姜黄素对高糖培养下大鼠神经胶质瘤细胞C6中p53、Siah-1和突触素蛋白表达的影响

目的:体外研究姜黄素对高糖培养下大鼠神经胶质瘤细胞C6中抑癌基因p53、E3泛素连接酶Siah-1和认知相关蛋白突触素(Synaptophysin)表达的影响。方法:采用CCK-8法检测10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μmol/L姜黄素在高糖培养下作用C6细胞24、48 h后的细胞存活率。采用Western blot法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测作用24 h后正常对照组(无任何处理)、高糖培养组和姜黄素低、高浓度组(高糖+10、30μmol/L姜黄素)细胞中p53、Siah-1、Synaptophysin蛋白及mRNA的表达情况;另同法检测高糖培养下小干扰RNA(siRNA)沉默C6细胞中p53基因后对Siah-1蛋白及mRNA表达的影响。结果:姜黄素在10～40μmol/L浓度范围内对C6细胞存活率无明显影响,大于40μmol/L浓度后呈浓度依赖性降低细胞存活率。与正常对照组比较,高糖培养组C6细胞中p53、Siah-1蛋白及mRNA表达增强,Synaptophysin蛋白及mRNA表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);与高糖培养组比较,姜黄素低、高浓度组C6细胞中p53、Siah-1蛋白及mRNA表达减弱,Synaptophysin蛋白及mRNA表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。高糖培养下,沉默p53基因后的C6细胞中Siah-1蛋白及mRNA表达均明显减弱(P<0.05)。结论:高糖条件下,姜黄素可通过下调C6细胞中p53、Siah-1表达,进而上调Synaptophysin表达。

真核表达载体pIRES2-EGFP-p16的构建及其在胶质瘤细胞C6内的表达

目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP-p16,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法用PCR的方法扩增p16基因,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-p16,经BamHⅠ及XhoⅠ双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中p16的表达。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-p16,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及p16的表达。结论成功地构建真核表达载体pIRES2-EGFP-p16,并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究p16对肿瘤的生物学作用以及p16在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。

苯乙酸对胶质瘤细胞C6的C-myc基因蛋白水平表达的抑制作用及意义

目的 观察诱导分化剂苯乙酸对胶质瘤细胞Ｃ６的增殖分化过程中癌基因Ｃ－ｍｙｃ的蛋白水平变化。方法 〖＾３Ｈ〗ＴｄＲ掺入法测细胞增殖率，免疫组化ＳＰ法检测Ｃ－ｍｙｃ基因蛋白水平的表达。结果 应用苯乙酸后，细胞ＣＰＭ降低；Ｃ－ｍｙｃ基因胞浆阳性表达显著下降。结论 苯乙酸对胶质瘤细胞存在剂量依赖性抑制作用机制可能为直接抑制胞浆中ＲＮＡ合成。

Beclin-1与LC3在胶质瘤细胞C6自噬中的相关性

组织细胞发生的自体吞噬简称自噬（autophagy）,是广泛存在于真核细胞内的一种生理现象,贯穿于生物合成、代谢调节、生长发育及衰退老化的全过程[1].自噬可在细胞所处的稳态环境发生变化时如饥饿、缺乏营养或线粒体功能障碍[2]等情况下被激活.

一种新去整合素Adinbitor的表达、序列分析及其对C6神经胶质瘤细胞凋亡的诱导(英文)

Adinbitor为一通过基因工程方法获得的来自于中国白眉蝮蛇毒腺的去整合素家族的新成员 .从蝮蛇毒腺中提取总RNA进行RT -PCR扩增 ,获得了 2 19bp的白眉蝮蛇去整合素基因 .cDNA测序及由此推导的氨基酸序列结果显示 ,Adinbitor为含有 73个氨基酸的多肽 ,其中包括 12个半胱氨酸 ,并具有去整合素的特征模序 -RGD .对此去整合素基因进行克隆、转化与诱导后 ,得到了该蛋白的可溶性高效表达 .经组氨酸亲和层析纯化 ,获得了分子量Mr为 9×10 3 的均质融合蛋白 ,并将其命名为adinbitor.序列分析表明 ,adinbitor与已发表于GENBANK上的整合素序列有很高的同源性 ,其中同源性最高的是南韩的saxatilin ,二者的蛋白质同源性高达 91.78% .活性测定结果表明 ,Adinbitor能有效地诱导神经胶质瘤细胞C6的细胞凋亡 ,有希望成为一种抗癌新药 .图 5参

槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的:研究类黄酮化合物槲皮素(quercetin,QUE)对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法:按QUE浓度分成10、25、50、75及100μmol.L-15个处理组和空白对照组(生理盐水)及溶剂对照组(二甲亚砜),大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×106.mL-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)对50及100μmol.L-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50μmol.L-1的QUE作用48 h的p53和bcl-2基因产物。结果:与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G0/G1期的细胞增加(P<0.01),而S和G2/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。

核糖核酸酶抑制因子对H_2O_2损伤的大鼠神经胶质瘤细胞系C6的影响

核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白 .为了进一步了解RI的功能 ,根据RI分子结构富含巯基的特点 ,研究了RI对过氧化氢(H2 O2 )损伤的大鼠神经胶质瘤细胞 (C6 )的影响 .用不同浓度的H2 O2 分别作用于转染有RIcDNA并且RI过表达的C6细胞和正常C6细胞 ,对比损伤前后 2者的细胞存活率、LDH漏出量、细胞内GSH和MDA含量差别 ,以及细胞内抗氧化酶类GPX、CAT和GST活性的差别 .结果表明 ,与正常C6细胞相比 ,RI过表达的C6细胞在H2 O2 作用下存活率高 ,LDH漏出量、MDA含量明显减少 ,而细胞内GSH较多 ;RI过表达的C6细胞在损伤前后均表现出更强的CAT和GST活性 .提示RI具有抗氧化功能 ,能够减轻H2 O2 所致的细胞过氧化损伤 .

苦参碱对C6胶质瘤细胞的增殖和原癌基因表达的影响

目的 :本研究拟探讨苦参碱对胶质瘤细胞株 (C6细胞株 )的抑制作用及其作用机理。方法 :应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对C6细胞的增殖抑制 ,应用流式细胞仪观察苦参碱对C6细胞周期的影响 ,应用RT PCR观察原癌基因C myc表达的变化。结果 :苦参碱对C6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性 ,当浓度为 0 2 0g/L时 ,对C6细胞增殖的抑制率达到 ( 5 3 8± 5 6 ) %。流式细胞仪分析显示 ,用 0 2 0g/L苦参碱培养 3d ,细胞周期中G0 /G1期所占比例增加 ,S期占细胞周期的比例降低。RT PCR结果显示 ,随着苦参碱作用剂量的增加 ,C myc基因的表达被明显抑制。结论 :苦参碱对大鼠胶质瘤细胞系C6的增殖具有明显的抑制作用 ,并对原癌基因C

苦参碱引起C6胶质瘤细胞凋亡及其对TRADD表达的影响

目的:应用一系列分子生物学检测技术来检测苦参碱对胶质瘤细胞中TRADD表达的影响,以进一步推测其诱导胶质瘤细胞凋亡的作用机制。方法:采用MTT法测定不同浓度苦参碱作用于C6胶质瘤细胞后的吸光值以计算其抑制率;采用Annex- in/FITC染色进行流式细胞术检测来测定不同浓度苦参碱诱导C6胶质瘤细胞的凋亡率;采用ICC(免疫细胞化学)、Western-blot- ting及Real-time PCR array(实时定量PCR芯片)方法来检测苦参碱对胶质瘤细胞TRADD表达的影响。结果:MTT结果显示细胞抑制率随着药物剂量的增加而增加;Annexin/FITC染色进行流式细胞术的检测结果显示胶质瘤细胞的凋亡率随着药物剂量的增加而增加;ICC、Western-bloning及Real-time PCR array结果显示苦参碱可诱导胶质瘤细胞TRADD基因及蛋白表达的上调。结论:苦参碱可以诱导胶质瘤细胞凋亡,其诱导胶质瘤细胞凋亡可能是通过上调TRADD的表达,以死亡受体途径来实现的。

鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究

目的探讨鲜壁虎冻干粉对Ｃ6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水。20天后,取小鼠血清体外处理Ｃ6胶质瘤细胞。通过形态学分析、流式细胞仪及ＴＵＮＥＬ法,观察细胞凋亡情况;Ｓ Ｐ免疫组化法检测细胞凋亡相关基因ｂｃｌ 2、ｂａｘ的表达水平。结果形态学变化、流式细胞仪分析和ＴＵＮＥＬ法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导Ｃ6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的ｂｃｌ 2基因表达无明显变化,ｂａｘ基因表达升高。结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调ｂａｘ基因有关。

黄连解毒汤在体外对大鼠胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的:研究黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:分别采用MTT法、流式细胞术、划痕法和Transwell法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,分别采用RT-PCR和Western blot法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞中BCL-2、BAX、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果:黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6胶质瘤细胞24 h或48 h时可显著抑制细胞增殖(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.01);黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6细胞24 h时的凋亡率均较空白对照组显著升高(P<0.01),划痕刻度均较空白对照组显著变宽(P<0.01),穿膜细胞数量均较空白对照组显著减少(P<0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达显著降低,而BAX和Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:黄连解毒汤可抑制大鼠胶质瘤C6细胞的增殖、迁移和侵袭,促进C6细胞凋亡,其机制可能与抑制C6细胞BCL-2表达以及促进BAX和Caspase-3表达有关。

替莫唑胺联合姜黄素对C6胶质瘤细胞凋亡的作用

目的:研究替莫唑胺联合姜黄素用药对C6胶质瘤细胞的抑制作用和诱导凋亡作用。方法:SRB法考察替莫唑胺联合姜黄素对C6细胞的抑制作用;流式细胞法检测联合用药对C6细胞的凋亡作用;激光共聚焦扫描显微镜观察联合用药对细胞的诱导作用及在细胞中的定位作用。结果:SRB法结果显示替莫唑胺联合姜黄素在48 h时对C6细胞的抑制率为(91.22±0.51)%,显著高于24 h的抑制率(83.66±0.18)%(P<0.05);流式细胞仪检测结果表明,替莫唑胺(10μmol/L)联合姜黄素(5μmol/L)用药时C6细胞的早期凋亡率为(33.15±0.79)%;通过激光共聚焦扫描显微镜观察,姜黄素联合替莫唑胺组诱导C6细胞的凋亡细胞数量多于游离药物组。结论:替莫唑胺联合姜黄素用药能够抑制C6细胞的生长,同时可诱导C6细胞的凋亡。

抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6胶质瘤细胞p16蛋白表达的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,应用顺铂作为对照,通过免疫细胞化学染色法检测不同浓度的抑胶素作用后细胞周期负性调控基因p16在不同时问点的蛋白表达。结果 C6胶质瘤细胞经过抑胶素处理后,随着抑胶素浓度的增加,p16蛋白的表达也明显增强。结论抑胶素能够抑制C6胶质瘤细胞的增殖,并且具有改变肿瘤细胞增殖周期的作用。

外源性IL-18基因转染联合顺铂对胶质瘤C6细胞凋亡的诱导作用

目的研究外源性IL-18基因联合顺铂对胶质瘤C6细胞的凋亡诱导作用,为胶质瘤治疗提供新的途径。方法将IL-18基因及pLXSN病毒载体导入胶质瘤C6细胞,建立C6/IL-18及C6/pLXSN细胞;C6/IL-18、C6/pLX-SN及胶质瘤C6细胞均以RPMI1640培养基培养,经0.3、3、30、60、120μg/ml顺铂作用48h后,用酶标仪在490nm波长处测吸光度值,计算细胞抑制率;以顺铂的10倍血浆峰浓度作用(3μg/ml)细胞24h后,采用吖啶橙/溴乙啶(A//EB)双荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 C6/IL-18细胞、C6/pLXSN细胞及亲代C6细胞经120、60、30、3、0.3μg/ml顺铂作用后的抑制率依次降低,C6/IL-18细胞抑制率明显高于C6/pLXSN和C6细胞(P均<0.05)。以30μg/ml顺铂作用后C6/IL-18细胞的凋亡率明显高于C6/pLXSN和C6细胞(P均<0.05)。结论外源性IL-18基因联合顺铂可明显增加对胶质瘤C6细胞的抑制作用,其相关机制有待进一步探讨。

光动力学疗法与白花蛇舌草联合应用对大鼠C6胶质瘤细胞的作用

目的探讨光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)与白花蛇舌草联合应用对大鼠C6胶质瘤细胞的作用。方法常规培养的Wistar大鼠C6胶质瘤细胞用MTT法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色法和流式细胞术观察PDT联合白花蛇舌草对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞存活率的影响、检测凋亡、分析对细胞形态学及细胞周期的影响。结果白花蛇舌草可明显抑制C6胶质瘤细胞的生长;使肿瘤细胞聚集在S期并诱导其凋亡。PDT与各浓度白花蛇舌草联合可抑制C6胶质瘤细胞增殖(P<0.01)。白花蛇舌草和PDT均可在一定程度上诱导C6胶质瘤细胞凋亡,二者联用后诱导细胞凋亡作用显著增强,这种作用在白花蛇舌草浓度为5.0μg/ml作用12h时最明显。结论白花蛇舌草可与PDT协同抑制C6胶质瘤细胞的增殖。其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。

^(125)I近距离照射对C_6胶质瘤细胞的影响

目的 了解不同剂量12 5I硅胶球囊内近距离照射对C6胶质瘤细胞的生物学效应。方法 将12 5I NaI溶液放入硅胶球囊内 ,对体外培养的C6胶质瘤细胞给予不同剂量的近距离照射 ,检测细胞死亡率、增殖抑制及细胞周期再分布情况。结果 与对照组相比 ,受照射组细胞死亡率、增殖抑制率明显增加 ,S期比例降低、G1期阻滞 ,细胞周期发生紊乱。结论 12 5I近距离照射可以通过导致细胞死亡。

腺病毒介导的人ING4基因诱导C6鼠胶质瘤细胞凋亡

目的:研究肿瘤抑制基因人ING4(inhibitor of growth family,member4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法:将携有绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His(由本科室构建)分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用,用MTT法绘制生长曲线,计算抑瘤率。再取重组腺病毒Ad-hING4-His及空腺病毒Ad作用后的C6细胞分别行激光共聚焦显微镜观察凋亡小体、透射电镜观察亚细胞结构的变化,抽提基因组DNA行琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测。结果:Ad-hING4-His感染C6细胞后,RT-PCR及Western-blotting结果提示有目的基因的转录和表达。hING4基因表达可以显著抑制C6细胞生长。激光共聚焦观察可见明显核断裂、透射电镜可见实验组细胞呈凋亡表现、基因组DNA电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测有明显AP峰,凋亡率达18.1%。结论:hING4可以通过促进细胞凋亡作用而显著抑制C6细胞的增殖和生长。

IL-12家族亚基基因在大鼠C6胶质瘤细胞表达研究

目的:对大鼠C6胶质瘤细胞应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)法观察白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)家族亚基基因的表达,为今后IL-12家族在脑胶质瘤方面研究奠定基础。方法:提取大鼠C6胶质瘤细胞RNA,反转录成c DNA,应用q PCR法观察IL-12家族亚基基因在大鼠C6胶质瘤细胞mRNA表达影响并进行比较分析。结果:在大鼠C6胶质瘤细胞中,IL-23a,IL-12a的表达丰度为高,EBI3,IL-27的表达丰度为中,IL-12b的表达丰度为低。结论:IL-12家族与胶质瘤发生、发展密切相关,其中IL-12、IL-23是最有潜力治疗脑胶质瘤的细胞因子,其研究进展将为脑胶质瘤的免疫治疗带来新思路。

鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的探讨鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,MTT法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用;免疫细胞化学染色法和western blot法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响。结果 MTT法显示,鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖的抑制具有剂量依赖性。免疫细胞化学染色和western blot检测显示,随着鸦胆子油乳注射液浓度增加,caspase-3蛋白表达明显上调。结论鸦胆子油乳注射液能通过促进凋亡基因caspase-3蛋白表达的上调,从而抑制C6胶质瘤细胞增殖。

冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用

[目的]探讨冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用。[方法]建立大鼠C6胶质瘤细胞模型,于治疗组给予灌服冰片及静脉注射顺铂,21天后分析治疗组与对照组胶质瘤横截面积。[结果]治疗组脑胶质瘤的横截面面积明显小于对照各组(P<0.05)。[结论]冰片能增加血脑屏障对顺铂的通透性,从而提高顺铂对胶质细胞瘤的治疗作用。