神经生长因子(NGF)对H_2O_2诱导胶质瘤A-172细胞凋亡的抑制效应及其机制(英文)

目的 :研究神经生长因子 (NGF)对过氧化氢 (H2 O2 )诱导神经胶质瘤细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法 :抑制细胞增殖的检测采用MTT法 ,吖啶橙 (AO)染色荧光显微观察细胞的形态学变化 ,DNA琼脂糖电泳检测DNA断裂 ,二硫硝基苯甲酸 (DTNB)法检测细胞内还原型谷胱甘肽 (GSH)水平的变化。结果 :10 0～ 80 0μmol/L的H2 O2 明显抑制A 172细胞增殖 ,2 0 0 μmol/LH2 O2 作用 12h后 ,形态学上表现为染色体聚集、核固缩和断裂 ,电泳可见DNA断裂形成的阶梯状条带。经NGF作用 2 4h后可引起A 172细胞内GSH水平上升近 2倍 ,但NGF抑制H2 O2 诱导A 172细胞凋亡的效应与GSH水平无关 ,而且此过程不需新蛋白或RNA的合成。结论 :H2 O2 可有效诱导神经胶质瘤A 172细胞凋亡 ,NGF对此表现显著抑制效应 ,但与细胞内GSH水平变化无关。

环状RNA MAPK4通过吸附miR-125a-3p对神经胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA MAPK4(circ-MAPK4)对神经胶质瘤细胞生物学行为的影响。方法 使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测人神经胶质瘤细胞株(U138、U373、U87、A172、U251)和人正常性星形胶质细胞(HA1800)中circ-MAPK4、微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)表达水平,将U138细胞分为circ-MAPK4低表达组(si-circMAPK4组)、阴性对照组(si-NC组)、无转染组(control组),si-circMAPK4组、si-NC组U138细胞分别转染circ-MAPK4 siRNA及其阴性对照siRNA-NC,control组细胞不做转染处理;采用circNet、StarBase分析预测circ-MAPK4与miR-125a-3p的靶向关系并使用荧光素酶实验进行验证;将si-circMAPK4组U138细胞分为circ-MAPK4+miR-inhibitor组、circ-MAPK4+NC-inhibitor组2个亚组并完成相关转染,采用CCK-8法检测U138细胞活力、细胞集落实验检测细胞克隆形成率、Transwell检测细胞侵入细胞数目、流式细胞法检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞增殖蛋白(Ki67、cycD)、侵袭蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)、凋亡蛋白(Ceaved-caspase3/caspase3)表达水平。结果 与HA1800细胞比较,U138、U373、U87和A172细胞的circ-MAPK4表达水平升高(P<0.05),miR-125a-3p表达水平下降(P<0.05);荧光素酶实验结果显示circ-MAPK4-mut/miR-125a-3p mimics、circ-MAPK4-mut/NC-mimics、circ-MAPK4-WT/NC-mimics细胞的荧光素酶相对活性均高于circ-MAPK4-WT/miR-125a-3p mimics细胞(F=437.659,P<0.001);与si-NC组比较,si-circMAPK4组细胞活力、克隆形成率、细胞侵入细胞数目、Ki67、cycD、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),而细胞凋亡率、Ceaved-caspase3/caspase3和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与circ-MAPK4+NC-inhibitor组比较,circ-MAPK4+miR-inhibitor组细胞活力、克隆形成率、细胞侵入细胞数目、Ki67、cycD、N-cadherin和Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、Ceaved-caspase3/caspase3和E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 circ-MAPK4低表达能减弱人神经胶质瘤细胞U138细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,可能与吸附miR-125a-3p作用有关。

秋水仙碱对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响

目的探讨秋水仙碱对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响及其机制。方法采用不同浓度的替莫唑胺(TMZ)处理人脑胶质瘤细胞系U87和A172细胞,构建TMZ耐药细胞系U87/TR和A172/TR,再使用秋水仙碱(10、30 ng/ml)干预1、2、3 d,采用细胞计数法、BrdU法和流式细胞术检测细胞活力、细胞增殖和细胞周期。生物信息学方法分析胶质瘤组织差异表达的微小RNA(miRNAs),并预测其靶基因;然后,采用qRT-PCR检测U-87/TR和A172/TR细胞中这些miRNAs的表达情况,调控miRNAs的表达以观察秋水仙碱效应的变化。结果秋水仙碱显著抑制U87/TR和A172/TR细胞的增殖活力(P<0.05),呈时间依赖性和剂量依赖性(P<0.05),而且显著阻滞U87/TR和A172/TR的有丝分裂,使细胞阻滞在G0/G1期。30ng/ml秋水仙碱显著增加TMZ对U87/TR和A172/TR细胞增殖的抑制效果(P<0.05),明显降低TMZ的IC50值(P<0.05)。生信分析显示,胶质瘤组织miR-330-3p、miR-491-5p、miR-6782-5p、miR-31-5p、miR-330-5p、miR-137和miR-433-3p呈差异表达,秋水仙碱明显上调U87/TR和A172/TR细胞miR-330-3p的表达(P<0.05)、明显抑制miR-330-3p靶基因ErbB的表达(P<0.05)。抑制miR-330-3p表达明显逆转秋水仙碱的生物学效应(P<0.05)。结论秋水仙碱可以抑制TMZ耐药的胶质瘤细胞的增殖,其机制可能涉及到miR-330-3p/ErbB信号通路的调节。

γ射线对A172胶质瘤细胞的生物学效应

以不同剂量照射后的细胞存活率、微核率和微核细胞率作为生物学终点,研究了γ射线对A172细胞的生物学效应.结果表明:细胞存活率与剂量之间满足回归方程lgY=-0.06427X+1.83354,其回归系数r=-0.9886,P<0.01.剂量为1Gy时微核率和微核细胞率达到最大值,此时的微核率为(66.75±3.564)%,微核细胞率为(53.9±0.7849)%,微核率和微核细胞率均随着剂量的增大先增大后减小,并分别维持在42%和37%左右.

高压氧对人胶质瘤172细胞生存的影响

目的:观察高压氧(HBO)对人胶质瘤172细胞生存的影响。方法:常规培养的人胶质瘤172细胞随机分为对照组和HBO组,对照组每日实验舱中常压0.1MPa空气放置90min,其余时间正常培养,HBO组每日HBO暴露1次,将细胞置实验舱中,氧气加压,15min升压至0.2MPa,稳压1h,减压15min,其余时间培养同对照组,HBO暴露10次。第11d取材,观察2组细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡比例、细胞生长周期,电镜观察细胞超微结构。结果:HBO组细胞计数明显少于对照组(P=0.01),HBO组早期和晚期凋亡细胞比例均明显高于对照组(均P<0.01)。2组G1期和S期细胞比例比较差异均无统计学意义,HBO组G2期细胞比例较对照组明显减少(P<0.01)。电镜观察到HBO组肿瘤细胞较对照组突起短小、减少。结论:HBO减慢了人胶质瘤172细胞生长,促进细胞凋亡,使更多的细胞阻滞在S期,使与肿瘤的转移、复发有关的突起变短、减少,显示了HBO对肿瘤细胞的抑制作用。

lncRNA LINC01410通过miR-205-5p调控胶质瘤A172细胞的增殖、凋亡和替莫唑胺敏感性

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01410对胶质瘤A172细胞增殖、凋亡和替莫唑胺(temozolomide,TMZ)敏感性的影响及其机制。方法:用qPCR法检测胶质瘤细胞系H4、SHG-44、A172和正常星形胶质细胞HA1800中LINC01410表达水平。将LINC01410 shRNA、shRNA control和miR-205-5p抑制剂(inhibitor)、inhibitor control转染至A172细胞,MTT法、流式细胞术分别检测400μmol/L TMZ处理后,转染细胞的增殖活性和凋亡水平,WB法检测细胞中Bax、Bcl-2、cyclin D1、p27的表达。在线生物信息学软件LncBase分析LINC01410的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC01410与miR-205-5p的靶向关系。结果:LINC01410在3种胶质瘤细胞中的表达水平均显著高于正常星形胶质细胞HA1800(均P<0.01),以在A172细胞中的表达水平最高(P<0.01)。转染LINC01410 shRNA和TMZ处理后,A172细胞的增殖能力下降、G1期细胞比例和凋亡率均升高(均P<0.01),细胞中Bax、p27表达水平升高而Bcl-2、cyclin D1表达水平下降(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实LINC01410靶向结合miR-205-5p,下调LINC01410促进miR-205-5p表达。转染miR-205-5p抑制剂可逆转下调LINC01410和TMZ处理对A172细胞增殖、周期和凋亡的影响。结论:下调lncRNA LINC01410可抑制胶质瘤A172细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡且提高对TMZ敏感性,其发生机制似与LINC01410对miR-205-5p的靶向作用有关。

FoxO3a对胶质瘤细胞株T98G和A172侵袭能力的影响

目的探讨叉形框蛋白3a(Fox O3a)对胶质瘤细胞系T98G、A172细胞侵袭能力的影响。方法将Fox O3a的RNAi干扰序列嵌入慢病毒载体p HY-LV-KD1.1产生重组病毒载体p HY-Fox O3a-KD;Fox O3a DNA序列克隆入慢病毒表达载体PHY-LV-OE1.6。通过Trans-Lentiviral Packaging System和Vira Power Lentiviral Expression System(Invitrogen)对重组载体进行病毒包装。重组后的慢病毒感染T98G、A172细胞,检测相应细胞株侵袭能力的改变,并通过Western blot检测胶质瘤侵袭相关的靶基因表达水平的变化。结果在T98G细胞中敲低Fox O3a后,肿瘤细胞侵袭能力下降并且侵袭相关基因MMP9表达水平下调;相反A172细胞中过表达Fox O3a肿瘤细胞侵袭能力增强。结论 Fox O3a可以影响T98G、A172细胞的侵袭能力。

miR-106a-5p靶向STAT3抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭的机制

目的探究miR-106a-5p靶向信号转导和转录激活因子3(STAT3)调控胶质瘤细胞增殖和侵袭的机制。方法选取2017年1月至2020年12月接受再次手术治疗的脑复发胶质瘤患者肿瘤组织15例及癌旁脑组织(距瘤缘>1.5 cm)5例,体外培养正常小鼠神经元细胞和胶质瘤细胞株GL261,qPCR检测miR-106a-5p水平。将构建的miRNA-NC mimics、miR-106a-5p mimics、miR-106a 5p inhibitor质粒转染GL261作为实验组,正常GL261作为Control组,qPCR检测各组细胞miR-106a-5p、STAT3表达。应用Targetsan预测和双荧光素酶基因报告验证miR-106a-5p与STAT3的靶向关系;CCK-8,Transwell检测各组细胞增殖和侵袭;蛋白质印迹测定凋亡相关蛋白BAX、cl-caspase-3和抑癌基因p21水平。结果miR-106a-5p在人复发胶质瘤组织和GL261中表达显著低于癌旁组织和正常小鼠神经细胞(P<0.05),相比Control组,miR-106a-5p mimics组GL261中miR-106a-5p水平显著升高、STAT3表达显著下降(P<0.01)。miR-106a-5p inhibitor组结果相反(P<0.05)。Targetsan预测和双荧光素酶基因报告证实了STAT3是miR-106a-5p的靶基因。此外,miR-106a-5p mimics组中STAT3表达显著下调,GL261增殖和侵袭明显减少(P<0.05),BAX、cl-caspase-3、p21的表达均显著上升(P<0.05);miR-106a-5p inhibitor组相反(P<0.05)。结论miR-106a-5p低表达于人复发胶质瘤组织和GL261中,通过负调控STAT3表达调节胶质瘤细胞的增殖和侵袭,为研究胶质瘤的复发提供一种新的靶点。

微小RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取2016年5月至2018年11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作56例为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测56例胶质瘤组织和56例正常脑组织中miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤U251细胞,转染miR模拟对照序列(miR-NC)、miR-520a-5p9模拟物(miR-520a-5p mimics)至U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞仪、Transwell和蛋白质印迹法检测过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因(MDM2)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证miR-520a-5p与MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂(anti-miR-520a-5p)对U251细胞中MDM2蛋白表达的影响。共转染miR-520a-5p mimics和MDM2过表达载体(pcD⁃NA3.1-MDM2)至U251细胞,上述相同方法观察过表达MDM2能否逆转过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-520a-5p表达降低(P<0.05)。与转染miR-NC的U251细胞比较,转染miR-520a-5p mimics的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值[(0.36±0.04)比(0.50±0.05)、(0.49±0.05)比(0.95±0.09)、(0.71±0.07)比(1.36±0.13)]、迁移细胞数[(67±6.26)比(144±13.38)]、侵袭细胞数[(59±5.47)比(135±13.12)]均降低(P<0.05),凋亡率[(21.17±2.06)%比(7.82±0.77)%]升高(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均降低(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。miR-520a-5p可与MDM2的3’UTR靶向结合,同时转染miR-520a-5p mimics的U251细胞中MDM2蛋白水平显著低于转染miR-NC的细胞,而转染anti-miR-520a-5p的U251细胞中MDM2的蛋白水平显著高于转染anti-miR-NC的细胞。与共转染miR-520a-5p mimics与pcDNA3.1的U251细胞比较,共转染miR-520a-5p mim⁃ics与pcDNA3.1-MDM2的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均升高(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达miR-520a-5p可能通过靶向负调控MDM2抑制胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。

lncRNA FAM95B1在胶质瘤中的表达及其影响LN382细胞增殖和迁移的可能机制

目的:探讨lncRNA FAM95B1对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响并探究其相关作用机制。方法:选取2018年1月至2020年8月于合肥市第三人民医院行手术治疗的38例胶质瘤患者的胶质瘤组织及癌旁组织标本,利用qPCR检测胶质瘤组织与4种细胞系中FAM95B1的表达水平,以表达最低的胶质瘤LN382细胞为研究对象,转染空载质粒(对照组)或pcDNA3.1-FAM95B1质粒(实验组)。MTT法和划痕实验检测FAM95B1对LN382细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学分析技术和双荧光素酶基因报告实验预测并验证FAM95B1与miR-26a-5p及PTEN之间的相互作用机制,应用qPCR和WB法检测FAM95B1对miR-26a-5p和PTEN表达的影响。结果:FAM95B1在胶质瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。FAM95B1在多种胶质瘤细胞系中的表达均明显低于正常脑胶质细胞(均P<0.01)。过表达FAM95B1可以下调LN382细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)。FAM95B1能够靶向结合miR-26a-5p(P<0.01),miR-26a-5p能够靶向结合PTEN mRNA(P<0.01)。过表达FAM95B1可下调LN382细胞中miR-26a-5p的表达(P<0.01),促进PTEN mRNA的表达(P<0.01)。结论:在胶质瘤组织和细胞系中异常低表达的FAM95B1通过发挥竞争性内源RNA的功能抑制miR-26a-5p的表达而增强PTEN蛋白表达,抑制胶质瘤细胞系LN382的增殖和迁移。

α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色体相关基因的表达及1p/19q遗传学改变在星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤及少突星形细胞瘤诊断中的意义

目的探讨a-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色体相关基因(ATRX)的表达及1p/19q遗传学改变在星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤及少突星形细胞瘤诊断中的意义。方法星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤及少突星形细胞瘤共53例,采用免疫组化及荧光原位杂交技术检测ATRX的表达及染色体1p/19q分子遗传学改变。结果星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤及少突星形细胞瘤中ATRX突变率(ATRX表达为阴性)分别为60.0%、44.4%及50.0%;星形细胞瘤染色体1p及19q单缺失和1p/19q共缺失率均为0%,少突胶质细胞瘤缺失率分别为54.5%、0%和45.5%,少突星形细胞瘤缺失率分别为12.5%、0%和0%,少突胶质细胞瘤染色体1p/19缺失率(包括共缺失及单缺失)与非少突胶质细胞肿瘤(包括星形细胞瘤及少突星形细胞瘤)比较差异有统计学意义(P=0.032)。联合检测ATRX表达及1p/19q缺失情况,少突星形细胞瘤与星形细胞瘤及少突胶质细胞瘤比较差异有统计学意义(P=0.046,P=0.003)。结论染色体1p/19q缺失主要发生在少突胶质细胞瘤中,对少突胶质细胞瘤的诊断具有重要价值;少突星形细胞瘤与星形细胞瘤的遗传学分子改变具有一定的差异性。

miR-103a-3p过表达靶向负调控PDK4抑制胶质瘤生长及侵袭

目的探讨miR-103a-3p过表达对胶质瘤C6细胞恶性生物学行为的影响及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法体外培养鼠源性C6胶质瘤细胞,转染miR-103a-3p mimics质粒过表达miR-103a-3p,转染miR-103a-3p mimics+pcDNA-PDK4质粒分析PDK4过表达对miR-103a-3p过表达的影响;EDU法检测细胞增殖活性;qRT-PCR检测miR-103a-3p、PDK4 mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;免疫印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。取40只裸鼠,其中20只皮下注射未转染质粒的C6细胞、20只皮下注射转染miR-103a-3p mimics质粒的C6细胞构建移植瘤模型,分析miR-103a-3p mimics过表达对移植瘤生长的影响。结果生物信息学及双荧光素酶试验证实PDK4是miR103a-3p的靶点。过表达miR-103a-3p明显降低C6细胞PDK4、Ki67、PCNA、N-cadherin、vimentin表达水平(P<0.05),明显抑制C6细胞增殖活性、侵袭能力(P<0.05),明显增加C6细胞E-cadherin表达水平、细胞凋亡率(P<0.05)。过表达PDK4明显抑制过表达miR-103a-3p对C6胶质瘤细胞的作用(P<0.05)。过表达miR-103a-3p明显抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.05),抑制肿瘤组织PDK4、Ki67、vimentin表达(P<0.05)。结论过表达miR-103a-3p通过靶向抑制PDK4表达,一方面抑制胶质瘤细胞增殖、促进胶质瘤细胞凋亡,从而抑制胶质瘤生长;另一方抑制胶质瘤上皮-间质转化过程,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。

长链非编码RNA LINC00319通过LINC00319/let-7a-5p/HMGA2机制调节胶质瘤的增殖

目的目的观察长链非编码RNA LINC00319在胶质瘤中的表达,探讨LINC00319对胶质瘤增殖的影响及其具体的分子机制。方法用real-time PCR法检测6例胶质瘤组织及胶质瘤细胞系U251、U87MG、A172和正常星形胶质细胞(NHA)中LINC00319的表达。随后在胶质瘤细胞系U251和U87MG中分别转染或不转染sh-LINC00319,CCK-8实验检测细胞增殖情况。生物信息学预测及双荧光素酶实验检测LINC00319在胶质瘤中可能的调节机制。结果real-time PCR结果显示,与NHA细胞及脑外伤组织相比,LINC00319在胶质瘤细胞和组织中高表达。CCK8实验显示,转染sh-LINC00319的胶质瘤细胞U251和U87MG存活率显著低于未转染的细胞(P<0.05)。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验证实,胶质瘤细胞中LINC00319可以直接与let-7a-5p相互作用,并且这种相互作用抑制下游高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达。结论LINC00319在胶质瘤细胞中高表达,降低LINC00319的表达可明显抑制胶质瘤细胞的增殖。LINC00319/let-7a-5p/HMGA2在胶质瘤的增殖中起关键作用,提示LINC00319有可能成为胶质瘤患者的治疗靶点。

MiR-125a-3p通过MAPK信号通路影响胶质瘤细胞的增殖及凋亡的实验研究

目的 探讨miR-125a-3p对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用.方法 (1)比较肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中565例胶质瘤组织和10例正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(2)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2015年4月至2018年4月手术切除并经病理检查证实的胶质瘤标本30例,其中低级别脑胶质瘤7例,高级别胶质瘤23例.另外收集同期因手术入路需要和颅脑外伤切除的正常脑组织标本8例.应用反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(3)体外培养正常胶质细胞HA1800及人脑胶质瘤细胞U251、U373、U87、U138、T98G,72 h后应用RT-qPCR检测6组细胞miR-125a-3p的表达;(4)取对数生长期的U251、U373细胞,分为无义序列组和miR-125a-3p模拟物组,应用LipofectamineTM 2000分别转染无义序列和miR-125a-3p模拟物.转染后72 h应用RT-qPCR检测2组细胞miR-125a-3p的表达,克隆形成实验检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测2组细胞的凋亡情况,Western blotting检测2组细胞凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达.结果 (1)TCGA数据库中,胶质瘤组织中miR-125a-3p的表达低于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05).(2)临床收集的正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤标本中miR-125a-3p的表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与HA1800细胞比较,U251、U373、U87、U138、T98G细胞中miR-125a-3p的表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中U251和U373细胞中miR-125a-3p表达下降得最明显.(4)与无义序列组比较,miR-125a-3p模拟物组U251和U373细胞中miR-125a-3p的表达增加,克隆形成率降低,凋亡率增加,凋亡相关蛋白活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-7的表达均增加,磷酸化(p)-P38/MAPK蛋白的表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-125a-3p在脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞中表达水平较低,过表达miR-125a-3p可以通过MAPK信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,其有望为胶质瘤的治疗提供新的潜在靶点.

反义miR-30a-5p抑制人脑胶质瘤细胞U87生长的体外实验研究

目的前期发现miR-30a-5p在胶质瘤中表达明显上调，本实验探究敲低miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U87细胞生物学特征的影响。方法real—timePCR检测转染miR-30a-5pI（miR-30a-5p抑制物）后U87细胞的miR-30a-5p表达水平，流式细胞术、MTT、Transwell、AnnexinV法检测细胞周期、生长、侵袭及凋亡的改变；Western blot检测相关蛋白。结果real—timePCR结果显示miR-30a-5pI可有效降低U87细胞中miR-30a-5p表达，抑制细胞增殖活性，使细胞周期阻滞在G0／G1期，侵袭能力明显受抑，凋亡增加，促增殖蛋白PCNA、促细胞周期进展蛋白Cyclin D1及促侵袭蛋白MMP-9的表达明显下调，而抑制侵袭蛋白TIMP-1及凋亡相关蛋白p53表达明显上调。结论敲低U87细胞的miR-30a-5p表达可抑制胶质瘤的增殖及侵袭，诱导凋亡；miR-30a-5p可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在候选靶点。

白藜芦醇抑制A172脑胶质瘤细胞生长的研究

目的:研究白藜芦醇对A172脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。方法:将A172细胞接种于96孔板上,每孔加入不同浓度的白藜芦醇,放入CO2培养箱(37℃),培养24h、48h和72h,用MTT(噻唑蓝)检测细胞的增殖活性。结果:白藜芦醇对A172脑胶质瘤细胞生长有抑制作用,且呈时间与剂量依赖性。结论:白藜芦醇对脑胶质瘤细胞的生长具有抑制作用,为临床进一步探讨脑胶质瘤的发病机制及应用中医药治疗脑胶质瘤提供了依据。

miR-130a-3p通过下调CPEB4增加胶质母细胞瘤替莫唑胺的敏感性

目的探索miR-130a-3p对胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)替莫唑胺(temozolomide,TMZ)化疗敏感性的影响与机制。方法采用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测胶质瘤细胞T98G细胞和TMZ耐药T98G-R细胞中miR-130a-3p以及胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)的相对表达水平。四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测胶质瘤细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光素酶报告实验检测miR-130a-3p与CPEB4的结合。结果T98G-R耐药细胞中miR-130a-3p表达水平较T98G细胞降低(0.25±0.08 vs.1.00±0.05,P<0.01),CPEB4表达水平较T98G细胞升高(1.37±0.17 vs.1.00±0.05,P<0.01)。MTT实验及流式细胞术结果表明,miR-130a-3p过表达可抑制胶质瘤细胞的增殖,促进TMZ诱导的细胞凋亡,但其可以被CPEB4过表达所逆转。荧光素酶报告实验显示,miR-130a-3p可以与CPEB4的3′-非翻译区结合,过表达miR-130a-3p抑制CPEB4的表达。结论miR-130a-3p通过靶向抑制CPEB4表达,促进胶质瘤细胞凋亡,增加GBM对TMZ的敏感性。

miR-130a-3p在胶质母细胞瘤中的表达与靶基因分析

目的探索miR-130a-3p在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)细胞中的表达水平,预测并分析miR-130a-3p的靶基因。方法采用实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测GBM细胞和正常人胶质细胞中miR-130a-3p的相对表达水平。选择miRanda、DIANA、TargetScan和PicTar工具预测miR-130a-3p的靶基因,对靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和通路富集分析,基于STRING数据库进一步建立蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)并利用Cytoscape软件进行可视化分析。结果相对于正常人胶质细胞,miR-130a-3p在GBM细胞中的表达水平显著下调。四种预测工具取交集后共筛选出302个靶基因。GO富集分析表明miR-130a-3p靶基因主要参与转录调控、蛋白泛素化、Wnt信号、miRNA介导基因沉默、DNA损伤反应、细胞迁移等生物学过程和分子功能。通路富集分析发现miR-130a-3p靶基因主要富集于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、内吞、自噬调节、胶质瘤、FoxO信号通路等。结论miR-130a-3p在GBM细胞中低表达,其靶基因涉及多个肿瘤发生相关的信号通路,为进一步阐明其在GBM发生过程中的调控机制以及开发靶向治疗提供参考。

miRNA-199a-5p靶向CDCA7L对胶质瘤细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-199a-5p靶向细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)对胶质瘤细胞迁移及侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人正常星形胶质细胞HA1800与人胶质瘤细胞株U251中miR-199a-5p表达量;使用Lipofectamine 2000转染试剂盒对U251细胞进行转染,并分别命名为空白组(正常培养的U251细胞)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-199a-5p mimic组(转染miR-199a-5p mimic)、miR-199a-5p mimic+pcDNA组(共转染miR-199a-5p mimic和pcDNA)、miR-199a-5p mimic+pcDNA-CDCA7L组(共转染miR-199a-5p mimic和pcDNA-CDCA7L),Transwell实验检测U251细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测CDCA7L蛋白表达情况;利用TargetScan软件预测miR-199a-5p和CDCA7L结合位点;双荧光素酶报告基因检测验证miR-199a-5p与CDCA7L靶向关系;HA1800、U251两组细胞间的比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SNK-q检验。结果与HA1800细胞比较,U251细胞中miR-199a-5p表达水平降低(1.09±0.26比0.32±0.14),CDCA7L蛋白表达量升高(0.21±0.02比0.85±0.13),差异具有统计学意义(P均<0.001)。miR-199a-5p mimic组细胞迁移数、侵袭数及CDCA7L蛋白表达量均低于空白组、miR-NC组(50.12±3.36比94.57±7.14、93.86±6.11;42.53±3.34比71.49±4.35、73.76±4.21;0.25±0.07比0.83±0.12、0.89±0.09),差异具有统计学意义(P均<0.001)。CDCA7L为miR-199a-5p靶基因。过表达CDCA7L可逆转miR-199a-5p对U251细胞迁移及侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论在胶质瘤细胞中miR-199a-5p呈低表达,上调miR-199a-5p可能通过靶向抑制CDCA7L蛋白表达,进而抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。