胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜引导牙周组织再生的动物实验研究

目的:将胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合应用于修复牙周缺损的动物实验,探讨其用于引导牙周组织再生的可行性。方法:人工构建4只成年Beagle犬下颌后牙区牙周缺损模型,分别随机采用:胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜、胶原-羟基磷灰石人工骨、空白对照治疗,每组8颗牙,12周后处死动物,进行组织学观察并测量新生组织高度。结果:与单纯植入胶原-羟基磷灰石人工骨组相比,胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜组获得了更多的新附着,表现为有较多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织生长,2组之间新生组织差异有显著性(P<0.05)。结论:胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合运用修复牙周牙槽骨缺损引导牙周组织再生的效果优于单纯植入人工骨。

阿拉伯树胶对胶原-羟基磷灰石复合材料性能的影响

为改善胶原-羟基磷灰石复合材料的界面结合性能,将阿拉伯树胶引入该体系中,以Ca(NO_3)_2·4H_2O、(NH_4)_2HPO_4、酸溶胶原、阿拉伯树胶为原料,原位合成了胶原-羟基磷灰石/阿拉伯树胶复合材料.采用FT-IR,XRD,SEM表征材料的晶相结构、化学组成和微观形貌,研究了阿拉伯树胶对胶原-羟基磷灰石复合材料结构与性能的影响.结果表明,阿拉伯树胶改变了胶原-羟基磷灰石复合材料的界面形态与结构;随阿拉伯树胶含量的增加,胶原-羟基磷灰石复合材料的晶粒变小,结晶度降低;复合材料的吸水性能和体外酶降解能力都显著下降(P<0.01),其机械性能在一定范围内得到提高.阿拉伯树胶与胶原或胶原-羟基磷灰石之间可能形成了蛋白-多糖复合物,从而起到了交联作用.

医用胶原-羟基磷灰石人工骨用于鞍底重建的临床研究

目的探索医用胶原-羟基磷灰石人工骨(CHA)用于鞍底重建的临床效果和应用前景。方法 2013年12月至2014年12月,共80例垂体瘤患者,随机分成两组,均在神经内镜下行经鼻碟鞍区病变切除术,试验组应用CHA修复鞍底,对照组按传统方法手术。术后随访3~6个月,比较两组患者术后一般情况、并发症情况,以及鞍底修复效果。结果两组患者手术时间、出血量及肿瘤全切率,均无显著差异(P>0.05);术后脑脊液漏发生率差异显著(P<0.05),其他术后并发症情况均无显著差异(P>0.05);术后6个月CT检查结果显示,试验组所有患者均可见新骨生成,CT值不同程度增加,并接近正常骨值,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论神经内镜经鼻手术创伤小,但仍不可避免出现脑脊液漏等并发症,应用CHA修复鞍底可显著减少该并发症的发生。

胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石仿生支架材料的制备及其生物相容性检测

目的制备胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石(collagen-chitosan/nano-hydroxyapatite-collagen-polylactic acid,Col-CS/nHAC-PLA)仿生支架材料,检测生物相容性,为其在骨软骨缺损修复中的应用奠定基础。方法以1,4二氧六环为溶剂,按8%质量浓度加入PLA和等量nHAC溶解,制备nHAC-PLA;用2%醋酸溶液配制浓度为2%的CS纯溶液及1%的Col纯溶液,以质量比(M/M)20∶1混合,倒入含nHAC-PLA的模具中,冷冻干燥成形制备Col-CS/nHAC-PLA仿生支架。行急性全身毒性实验、皮内刺激实验、热源实验、溶血实验、体外细胞毒实验、骨植入实验,评价其生物相容性。结果 Col-CS/nHAC-PLA仿生支架无急性全身毒性;皮内刺激实验示原发刺激指数为0分,为极轻微刺激;热原实验示3只实验动物体温升高均<0.6℃,体温升高总和<1.3℃,符合规定标准;溶血实验示平均溶血率为1.38%,符合≤5%标准。体外细胞毒性实验示材料浸提液不影响兔BMSCs增殖,毒性分级为Ⅰ级。骨植入实验显示支架材料与周边组织相容性好。结论 Col-CS/nHAC-PLA仿生支架材料具有良好生物相容性,有望成为较理想的组织工程骨软骨支架。

大鼠牙源性细胞复合nHAC/PLA支架体内构建牙体组织-骨复合体样结构的研究

目的:探讨不同组合生长因子诱导的大鼠牙源性上皮细胞(rDECs)、间充质细胞(rDMCs)复合nHAC/PLA支架体内形成牙体组织-骨复合体样结构的能力。方法:应用酶消化法和差速消化法分离培养rDECs和rDMCs,免疫荧光染色鉴定其来源。将各组细胞-支架复合物移植裸鼠皮下3月、5月后分别取材,检测移植物形成牙体组织-骨复合体样结构能力。结果:成功分离培养、鉴定大鼠牙源性上皮细胞和间充质细胞。细胞-支架复合物移植后3月,组1、2、3在细胞-支架接触部位均发现类骨质、新生成熟骨和血管形成,并有OCN、OPN的阳性表达。组2促成骨作用最强。对照组4没有新生骨形成,仅有少量胶原纤维和血管。移植后5月,组1、3均形成没有髓腔的牙根样结构,部分区域有DSPP、DMP1、CAP表达。组2形成周边有新生骨、中央有单根牙体样组织,中心为含有牙髓样组织和血管的髓腔样结构,并有DSPP、DMP1、OPN、OCN在髓腔内壁牙本质基质、部分牙髓样组织和血管内的阳性表达,ameloblastin、CAP分别在釉质样、牙骨质样组织中表达阳性。对照组4形成新生骨,OCN强阳性表达,未形成牙体样结构。结论:经TGF-β1+BMP4诱导的rDECs+rDMCs-nHAC/PLA体内移植物促成骨和成牙作用最强,移植后5月形成牙体组织-骨复合体样结构。

3D打印HAP-GEL支架复合BMSCs和HUVECs细胞修复兔颅骨缺损

目的:探讨3D打印羟基磷灰石晶体-可溶性胶原(hydroxyapatite-geltin,HAP-GEL)支架复合骨髓间充质干细胞(bone regeneration bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织工程骨对兔颅骨缺损的修复效果。方法:将3D打印的HAP-GEL复合物支架与BMSCs和HUVECs共培养;制作颅骨缺损模型,随机分为3组,即单独HAP-GEL支架组,HAP-GEL支架复合细胞组和空白对照组。术后12周对标本进行大体观察和X线检测,分析骨修复情况。结果:大体标本观察,空白对照组仅有少量骨质形成;HAP-GEL组材料有部分降解,骨缺损边缘较清晰;HAP-GEL复合细胞组骨痂形成较多,骨缺损界限不清。X射线显示,空白对照组骨缺损为较明显的透射影;与HAP-GEL组相比,HAP-GEL复合细胞组缺损区域密度明显增高,接近正常骨组织。结论:负载有细胞的HAP-GEL复合体对兔颅骨缺损的修复效果优于单纯HAP-GEL支架材料,是一种相对理想的骨缺损修复替代材料。

大鼠牙源性细胞复合nHAC/PLA支架的体外生物相容性研究

目的:探讨大鼠牙源性上皮细胞(rDECs)、牙源性间充质细胞(rDMCs)分层复合纳米羟基磷灰石-胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)支架共生长的生物相容性。方法:①.应用酶消化法和差速消化法分离培养rDECs和rDMCs,经cytokeratin、vimentin免疫荧光染色鉴定其来源。②.应用扫描电镜观测rDECs、rDMCs分层复合nHAC/PLA支架后的生物相容性。结果:①.成功分离培养、鉴定大鼠牙源性上皮细胞和间充质细胞,免疫荧光染色鉴定rDECs、rDMCs分别表达cytokeratin、vimentin,证明rDECs、rDMCs分别来源于牙源性上皮组织、中胚层间充质。②.扫描电镜显示:rDECs、rDMCs复合nHAC/PLA共培养5 d后,椭圆形的rDECs和长梭形的rDMCs胞体充分伸展,胞质中胶原纤维和基质分泌丰富,细胞与支架相互交织成网状。10d后,rDECs、rDMCs胞质中基质分泌更加丰富,覆盖部分细胞,并与支架相融合。结论:rDECs、rDMCs在nHAC/PLA支架上增殖、分化旺盛,具有良好的生物相容性。