穿山龙薯蓣皂苷通过调控自噬治疗胶原诱导性关节炎小鼠模型的机制

目的探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制。方法通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激。加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组。在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标。结果与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P<0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P<0.01)。与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P<0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状。与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低。结论穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用。

基于IL-6/STAT3通路研究苗药方剂“四大血”对胶原诱导性关节炎小鼠的保护作用

目的基于白细胞介素-6(IL-6)/STAT3通路研究苗药方剂“四大血”(SX)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的保护作用机制。方法取40只C57BL/6雄性小鼠随机均分为4组[正常组、模型组、SX组和甲氨蝶呤(MTX)组],采用鸡Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂混合乳化剂诱导类风湿性关节炎(RA)小鼠模型。造模成功后按照实验分组(每组6只)进行灌胃给药。分别检测各组小鼠的足肿胀程度、关节病理改变、关节炎指数(AI)评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平、关节滑膜组织中p-STAT3蛋白表达情况。结果SX对RA疾病相关指标有显著改善作用,可以降低小鼠足肿胀程度、关节炎滑膜炎症、AI评分、TNF-α和IL-6水平,抑制p-STAT3蛋白的表达。结论SX可以发挥明显的抗RA作用,其可通过抑制IL-6/STAT3信号通路蛋白(p-STAT3)表达发挥对CIA小鼠的保护作用。

益肾蠲痹丸对胶原诱导性关节炎小鼠血清炎症因子及肠道菌群的影响

目的研究益肾蠲痹丸对胶原诱导性关节炎小鼠(CIA)血清炎症因子和肠道菌群的影响,从肠道微生态角度探讨其治疗类风湿关节炎的作用机制。方法根据随机数字表法将18只BALB/c小鼠分为空白组、模型组、益肾蠲痹组,每组6只。模型组和益肾蠲痹组小鼠采用尾部注射鸡Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂混合液方法构建CIA模型,第28天造模成功后,益肾蠲痹组开始给予益肾蠲痹丸浓缩剂灌胃,空白组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃,均连续灌胃4周。记录3组小鼠造模第28天和灌胃2周、4周后的体重及关节炎指数评分;灌胃4周后,ELISA法检测血清白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)水平,HE染色观察关节组织病理学形态,16SrDNA法进行肠道菌群分析。结果灌胃2周和4周后,模型组小鼠体重均明显低于空白组(P均<0.05),而益肾蠲痹丸组小鼠体重均明显高于同期模型组(P均<0.05)。灌胃2周后,模型组和益肾蠲痹组小鼠关节炎指数评分比较差异无统计学意义(P>0.05);灌胃4周后,益肾蠲痹组小鼠关节炎指数评分明显低于模型组(P<0.05)。灌胃4周后,模型组小鼠血清IL-10水平明显低于空白组(P<0.05),血清IL-17A水平明显高于空白组(P<0.05),关节腔内见滑膜细胞增生和血管翳生成,肠道菌群丰度和多样性显著下降,菌群结构也发生明显变化;与模型组比较,益肾蠲痹组小鼠血清IL-10水平明显升高(P<0.05),IL-17A水平明显降低(P<0.05),关节腔内无滑膜细胞增生和血管翳,肠道菌群丰度和均匀度均明显增加,且物种差异明显。结论益肾蠲痹丸对CIA小鼠具有显著抗炎和调节肠道内菌群的丰富度和多样性作用,推测其调节肠道内微生态的作用机制可能与调节Th17/Treg的平衡相关。

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

目的研究16k D黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响,探讨黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机理。方法采用雄性Balb/c小鼠建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白高、中、低剂量组,另设空白对照组;各治疗组腹腔注射药物14天,对照组与模型组注射等体积生理盐水。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3^+CD4^+IL-17A^+Th17细胞、CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾组织中维甲酸相关孤独受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)和叉头状转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。结果流式检测结果显示,黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠外周血中CD3^+CD4^+IL-17A^+Th17细胞比例(P<0.01),提高CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的比例(P<0.01)。Western blot结果显示黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠脾组织中RORγt的表达(P<0.01),提高Foxp3的表达(P<0.01)。结论黄芪糖蛋白提高Foxp3的表达水平,降低RORγt的表达水平,恢复Th17/Treg细胞之间的平衡,可能是黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的机制之一。

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠脾组织T-bet及GATA-3表达的影响

目的:探讨黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)小鼠特异性转录因子T-bet和GATA-3表达的影响,阐述黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机制。方法:建立牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型,随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白低剂量组、中剂量组、高剂量组;HE染色观察CIA小鼠脾组织损伤程度;采用流式细胞术检测CIA小鼠外周血IFN-γ和IL-4的水平;Western blot法检测CIA小鼠脾组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪糖蛋白改善了CIA小鼠脾组织损伤情况,减轻炎性反应细胞浸润,下调了外周血IFN-γ和IL-4水平(P<0.05);同时,降低了T-bet和GATA-3蛋白的表达(P<0.05)。结论:黄芪糖蛋白对CIA小鼠的治疗作用,可能是与降低T-bet、GATA-3表达,调整Th1/Th2功能失衡有关。

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白调控胶原诱导性关节炎小鼠肠系膜淋巴结Treg/Th17平衡

目的探讨乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(Zaocys typeⅡcollagen,ZCⅡ)对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNLs)Treg/Th17细胞及其细胞因子的影响。方法鸡Ⅱ型胶原蛋白小鼠尾根部皮下注射,诱导CIA模型;胃蛋白酶消化法提取ZCⅡ,口服高、中、低剂量ZCⅡ干预。视觉评分法评价关节肿胀,HE染色评价膝关节组织病理学;分离小鼠MLNLs,流式细胞术(FCM)检测Treg和Th17细胞的比率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MLNLs培养上清中TGF-β和IL-17的活性。结果与正常组比较,CIA小鼠关节炎及组织病理学评分升高(P<0.05),MLNLs中Treg和Th17的比率及其分泌TGF-β和IL-17水平上升(P<0.05)。与CIA模型组比较,不同剂量ZCⅡ干预组关节炎及组织病理学评分降低(P<0.05),MLNLs中Treg细胞的比率上升,Th17细胞的比率下降(P<0.05),MLNLs分泌TGF-β水平上升,分泌IL-17水平下降(P<0.05)。结论口服ZCⅡ能够改善CIA小鼠关节炎及组织病理学评分;ZCⅡ可能通过调节MLNLs中Treg/Th17比率及其细胞因子的水平,重新诱导CIA小鼠的免疫平衡,缓解关节炎症。

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白的鉴定及其对胶原诱导性关节炎小鼠的干预研究

目的：分析乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白（Zaocys type Ⅱ collagen，ZC Ⅱ）与其他物种Ⅱ型胶原蛋白（C Ⅱ collagen）的同源性，探讨其对胶原诱导性关节炎（Collagen—induced arthritis，CIA）小鼠关节炎症的影响。方法：采用限制性胃蛋白酶消化法提取ZCⅡ；SDS—PAGE凝胶电泳及紫外分光光度计法对其鉴定，质谱分析其同源性。鸡CⅡ小鼠尾根部皮下注射诱导CIA模型；口服ZCII高、中、低剂量干预，视觉评分法对关节炎评分，HE染色评价小鼠膝关节病理变化。结果：提取的ZCU分子量约为110～140kD，紫外吸收峰为230nm左右；质谱分析所得肽质量指纹图谱与其他物种有4个以上肽段匹配，蛋白评分大于95％。在关节炎症方面，与正常对照组比较，CIA小鼠关节炎及组织病理学评分升高（P〈0．05）；与CIA模型组比较，不同剂量ZCU干预组关节炎及组织病理学评分显著降低（P〈0．05）。结论：质谱分析结果提示ZCⅡ与其他物种CⅡ具有较高同源性；ZCII能显著抑制CIA小鼠的关节肿胀，改善关节组织病理变化。

薯蓣皂苷元体外作用对胶原诱导性关节炎小鼠Th1/Th2型细胞因子的影响

目的探讨薯蓣皂苷元体外作用对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠外周淋巴细胞分泌细胞因子水平的影响。方法建立CIA小鼠模型,无菌取外周淋巴组织,提取淋巴细胞体外培养,将淋巴细胞分为空白组、细胞模型组、高、中、低剂量组,采用基因芯片法检测各组培养上清中辅助性T细胞(Th)1/Th2型细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-4、IL-5的表达水平。结果薯蓣皂苷元作用后IFN-γ表达水平有降低趋势,其中高剂量组薯蓣皂苷元对IFN-γ表达有显著的抑制作用(P<0.01)。经薯蓣皂苷元作用后TNF-α有降低趋势,但与模型组比较差异并无统计学意义(P>0.05)。经薯蓣皂苷元作用后IL-4水平有上升趋势,其中中、高剂量薯蓣皂苷元可以显著提高IL-4水平(P<0.05)。低、中、高剂量薯蓣皂苷元作用后可以显著提高IL-5水平(P<0.01,P<0.05)。结论薯蓣皂苷元体外对CIA小鼠外周淋巴细胞Th1/Th2型细胞因子具有一定的调节作用,可能与其治疗类风湿关节炎有关。

胶原诱导性关节炎小鼠CD4^+ T细胞亚群表达酪氨酸羟化酶的作用

目的:本研究应用胶原诱导性关节炎(CIA)的动物模型,通过研究CD4+T细胞亚群表达酪氨酸羟化酶(TH)的变化与作用,探讨CD4+T细胞亚群来源的儿茶酚胺与CIA的炎症反应之间的关系。方法:雄性DBA/1小鼠36只随机分为对照组、35天模型组和55天模型组(n=12)。用II型胶原(CII)乳剂免疫DBA/1小鼠诱导CIA,在初次免疫后第35天和55天进行关节临床评分并检测血清中抗CII IgG抗体水平的变化。用Western blot法检测肠系膜淋巴结中Th1、Th17、Th2和Treg细胞的特异性转录因子及其细胞因子以及TH表达的变化。用流式细胞术检测肠系膜淋巴结中表达TH的CD4+T细胞亚群数目的变化。结果:CIA小鼠在发病早期(初次免疫后第35天)和发病晚期(初次免疫后第55天)临床评分和血清中抗CII IgG抗体水平显著升高。CIA小鼠肠系膜淋巴结中Th1和Th17细胞的特异性转录因子和细胞因子表达增加而Th2和Treg细胞的细胞因子表达减少。CIA小鼠肠系膜淋巴结中TH的表达增加,且CD4+T细胞中TH+的细胞数目增多,这主要是来自CD4+T细胞亚群中Th1和Th17细胞的作用。结论:CIA小鼠肠系膜淋巴结中存在CD4+T细胞亚群来源的儿茶酚胺的增加,可能在CIA的发展过程中具有一定的抗炎作用。

雷帕霉素联合人脐带血CD4^+ CD25^+调节性T细胞治疗胶原诱导性关节炎小鼠的初步研究

目的:初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合人脐带血CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用。方法:通过体外扩增培养获得人脐带血Tregs;建立牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)小鼠模型;将CIA小鼠随机分为对照组,Tregs治疗组,Rapa治疗组,Tregs与Rapa联合治疗组;小鼠骨关节切片进行Safranin O-fast green染色、甲苯胺蓝染色以及HE染色;ELISA法检测CIA小鼠血浆抗Ⅱ型胶原抗体浓度;流式细胞术检测CIA小鼠脾脏CD4+T细胞亚型;检测Tregs在体外对CIA小鼠Ⅱ型胶原特异性CD4+T细胞增殖的抑制功能;Transwell分隔培养法比较非接触培养与直接接触培养中Tregs对CD4+T细胞增殖抑制作用的差异。结果:Tregs与Rapa联合治疗能够延缓疾病发生,显著降低关节炎评分,减少CIA小鼠关节中软骨的破坏以及炎症细胞浸润,降低CIA小鼠血浆中抗胶原总IgG抗体水平以及脾脏中Th17细胞比例;Tregs在体外能够有效抑制CIA小鼠胶原特异性CD4+T细胞的增殖,这种抑制作用主要可能是通过直接接触抑制途径起作用。结论:雷帕霉素联合人脐带血Tregs治疗能够改善CIA小鼠关节炎症状。

胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞的检测及意义

目的:研究Th17细胞及其相关细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在胶原诱导性关节炎(collagen-induced ar-thritis,CIA)小鼠体内的变化。方法:利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠CIA模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL-17的含量。结果:CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例分别为(3.19±0.70)%、(3.54±0.97)%,显著高于正常对照组的(0.95±0.34)%、(1.31±0.47)%,P<0.01。CIA小鼠血清中IL-17的含量也明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:Th17细胞及其分泌的细胞因子IL-17在CIA小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。

蠲痹颗粒对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞平衡调控作用的研究

目的:研究蠲痹颗粒对胶原诱导性小鼠关节炎Th17/Treg细胞平衡调控作用,揭示蠲痹颗粒治疗类风湿关节炎的作用机理。方法:建立牛II型胶原诱导性关节炎(CIA)模型,按临床评分将20只DBA/1小鼠分为CIA模型组和蠲痹颗粒组,每组10只。关节炎临床评分法观察CIA小鼠关节炎发病严重程度;流式细胞术检测脾淋巴细胞(CD4、CD8、B220)亚群比例、CD4+T细胞内Th17、Th1细胞因子及Treg细胞的表达。结果:蠲痹颗粒能显著降低CIA小鼠胶原关节炎的临床评分,对脾淋巴细胞(CD4、CD8、B220)亚群比例无明显影响;同时下调CIA小鼠CD4+T细胞胞内白细胞介素-17A的表达水平,在一定程度上促进Treg细胞的表达。结论:调控Th17细胞与Treg细胞平衡,下调促炎细胞因子白细胞介素-17A表达,可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞分化作用研究

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠体内Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17（IL-17A）的作用。方法健康SPF级DBA/1 7~8周雄性小鼠20只,测定造模对照组（经生理盐水治疗后CIA小鼠）、薏苡仁酯组（经薏苡仁酯注射液治疗后CIA小鼠）小鼠脾脏Th17细胞及血清中IL-17变化。应用流式细胞术（FCM）分析小鼠脾脏中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IL-17A含量。结果经薏苡仁酯注射液治疗后,薏苡仁酯组CIA小鼠脾脏中Th17细胞比例较造模对照组显著降低（1.82%比4.99%,P〈0.05）,小鼠血清中IL-17A的含量也明显低于造模对照组[（3.54±0.61）pg/m L比（8.31±0.25）pg/m L,P〈0.05]。结论薏苡仁酯对CIA小鼠Th17细胞具有分化作用。

胶原诱导性关节炎小鼠的淋巴组织中CD4~＋T细胞表达酪氨酸羟化酶的变化

目的:以类风湿性关节炎(RA)的小鼠模型—胶原诱导性关节炎(CIA)为研究对象,探讨在CIA发病过程中淋巴组织的CD4+T细胞表达儿茶酚胺合成的限速酶—酪氨酸羟化酶(TH)的变化,为淋巴细胞的内源性儿茶酚胺参与自身免疫性疾病的发病机制提供研究基础。方法:在DBA/1小鼠尾根部皮内多点注射鸡Ⅱ型胶原乳剂以诱导CIA,在初次免疫后的第22天开始进行小鼠的关节临床评分,并在初次免疫后的第35和第55天进行小鼠踝关节的组织病理学观察。用免疫荧光组织化学法检测小鼠在初次免疫后的第35和55天,其肠系膜淋巴结和脾脏中的TH阳性细胞数和CD4阳性细胞数的变化,以及TH+和CD4+T细胞共定位的细胞数量变化。结果:在初次免疫后的第29~32天,小鼠出现关节红肿,临床评分升高,在第46天达到高峰。踝关节病理学检查发现,CIA小鼠在发病早期(初次免疫后第35天)和发病晚期(初次免疫后第55天)其关节滑膜组织中炎性细胞浸润、滑膜组织增生、关节间隙变窄、部分关节软骨破坏。与正常组和佐剂对照组相比,CIA小鼠在发病早期和发病晚期其肠系膜淋巴结和脾脏中的TH+细胞数目和CD4+T细胞数目均显著增多,而且TH+和CD4+共定位的细胞数目也明显增多,但在CIA小鼠的发病早期与发病晚期之间,这些阳性细胞的数目无统计学差异。结论:在CIA发病过程中,CD4+T细胞表达TH增加,提示淋巴细胞的内源性儿茶酚胺参与RA的发病机制。

青藤碱对胶原诱导性关节炎小鼠TLR4、MyD88及NF-κB mRNA表达的影响

目的:探讨青藤碱(SIN)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠滑膜Toll样受体(TLR)4、髓样分化因子88(My D88)、核因子(NF)-κB mRNA表达的影响。方法:30只DBA/1小鼠均分为正常组、CIA组和SIN组;CIA组与SIN组小鼠尾根部给予皮内注射胶原乳剂诱导建立CIA模型,CIA造模第28天时SIN组小鼠给予SIN干预治疗,其余两组予生理盐水作对照,治疗20 d;于造模第27、34、41及48天时对各组小鼠进行关节炎指数(AI)评分,并于第48天时处死3组小鼠取小鼠膝关节滑膜,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定小鼠滑膜TLR4、My D88及NF-κB mRNA的表达。结果:与正常组比较,CIA组及SIN组小鼠AI评分明显升高(P<0.01);造模第41和48天时,SIN组小鼠AI评分较CIA组有明显下降(P<0.05);CIA组TLR4、My D88、NF-κB mRNA的相对表达较正常组明显上调,与CIA组相比,SIN组TLR4、My D88及NF-κB mRNA的相对表达明显降低(P<0.01)。结论:SIN可改善CIA小鼠的关节炎症,这可能与其抑制了滑膜TLR4/NF-κB信号通路有关。

圣愈汤对胶原诱导性关节炎小鼠踝关节组织SDF-1/CXCR4信号通路的影响

目的探讨圣愈汤对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的治疗作用,及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号轴的调控作用。方法取DAB/1小鼠72只,用随机数字表法分为正常对照组、模型组、阳性对照组(甲氨蝶呤,0.1 mg/kg)组和低(9 g/kg)、中(18 g/kg)、高(36 g/kg)剂量圣愈汤组,每组12只。除正常对照组外,其余各组均给予鸡Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)乳化液建立小鼠CIA模型,并于造模成功后开始灌胃给药,各组均连续给药28 d,1次/d。末次给药结束12 h后,观察小鼠一般行为变化,并对关节炎指数进行评分;酶联免疫吸附法检测踝关节液中IL-1、IL-6、TNF-α水平;苏木精-伊红(HE)染色观察踝关节病理变化;免疫组化法染色观察踝关节组织SDF-1及CXCR4表达情况;蛋白免疫印迹法(WB)分别检测踝关节组织SDF-1/CXCR4相关通路蛋白-细胞外信号调节酶(Erk)及其磷酸化Erk(p-Erk)、细胞外信号调节酶相关激酶(p38MAPK)及其磷酸化p38MAPK(pp38MAPK)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达情况。结果与正常对照组相比,模型组小鼠踝关节肿胀、滑膜增生及软骨退变等病理损伤严重,关节炎评分及滑膜增厚评分、关节腔液IL-1、IL-6及TNF-α水平、踝关节组织SDF-1、CXCR4阳性表达水平、滑膜及软骨组织中p-Erk/Erk、p-p38MAPK/p38MAPK、MMP-3、MMP-9表达水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,圣愈汤低、中、高剂量组及阳性对照组小鼠踝关节肿胀、滑膜增生及软骨退变等病理损伤减轻,且SDF-1、CXCR4阳性表达及相关通路蛋白、炎症细胞因子等上述指标均降低(P<0.05),且随着圣愈汤剂量升高上述指标降低越明显(P<0.05);圣愈汤中剂量组与阳性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论圣愈汤可能通过抑制SDF-1/CXCR4激活,减弱Erk/p38MAPK通路活化,减少基质金属酶和炎症细胞因子等释放,改善CIA小鼠踝关节红肿及滑膜增生、软骨退变等症状。

异种双份脐血干细胞移植对胶原诱导性关节炎小鼠IL-4及TNF-α mRNA表达的影响

目的观察异种、异基因双份人脐血间充质干细胞(MSCs)移植对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠白细胞介素(IL)-4及肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达的影响。方法先进行脐血CD34+细胞分选,然后采用弗氏完全佐剂和Ⅱ型胶原诱导C57BL/6(H-2b)小鼠,建立CIA小鼠模型,并随机分为正常对照组、模型组、单份MSCs移植治疗组、双份MSCs移植治疗组、甲氨蝶呤阳性治疗对照组,每组10只小鼠。采用尾静脉注射,除模型组、正常对照组用生理盐水,两个MSCs移植治疗组给予的脐血所含的CD34+细胞数均为2×105。移植后第42天处死动物、取脾组织,采用反转录PCR(RT-PCR)法检测IL-4、TNF-α mRNA的表达,收集数据并做统计分析。结果双份MSCs移植治疗组IL-4、TNF-α mRNA的表达,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论双份MSCs移植治疗CIA小鼠能显著抑制TNF-α mRNA的表达,上调IL-4 mRNA表达,具有免疫调节作用,可能有助于类风湿关节炎的治疗。

Flk-1^+骨髓间充质干细胞移植上调白细胞介素6水平:是否同时加重了胶原诱导性关节炎小鼠的症状?

背景:间充质干细胞的免疫调节作用是被大家普遍认可的,在以往实验中也对Flk-1+骨髓间充质干细胞体外抑制T/B淋巴细胞增殖的能力进行了确认。目的:验证Flk-1+骨髓间充质干细胞对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用。方法:健康10周龄雄性DBA-1(H-2Kq)小鼠18只,随机分为3组:初次免疫后细胞移植组、加强免疫后细胞移植组、模型对照组,3组小鼠均通过尾皮下注射牛Ⅱ型胶原进行初次免疫,21d后同法进行加强免疫,建立胶原诱导性关节炎模型。密度梯度离心法和贴壁筛选法体外分离DBA-1(H-2Kq)小鼠Flk-1+骨髓间充质干细胞,初次免疫后细胞移植组小鼠在初次免疫后立即经尾静脉输注Flk-1+骨髓间充质干细胞(1～2)×106个/只,加强免疫后细胞移植组小鼠在加强免疫时同法输注等量Flk-1+骨髓间充质干细胞,模型对照组小鼠于初次免疫后0或21d尾静脉输注等量生理盐水。观察初次免疫后和加强免疫后各组小鼠的爪垫增厚情况、临床评分,检测小鼠关节病理学变化及血清因子质量浓度的动态变化。结果与结论:与模型对照组比较,初次免疫后细胞移植组爪垫增厚程度及平均临床疾病得分均无明显差异(P>0.05),均可见明显的滑膜组织损伤和炎症细胞浸润,各血清细胞因子质量浓度基本相似;而加强免疫后细胞移植组爪垫明显增厚(P<0.01),平均临床疾病得分高达3.35分,滑膜损伤严重,毛细血管增生,在初次免疫后28d白细胞介素6血清浓度急剧上升(P<0.1),初次免疫后35d白细胞介素6血清浓度又明显下降(P<0.1)。提示在胶原诱导性关节炎小鼠模型中,Flk-1+骨髓间充质干细胞移植不但未取得预期的治疗效果,还在加强免疫后细胞移植组观察到显著地关节炎症状恶化现象,其可能通过上调白细胞介素6血清浓度加重类风湿关节炎小鼠的行为症状。

OPN-siRNA对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用

目的:观察骨桥蛋白(OPN)的小干扰RNA(siRNA)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的治疗作用。方法:采用牛Ⅱ型胶原建立CIA小鼠,未做任何处理的DBA1小鼠为空白组,将CIA小鼠随机分为模型组、空载体组、OPN-siRNA1组及OPN-siRNA2组,每组3只,将成功构建的OPN-siRNA表达载体尾静脉注射CIA小鼠,模型组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液(PBS)和p GFP-V-RS空载体。每周注射一次,每次注射100μl,共注射8次。注射后28 d处死小鼠。RT-PCR法检测小鼠肺脏组织中OPN mRNA的表达水平;免疫组化法检测小鼠肺脏组织和踝关节中OPN蛋白的表达水平;病理切片苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肺脏及踝关节的病理变化; ELISA检测小鼠血清中IL-17、IL-10及IFN-γ水平;流式细胞检测小鼠脾细胞Th17及Treg水平。结果:(1)OPN-siRNA1组和OPN-siRNA2组小鼠肺组织中OPN mRNA的表达明显低于模型组和空载体组,差异有统计学意义(P<0. 05)。(2)OPN-siRNA1组和OPN-siRNA2组小鼠肺脏和踝关节中OPN蛋白的表达明显低于模型组和空载体组(P<0. 05)。(3)光镜下观察踝关节的HE染色病理切片,与模型组和空载体组比较:OPNsiRNA1组和OPN-siRNA2组小鼠踝关节炎性细胞浸润减少,关节肿胀程度减轻;肺组织炎细胞浸润减轻,间质性肺病明显改善。(4)小鼠血清IL-10水平OPN-siRNA1组和OPN-siRNA2组明显高于模型组和空载体组,差异有统计学意义(P<0. 05);血清IFN-γ水平OPN-siRNA1组和OPN-siRNA2组低于模型组和空载体组,差异有统计学意义(P<0. 05)。(5)OPN-siRNA1组和OPN-siRNA2组的Th17细胞下降,Treg细胞升高,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:OPN-siRNA抑制RA模型鼠体内OPN基因和蛋白表达和炎症介质的水平,同时改善CIA小鼠肺脏和踝关节的病理变化,因此,OPN可能成为RA治疗的潜在靶点。

断藤益母汤对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用及对血清IL-1β和MMP-1表达影响

目的探讨断藤益母汤对类风湿关节炎的治疗作用及可能的作用机制。方法取SPF级DBA/1雄性小鼠48只,随机分为空白对照组、模型组、甲氨蝶呤组,断藤益母汤高剂量组、断藤益母汤中剂量组、断藤益母汤低剂量组,除空白组外,其它组建立胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠模型,所有小鼠连续灌胃28 d,观察各组小鼠足肿胀度变化,记录小鼠关节炎评分,检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的水平,用苏木素伊红(HE)染色法观察小鼠足踝关节滑膜病理改变。结果与模型组小鼠比较,甲氨蝶呤组及断藤益母汤不同剂量组小鼠的足肿胀度均明显降低,足关节炎评分下降,病理显示用药组小鼠踝关节病理炎性细胞浸润少,滑膜增生明显减少,软骨及骨侵蚀减弱,病理评分降低(P<0.05),血清IL-1β、MMP-1炎症因子水平对比模型组明显下降(P<0.05),其中断藤益母汤高剂量组显示更好的治疗效果。结论断藤益母汤对CIA模型小鼠关节炎症有良好治疗效果,可能是与降低血清IL-1β、MMP-1的水平有关。