一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法的研究

目的:应用胶原酶Ⅴ酶消化法建立一种高效的小鼠肺单细胞悬液制备方法。方法:小鼠处死后取出肺脏,将其剪碎,应用胶原酶Ⅴ(175 U.ml-1)消化,37℃孵育1 h,随后进行细胞计数、活细胞百分率和流式细胞仪检测。结果:(1)光镜下见胶原酶Ⅴ消化所得小鼠肺细胞多种多样,大小不一,细胞形态完整,分散度好;(2)30 mg小鼠肺组织可提取细胞数量为(1～3)×106个,肺单细胞悬液中活细胞百分率均在95%以上;(3)流式细胞术检测可见大量的肺细胞。结论:应用胶原酶Ⅴ酶消化法制备小鼠肺单细胞悬液高效、简便,为肺细胞生物学及肺部疾病发病机制研究提供了有效的肺单细胞制备方法。

不同日龄猪胰岛形态学特点及分离纯化的比较研究

本试验旨在研究不同日龄的猪胰岛细胞形态学特征和比较不同分离纯化技术的方法,用出生1日龄、50日龄、100日龄、150日龄的猪为试验动物,采用胶原酶静注法、DTZ染色法、histopaque纯化法等进行猪胰岛形态学观察及胰岛分离纯化,并采用葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测1日龄和150日龄猪胰岛体外功能。结果表明,出生1日龄、50日龄、100日龄、150日龄猪胰岛直径分别为33±9μm、64±20μm、91±32μm、143±54μm;1日龄猪分离胰岛数为3045±986个/g、纯度为78%、存活率为92%,50日龄猪分离胰岛数为2567±873个/g、纯度为74%、存活率为94%;100日龄龄猪分离胰岛数为1969±547个/g、纯度为79%、存活率为90%;150日龄猪分离胰岛数为1758±125个/g、纯度为84%、存活率为92%;1日龄猪细胞高糖组胰岛素释放量为800.56±80.53 mIU/胰岛,低糖组为178.37±38.44 mIU/胰岛;150日龄猪高糖组胰岛素释放量为723.58±81.69 mIU/胰岛,低糖组为100.43±20.12 mIU/胰岛。由此可知,出生后胰岛呈现随日龄逐渐增大,出生1日龄猪胰岛分化能力、胰岛数量及胰岛释放量优于150日龄猪。