豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的分离、培养及其鉴定

目的探索豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的原代培养方法。方法颈部脱臼法处死豚鼠,无菌条件下分离出膀胱肌组织制备成肌条,采用Ⅴ型胶原酶酶解法分离细胞,将细胞悬液接种于含干细胞因子的细胞培养基中培养,隔日换液。用酪氨酸蛋白激酶受体特异性抗体标记细胞,证实细胞类型。结果培养后的Cajal样间质细胞保持其固有特征,可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起,该类细胞酪氨酸蛋白激酶受体抗体荧光染色阳性证实细胞培养成功。结论用Ⅴ型胶原酶消化法可获得成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞,并在体外条件下生长,可用于Cajal样间质细胞的电生理学研究。

乌司他丁对犬胰岛的保护作用

目的 判定在机械分离纯化犬胰岛过程中，胰腺原位灌洗时应用乌司他丁（UTI）的保护作用，观察胰岛的获取产量。方法将20只犬随机分为两组，每组10只。HC-A组：胰腺经腹主动脉原位灌洗时用冷HC-A液2500ml；HC-A＋UTI组：胰腺原位灌洗时，HC-A液中加用UTI 10000U／kg。两组均经主胰管用4℃胶原酶V控压灌注，在Ricordi Chamber系统中消化，用Ficoll连续梯度离心纯化。

三种消化酶在大鼠胰岛分离纯化中的效果比较

目的 分别用 3种酶消化大鼠胰腺 ,比较分离纯化后胰岛细胞的收获量、纯度、活性和功能。方法 将 2 1只SD大鼠按应用释放酶、胶原酶P、胶原酶V消化胰腺随机均分为A、B、C组。结果 A组的胰岛细胞收获量比B组或C组多 ( 93 0± 78比 692± 68或 70 6± 70 ,P <0 .0 5 ) ;纯度比B组或C组高 ( 93 .8± 2 .3比 88.4± 2 .0或 89.2± 2 .1,P <0 .0 5 ) ;成活率比B组或C组高( 97.2± 1.4比 92 .2± 1.9或 92 .9± 2 .1,P <0 .0 5 ) ;A组培养后胰岛素分泌量和葡萄糖刺激时胰岛素分泌量比B组或C组多 (P <0 .0 5 ) ;A组逆转糖尿病大鼠的高血糖状态时间比B组或C组长( 7.5± 1.3比 5 .8± 1.6或 6.3± 1.2 ,P <0 .0 5 )。结论 与胶原酶P和胶原酶V比较 ,释放酶消化大鼠胰腺可提高胰岛细胞的收获量、纯度、活性和功能。

大鼠胰岛分离及纯化方案的改进

目的优化大鼠胰岛分离纯化条件,为糖尿病胰岛受损的发病机制研究及胰岛再生的应用提供必要材料。方法胆总管原位灌注胶原酶V消化胰腺并分离胰岛后,比较经典不连续密度梯度Ficoll离心法和Histopaque1077密度离心法纯化胰岛的效果,其间观察胰腺灌注液体积及消化时间不同对大鼠胰岛分离纯化的影响,并对纯化后的胰岛进行数量、纯度和功能的体外检测。结果 Histopaque 1077密度离心法比经典不连续密度梯度Ficoll离心法可得到更多优质的胰岛(P<0.01)。两种方法获得的胰岛在高糖刺激下释放胰岛素的能力差异无统计学意义(P>0.05)。胰腺灌注液之体积及消化时间对胰岛提取有十分重要的影响。结论 Histopaque 1077密度离心法简单易行且效率较高,有望成为纯化大鼠胰岛的首选方法,便于临床和基础研究工作的开展。

乌司他丁对犬胰岛的保护作用

目的判定在机械分离纯化犬胰岛过程中,胰腺原位灌洗时应用乌司他丁(UTI)的保护作用,观察胰岛的获取产量。方法将20只犬随机分为两组,每组10只。HC-A组:胰腺经腹主动脉原位灌洗时用冷HC-A液2500ml;HC-A+UTI组:胰腺原位灌洗时,HC-A液中加用UTI10000U/kg。两组均经主胰管用4℃胶原酶V控压灌注,在RicordiChamber系统中消化,用Ficoll连续梯度离心纯化。记录消化时间、胰岛外分泌腺包裹率、胰岛纯度、纯化后胰岛在体外用低糖与高糖刺激下胰岛素分泌量、C-肽的释放量及收获的胰岛当量(IEQ),并对纯化后的胰岛进行光镜及电镜观察。结果HC-A+UTI组与HC-A组在胰腺消化时间、胰岛外分泌腺包裹率、胰岛纯度、纯化后的胰岛在体外经低糖与高糖刺激下胰岛素分泌量、C-肽的释放量以及胰岛的形态和结构上比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HC-A组收获胰岛[(3.42±1.47)×104]IEQ,HC-A+UTI组收获胰岛[(6.17±2.86)×104]IEQ,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论在犬胰岛分离和纯化过程中,胰腺获取原位灌洗液中加用UTI能保护胰腺组织,增加胰岛产量。