槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的:研究类黄酮化合物槲皮素(quercetin,QUE)对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法:按QUE浓度分成10、25、50、75及100μmol.L-15个处理组和空白对照组(生理盐水)及溶剂对照组(二甲亚砜),大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×106.mL-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)对50及100μmol.L-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50μmol.L-1的QUE作用48 h的p53和bcl-2基因产物。结果:与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G0/G1期的细胞增加(P<0.01),而S和G2/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。

黄连解毒汤在体外对大鼠胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的:研究黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:分别采用MTT法、流式细胞术、划痕法和Transwell法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,分别采用RT-PCR和Western blot法测定黄连解毒汤对大鼠胶质瘤C6细胞中BCL-2、BAX、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果:黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6胶质瘤细胞24 h或48 h时可显著抑制细胞增殖(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.01);黄连解毒汤100、300、900 mg/L作用大鼠C6细胞24 h时的凋亡率均较空白对照组显著升高(P<0.01),划痕刻度均较空白对照组显著变宽(P<0.01),穿膜细胞数量均较空白对照组显著减少(P<0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达显著降低,而BAX和Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:黄连解毒汤可抑制大鼠胶质瘤C6细胞的增殖、迁移和侵袭,促进C6细胞凋亡,其机制可能与抑制C6细胞BCL-2表达以及促进BAX和Caspase-3表达有关。

ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的研究全反式维甲酸(ATRA)诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Caspase-3和Bcl-2表达情况,探讨ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制ATRA不同浓度不同时间(6、12、24、48、72h)对胶质瘤C6细胞作用后细胞生长曲线,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA水平的表达变化影响,Western blot分析Caspase-3和Bcl-2在胶质瘤C6细胞中的表达情况。结果胶质瘤C6细胞经ATRA诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在ATRA作用下明显呈低表达而Caspase-3 mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Westernblot检测结果显示ATRA作用后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白Caspase-3的表达。结论ATRA对胶质瘤C6细胞的增殖具有抑制作用。

外源性IL-18基因转染联合顺铂对胶质瘤C6细胞凋亡的诱导作用

目的研究外源性IL-18基因联合顺铂对胶质瘤C6细胞的凋亡诱导作用,为胶质瘤治疗提供新的途径。方法将IL-18基因及pLXSN病毒载体导入胶质瘤C6细胞,建立C6/IL-18及C6/pLXSN细胞;C6/IL-18、C6/pLX-SN及胶质瘤C6细胞均以RPMI1640培养基培养,经0.3、3、30、60、120μg/ml顺铂作用48h后,用酶标仪在490nm波长处测吸光度值,计算细胞抑制率;以顺铂的10倍血浆峰浓度作用(3μg/ml)细胞24h后,采用吖啶橙/溴乙啶(A//EB)双荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 C6/IL-18细胞、C6/pLXSN细胞及亲代C6细胞经120、60、30、3、0.3μg/ml顺铂作用后的抑制率依次降低,C6/IL-18细胞抑制率明显高于C6/pLXSN和C6细胞(P均<0.05)。以30μg/ml顺铂作用后C6/IL-18细胞的凋亡率明显高于C6/pLXSN和C6细胞(P均<0.05)。结论外源性IL-18基因联合顺铂可明显增加对胶质瘤C6细胞的抑制作用,其相关机制有待进一步探讨。

大蒜素对脑胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的实验研究

[目的]探讨大蒜素对体外培养的脑胶质瘤C6细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。[方法]培养脑胶质瘤C6细胞至对数生长期,不同浓度大蒜素作用下,于倒置显微镜及Hoechst33258荧光染色显微镜下观察C6细胞形态学变化;四甲基偶氮噻唑蓝法(tetrazolium salt colorimetry,MTT)检测不同浓度大蒜素对C6细胞增殖的影响并计算抑制率;钙依赖性磷脂结合蛋白-荧光素/碘化丙啶双染法(Annexin V-fluorescein/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI)检测凋亡率;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期;蛋白质印迹法(western blotting,WB)检测Bax、Bcl-2基因的表达。[结果]大蒜素作用C6细胞24h后,于倒置显微镜观察可见C6细胞生长明显抑制,部分细胞皱缩变形,出现成泡现象;Hoechst33258荧光染色显微镜下观察发现凋亡的细胞,细胞的体积变大,核固缩、凝集,核染色质边集,出现浓染致密的颗粒块荧光信号,并随着大蒜素浓度增加表现越加明显。不同浓度(5、10、20、40、80μg·m L^(-1))大蒜素作用C6细胞(24h、48h、72h)后,细胞增殖受到抑制,与0μg·m L^(-1)大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01);同一浓度大蒜素作用C6细胞48h、72h后,与24h比,差异有统计学意义(P<0.01)。随着大蒜素浓度的增加,C6细胞凋亡率上升,与0μg·m L^(-1)大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01);其中80μg·m L^(-1)大蒜素显著抑制C6细胞增殖、诱导其凋亡,与各浓度大蒜素比,差异有统计学意义(P<0.01)。20μg·m L^(-1)大蒜素作用C6细胞24h后,与0μg·m L^(-1)大蒜素比G0/G1期细胞比例增加,S、G2/M期细胞比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着大蒜素浓度的增加Bax表达水平上升、Bcl-2表达水平下降,Bcl-2/Bax比值逐渐上升,与0μg·m L^(-1)大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01);其中80μg·m L^(-1)大蒜素与5、20μg·m L^(-1)大蒜素比,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]大蒜素能体外抑制C6细胞的增殖,并诱导其凋亡,其中80μg·m L^(-1)大蒜素作用最强,分子机制涉及调控Bax、Bcl-2基因的表达。

消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖抑制的实验研究

目的:观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制作用。方法:运用血清药理学方法,选择不同浓度的消癥丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育,于不同时间观察细胞的生长状况;台盼蓝染色计数细胞数绘制生长曲线;用MTT法观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制作用。结果:消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖具有一定的抑制作用。且这种作用呈时间、剂量依赖性,随着剂量的增加和时间的延长,抑制率增高。结论:消癥丸具有抑制胶质瘤C6细胞增殖的作用,为临床抗胶质瘤治疗提供实验依据。

Cx43对脑胶质瘤C6细胞增殖的影响及机制

目的将p CMV-Cx43c DNA重组质粒转染入大鼠脑胶质瘤C6细胞,上调C6细胞Cx43表达,进而探讨C6细胞Cx43过表达对其增殖能力的影响及机制。方法通过脂质体将p CMV-Cx43c DNA重组质粒转入C6细胞,使C6细胞过表达Cx43,并用G418筛选出稳定过表达Cx43的C6细胞;测定细胞倍增时间和软琼脂集落形成实验,检测各组细胞的增殖程度;分别用ERK1/2特异性阻断剂PD98059(30μmol·L^(-1))、p38MAPK特异性阻断剂SB20219(10μmol·L^(-1))处理各组细胞,Western blot检测各组细胞Cx43、p-Cx43、pERK1/2和p-p38MAPK的表达;MTT比色法检测各组细胞活性。结果成功将p CMV-Cx43c DNA重组质粒转入C6细胞,并筛选出稳定转染Cx43基因的C6细胞;测定细胞倍增时间和软琼脂集落形成实验表明C6-Cx43组比C6组、C6-p CMV组细胞增殖速度减慢,细胞集落数明显减少(P<0.01);ERK1/2、p38MAPK特异性阻断剂处理细胞后,Western blot检测发现C6-Cx43+PD98059组、C6-Cx43+SB202190组较C6-Cx43组Cx43表达升高(P<0.01)、pCx43(P<0.05)表达下调。结论阻断ERK1/2、p38MAPK通路,导致Cx43蛋白表达升高,从而抑制C6细胞的增殖。

Lipofectamine2000转染pSiRNA-STAT3质粒对脑神经胶质瘤C6细胞的作用

目的研究Lipofectamine2000下转染p SiRNA-STAT3质粒对脑神经细胞C6的作用。方法取对数生长期的C6细胞随机分为Mack组、Scramble组和p SiRNA-STAT3组采用MTT法检测C6细胞在不同时间段(6、8、10 h)细胞增殖活性;荧光显微镜观察吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)检测细胞凋亡及线粒体膜电位变化。结果 Lipo2000转染p SiRNA-STAT3质粒在8 h时对C6细胞具有明显的抑制作用;镜下观察p SiRNA-STAT3组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低。Mock组与Scramble组比较无统计学意义(P>0.05);p SiRNA-STAT3组与Scramble组比较差异显著(P<0.05)。结论 Lipo2000转染p SiRNA-STAT3质粒可能通过降低线粒体膜电位,抑制肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长的作用。

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠胶质瘤C6细胞分化的作用

目的:探讨半胱氨酰白三烯受体在大鼠胶质瘤C6细胞的分化中的作用。方法:以激动剂LTD4、CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特以及分化诱导剂forskolin处理C6细胞,观察细胞形态及GFAP蛋白表达变化。结果:Forskolin(10μmol/L)可诱导C6细胞形态变化及GFAP蛋白表达(细胞分化),而LTD4(0.1～100 nmol/L)不能诱导这些变化;单用孟鲁斯特(1μmol/L)无明显作用,但与LTD4(100 nmol/L)合用可诱导C6细胞分化。结论:CysLT2受体可能参与调节大鼠胶质瘤C6细胞的分化。

消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表达的影响。[方法]运用血清药理学方法,选择不同浓度的消癥丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育,用MTT法计算增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癥丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖,且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癥丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点,大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癥丸能显著降低其表达。[结论]消癥丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖,降低Bcl-2表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,发挥其临床抗肿瘤,抑制脑瘤的作用。

土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡

目的:研究土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡及其机制。方法:采用MTT法检测0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μmol/L不同终浓度PAB对C6细胞增殖能力的影响,激光扫描共聚焦显微镜观察AO/EB荧光染色后细胞的凋亡情况,流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化,免疫组化法测定C6细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果:MTT结果显示,PAB呈时间剂量依赖性抑制C6细胞的生长。PAB处理24、48和72 h后,对C6细胞的半效致死剂量(IC50)分别为39.811、23.306和7.360μmol/L。5.0、10.0、20.0μmol/L PAB作用C6细胞72 h后的凋亡率分别为(50.5±0.7)%、(63.5±2.3)%和(80.0±1.2)%,与对照组(12.0±1.6)%比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示5.0、10.0、20.0μmol/L不同浓度PAB作用C6细胞72小时后,随着浓度的增加,G2/M期细胞逐渐增多,分别为(29.84±6.215)%,(34.58±1.187)%和(70.23±6.325)%,与对照组(7.79±0.570)%相比,后两组差异有统计学意义(P<0.05)。C6细胞中Bcl-2蛋白阳性表达率随药物剂量的增大而减小。结论:PAB可抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期、下调Bcl-2表达为其可能的作用机制。

漆黄素对胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及细胞周期的影响

目的研究漆黄素对胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及细胞周期的影响。方法以不同浓度的漆黄素（12．5、25、50μmol／L）处理C6细胞，以DMSO作为对照组．分别采用Transwell体外侵袭实验、Transwell体外迁移实验检测漆黄素对C6细胞侵袭、迁移能力的影响，采用流式细胞术检测漆黄素对C6细胞增殖及细胞周期的影响。结果Transwell侵袭实验显示：漆黄素处理24h后与对照组相比，漆黄素处理组的c6细胞侵袭率明显降低。Transwell侵袭实验显示：漆黄素处理c6细胞12h后与对照组相比，漆黄素处理组的c6细胞迁移率显著降低。流式细胞术检测细胞增殖结果显示：与对照组相比，漆黄素处理组的C6细胞增殖率明显降低。流式细胞术检测细胞周期结果显示：与对照组相比，漆黄素处理组的C1期细胞比例逐渐增高，而G2期和S期的细胞比例相位降低，将细胞周期阻滞在G1期，结论漆黄素能够明娃抑制胶质瘤C6细胞的侵袭、迁移能力；并可通过阻滞C6细胞的细胞周期进程来抑制其增殖.

槲皮素对胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响

目的探究黄酮类化合物槲皮素对大鼠胶质瘤C6细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将C6胶质瘤细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组;Q0组加适量二甲亚砜处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100和150μmol/L。分别通过transwell体外侵袭实验,transwell体外迁移实验,Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移,增殖能力及其细胞周期的影响。结果槲皮素处理36h后,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为45.81%、13.63%和4.63%;与对照组(100%)相比,其侵袭细胞比率显著降低(P均<0.05)。槲皮素处理12h后,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为:57.98%、33.60%和11.79%;与对照组(100%)相比,其迁移细胞比率显著降低(P均<0.05)。槲皮素处理24h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为45.37%、21.49%、7.30%和1.12%;G0/Gl期C6细胞所占比例分别为60.86%、52.11%、35.64%、39.63%,S期分别为34.39%、40.86%、63.48%、60.36%,G2/M期分别为4.76%、6.87%、0.88%、0.11%;Q50、Q100、Q150组的G0/Gl、S、G2/M期细胞比例与Q0组比较,具有显著的统计学差异(P均<0.05);结论研究发现,槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移能力;并可通过阻滞C6细胞的细胞周期进程来抑制其增殖。

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法 C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基(DMEM),37℃,5%CO2条件下培养;质粒提取与转染;用Hoechst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组(P<0.05)。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。

肿瘤坏死因子-α基因治疗联合放疗抗大鼠胶质瘤C6细胞作用的实验研究

背景与目的:恶性胶质瘤预后差,有必要探索新方法提高疗效。本研究用Ad-rhTNF-α基因治疗联合放疗治疗大鼠皮下C6胶质瘤,评估其疗效和安全性。方法:基因工程技术构建Ad-rhTNF-α后,建立大鼠皮下胶质瘤模型,联合治疗组瘤内注射Ad-rhTNF-α,24h后行X线加速器放疗,各对照组作相应处理。放疗5天后处死所有大鼠进行形态学研究。结果:联合治疗组肿瘤体积最小,有丝分裂细胞数量最少,坏死区域最广,凋亡小体最为多见。联合治疗组外周血Th/Ts比值降低(P<0.05),NK细胞数量增多(P<0.05),体内免疫机制上调,效应细胞数量增多,免疫活性增强。各组体重与全血细胞分析的各项指标很接近。结论:Ad-rhTNF-α基因治疗放射联合治疗抗大鼠C6胶质瘤肿瘤作用明显优于单纯放疗和基因治疗,并且在目前剂量下是安全的。

胶质瘤C6肿瘤干细胞蛋白质组学初步分析

目的:运用蛋白质组学的方法,对C6脑肿瘤干细胞(BTSC)和非BTSC细胞进行配对研究,建立差异性蛋白文库,为探讨胶质瘤病因提供初步线索。方法:在C6细胞中,参照神经干细胞(NSC)培养条件进行培养。出现典型的神经球后,利用免疫荧光染色检测细胞标记,包括nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等,以及诱导分化等方法,鉴定神经球细胞是否为BTSC。收集神经球和非神经球细胞,进行配对,利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)检测细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点。结果:C6细胞在NSC培养条件下,出现比较典型的神经球。神经球细胞nestin阳性,NSE和GFAP阴性。经诱导发生分化,分化后细胞形态与C6相似,能够表达NSE和GFAP等多种表型细胞标记,证实这种神经球细胞为肿瘤干细胞。在2D-PAGE结果中,C6肿瘤干细胞和非干细胞配对比较,有统计学差异(P<0.05)的蛋白点共有84个,大于2倍差异蛋白点有50个,大于3倍的有17个,大于4倍的有6个,最大差异倍数为11.607 2。在BTSC中,有55个差异蛋白表达增多(上调),29个蛋白表达下降(下调)。结论:胶质瘤C6细胞系中存在肿瘤干细胞,在蛋白质组学方面与非BTSC细胞有明显差异。

胰岛素样生长因子结合蛋白-3在白藜芦醇抑制脑胶质瘤C6细胞增殖中的作用

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)在白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制脑胶质瘤C6细胞增殖中的作用。方法将脑胶质细胞和脑胶质瘤C6细胞分为脑胶质细胞组、Res+脑胶质细胞组、脑胶质瘤C6细胞组及Res+脑胶质瘤C6细胞组,采用MTT和Western blot法分别检测Res对各组细胞增殖及细胞中IGFBP-3和ERK蛋白表达水平的影响。将脑胶质瘤C6细胞分为空白对照组、Res组、si RNA-IGFBP-3组和Res+si RNA-IGFBP-3组,采用MTT法、流式细胞术、Transwell试验及Western blot法分别检测Res联合si RNA-IGFBP-3对脑胶质瘤C6细胞增殖、凋亡、侵袭能力及细胞中IGFBP-3和ERK蛋白表达水平的影响。结果各组细胞培养48 h后,Res+脑胶质细胞组与脑胶质细胞组的细胞增殖抑制率及细胞中IGFBP-3和ERK蛋白的表达水平均无明显变化(P>0.05);Res+脑胶质瘤C6细胞组与脑胶质瘤C6细胞组比较,细胞增殖抑制率和细胞中ERK蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),而IGFBP-3蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,Res组细胞增殖抑制率、凋亡率、IGFBP-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),侵袭能力、ERK蛋白表达水平明显降低(P<0.05);而si RNA-IGFBP-3组和Res+si RNA-IGFBP-3组细胞增殖抑制率、凋亡率、IGFBP-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),侵袭能力、ERK蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 Res可能是通过增强IGFBP-3的表达来抑制ERK信号通路的活性,进而发挥促进脑胶质瘤细胞凋亡的作用。

蛇六谷乙酸乙酯萃取物A_1组分对大鼠胶质瘤C_6细胞增殖及C-myc、bcl-2、p^(53)癌基因表达的影响

目的:探讨蛇六谷乙酸乙酯萃取物A1组分对大鼠胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法:用MTT比色法检测不同浓度A1组分对C6细胞增殖的抑制作用,RT-PCR法检测A1组分对C6细胞C-myc、bc l-2,p53mRNA基因表达的影响。结果:A1组分对C6细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈量-效关系,并有明显的细胞形态学改变;RT-PCR结果显示,随着A1组分作用剂量的增加,C6细胞的C-myc、bc l-2及p53mRNA表达均有明显降低。结论:蛇六谷乙酸乙酯萃取物A1组分对大鼠胶质瘤C6细胞的增殖具有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制原癌基因C-myc、bc l-2及p53的表达有关。

苦参碱对胶质瘤C6细胞血管生成相关因子的影响

目的探讨缺氧条件下苦参碱对胶质瘤C6细胞血管生成相关因子的影响。方法胶质瘤C6细胞培养至对数生长期,分别加入0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0g/L苦参碱溶液,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;对数生长期胶质瘤C6细胞随机分为CoCl_2正常组、常氧正常组、CoCl_2苦参碱组、常氧苦参碱组,其中CoCl_2正常组和CoCl_2苦参碱组采用CoCl_2培养液培养,常氧正常组和常氧苦参碱组采用正常DMEM培养液培养,采用倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,采用Western blot方法检测各组细胞血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、金属蛋白酶组织抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinase-3,TIMP-3)表达情况。结果 CoCl_2处理后苦参碱对胶质瘤C6细胞有明显抑制作用,且随苦参碱浓度增加细胞抑制率明显升高(24h:R^2=0.9897,IC_(50)=1.468g/L);常氧正常组细胞狭长,梭形,贴壁生长;CoCl_2正常组细胞呈三维空间分布;常氧苦参碱组细胞变小、变圆,出现碎裂;CoCl_2苦参碱组细胞较轻程度变小、变圆,出现碎裂;CoCl_2正常组和CoCl_2苦参碱组HIF-1α(1.660±0.171、1.331±0.112)、VEGF(1.161±0.020、0.932±0.016)、TIMP-3(1.464±0.047、1.785±0.043)蛋白表达量明显高于常氧正常组(1.092±0.082、0.784±0.042、0.603±0.052)和常氧苦参碱组(0.734±0.080、0.637±0.022、1.203±0.069)(P<0.05),CoCl2苦参碱组HIF-1α和VEGF蛋白表达量低于CoCl2正常组,TIMP-3蛋白表达量高于CoCl_2正常组(P<0.05);常氧苦参碱组HIF-1α和VEGF蛋白表达量低于常氧正常组,TIMP-3蛋白表达量高于常氧正常组(P<0.05)。结论缺氧条件下苦参碱能抑制胶质瘤C6细胞增殖,使VEGF蛋白表达下调、TIMP-3蛋白表达上调,其抗肿瘤机制可能与抑制血管生成相关。

姜黄素、槲皮素、尼莫地平对C6胶质瘤细胞替尼泊苷敏感性的影响＊

目的:观察姜黄素(Curcumin,Cur)、槲皮素(Quercetin,Que)和尼莫地平(Nimodipine,Nim)对胶质瘤细胞化疗药物替尼泊苷(Teniposide,Ten)敏感性的影响。方法:体外培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,采用MTT比色法确定Ten的IC 50及Cur、Que、Nim的安全浓度,检测Ten与Cur、Que、Nim联合使用对肿瘤细胞增殖率的影响。结果:Ten的IC50为0.5μg/ml,Cur、Que和Nim的安全浓度分别为5.16μg/ml、0.03μg/ml和10μg/ml。Ten分别与Cur、Nim联合使用对胶质瘤细胞的抑制率明显高于单独使用Ten的抑瘤效果,Ten与Que联用的协同作用最明显。结论:Cur、Que和Nim能增强大鼠脑胶质瘤C6细胞对化疗药物Ten的敏感性,合用呈现协同效应。