胶质瘤干祖细胞分化与自噬的相关性研究

目的观察胶质瘤干祖细胞(GSPCs)诱导分化前后自噬活性的变化,探讨GSPCs分化与自噬的相关性。方法于干细胞培养基和诱导分化培养基培养GSPCs,分别采用微管相关蛋白轻链3(LC3)免疫荧光染色、透射电镜及Western blot检测GSPCs分化前后自噬活性的变化。GSPCs诱导分化时,加入3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬抑制剂,观察其对GSPCs分化的影响,并采用自噬激活剂雷帕霉素(RPM)行进一步检测。结果 GSPCs分化前,自噬活性低;诱导其分化后,自噬活性增高。加入自噬抑制剂3-MA可抑制GSPCs贴壁分化;Western blot检测示,加入3-MA的GSPCs中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白-2(MAP-2)及beclin-1表达量显著低于未加3-MA的GSPCs。GSPCs在含血清条件下培养时,适当浓度的RPM可促进其贴壁分化。结论 GSPCs分化与其自噬活性密切相关。增强GSPCs自噬活性可促进分化,抑制其自噬活性可抑制分化。

X染色体耦联锌指蛋白在人脑胶质瘤干祖细胞中的表达及意义

目的探讨X染色体耦联锌指蛋白(Zfx)在人脑胶质瘤干祖细胞中的表达及意义。方法逆转录PCR方法检测人脑胶质瘤干祖细胞SU2及其分化后贴壁细胞中mRNA的表达;细胞免疫组化检测人脑胶质瘤干祖细胞SU2中Zfx、CD133、nestin的表达;然后在含有10%胎牛血清培养液中诱导SU2分化,并检测分化后的细胞中Zfx、S100、GFAP的表达。结果 Zfx在胶质瘤干祖细胞SU2及其分化后贴壁细胞中的mRNA均有表达。Zfx在人脑胶质瘤干祖细胞SU2中的蛋白水平表达高,但SU2经诱导分化后细胞中Zfx蛋白水平表达减弱。结论 Zfx在人脑胶质瘤干祖细胞中高表达,可能在人脑胶质瘤干祖细胞自我更新和分化抑制过程中起重要作用。

人脑胶质瘤干祖细胞-绿色荧光裸小鼠皮下移植瘤SU3-NC/GFP-1模型建立

目的探讨人脑胶质瘤干祖细胞-绿色荧光裸小鼠皮下移植瘤模型的建立。方法将人脑胶质瘤干祖细胞株SU3接种于NC-C57BL/6J荧光裸小鼠右前肢腋下,定期测肿瘤大小,取移植瘤组织块持续传代,并做常规病理、免疫组化染色和绿色荧光蛋白(GFP)检测。结果移植瘤连续传至10代,100%致瘤率。肿瘤晚期都有肉眼可见的肿瘤表面皮肤溃疡性结痂,常规病理符合恶性肿瘤特征,分子免疫病理缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、CD34、TNF、Ki67非均一性表达于相关区域或相关细胞,在470nm激发光下可见移植瘤间质存在一定数量的GFP细胞,以及在坏死区域内的GFP细胞CD68+和CD11b+。结论成功建立人脑胶质瘤干祖细胞-绿色荧光裸小鼠皮下移植瘤模型。

TGF-β信号通路对胶质瘤干/祖细胞的生物学效应

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)作为一种多功能生长因子,具有抑制神经干细胞增殖以及诱导其分化的功能。然而,TGF-β在肿瘤形成过程中具有双重性,在肿瘤形成初期TGF-β可作为抑癌因子抑制细胞增殖,促进细胞分化或凋亡;而在肿瘤发展期,TGF-β却通过促进肿瘤增殖、刺激血管增生和抑制免疫反应而成为促癌因子。目前TGF-β由抑癌因子转变成促癌因子的分子机制尚不清楚。研究发现,TGF-β信号通路在高级别胶质瘤中高度激活表达,并且TGF-β活性高的胶质瘤患者的临床预后极差。胶质瘤干/祖细胞作为胶质瘤发生发展的起源,是胶质瘤治疗成败的关键。因此,研究TGF-β信号通路在胶质瘤干/祖细胞中的生物学效应显得至关重要。本文就TGF-β信号通路在肿瘤干细胞和胶质瘤干/祖细胞的增殖、分化、血管生成、转移等方面的作用作一综述。