NRG4基因对胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨神经调节蛋白4(NRG4)对神经胶质瘤细胞的增殖、迁移以及侵袭作用的影响及机制。方法采用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测神经胶质瘤患者(研究组)、对照组(同期健康志愿者)血清以及星形胶质细胞HA、神经胶质瘤细胞系U251、SHG44、LN229及T98G中NRG4和人表皮生长因子受体4(ErbB4)mRNA表达水平;将U251细胞分为Control组(空白对照)、NC组(转染不带RNA的质粒)、si-NRG4组(转染si-NRG4)和si-NRG4+ErbB4组[转染si-NRG4和ErbB4过表达质粒(pcDNA-ErbB4)]4组,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,划痕愈合实验和Transwell实验分析U251细胞的迁移与侵袭能力变化,免疫印迹(Western blot)检测PI3K/AKT通路中关键蛋白磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)中p110α、p110β亚型、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAKT)中ser473和thr308 a以及蛋白激酶(AKT)表达水平。结果研究组血清中NRG4和ErbB4 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.0001),神经胶质瘤细胞系U251中NRG4和ErbB4 mRNA相对表达量最高;与NC组比较,si-NRG4组中NRG4基因表达下调,不仅抑制U251细胞的增殖、迁移与侵袭,还降低了PI3 K-p110α,pAKT-ser473 and pAKT-thr308蛋白表达(P<0.05)。结论抑制NRG4表达可以减缓磷脂酰肌醇有关的信号通路PI3K/AKT通路的激活,抑制U251细胞的增殖和迁移,促进U251细胞凋亡,因此NRG4有可能成为治疗胶质瘤的潜在靶点。

布托啡诺通过下调布托啡诺调节音猬因子/胶质瘤相关癌基因同源物1通路抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为

目的探讨布托啡诺调节音猬因子(SHH)/胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI1)信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法将胶质瘤LN229细胞分为对照组、布托啡诺低剂量组、布托啡诺中剂量组、布托啡诺高剂量组以及布托啡诺高剂量+pc DNA3.1组、布托啡诺高剂量+pc-SHH组。MTT和Edu实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHH mRNA、GLI1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测Ki-67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase-3)、SHH和GLI1蛋白表达水平。结果布托啡诺可降低LN229细胞活力、增殖率,减少细胞迁移和侵袭个数(P<0.05)。布托啡诺可降低LN229细胞中SHH mRNA、GLI1 mRNA表达水平及Ki-67、MMP-2、SHH和GLI1蛋白表达,促进细胞凋亡和增高Cleaved-Caspase-3蛋白表达(P<0.05)。过表达SHH可部分逆转布托啡诺对LN229细胞的抑制作用(P<0.05)。结论布托啡诺可以抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为,其机制可能与抑制SHH/GLI1信号通路有关。

苍术素调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对脑胶质瘤细胞铁死亡的影响

目的探讨苍术素调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对脑胶质瘤细胞铁死亡的影响及其机制。方法体外培养脑胶质瘤U251细胞,将U251细胞分为对照组、苍术素低剂量组(5 mol/L)、中剂量组(10 mol/L)、高剂量组(20 mol/L)、ML385组(Nrf2抑制剂1 mol/L)。MTT和Edu实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测亚铁离子(Fe^(2+))、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)水平;Western blot检测Ki-67、cleaved-caspase3、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达;建立脑胶质瘤裸鼠模型,观察肿瘤生长情况,检测肿瘤组织中Ki-67、cleaved-caspase3、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白水平。结果细胞实验结果显示,与对照组比较,苍术素低、中、高剂量组U251细胞Fe^(2+)、MDA、LDH、ROS水平、细胞凋亡率、cleaved-caspase3水平显著性升高,GSH水平、OD490(24 h、48 h)值和细胞增殖率、Ki-67、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与苍术素高剂量组比较,ML385组U251细胞各检测指标水平无统计学差异(P>0.05);裸鼠成瘤实验结果表明,与模型组比较,苍术素组和ML385组裸鼠肿瘤质量和肿瘤体积、裸鼠肿瘤组织中Ki-67、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平显著性降低,cleaved-caspase3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05);与苍术素组比较,ML385组裸鼠肿瘤质量、肿瘤体积、抑瘤率和各蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论苍术素可能通过抑制Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路促进脑胶质瘤细胞铁死亡。

槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制研究

探讨槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制。方法 根据实验方式进行分组,分为对照组、槐定碱组、氯喹+槐定碱组。对槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭能力、迁移能力及活性氧蛋白水平激发情况进行分析,其中细胞增殖的抑制作用利用MTT法检测、侵袭能力利用Transwell小室法检测、细胞的迁移能力利用细胞划痕试验检、活性氧蛋白水平利用Western-blot法检测。结果 与对照组中的超微结构结构相比,U251恶性胶质瘤细胞株在经过槐定碱处理后,其胞质中出现大小不等的自噬体,而这部分自噬体中含有溶酶体、胞质等未消化的细胞器。MTT法检测发现在使用槐定碱试剂进行干预后,槐定碱组中槐定碱对U251恶性胶质瘤细胞生长的半数抑制浓度为(16.45±2.41),高于氯喹+槐定碱组的(2.67±0.56)及对照组的(1.01±0.03);通过Transwell小室检测细胞迁移率发现槐定碱组低于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);LC3Ⅱ/Ⅰ、活性氧水平分析中槐定碱组高于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);同时Person相关性分析提示活性氧与细胞中呈正相关性(r=0.431,P<0.05)。结论 通过分析发现,槐定碱能够通过调节、诱导自噬来抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭、迁移,并涉及细胞中活性氧水平的改变。

桑辛素对胶质瘤细胞株U87迁移与侵袭的影响

目的研究桑辛素在体外对人脑胶质母细胞瘤U87细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法利用细胞毒性及活性检测试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8)检测桑辛素对U87细胞增殖能力的影响;利用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测桑辛素对U87细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测桑辛素对U87细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinas,MMP-2)表达水平的影响。结果CCK-8检测结果显示,与0μg/mL的桑辛素相比,1、2、4、6μg/mL的桑辛素能够显著抑制U87细胞的增殖(P<0.001);划痕实验结果表明桑辛素浓度2、4、6μg/mL组迁移率分别为(20.597±1.225)%、(14.734±1.528)%和(7.811±1.496)%,显著低于0μg/mL组的(40.566±3.284)%(P<0.001);Transwell侵袭实验结果显示,桑辛素浓度2、4、6μg/mL组划痕愈合率分别为(85.000±6.557)、(41.000±6.245)和(13.333±3.215)个,显著低于0μg/mL组(116.667±14.572)(P<0.01);Western blot检测结果显示随着桑辛素浓度的增加,U87细胞中Vimentin的表达水平升高(P<0.001),而MMP-2的表达水平降低(P<0.001)。结论桑辛素能够有效抑制U87细胞的迁移和侵袭能力,其作用在一定的范围内与桑辛素的浓度呈正相关性。

单细胞测序筛选原发和复发胶质母细胞瘤中恒定存在的胶质瘤细胞

目的:胶质母细胞瘤是成人最常见、侵袭性最强的原发性高致死性脑肿瘤。基因表达似乎是预测胶质母细胞瘤患者生存和治疗反应的重要因素。然而,不同患者之间肿瘤细胞的异质性可能会阻碍找到一种癌症的恒定治疗靶点,因为不仅ndGBM和rGBM之间的遗传谱不同,不同患者之间甚至同一患者的肿瘤细胞亚群之间的遗传谱也不同。因此,在不同的ndGBM和rGBM患者中发现一种恒定的肿瘤细胞类型可能是更好地治疗胶质母细胞瘤的一种潜在方法。本文通过单细胞测序(single-cell RNA sequencing, scRNA-seq)筛选恒定的肿瘤细胞类型,比较新诊断的胶质母细胞瘤(ndGBM)和复发性胶质母细胞瘤(rGBM)组的遗传机制。方法:从Gene Expression Omnibus (GEO)数据库(GSE182109)下载3例ndGBM患者(3例样本)和2例rGBM患者(7例样本)胶质母细胞瘤样本的基因表达谱,并使用R包进行scRNA-seq。结果:共有59,400个胶母细胞瘤组织细胞及12,172个胶质瘤细胞最终通过质控,本研究成功筛选出了恒定的胶质瘤细胞亚型。此外,本研究还进行了拟时序分析、基因本体(Gene Ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)富集分析、细胞–细胞相互作用和单细胞调控网络推测聚类。本研究还鉴定了ndGBM和rGBM组的关键基因基因和各组的不同功能。结论:本文筛选了WHO IV级、IDH野生型和甲基化的胶质母细胞瘤中存在于每个样本和每个发展阶段的一类肿瘤细胞亚型。进一步的研究需要通过分子实验来验证分子机制,并针对这些靶点开发诊断方法和药物治疗ndGBM和rGBM。

ST8SIA3在胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的作用

目的探讨ST8α-乙酰神经氨酸酶α-2,8-唾液酸转移酶3(ST8SIA3)对胶质瘤产生耐替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)特性的影响。方法将胶质母细胞瘤细胞株U87-MG进行慢病毒转染,分为对照组、下调组(ST8SIA3表达下调)、过表达组(ST8SIA3过表达),使用qRT-PCR检测3组ST8SIA3相对表达,通过Western-blot检测3组A2B5表达与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferese,MGMT)表达。采用不同TMZ浓度(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)与3组细胞培养48h后,使用CCK-8检测并绘制TMZ浓度-细胞生存率曲线。通过单细胞成球实验观察下调组和过表达组ST8SIA3对胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSC)自我更新能力及干细胞标志物(CD133、SOX2)的影响。采用TCGA及CGGA数据库的人脑胶质瘤临床数据,分析ST8SIA3表达与患者预后关系。裸鼠种瘤后记录裸鼠出现恶病质的时间并进行生存分析统计,免疫组织化学方法检测裸鼠原位移植瘤标本MGMT和A2B5表达。结果过表达组A2B5和MGMT相对表达增加。CCK-8实验结果显示:随着ST8SIA3表达增加,TMZ的LC_(50)(半致死浓度)逐渐升高。单细胞成球实验显示:随着ST8SIA3表达增高,成球细胞数量及体积逐渐增加。裸鼠原位移植瘤模型结果显示:过表达ST8SIA3明显缩短裸鼠生存期;随着ST8SIA3表达增加,Ki-67、A2B5、MGMT表达随之增加。结论ST8SIA3通过合成干细胞标志物A2B5从而促进U87-MG细胞成球能力,进而表现出GSC耐TMZ特性。

YY1对胶质瘤细胞迁移能力的影响及其分子机制

目的探讨转录因子阴阳1(YY1)对胶质瘤细胞迁移的影响及其分子机制。方法体外培养人胶质瘤细胞U251和U87,对细胞过表达或敲低YY1后,通过Transwell实验、细胞划痕实验、克隆形成实验检测过表达或敲低YY1对胶质瘤细胞U251和U87迁移的影响;通过基因转录调控数据库(GTRD)预测YY1下游靶基因,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹实验检测YY1下游靶基因基质金属蛋白酶15(MMP15)mRNA及其蛋白的表达情况;利用双荧光素酶报告实验检测YY1与MMP15启动子的结合区域。通过Transwell实验、细胞划痕实验、克隆形成实验检测过表达HA-YY1的同时敲低MMP15对胶质瘤细胞U251和U87迁移的影响。结果Transwell实验结果表明,与未过表达HA-YY1的对照组相比,过表达HA-YY1组U251和U87细胞的迁移能力显著提高(t=13.300、5.847,P<0.05);划痕实验结果显示,过表达HA-YY1组U251和U87细胞的划痕间距较对照组明显变小(t=9.698、7.215,P<0.05);克隆形成实验结果显示,过表达HA-YY1组U251和U87细胞的克隆形成能力较对照组显著提高(t=5.871、5.095,P<0.05);双荧光素酶报告实验显示,YY1能够直接结合到MMP15的启动子区域,并促进MMP15的表达;而敲低MMP15可以抑制由于YY1过表达而促进的细胞迁移。结论YY1通过转录激活MMP15促进胶质瘤细胞迁移。

三种氘标记的葡萄糖在大鼠脑胶质瘤细胞中的代谢特征对比

磁共振氘(2H)成像是近年来涌现出的一种能在活体水平下实现特定代谢通路可视化的分子代谢成像方法,在癌症检测等重大疾病方面具有极好的临床应用前景.本文分析了三种不同氘标记葡萄糖——[6,6’-^(2)H_(2)]-葡萄糖、[2,3,4,6,6’-^(2)H_(5)]-葡萄糖和[1,2,3,4,5,6,6’-^(2)H_(7)]-葡萄糖在脑胶质瘤细胞中的代谢特征差异.将大鼠脑胶质瘤C6细胞与三种氘标记的葡萄糖一起孵育,收集不同时刻细胞培养基样品,采用核磁共振波谱仪对样品进行核磁共振氘谱采集,获取不同时间三种氘标记葡萄糖的消耗量以及下游代谢产物水和乳酸的产量,从而得出三种氘标记葡萄糖探针在肿瘤细胞中的消耗速度以及代谢物的生成速度等动态代谢特征.结果显示在细胞实验中三种氘标记葡萄糖均能够显示出肿瘤细胞的代谢特征,且葡萄糖的消耗速度并无显著性差异,氘标记水和氘标记乳酸的产量也符合理论估算.因此本文认为低成本的氘标记葡萄糖探针[2,3,4,6,6’-^(2)H_(5)]-葡萄糖具备更好的临床转化价值.

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照(NC组),同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因(metadherin,MTDH)及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低(P<0.05),侵袭细胞数均显著减少(P<0.05),划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

LncRNA XIST靶向miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST通过miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用及机制。方法RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、T98G、U87-MG、A172、SW1783中XIST表达水平及si-XIST转染U251细胞后XIST与miR-543表达;在胶质瘤细胞U251中敲低XIST后,MTT法、流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和凋亡情况;用双荧光素酶报告基因验证LncRNA XIST与miR-543的靶向关系。结果XIST在U251细胞中表达水平(0.79±0.08)最高,故以U251细胞进行后续实验;与XIST组[(2.35±0.17)、(0.37±0.05)]相比,si-XIST组U251细胞XIST表达水平(0.25±0.19)较低,miR-543表达水平(3.15±0.36)较高(P<0.05);与XIST组[(0.57±0.09)、(0.81±0.01)、(1.15±0.04)]相比,si-XIST组胶质瘤U251细胞A570在24、48、72 h[(0.22±0.02)、(0.31±0.03)、(0.55±0.04)]明显降低(P<0.05)。与XIST组(1.12±0.56)%相比,si-XIST组细胞凋亡率(35.64±4.31)%较高(P<0.05)。共转染XIST-wt和miR-543处理组中相对荧光素酶活性显著下降[(1.15±0.22)vs(0.22±0.03)](P<0.05)。结论干扰LncRNA XIST可通过靶向负调控miR-543表达,抑制胶质瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。

不同氧浓度微环境中脑胶质瘤细胞生物学行为变化观察

目的 观察高氧、低氧、极低氧微环境中胶质瘤细胞生物学行为变化,并探讨其可能的机制。方法 取人胶质瘤U251细胞进行体外培养,将细胞分为极低氧组、低氧组、常氧组、高氧组,分别置于5%极低氧条件(37℃,5%CO_(2),5%O_(2))、10.5%低氧条件(37℃,5%CO_(2),10.5%O_(2))、21%常氧条件(37℃,5%CO_(2),21%O_(2))、42%高氧条件(37℃,5%CO_(2),42%O_(2))中培养96 h。采用CCK-8检测各组细胞在0、24、48、72、96 h时的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,实时定量qPCR法检测细胞HIF-1α mRNA表达,DCFH-DA荧光探针染色法检测细胞ROS水平。结果 与常氧组比较,极低氧组、低氧组、高氧组在24、48、72、96 h的增殖能力均降低;低氧组在48、72、96 h的增殖能力高于极低氧组和高氧组(P<0.05或<0.01)。与常氧组比较,极低氧组、低氧组、高氧组细胞凋亡率升高、细胞侵袭数量减少;与低氧组比较,极低氧组和高氧组细胞凋亡率升高、细胞侵袭数量减少(P均<0.05)。与常氧组比较,较极低氧组、低氧组、高氧组细胞HIF-1α mRNA表达水平升高(P均<0.01);与低氧组比较,极低氧组HIF-1α mRNA表达水平升高、高氧组表达水平降低(P<0.05或<0.01)。与常氧组比较,低氧组、极低氧组、高氧组中细胞ROS水平均升高(P均<0.01);与低氧组比较,极低氧组和高氧组细胞ROS水平升高,且极低氧组高于高氧组(P均<0.01)。结论 U251细胞在正常氧微环境中生长状态最佳,低氧和高氧微环境均不利于其增殖和侵袭并能促进其凋亡;这些差异可能与氧浓度改变引发ROS/HIF-1信号通路调节有关。

石菖蒲挥发油对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨石菖蒲挥发油(volatile oil of acorus gramineus,VOA)对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测石菖蒲挥发油对p53野生型细胞株U87、p53突变型细胞株U251及正常细胞株HEB的细胞抑制作用及计算半数抑制浓度(IC50)。以Annexin V/PI染色-流式细胞仪检测法染色法考察不同浓度VOA给药U87及U251细胞株48 h后对细胞凋亡的影响。结果随着VOA剂量的增加,人脑神经胶质瘤细胞生存活率显著降低(P<0.05)。相比于正常的人脑神经细胞HEB,VOA对神经胶质瘤细胞(U87、U251)的IC50值要更为敏感。不同浓度VOA作用于U87细胞48 h和U251细胞48 h后,经流式细胞仪检测均能观察到不同程度的细胞凋亡,随着VOA给药浓度的加大,U87及U251凋亡细胞比例呈显著上升趋势(P<0.05)。结论石菖蒲挥发油有抑制人胶质瘤U87及U251细胞增殖,促进细胞凋亡的作用。

H4及A172神经胶质瘤细胞系高亲和腺相关病毒载体的研究

目的对腺相关病毒衣壳进行合理设计改造,从而提高腺相关病毒转导脑肿瘤细胞的效率。方法通过在AAV5的衣壳蛋白Cap的氨基酸N573后插入一段寡肽GIVADNLNL以替换Q574到T578之间的蛋白序列QSSTT,同时引入两个点突变S2A和T711S得到AAVX01。研究该改造对腺相关病毒产量是否会造成影响;用包装有荧光蛋白报告基因的AAV病毒感染H4及A172细胞系,观察和比较AAVX01与野生AAV5及AAV8的转导效率。结果通过改造得到新型血清型AAVX01,且AAVX01产量和实心率不低于野生型AAV5,8,AAVX01相比于野生型AAV5,8对于神经胶质瘤细胞有更好的转导效率。结论本研究构建了有效的对神经胶质瘤细胞有高亲和性和转导性的AAV载体,对未来胶质瘤的基因治疗研究提供了一个可行的载体平台。

基于转录组与体外实验揭示泽泻醇B抑制神经胶质瘤细胞增殖作用的机制

目的:分析人脑胶质瘤细胞系T98G对泽泻醇B的反应及其作用机制。方法:泽泻醇B处理人脑胶质瘤细胞T98G后,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞活力,划痕、侵袭和迁移实验评估细胞运动能力。用10、20μmol/L泽泻醇B处理T98G细胞,利用高通量测序技术获得基因表达谱,并对差异表达基因(DEGs)进行生物信息学分析。结合转录组测序分析结果和细胞表型,筛选出肿瘤相关靶点进行qPCR和Western Blot验证。结果:体外研究显示与空白对照组比较,泽泻醇B能有效抑制人脑胶质瘤细胞T98G增殖、侵袭和迁移。转录组测序结果显示泽泻醇B 10μmol/L组中,有差异表达基因3 235个,其中上调基因1 502个,下调基因1 733个;泽泻醇B 20μmol/L组中,有差异基因4 957个,其中上调基因2 362个,下调基因2 595个。KEGG通路结果显示,泽泻醇B 10、20μmol/L组差异表达基因共富集通路包括MAPK信号通路、细胞周期、肿瘤microRNAs、P53信号通路、DNA复制,其中MAPK信号通路差异基因富集数量最多。qPCR显示DEGs mRNA表达量变化与转录组测序基本一致。结论:泽泻醇B能有效抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移,其发挥抗细胞增殖作用机制可能与抑制MAPK信号通路上GRB2、AKT1、ERK1/2等关键靶点表达和磷酸化有关;其抑制T98G细胞侵袭和迁移的能力可能与下调MMP1和MMP3蛋白表达,升高TIMP3蛋白表达有关。

杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移和体外抑制作用的影响

目的:探讨杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移及体外抑制的作用及可能的机制。方法:C6小鼠脑胶质瘤细胞分为0μmol/L杨梅黄酮组、10μmol/L杨梅黄酮组、20μmol/L杨梅黄酮组和40μmol/L杨梅黄酮组。细胞计数试剂(CCK-8)法比较杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤细胞的作用;碳酸脂膜(Transwell)法检测杨梅黄酮对C6小鼠脑胶质瘤细胞侵袭的影响;细胞划痕试验检测杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤细胞迁移的影响;人脐静脉内皮细胞(HUVEC)成管实验观察杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤细胞的作用;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达。结果:与0μmol/L杨梅黄酮组比较,10μmol/L杨梅黄酮组C6小鼠脑胶质瘤细胞活力、细胞侵袭率、细胞迁移率均下降,体外成管长度短,MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05);与10μmol/L杨梅黄酮组比较,20μmol/L杨梅黄酮组C6小鼠脑胶质瘤细胞活力、细胞侵袭率、细胞迁移率均下降,体外成管长度短,MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05);与20μmol/L杨梅黄酮组比较,40μmol/L杨梅黄酮组C6小鼠脑胶质瘤细胞活力、细胞侵袭率、细胞迁移率均下降,体外成管长度短,MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论:杨梅黄酮能够抑制小鼠脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭及迁移,也能够抑制HUVEC细胞的体外成管作用,其可能与杨梅黄酮控制MMP-2、MMP-9蛋白的表达有关。

山茶花提取物抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探究山茶花提取物通过调控miR-526b-3p的表达抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法收集对数期SW1088细胞,用浓度为30、60、120 mg/L的山茶花提取物处理细胞,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,以正常培养SW1088细胞作为对照组;按照脂质体法将miR-NC、miR-526b-3p转染至SW1088细胞中分别记为miR-NC组、miR-526b-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-526b-3p转染至SW1088细胞中,并加入高剂量山茶花提取物分别记为anti-miR-NC+高剂量组、anti-miR-526b-3p+高剂量组。MTT、Transwell分别检测细胞增殖活性和细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达水平;qRT-PCR检测miR-526b-3p相对表达量。结果山茶花提取物或过表达miR-526b-3p可降低胶质瘤细胞SW1088增殖活性,同时降低细胞迁移数量、侵袭数量,以及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平,增加miR-526b-3p相对表达量。此外,高剂量组可降低SW1088细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白水平。抑制miR-526b-3p可减弱山茶花提取物对胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭以及PI3K/AKT信号通路的影响。结论山茶花提取物可能通过调控miR-526b-3p/PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭。

LINC00662通过miR-144/COX-2调控胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的作用研究

目的探究LINC00662通过miR-144/COX-2轴调节胶质瘤细胞耐药性的机制。方法qRT-PCR检测胶质瘤组织和癌旁正常组织、U251细胞和U251/替莫唑胺(TMZ)细胞中LINC00662、miR-144和COX-2 mRNA表达水平;双荧光素酶报告系统评估LINC00662、miR-144和COX-2的调控关系。设置空白对照组、敲低LINC00662阴性对照(si-NC)组、敲低LINC00662组、同时敲低LINC00662和抑制miR-144表达组。CCK-8和Edu法分析细胞增殖情况;流式细胞术定量检测细胞凋亡;Western blot分析靶蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,胶质瘤组织中LINC00662和COX-2 mRNA表达显著上调,miR-144表达下调(P<0.05);与U251细胞相比,U251/TMZ细胞中LINC00662和COX-2 mRNA表达显著上调,miR-144表达下调(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实LINC00662靶向结合miR-144,miR-144靶向结合COX-2。与si-NC组相比,敲低LINC00662组U251/TMZ细胞增殖能力显著降低,凋亡率升高(P<0.05);COX-2、PCNA、MRP1和Bcl-2蛋白显著下调,Bax蛋白上调(P<0.05);抑制miR-144表达可在一定程度上逆转LINC00662敲低对U251/TMZ细胞增殖、凋亡的影响(P<0.05)。结论LINC00662通过miR-144/COX-2信号可调节胶质瘤细胞增殖、凋亡,改变胶质瘤细胞TMZ耐药性。

重楼皂苷Ⅵ对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

目的探讨重楼皂苷Ⅵ(PPⅥ)对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法以人脑胶质瘤LN229细胞为对象,采用MTT法检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、1、2、4、8、16、32、64μmol/L]作用不同时间(24、48、72 h)后的细胞存活率,采用克隆形成实验检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、2、4、8μmol/L]作用14 d后的细胞克隆数和克隆形成率,采用流式细胞术和Western blot法分别检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、4、8μmol/L]作用24 h后的细胞凋亡率和凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)]、Fas/Fas配体(FasL)死亡受体通路相关蛋白、蛋白激酶B(又称Akt)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,PPⅥ各浓度组细胞的存活率、克隆数和克隆形成率、Bcl-2蛋白的表达水平和Akt、GSK-3β蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);细胞凋亡率,Bax、cleaved caspase-3蛋白和Fas、FasL、cleaved caspase-8蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论PPⅥ可抑制人胶质瘤LN229细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能与激活Fas/FasL死亡受体通路和抑制Akt/GSK-3β通路有关。

miR-544靶向DUSP13抑制神经胶质瘤细胞增殖、周期分布和凋亡

目的探究miR-544在神经胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)细胞增殖中的作用及机制。方法采用RT-qPCR检测miR-544及DUSP13在GBM组织和细胞中的表达。过表达miR-544后,CCK-8检测细胞活性变化;克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。DUSP13与miR-544的靶向关系通过荧光素酶报告实验来证实。结果GBM组织和细胞中miR-544表达显著低于癌旁组织和正常细胞(P<0.05),DUSP13表达水平显著高于癌旁组织和正常细胞(P<0.05)。过表达miR-544显著抑制细胞增殖和细胞活力,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡(P<0.05)。过表达miR-544显著降低DUSP1表达水平(P<0.05)。miR-544靶向作用与DUSP13。过表达DUSP13显著削弱过表达miR-544对U87细胞增殖、周期分布和凋亡的影响(P<0.05)。结论miR-544靶向DUSP13抑制神经胶质瘤细胞增殖、周期分布和凋亡,为临床靶向治疗提供新思路。