弹性蛋白酶调节中性粒细胞炎性募集的功能研究

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测NE的抑制对中性粒细胞体内炎性募集、体外趋化、牢固黏附、细胞极化与伸展能力的影响;利用流式细胞术及鲁米诺化学发光系统检测NE的抑制对中性粒细胞吞噬及活性氧(ROS)释放能力的影响。结果:西维来司钠盐预处理显著减弱了中性粒细胞体内炎性募集(P<0.001);减弱了中性粒细胞在体外趋化过程中对催化剂方向性的感知(P<0.05),减慢了趋化速率(P<0.05),降低了趋化距离(P<0.05);减少了中性粒细胞在炎性内皮细胞表面形成牢固黏附的能力(P<0.000 1),抑制了中性粒细胞对细菌的吞噬能力(P<0.01);但对中性粒细胞的伸展、极化及ROS的释放均无显著影响。结论:NE的抑制显著损害了中性粒细胞在体内外的炎性募集级联反应及吞噬作用,但对中性粒细胞的伸展、极化、ROS释放等功能无显著影响。

中性粒细胞弹性蛋白酶在支气管扩张中的生物学功能及中药干预研究进展

中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)是中性粒细胞原代颗粒中的一种主要蛋白酶,参与支气管扩张复杂病理的发生、发展,具有调节炎症反应、控制感染、增加黏液分泌、降解细胞外基质和细胞因子及损害免疫系统等多种生物学功能,与疾病预后有关,可作为临床治疗结果的预测因子和可能的治疗靶点。尚未有大量高级别临床研究证明内源性及外源性NE抑制剂对支气管扩张的疗效。中医药发挥其多靶点、多途径、精准施治等作用干预NE介导的支气管扩张,在改善临床症状、减少急性加重次数、减轻气道炎症反应等方面具有优势。该文综述NE在支气管扩张中的主要生物学功能,以及中医药干预NE介导的气道炎症的进展,期望为临床和科研提供有价值的参考依据。

中性粒细胞相关蛋白酶减轻急性心肌梗死早期损伤的研究

目的:明确中性粒细胞弹性蛋白酶及蛋白酶3(neutrophil elastase/proteinase 3, NE/PR3)在心肌梗死早期损伤阶段中的作用。方法:ELISA试剂盒检测急性心肌梗死患者及健康对照组外周血中NE/PR3含量;基于冠状动脉左前降支结扎术构建心肌梗死模型,通过WB及RT-QPCR检测心肌梗死后0、1、3、7d时心脏组织中NE/PR3的表达变化;小型动物心脏超声仪进行心功能检测、免疫组化染色以及Western blot检测纤维化相关蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)变化明确敲除NE/PR3的影响。结果:心肌梗死患者外周血中NE/PR3含量以及中性粒细胞的占比均明显升高;在心肌梗死小鼠的心脏组织中表达量明显升高,且主要在梗死后1d时最为明显;NE/PR3基因缺失小鼠心肌梗死早期的纤维化程度增加、提高了心肌梗死后小鼠存活率、减少早期心脏破裂率并改善损伤早期心功能。结论:敲除中性粒细胞弹性蛋白酶NE/PR3可通过促进早期成纤维细胞活化转换为肌成纤维细胞促进心脏修复从而减少了早期心脏破裂等危险事件的发生及心脏损伤。

中性蛋白酶高温酶解条件下猪粪资源化利用中养分的变化规律

以酶工程及酶动力学为技术依托及科学依据,将猪粪加玉米秸秆组合作为底物,添加2%中性蛋白酶,在生化反应釜中80℃酶解3 h,底物含水量降低至56.01%,同比下降2.34%;大分子有机质含量降低至63.79%,酶解后,A、B处理的底物有机质含量分别降低了14.19%、15.06%;植物可利用大量元素提高至6.87%,符合NY 525—2012有机肥标准;速效磷、速效钾、全盐、总腐殖酸呈下降趋势;蛔虫卵死亡率达到92%,种子发芽指数达到54%,达到有机肥腐熟标准。

中性粒细胞弹性蛋白酶在支气管扩张症中的研究进展

支气管扩张症(BE)主要是中性粒细胞驱动的慢性气道炎症,中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)是中性粒细胞储存并释放水解功能最为强大的蛋白酶,通过损伤气道黏膜屏障、抑制气道免疫反应以及调节炎症等多种途径参与BE的发病机制。NE是目前BE最具潜力的生物标志物,针对NE靶向疗法正在开发过程中。本文就NE的特性、参与BE的作用机制、作为潜在生物标志物及治疗靶点的应用前景方面进行综述,期望为BE诊断、评估及个性化治疗提供新的视野。

枯草芽孢杆菌对环境耐受性和产中性蛋白酶能力研究

为了探究枯草芽孢杆菌对环境耐受性及产中性蛋白酶的能力,试验模拟饲料加工温度、胃肠道酸性环境、胆盐对枯草芽孢杆菌进行环境耐受性评定,在单因素(pH值、时间、温度、接种量、碳源、碳源添加量和金属离子)试验基础上采用正交试验以中性蛋白酶活力为评定指标,对枯草芽孢杆菌培养条件进行优化。结果表明:枯草芽孢杆菌对温度、胃肠道酸性环境和胆盐均具有一定耐受性;单因素试验中最佳pH值为5,培养时间为24 h,培养温度为30℃,接种量为2%,碳源为淀粉,淀粉添加量为3%;金属离子Mg^(2+)、Fe^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)和Zn^(2+)对产酶均具有抑制作用,不在培养基中添加金属离子。正交试验优化后枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶活力最佳培养条件为pH值6,淀粉添加量3%,培养温度35℃,培养时间24 h,枯草芽孢杆菌种子菌液接种量3%,在最优条件下,酶活力可达40.05 U/mL。说明枯草芽孢杆菌可耐受动物胃肠道环境且培养条件优化后中性蛋白酶酶活力显著提高。

改良根治术与保乳手术治疗早期乳腺癌的疗效及对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和基质金属蛋白酶-9影响对比

目的对比改良根治术与保乳手术治疗早期乳腺癌(EBC)的疗效及对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法以2014年1月至2017年4月河北省秦皇岛市第一医院收治的145例EBC患者作为研究对象,按照不同的治疗方式分为保乳手术组70例与改良根治术组75例。两组术后均随访1、5年。对比两组患者的手术指标及手术前后血清NGAL、MMP-9水平变化情况,采用创伤后应激障碍问卷(PCL-C)评估创伤后应激障碍(PTSD),比较两组患者乳房美容效果满意度及术后1、5年的局部复发率、生存率、远处转移率。结果保乳手术组患者术中出血量少于改良根治术组,手术时间、切口长度、住院时间短于改良根治术组(P<0.05);两组的清除淋巴数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术前两组患者的血清NGAL、MMP-9水平比较差异无统计学意义,术后3、5 d时,保乳手术组的NGAL、MMP-9水平均低于术前及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。出院时,保乳手术组的PTSD阳性率、PCL-C总评分均低于改良根治术组,乳房美容效果满意度高于改良根治术组(P<0.05)。两组患者术后1、5年的局部复发率、总生存率、远处转移率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与改良根治术相比,保乳手术改善早期乳腺癌患者的效果明显,可改善患者的手术情况,降低创伤后应激反应,提高患者的乳房美容效果满意度,且对近远期患者的预后并无不利影响,同时并未增加外周血NGAL、MMP-9的表达,安全性较高。

中性粒细胞弹性蛋白酶在急性呼吸窘迫综合征中的研究现状

中性粒细胞弹性蛋白酶是中性粒细胞嗜天青颗粒中的主要蛋白酶,在抵御感染中发挥重要作用。然而,大量释放的中性粒细胞弹性蛋白酶可能导致过度炎症反应,加剧肺组织损伤,诱发急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的发展。西维来司他钠作为一种特异性中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂,在缓解中性粒细胞弹性蛋白酶诱发的病理过程中具有明显的潜力,并在临床急性呼吸窘迫综合征的治疗中受到广泛的关注。本文将深入探讨中性粒细胞弹性蛋白酶的生物学特性及其在急性呼吸窘迫综合征病理生理中的作用机制,以及西维来司他钠在急性呼吸窘迫综合征临床管理中的应用,为深入理解该药物在急性呼吸窘迫综合征治疗中的作用机制提供重要线索。

中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂在脓毒症相关ARDS中作用的研究进展

脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是脓毒症严重并发症之一,其患病率和死亡率居高不下。中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)在其病理生理过程中发挥了重要作用,参与了肺泡-毛细血管屏障破坏、氧化应激和炎症反应、自噬和细胞死亡等多个过程。西维来司他钠作为唯一上市的特异性NE抑制剂(NEI),在减轻炎症反应和保护肺组织中显示出巨大的潜力。该文主要对NE及NEI在脓毒症相关ARDS中的作用机制进行概述,并简要探讨脓毒症相关ARDS和西维来司他钠的潜在治疗方案,以期为临床治疗提供参考。

血清中性粒细胞弹性蛋白酶与育龄期女性复发性单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的关系

目的探讨血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)与育龄期女性复发性单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的关系。方法纳入2021年1月至2022年4月天津市第一中心医院就诊的100例单纯疱疹病毒感染患者,所有患者均在入院后接受统一的抗病毒治疗方案,测定所有患者治疗前及治疗1、2、3、4个月时血清NE水平。将55例治疗有效患者纳入有效组,45例治疗无效患者纳入无效组。比较分析两组患者的基线资料,通过单因素分析及多因素logistic回归模型,分析血清NE与单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的关系。结果无效组患者的性生活频次、血清NE、C反应蛋白(CRP)高于有效组,白细胞介素-2(IL-2)水平低于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。无效组患者治疗前及治疗1、2、3、4个月血清NE水平均高于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,性生活频次、CRP、治疗前NE、治疗1个月NE、治疗2个月NE、治疗3个月NE及治疗4个月NE是影响单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的相关因素(P<0.05)。经限制性立方样条模型(RCS)分析,单纯疱疹病毒感染患者治疗前血清NE水平与抗病毒治疗无效的关联呈非线性曲线型剂量反应关系,当治疗前血清NE水平>113.865ng/ml时,患者抗病毒治疗无效风险随指标水平升高而逐渐增加。结论单纯疱疹病毒感染患者血清NE水平与抗病毒治疗效果有关,治疗前血清NE水平高可能提示患者抗病毒治疗无效的风险较高。

乳清蛋白酶解物对酸奶品质及抗氧化活性的影响

[目的]缩短酸奶发酵时间,提升乳品生产效率、酸奶营养价值和功能特性。[方法]研究乳清蛋白酶解物对酸奶多个指标影响,包括酸度、pH值、黏度、持水力、乳酸菌数量、感官品质、质构特性、抗氧化活性。[结果]在酸奶发酵过程中,酶解物能促进乳酸菌生长,提高发酵产酸能力,有效缩短发酵时间。然而,酶解物添加量超过4%时,酸奶黏度、持水力随酶解物添加量增加而降低。综合分析可知,乳清蛋白酶解物添加量4%时,酸奶感官品质、质构特性、抗氧化活性较佳。ABTS自由基清除率90.07%、DPPH自由基清除率74.94%、羟自由基清除率90.17%、还原力A700为0.657。[结论]在酸奶发酵过程中,添加适量乳清蛋白酶解物不仅缩短发酵周期,还提升酸奶品质、抗氧化活性。

中性粒细胞弹性蛋白酶与慢性阻塞性肺疾病关系的研究进展

慢性阻塞性肺疾病是一种常见且多发的呼吸系统疾病,以慢性炎症为主要特征,而中性粒细胞弹性蛋白酶作为一种重要炎性蛋白酶,它能消化、水解细胞外基质和上皮连接结构,损害气道上皮完整性、损伤肺组织,在该病的演变进展过程中具有重要意义。文章对两者的相关性进行综述与探讨,为中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂作为慢性阻塞性肺疾病临床用药提供新视野及一定理论基础。

中性蛋白酶辅助提取天麻淀粉的工艺优化

以新鲜天麻为原料、中性蛋白酶为酶解剂,通过单因素和正交试验研究料液比、酶解时间、酶解pH、酶添加量和酶解温度对天麻淀粉中蛋白质残留率和天麻淀粉得率的影响,并确定最佳提取工艺。结果表明:天麻淀粉提取最佳工艺为料液比1∶7(g/mL)、酶解时间2.5 h、酶解温度35℃、酶添加量0.8 mg/g、酶解pH 7.0,在此条件下天麻淀粉得率为12.49%,蛋白质残留率为0.0068%。

蜜环菌发酵玉米醇溶蛋白中蛋白酶学性质研究

为探究大型食药用真菌胞外蛋白酶的相关特性,从蜜环菌发酵的玉米醇溶蛋白产物中分离、纯化蛋白酶,通过饱和硫酸铵沉淀粗酶液、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析柱及Sephadex G-50层析柱纯化,得到电泳纯的蛋白酶。结果表明,该蛋白酶的分子质量为18.4 ku;最适温度为60℃,在40~60℃具有良好稳定性;pH值为8时酶活力最高,pH值稳定性范围为6~8;Mn2+对该酶具有明显的促进作用,乙二胺四乙酸(EDTA)对中性蛋白酶有明显的抑制作用;米氏常数Km为3.786 mg/mL。研究结果为大型食药用真菌来源蛋白酶的研究与应用提供理论依据,为大型真菌源酶制剂的研发提出新思路。

五味子蛋白酶解前后抗氧化活性和功能特性

以五味子蛋白为原料,评价中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对五味子蛋白酶解前后的抗氧化活性和功能特性;根据两种蛋白酶最适酶解条件,对五味子蛋白酶解,通过扫描电子显微镜、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、游离巯基和二硫键含量测定分析其结构,并测定其体外清除羟基自由基、DPPH自由基和ABTS~+自由基的能力,测定亚铁离子螯合能力和铁离子还原能力,并对不同酶解产物的持水性、持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性等功能特性进行评价;结果显示,五味子蛋白经酶解后相对分子量显著下降,中性蛋白酶酶解产物分子量最低,中性蛋白酶酶解产物水解度最高,为26.45%,酶解效果优于木瓜蛋白酶。以五味子蛋白为参照,酶解可以提升其抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物抗氧化能力优于木瓜蛋白酶酶解产物,但木瓜蛋白酶酶解产物具有较好的还原能力。五味子蛋白经酶解后,溶解性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性均提高,并且中性蛋白酶酶解产物功能特性优于木瓜蛋白酶酶解产物。扫描电子显微镜观察到五味子蛋白经两种不同蛋白酶酶解后,产生不同程度的碎片和条状结构,并且木瓜蛋白酶的酶解产物中存在部分较大的片状结构,中性蛋白酶酶解产物呈现出细小的无规则碎片结构,相对松散。同时与五味子蛋白相比,两种酶解产物游离巯基含量均增加,其中中性蛋白酶酶解产物二硫键含量最小。综上,酶解可以降低五味子蛋白分子量,提升五味子蛋白的抗氧化活性和功能特性。

Cdc42蛋白参与中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的人气道上皮细胞黏蛋白高分泌

目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)与中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC高分泌的关系。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以Cdc42 siRNA和NE进行干预,将细胞分为6组:对照组、NE组、NE+Cdc42 siRNA组、Cdc42 siRNA组、阴性siRNA组、NE+阴性siRNA组。采用Western blot法检测Cdc42蛋白的相对含量,ELISA和免疫荧光检测各组细胞MUC5AC蛋白的表达水平。结果与对照组相比,NE组Cdc42蛋白含量明显增加(P<0.05),细胞MUC5AC蛋白表达水平亦显著增高(P<0.001);与NE组比较,NE+Cdc42 siRNA组的MUC5AC蛋白水平显著降低(P<0.05),其Cdc42蛋白含量亦明显降低(P<0.001);Cdc42 siRNA组以及阴性siRNA组的Cdc42蛋白、MUC5AC蛋白含量相较于对照组变化不大(P>0.05)。结论Cdc42在NE诱导的气道上皮细胞黏液高分泌的形成过程中可能发挥着重要的介导作用。

蛋白酶对羊肚菌水解液滋味和风味物质的影响

以游离氨基酸总量为指标,研究不同蛋白酶对羊肚菌的酶解效果,筛选羊肚菌酶解增鲜工艺最适蛋白酶,并采用单因素试验以及L9(34)正交试验,优化最适蛋白酶的水解工艺,在此基础上采用氨基酸分析仪及气质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技术对羊肚菌酶解前后氨基酸组成与挥发性风味物质进行分析评价。结果表明:中性蛋白酶酶解后游离氨基酸总量显著高于其他处理组,可以保持其鲜味和滋味的丰富性,因此选择中性蛋白酶对羊肚菌进行酶解处理。中性蛋白酶最佳酶解工艺条件为pH6.5、酶解温度45℃、中性蛋白酶添加量0.20%、酶解时间2.5 h。相较于未经酶解处理样品,该工艺条件下所得水解液(游离氨基酸总量220.54 mg/g)鲜味氨基酸、甜味氨基酸、苦味氨基酸浓度增加;醇类、酮类、醛类等挥发性风味物质相对含量增加,可以作为羊肚菌调味品加工基料。

血液透析患者动静脉内瘘狭窄与中性粒细胞弹性蛋白酶水平的相关性

目的探讨血液透析患者动静脉内瘘狭窄与中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)水平的相关性。方法回顾性选取2020年1月至2022年3月复旦大学附属中山医院青浦分院肾内科收治的维持血液透析的患者共109例,依据静脉内瘘建立后6~8周,经超声检查确认血液透析患者动静脉内瘘狭窄程度,动静脉内瘘狭窄超过50%的为狭窄组(n=61),动静脉内瘘狭窄低于50%的为非狭窄组(n=48)。对两组患者生化指标和血清中NE水平进行对比;分析动静脉内瘘狭窄与NE水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清中NE水平对血液透析患者动静脉内瘘狭窄的诊断价值;Logistic回归分析影响血液透析患者动静脉内瘘狭窄的危险因素。结果两组患者的年龄、性别构成比、糖尿病史、脑血管疾病史、冠状动脉疾病史、外周动脉疾病史、维持透析时间和透析超滤量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者的血红蛋白、超敏C-反应蛋白、白细胞计数、钙、磷、全段甲状旁腺素、尿酸、白蛋白、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。狭窄组患者的中性粒细胞与淋巴细胞比率值为3.92±1.31,明显高于非狭窄组(2.87±0.96),血清铁蛋白和NE水平分别为(296.36±129.18)、(431.73±212.42)ng/mL,明显高于非狭窄组[(142.42±69.37)、(192.51±132.39)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。血液透析患者动静脉内瘘发生狭窄与NLR、SF和NE水平呈现正相关(r=0.297、0.265、0.313,P<0.05);NE水平诊断血液透析患者动静脉内瘘发生狭窄的ROC曲线下面积明显大于NLR、SF。NLR、SF、NE高表达是血液透析患者动静脉内瘘发生狭窄的危险因素。结论血清中NE水平可能与血液透析患者动静脉内瘘狭窄的发生有相关性,可作为炎症指标来预测动静脉内瘘狭窄。

甲壳质酶蛋白40、中性粒细胞载脂蛋白及基质金属蛋白酶-9水平与尿毒症维持性血液透析患者感染相关性研究

目的:探究血清甲壳质酶蛋白40(YKL-40)、中性粒细胞载脂蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与尿毒症维持性血液透析(MHD)患者感染的相关性。方法:选取尿毒症MHD患者120例,根据是否发生院内感染分为两组,感染组34例,非感染组86例,比较感染组感染部位及病原菌分布情况,比较两组一般临床资料及血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、YKL-40、NGAL、MMP-9表达水平,并分析YKL-40、NGAL、MMP-9在MHD患者感染中的应用价值。结果:感染组年龄、透析时间及血清CRP、IL-6、YKL-40、NGAL、MMP-9水平显著高于非感染组(均P<0.05);经Logistic回归分析显示,YKL-40、NGAL、MMP-9水平是预测MHD感染的独立因素(均P<0.05)。YKL-40、NGAL、MMP-9诊断MHD感染的受试工作者特征曲线(ROC)的AUC分别为0.924、0.964、0.814,三者联合诊断MHD感染的AUC值为0.993,优于各单项指标。结论:YKL-40、NGAL、MMP-9水平升高是尿毒症MHD患者感染的独立危险因素,三者联合检测可提高MHD患者感染的诊断价值。

枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的固定化及应用的研究

目前酶法脱毛用酶稳定性差,易受到外界环境影响。为改善酶的稳定性和提高酶法脱毛效率,以脱毛用中性蛋白酶为研究对象,以纳米SiO_(2)、海藻酸钠和壳聚糖为固定化材料,采用共价结合法对枯草芽孢杆菌来源的重组中性蛋白酶的固定化进行了探索和研究。以固定化中性蛋白酶的酶活回收率为指标,通过单因素结合响应面法优化了中性蛋白酶固定化三种材料的配比,纳米SiO_(2)1.02%、壳聚糖1.32%和海藻酸钠1.57%,在此条件下固定化中性蛋白酶的回收率可达67.28%±4.21%。将固定化中性蛋白酶应用于黄牛皮循环脱毛工艺中,可循环脱毛4次,液体酶仅可开展3次,与液体酶相比其稳定性显著提高。经组织学评价脱毛后的黄牛皮粒面和毛孔结构清晰,网状层联系紧密,无缝隙;胶原纤维束内部略松散,胶原纤维束之间略松散。因此,固定化中性蛋白酶可用于皮革业脱毛环节,推动酶制剂在制革业的应用。