ml vs.22048.23(6 092.53,4 0457.13)pg/ml,χ2=14.64,P=0.001;(41.60±15.86)pg/ml vs.(282.48±273.93)pg/ml,χ2=7.72,P=0.021]。结论:CIA大鼠存在免疫功能紊乱,血清中趋化因子显著升高;腹腔注射ATO可以改善CIA大鼠的关节炎程度,其作用机制可能通过下调趋化因子MCP-1、RANTES、IP-10水平的表达来发挥作用。

脐带间充质干细胞移植对胶原诱导型关节炎大鼠炎性趋化因子表达的影响

目的观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)移植对胶原诱导型关节炎(collagen typeⅡ-induced arthritis,CIA)大鼠模型血清中:血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、内皮细胞生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,初步探讨UC-MSC移植对CIA大鼠炎性趋化因子的调节作用。方法采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型,经大鼠尾静脉注射UC-MSC;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠干预前后血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平变化。结果模型组血清VCAM-1、SDF-1、VEGF、TNF-α水平均明显高于同期空白对照组(P<0.05);经UC-MSC治疗组上述炎症因子水平逐渐降低,至第5周上述指标均接近空白对照组(P<0.05)。结论 CIA大鼠存在免疫功能紊乱,其炎症趋化因子水平显著增高;UC-MSC能下调CIA大鼠炎症趋化因子水平,减轻机体免疫性炎症反应,促进疾病缓解,改善预后。

大黄素对胶原诱导性关节炎大鼠的骨保护作用:基于抑制铁死亡和降解基质金属蛋白酶

目的探讨大黄素对类风湿关节炎(RA)铁死亡相关信号通路介导的骨保护作用机制。方法除正常组外,使用200μL不完全弗氏佐剂乳化的牛二型胶原构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的类风湿关节炎模型。21 d后分为正常组(Normal)、模型组(Model)、甲氨蝶呤组(MTX,0.2 mg/kg,3次/周)、大黄素(Emo)高(80 mg·kg^(-1)·d^(-1))、低(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,10只/组。记录大鼠造模之后的关节炎评分和足趾体积;使用丙二醛(MDA)试剂盒检测组织MDA含量;用番红固绿染色法、苏木精-伊红染色法对踝关节石蜡切片进行染色,光镜下观察大鼠踝关节组织形态学改变;用免疫组织化学法对踝关节切片的基质金属蛋白酶(MMP)3、13进行染色,光镜下观察大鼠踝关节MMPs的表达;Western blot法检测大鼠踝关节组织中长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白质含量。结果与正常组相比,模型组大鼠的关节炎评分指数、足趾肿胀度增高(P<0.05);软骨表面粗糙,软骨细胞丢失、排列杂乱稀疏;MDA含量和ACSL4的蛋白质含量升高,SLC7A11、GPX4、FTH1的含量降低(P<0.05);踝关节MMP3和MMP13的表达量升高;与模型组相比,MTX组和大黄素(40 mg/kg、80 mg/kg)组的关节炎评分指数、足趾肿胀度降低(P<0.05),软骨表面相对光滑平整,软骨细胞排列整齐,MDA含量升高(P<0.05);MTX组和大黄素高剂量组ACSL4的蛋白质含量降低,SLC7A11、GPX4、FTH1的含量升高(P<0.05)。结论大黄素能有效控制CIA大鼠关节炎症、改善关节骨侵蚀。调节铁死亡相关信号通路ACSL4、SLC7A11、GPX4、FTH1的含量,降低MMP3和MMP13的表达,可能是其抑制RA骨破坏的重要机制和途径之一。

金边祛风饮对胶原型关节炎大鼠细胞因子的影响

目的研究金边祛风饮对胶原型关节炎(CIA)大鼠模型的治疗作用机制。方法采取Wistar大鼠60只,建立大鼠胶原诱导的关节炎模型,随机分为6组,左足注射Ⅱ型胶原蛋白、弗式不完全佐剂、乙酸混合物制造CIA大鼠模型,并设立正常组、甲氨蝶呤(MTX)对照组,观察金边祛风饮对CIA大鼠关节病理改变、肿胀评分及血清中TNF-α、IL-1β、MMP-3指标的影响。结果金边祛风饮各剂量组大鼠关节疼痛指数均有所改善,以高、中剂量组明显,病程明显缩短(P<0.01),治疗28 d后,血清TNF-α、IL-1β、MMP-3水平均降低,以高、中剂量最明显(P<0.05)。结论金边祛风饮能减轻大鼠关节皮下软组织及滑膜组织的充血和水肿程度,抑制滑膜细胞的增生,缓解炎性细胞的浸润;有效调节炎症细胞分泌细胞因子IL-1β、TNF-α、MMP-3含量可能是金边祛风饮治疗类风湿关节炎的机制之一。

Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠滑膜成纤维细胞的培养、纯化和鉴定

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)病人滑膜成纤维细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)是研究RA发病机制和进行RA药物筛选的最理想的细胞来源.但是对于众多非医疗机构的高校和科研院所而言,由于RA病人滑膜组织不易获取而难以进行细胞水平的操作.因此,建立胶原诱导的关节炎大鼠(Collagen-induced arthritis,CIA)模型,成功分离膝关节滑膜组织并进行滑膜成纤维细胞的原代培养和纯化,将有效解决RA FLS的来源问题,为后续实验奠定基础.本实验通过皮内和皮下两次注射鸡Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠罹患关节炎,通过关节炎指数评分和膝关节HE染色明确CIA模型的建立;分离膝关节滑膜组织,采用Ⅱ型胶原酶和无EDTA胰酶消化法分离细胞并进行传代培养,传至第三代时,细胞免疫荧光检测细胞中VCAM-1蛋白含量以鉴定细胞纯度.结果显示,滑膜组织经过消化和培养后得到大量大鼠滑膜成纤维细胞;在显微镜下观察所得细胞呈梭形树突状,具有成纤维样细胞特征;VCAM-1蛋白阳性细胞达98%以上,确证所分离细胞为滑膜成纤维样细胞,且纯度极高.本研究建立了较简便快捷地获得大量滑膜成纤维细胞的方法,为RA的发病机制研究和药物防治提供了丰富的实验材料.

苗药验方“四大血”对胶原诱导关节炎大鼠IL-17和VEGF表达的影响

目的:探讨苗药验方“四大血”(SX)对牛Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠白细胞介素17(IL-17)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法:42只SD大鼠分为空白对照组(NG组,n=7)及造模组(n=35),除NG组外,所有大鼠用牛Ⅱ型胶原与等量不完全弗氏佐剂混合乳化剂于尾根部皮下注射致炎、复制CIA动物模型,造模第14天将造模组大鼠均分为模型对照组(Mod组),SX高、中、低药物治疗组(分别给予SX40、20及10g/kg灌胃,21d,n=7)及阳性药物对照组(GTW组,给予雷公藤多甙片40g/kg灌胃,21d,n=7);于造模第14天、给药治疗第7、14及21天时检测足肿胀度(ER);给药第21天时,观察大鼠膝关节滑膜组织病理改变,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定大鼠膝关节滑膜组织VEGFmRNA的表达,ELISA法检测测大鼠血清IL-17及VEGF水平。结果:与Mod组相比,SX40、20及10g/kg组、GTW组大鼠足关节ER减轻,关节滑膜组织炎性细胞浸润明显下降,纤维组织增生及水肿程度减轻;治疗第21天时,与Mod组比较,SX40、20及10g/kg组大鼠膝关节滑膜组织VEGFmRNA水平、血清VEGF含量均显著降低(P<0.01),SX40、20g/kg组血清IL-17含量显著降低(P<0.01)。结论:SX能有效缓解CIA病情,其机制可能与降低IL-17和VEGF含量有关。

MicroRNA在胶原诱导型关节炎大鼠中的异常表达及功能分析

目的:类风湿关节炎是一种常见的自身免疫性疾病,微RNA(microRNA,miRNA)可能参与其发病过程。本研究旨在检测胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠中异常表达的miRNA,并对其靶基因进行生物学功能及通路的富集分析。方法:提取实验动物滑膜内总RNA,通过miRNA芯片获得miRNA基因谱,筛选差异表达miRNA并预测其相关靶基因;对差异表达显著的miRNA靶基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果:CIA大鼠模型中有包括rno-miR-6215、rno-miR-709等在内的69个呈显著差异表达的miRNA,其中22个(31.9%)上调和47个(68.1%)下调;GO及KEGG富集分析结果发现上调miRNA的靶基因主要富集于细胞代谢过程,它们可能参与了MAPK和Wnt等信号通路;下调miRNA的靶基因主要富集于神经系统发育,它们可能参与了轴突引导的信号通路。结论:CIA大鼠模型内miRNA呈显著的差异表达,其靶基因可能参与细胞代谢的生物功能及MAPK和Wnt等信号通路。

蒙药森登-4汤抑制胶原诱导性关节炎大鼠骨破坏作用机制及对滑膜成纤维细胞体外增殖的影响

目的研究蒙药森登-4汤抑制胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠骨破坏作用机制及对滑膜成纤维细胞(FLS)体外增殖的影响。方法本研究首先利用牛Ⅱ型胶原建立SD大鼠CIA模型,造模成功后随机分为模型组、雷公藤多苷组和蒙药森登-4汤高、中、低剂量组,各10只;正常组10只大鼠不造模。各组大鼠给予相应药物,观察各组大鼠踝关节组织病理学改变,检测各组大鼠血清白细胞介素1(IL-1)、IL-6、IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子含量,检测Wnt信号通路关键因子DKK1蛋白在爪关节中的表达。随机取1只CIA大鼠分离FLS行体外培养,实验分为空白对照组、雷公藤多苷组及高、中、低剂量蒙药森登-4汤含药血清组,干预24、48、72 h后检测CIA-FLS增殖情况。结果各用药组大鼠滑膜增生、细胞浸润及骨破坏评分较模型组均有不同程度下调,其中雷公藤多苷组和蒙药森登-4汤高剂量组下调最为明显[(1. 10±0. 57)、(1. 20±0. 42)分比(2. 80±0. 42)分;(1. 10±0. 88)、(1. 10±0. 32)分比(2. 90±0. 32)分;(0. 90±0. 57)、(1. 30±0. 48)分比(2. 70±0. 48)分](均P <0. 01)。各用药组大鼠血清IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α水平和爪关节DKK1蛋白表达水平与模型组比较均有所下降。高、中剂量蒙药森登-4汤含药血清组和雷公藤多苷组干预24、48、72 h后,以及低剂量蒙药森登-4汤含药血清组干预48、72 h后,均可明显抑制CIA-FLS增殖,与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论蒙药森登-4汤对CIA大鼠具有明显的骨破坏抑制作用,对CIA-FLS体外增殖有明显抑制作用,其作用存在量效关系,蒙药森登-4汤高剂量作用优于中剂量和低剂量。

温化蠲痹方对胶原诱导性大鼠滑膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠30只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方组(10只,简称中药组)。中药组给予温化蠲痹方22.9 g/(kg·d)灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30天。给药结束后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平。结果:与模型组比较,治疗后中药组和MTX组大鼠关节炎指数(AI)评分明显降低(P<0.01);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药温化蠲痹方可能通过下调CIA大鼠滑膜VEGF水平,抑制血管翳形成而治疗CIA。

经方二妙散通过ChAT/α7nAChR/NF-κB途径治疗胶原诱导性关节炎大鼠的作用机制研究

目的:探讨经方二妙散通过ChAT/α7nAChR/NF-κB途径治疗胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的作用机制。方法:56只SPF级雌性Wistar大鼠随机分为正常对照(NOR)组、CIA模型(CIA)组、迷走神经切断(VAO)组、假手术(SHO)组、二妙散治疗CIA大鼠(EMS)组、二妙散治疗迷走神经切断(EVAO)组和二妙散治疗假手术(ESHO)组。除NOR组外,其他组均构建CIA大鼠模型,颈部单侧迷走神经切断及假手术7 d后开始给药,持续35 d。记录大鼠体质量及关节情况,观察大鼠脾脏和关节组织病理形态,检测血清IL-1、IL-6、TNF-α含量及关节中ChAT/α7nAChR/NF-κB通路核心基因mRNA及蛋白表达,免疫组化定位分析。结果:CIA组对比NOR组/VAO组对比CIA组和SHO组,大鼠体质量显著降低(P<0.05,P<0.01),关节炎评分显著升高(P<0.01),踝关节明显肿胀(伴畸形),脾脏淋巴样白髓和主要生发中心增生明显,关节腔隙缩小(破坏)伴炎症细胞浸润,血清IL-1、IL-6、TNF-α含量显著增加(P<0.05,P<0.01),关节CHRNA7、ChAT、IκBα、NF-κB p50/p65 mRNA及蛋白水平显著升高,且主要表达于关节面(P<0.05,P<0.01)。EMS组对比CIA组/ESHO组对比SHO组,大鼠体质量显著升高,关节炎评分显著下降(P<0.05),踝关节肿胀度明显减轻,脾脏白髓和生发中心明显减少,关节面炎症细胞浸润减少,关节腔隙增大,血清IL-1、IL-6、TNF-α含量下降,CHRNA7、ChAT、IκBα mRNA及蛋白水平表达趋势上升,NF-κB p50/p65 mRNA及蛋白水平表达趋势下降,且主要位于关节面。EVAO组对比VAO组,大鼠体质量显著下降(P<0.05),血清IL-1含量显著增加(P<0.01),IL-6、TNF-α含量差异无统计学意义(P>0.05),CHRNA7、ChAT、IκBα mRNA及蛋白水平表达趋势下降,NF-κB p50/p65 mRNA及蛋白水平表达趋势上升,且主要表达于关节面。结论:经方二妙散可能通过ChAT介导α7nAChR高表达,从而下调NF-κB p50/p65,进而显著降低CIA大鼠炎症因子表达,缓解机体炎症和关节病变程度,最终有效治疗CIA。

蓬草除痹汤干预类风湿性关节炎大鼠骨吸收骨重建及细胞因子的表达

背景:实验研究显示,复方中药能有效下调RANKL或上调护骨素及调节RANKL/OPG轴而发挥中药抑制关节破坏和骨吸收的作用。目的:进一步验证中药蓬草除痹汤对类风湿性关节炎大鼠细胞因子及骨吸收和重建的影响。方法:取Wistar大鼠60只,随机分为6组,空白组、模型组、中药蓬草除痹汤高、中、低剂量组、雷公藤对照组。空白组不做处理,其余大鼠建立胶原诱导性关节炎大鼠模型,模型组不做处理,其他各组均为灌胃给药,1次/d,连续给药28d。结果与结论:与模型组比较,各治疗组可以显著抑制大鼠右足肿胀的程度(P<0.01或P<0.05)。各治疗组血清白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2水平均明显低于模型组(P<0.01),其中蓬草除痹汤中、高剂量组抑制作用明显优于雷公藤多甙片组(P<0.05)。各治疗组大鼠关节软骨下骨和骨小梁区核因子κB受体活化因子配体表达均低于模型组(P<0.01),护骨素关节软骨组织表达量均低于模型组(均P<0.01)。表明,蓬草除痹汤能有效改善胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症状,减轻骨侵蚀,其机制可能与下调血清中致炎因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2的水平,抑制类风湿性关节炎大鼠关节中核因子κB受体活化因子配体表达有关。

蓬草除痹汤对类风湿性关节炎大鼠TNF-α、IL-1β、前列腺素E2水平、RANKL及护骨素影响随机平行对照研究

[目的]观察蓬草除痹汤对类风湿性关节炎大鼠细胞因子及骨吸收和重建影响。[方法]使用随机平行对照方法,将60只Wistar大鼠编号查随机数字表分为六组,空白组、模型组、蓬草除痹汤(高、中、低剂量)组、雷公藤多甙片组,10只/组。复制胶原诱导性关节炎大鼠模型,分别灌胃干预,空白组、模型组等容积生理盐水;蓬草除痹汤组(生药38.5g/kg,19.5g/kg,9.75g/kg),雷公藤多甙片混悬液5.75g/kg,1次/d,连续28d。连续干预4周后,各组大鼠眶静脉取血,3500r/min,离心10min,取上清液存于-70℃冰箱备用。观测关节炎指数、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2水平、光镜下RANKL、护骨素。[结果]各药物干预组均可显著抑制大鼠右足肿胀程度(P<0.01/P<0.05),血清白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2水平均明显低于模型组(P<0.01);蓬草除痹汤中、高剂量组抑制作用明显优于雷公藤多甙片组(P<0.05);各药物干预组大鼠关节软骨下骨和骨小梁区核因子κB受体活化因子配体表达均低于模型组(P<0.01),护骨素关节软骨组织表达量均低于模型组(P<0.01)。[结论]蓬草除痹汤可有效改善胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症状,减轻骨侵蚀,机制与下调血清中致炎因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2的水平,抑制类风湿性关节炎大鼠关节中核因子κB受体活化因子配体表达有关。

雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎雌性大鼠生殖毒性的影响

为研究雷公藤甲素(triptolide, TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将50只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量0.5、1、2倍组(含雷公藤甲素3.75、7.5、15μg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,首次免疫后当日开始灌胃给药,每天1次,给药42 d。分别于第21、42天取材,计算子宫和卵巢脏器指数;显微镜下观察子宫和卵巢组织病理形态学变化;ELISA法检测卵巢组织匀浆中雌二醇(estradiol, E_(2))及细胞色素P450A1(aromatase, CYP19A1)水平;免疫组织化学法检测卵巢组织中通路相关蛋白转化生长因子β3(transforming growth factor β3, TGFβ3)、细胞信号传导分子3(mothers against decapentaplegic homolog 3, Smad3)及肾上腺核受体1(steroidogenic factor-1, SF-1)表达水平。并在体外建立中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞系,经TP给药(30、60、120 nmol·L^(-1))24 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TGFβ3、Smad3及SF-1蛋白表达,并通过免疫荧光检测SF-1因子入核情况。结果表明,与模型组比较,TP各给药组在给药21、42 d子宫腺体数、总卵泡数、成熟卵泡数、黄体数均有降低趋势,但差异并无统计学意义,仅2倍TP在给药42 d时可显著增加闭锁卵泡数;TP 3.75μg·kg^(-1)·d^(-1)在给药21 d即可显著降低E_(2)水平,但对雌激素合成限速酶CYP19A1无显著影响,但可显著降低卵巢组织TGFβ3、Smad3因子表达,且无论给药21 d还是42 d,TP 7.5、15μg·kg^(-1)·d^(-1)均显著降低SF-1因子表达。TP可显著促进体外卵巢细胞凋亡,给药24 h后,凋亡主要集中在凋亡晚期;且60 nmol·L^(-1) TP即可显著降低TGFβ3、Smad3及SF-1蛋白表达,并呈剂量依赖性。综上所述,2倍以下临床等效剂量的TP灌胃21、42 d并未引起CIA大鼠子宫、卵巢组织明显的生殖损伤,仅在2倍临床等效剂量给药42 d时,闭锁卵泡数发生显著变化。TP通过抑制TGFβ3/Smad3/SF-1通路表达发挥体内生殖靶器官及体外卵巢细胞生殖毒性作用。

无尾果醇提物对类风湿性关节炎大鼠的影响

目的研究无尾果乙醇提取物对类风湿性关节炎大鼠的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,观察醇提物对大鼠体质量、关节炎指数、足肿胀程度、关节病理改变及TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-2、p65、IκBα磷酸化水平的影响。结果乙醇提取物可明显改善大鼠症状,显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、p65、IκBα磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),显著升高IL-2水平(P<0.01)。结论无尾果乙醇提取物具有良好的抗类风湿性关节炎作用,其机制可能与NF-κB信号通路有关。