吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进作用及其机制

目的研究吴茱萸碱对人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的促进用及其机制。方法将体外培养的胶质瘤SHG-44细胞分为对照组、吴茱萸碱组(根据吴茱萸碱浓度不同分为3个亚组),CCK-8法观察细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤SHG-44细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达。结果吴茱萸碱对胶质瘤SHG-44细胞增殖有抑制作用。流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测结果表明,随着吴茱萸碱作用浓度的递增,胶质瘤SHG-44细胞凋亡率呈剂量依赖性递增;吴茱萸碱作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达升高。结论吴茱萸碱通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达,抑制胶质瘤SHG-44细胞增殖并促进其凋亡。

不同浓度五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的影响

脑肿瘤发病率目前在全球范围内呈上升趋势,脑肿瘤中以胶质瘤最为常见,恶性胶质瘤是肿瘤患者的第4位死亡原因,具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低＂三高一低＂的特点。研究表明,五味子具有保肝、抗肿瘤、抗氧化与抗衰老等作用,但目前对于五味子的研究都主要集中在保肝作用方面,

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨 PTEN基因对人脑胶质瘤 SHG- 4 4细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl- 2表达的影响 ,阐明 PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制 .方法 PTEN基因体外转染 SHG- 4 4细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况 ;采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况 ;以免疫荧光法检测 bcl- 2基因的表达 .结果 PTEN基因转染的 SHG- 4 4细胞有 PTEN蛋白的表达 .透射电镜下可见转染 PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪显示细胞周期从 G1 期到 S期发生抑制 ,并且在 G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (15 .9% ) ;细胞核 DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl-2的表达也显著下调 .结论 PTEN基因可诱导 SHG- 4 4细胞凋亡 ,并下调 bcl- 2蛋白的表达 ,这可能是

九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡及其机制研究

目的研究九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法用四甲基偶氨唑蓝(MTT)法检测不同剂量九节龙皂苷于不同时间(6、12、24、72h)对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Western-blot检测caspase-3和Bcl-2在SHG-44细胞中的表达情况。结果流式细胞仪检测显示,随着九节龙皂苷浓度的增大和时间延长,SHG-44细胞的凋亡率明显上升,Western-blot结果提示九节龙皂苷下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白caspase-3,九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长与增殖。结论九节龙皂苷引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用,通过调控caspase-3和Bcl-2诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡。

全反式维甲酸对胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的影响(英文)

背景与目的:胶质瘤有恶性进展的趋势,而诱导分化治疗可诱导高级别肿瘤的分化,使肿瘤恶性程度降低甚或转为正常。本研究旨在检测全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)处理后胶质瘤SHG-44细胞的基因表达谱改变,为进一步研究胶质瘤的基因治疗奠定基础。方法:以10μmol/LATRA处理SHG-44细胞后,提取总RNA进行反转录聚合酶链反应,并以荧光染料Cy3和Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测ATRA诱导前后SHG-44细胞的基因表达谱,获得差异表达基因;随机选择数个差异基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列的结果。结果:应用cDNA微阵列检测发现ATRA处理前后的SHG-44细胞之间存在42个差异表达基因,其中表达上调28个、表达下调14个。这42个差异表达基因按功能分为:凋亡类3个、细胞迁移和转移类3个、细胞周期与生长调节类2个、细胞骨架类2个、分化类1个、细胞代谢类5个、癌基因1个、氧化磷酸化类1个、受体与信号传导类2个、核蛋白体类3个、泛素-蛋白酶系统类2个、生长因子与细胞因子类1个及其他类相关基因16个。结论:ATRA可引起胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的改变,上述差异表达基因可能不仅介导药物诱导胶质瘤分化的机制,而且调节胶质瘤的演进。

miRNA-34a对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在人脑胶质瘤组织中的表达以及其对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响。方法:20例胶质瘤组织标本均取自于青岛医学院附属医院神经外科(2007年01月至2010年12月),作为对照的正常脑组织取自5位重症脑外伤需行减压手术的患者。Real-time PCR检测胶质瘤组织中miR-34a的表达。体外转染miR-34a mimics至SHG-44细胞中,MTT实验、流式细胞术检测SHG-44细胞的增殖、细胞周期及凋亡。结果:miR-34a在人脑胶质瘤组织中的表达量明显低于正常脑组织,其在Ⅲ、Ⅳ期胶质瘤组织中表达量明显低于Ⅰ、Ⅱ期胶质瘤组织。miR-34amimics体外转染组与空白组相比,其细胞增殖抑制率明显提高[(37.24±5.72)%vs(4.19±0.63)%,P<0.01];miR-34amimics转染组SHG-44细胞G1期比例明显高于空白对照组[(61.78±2.01)%vs(50.91±1.19)%,P<0.05];且miR-34a转染组细胞凋亡率与空白组细胞相比显著升高[(15.28±3.65)%,vs(2.07±0.84)%,P<0.01]。结论:miR-34a在人脑胶质瘤组织中低表达,miR-34a可抑制SHG-44细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。

pEgr-hPTEN体外稳定转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期及增殖的影响

目的 探讨外源野生型PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 4 4细胞周期及增殖的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 脂质体包裹重组质粒pEgr hPTEN体外转染内源性PTEN基因突变的SHG 4 4胶质瘤细胞 ;G4 18筛选稳定表达细胞株并扩增培养 ;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度 ;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果 经 10到 2 0dG4 18筛选得到稳定表达细胞株 ;重组质粒pEgr hPTEN稳定转染可明显抑制SHG 4 4细胞的体外增殖 ,细胞周期明显改变 ,细胞从G1期到S期发生阻滞。结论 提示转染外源野生型PTEN基因可使SHG 4 4细胞周期阻滞于G1期 ,并可抑制肿瘤细胞增殖。

针对MAGE-1基因RNAi在恶性胶质瘤SHG-44细胞中的作用研究

目的构建抑制黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)的siRNA表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建RNA干涉(RNAi)质粒载体。利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后SHG-44细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干扰效果。结果重组构建的pSUPER-MAGE-1载体经双酶切电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成功插入到预计位点,并且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的SHG-44多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干涉作用。结论成功构建了针对MAGE-1基因的siRNA表达载体,抑制SHG-44细胞中的MAGE-1分子的表达。

参麦注射液诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡的影响

目的观察参麦注射液体内外对人脑胶质瘤SHG-44细胞生长的抑制及诱导凋亡的作用。方法常规培养细胞,分别加入10,20,40,80,160,320μg·m L-1参麦注射液,分别于培养48,72,96 h后采用噻唑蓝(MTT)法检测参麦注射液对SHG-44细胞增殖的抑制作用;Annexin V-FITC/PI法检测对细胞凋亡的影响;建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,随机分为模型对照组、顺铂组及参麦注射液(20,40,80 mg·kg-1)3个剂量组,每日腹腔注射给药,观察荷瘤裸鼠的一般活动状况以及进食量;12 d后处死裸鼠,剥瘤称定质量并计算抑瘤率;取组织瘤块,免疫组织化学法检测基因蛋白Caspase-9、Caspase-12、Fas、Survivin含量。结果参麦注射液6个剂量组对SHG-44细胞的增殖均具有明显抑制作用,该抑制率具有时间和剂量依赖性;3个剂量的参麦注射液均能明显诱导SHG-44细胞凋亡;参麦注射液腹腔注射给药可明显抑制荷瘤裸鼠移植瘤的生长;促进Caspase-9、Caspase-12、Fas表达,抑制Survivin的表达。结论参麦注射液体内外均可抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的生长,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的机制可能与上调Caspase-9、Caspase-12、Fas水平,下调Survivin有关。

CD44表达量对胶质母细胞瘤患者预后的影响分析

目的探讨CD44表达量对胶质母细胞瘤(GBM)患者预后的影响。方法选取2021年7月1日至2023年8月31日解放军总医院第一医学中心收治的102例GBM患者为研究对象,以术中切除肿瘤组织CD44积分光密度(IOD)的平均值为分界线,将研究对象分为CD44高表达组(IOD≥699023,51例)和CD44低表达组(IOD<699023,51例)。比较分析两组患者的一般资料、生存结局。采用单因素分析及Cox多因素回归方法分析GBM患者总生存率的影响因素。结果两组患者的性别、年龄比较差异均无统计学意义(P>0.05)。患者术后随访时间2.6~27.5个月,中位随访时间15.0个月,10例患者存活,其中CD44高表达组有3例患者存活,CD44低表达组有7例患者存活,CD44低表达组患者的中位总生存期为18.3个月,CD44高表达组患者的中位总生存期为13.6个月,log-rank检验结果显示,CD44低表达组患者的总生存率高于CD44高表达组(χ^(2)=22.233,P<0.001)。术后放化疗、手术切除程度、肿瘤性质、MGMT启动子甲基化状态、CD44表达量与GBM患者的总生存率显著相关(P<0.05)。Cox多因素回归分析结果显示,原发GEM、术后放化疗、完全切除、MGMT启动子甲基化、CD44低表达均为GBM患者总生存率的独立保护因素(P<0.05)。结论CD44表达量与GBM患者的预后显著相关,且CD44低表达为GBM患者总生存率的独立保护因素。

CD44差异表达在胶质母细胞瘤中的生物信息学分析及细胞实验验证

目的探究CD44差异表达在胶质母细胞瘤(GBM)中的临床意义以及相关通路的富集并以胶质母细胞瘤细胞系U87进行实验验证。方法通过差异表达和Cox分析确定泛癌转录组中肿瘤患者与健康人的CD44表达是否具有差异以及风险比(HR);比较GBM患者CD44高、低表达组的免疫浸润及干细胞相关评分,并进一步分析各免疫细胞亚群是否具有差异及其与CD44的相关性;对GBM患者CD44高、低表达组差异表达的基因进行通路富集;通过构建、包装慢病毒和运用电转核糖核蛋白复合体的方法在U87细胞中过表达(OE)、敲低(KD)以及敲除(KO)CD44;对U87和U87 CD44 OE细胞进行CD44的免疫荧光染色;敲低CD44对U87细胞的活力与凋亡进行检测,敲除CD44对U87细胞的迁移与侵袭能力进行检测。结果CD44在GBM中表达较高与健康人差异明显(P<0.05),且HR>1。高表达CD44的GBM患者具有较高的基质细胞与免疫浸润评分以及较低的细胞干性,CD44高、低表达的GBM患者的树突状细胞、CD4^(+)记忆T细胞和调节性T细胞具有明显差异,且与CD44表达呈正相关(P<0.05)。CD44高、低表达的GBM患者的差异基因富集在与细胞迁移与凋亡的相关通路(P<0.05)。U87细胞实验表明,CD44正常情况定位在细胞膜,但CD44 OE后会在细胞质中发生蓄积。CD44 KD会导致细胞活力下降,细胞发生凋亡,CD44 KO的细胞迁移与侵袭能力也会下降(P<0.05)。结论CD44表达降低可以促进U87细胞活力降低、凋亡比例升高,侵袭与迁移能力下降,可能是影响GBM患者预后的相关因素。

人脑胶质瘤细胞SHG-44照射后COX-2表达与放射敏感性的关系

目的:探讨人脑胶质瘤细胞SHG-44照射存活后代细胞对放射敏感性的变化,以及环氧合酶-2(COX-2)的表达情况,为临床使用COX-2抑制剂提供理论依据。方法:采用克隆形成率研究SHG-44及SHG-44照射存活后代细胞的放射敏感性;并分别用RT-PCR方法及免疫组化的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:与SHG-44细胞相比,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性下降,COX-2 mRNA及蛋白表达均升高。COX-2表达水平与SHG-44照射后代细胞放射敏感性呈负相关。结论:辐射诱导了SHG-44细胞COX-2表达的升高,使SHG-44照射后代细胞对放射敏感性下降,COX-2表达的升高可能是导致其辐射耐受的原因之一。

miR-21与胶质瘤SHG-44细胞放射敏感性的关系

目的探讨miR-21与胶质瘤SHG-44细胞放射敏感忭的关系及其机制。方法建矗胶质瘤辐射抗性细胞模型SHG-44抗，采用实时定量聚合酶链反应（PCR）法榆测SHG-44和SHG-44‰细胞中miR-21的表达。通过反义寡核苷酸序列AS—miR-21敲低SHG-44m细胞中miR-21的表达，以文时定量PCR验证敲低效果。采用成克隆实验测定miR-21敲低前后SHG-44抗细胞的放射敏感。陀，通过检测caspase-3的活性评估细胞凋亡。结果SHG-44。细胞的miR-21表达鼍足SftG-44细胞的1．49倍。成克隆实验结果显示，敲低miR-21表达后，SHG-44。细胞的放射敏感性提高，平均敛死剂齄和准阈剂量的放射增敏比分别为1．48和1．54。AS—miR-21转染组、单纯放射组及转染联介放射绀SHG-44精细胞的caspase-3表达水平分别为2．244-0．14、2．05±0．19和5．724-0．45，转染联合放射组分别高于AS—miR-21转染组和单纯放射组。结论miR-21可能参与了胶质瘤辅射抗性的形成，“掣成为治疗辐射抗性胶质瘤的潜在靶点。

九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡的实验观察

目的:探讨九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法:用四基偶唑蓝(MTT)法检测5、7.5、10、12.5、15、20、40、80mg/L九节龙皂苷作用6、12、24、72h对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测SHG-44细胞DNA的完整性。结果:九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞生长活性呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞发生明显的凋亡,细胞核发生浓聚边集,DNA呈凋亡特异性"梯状"分布。结论:九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长活性,能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的 比较人恶性胶质瘤细胞系CHG 5和SHG 44的细胞骨架系统成分 ,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法 利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布 ,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果 除微管和微丝均被染色外 ,所有细胞均表达Vimentin(波形蛋白 ) ,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似 ,但两种细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG 44细胞中表达较强 ,而GFAP在CHG 5细胞中表达较强。丙酮、75 %酒精和4%多聚甲醛对微管的固定效果较好 ;用醛类固定后中间丝 (尤其是Vimentin)染色极弱。结论 CHG 5分化程度较SHG 44高 。

芳香化酶在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的表达及调控

目的 研究芳香化酶细胞色素P45 0 (AROM)及雌激素受体 (ER α)在胶质母细胞瘤细胞系SHG 4 4细胞中的基因表达。 方法 细胞培养、免疫细胞化学染色、原位杂交染色及RT PCR技术。 结果 在SHG 4 4细胞中分别检测到AROM及ER α的表达 ,进一步发现SHG 4 4细胞中AROM的表达是由多个组织特异性启动子驱动基因的转录。 结论 可能为中枢神经系统肿瘤发生的激素调节提供新的资料。

脑胶质瘤细胞SHG-44的热、放射敏感性及Fas/FasL表达

观测加热联合放射对SHG-44细胞的影响及相关基因Fas/FasL的表达。采用细胞集落法及流或细胞术观察加热对脑胶质瘤细胞SHG-44放射后集落形成的影响和凋亡的变化,并用RT-PCR法检测Fas/FasL表达。结果表明,放射+42℃加热(加热时间40min)较单纯放射(2Gy)的细胞集落明显减少,热增强比(TER)为1.95;空白对照组、单纯放射组、放射+加热组凋亡比率分别为:20.2、29.3、59.1;Fas在3个实验组中均表达,但FasL仅在单纯放射组、放射+加热组中表达。热能明显增加脑胶质瘤细胞SHG-44的放射敏感性,也表明凋亡与Fas/FasL有关。

他莫昔芬对SHG-44人胶质瘤细胞增殖的抑制作用研究

目的:探讨他莫昔芬对人胶质瘤细胞SHG-44生长的作用及其机制。方法:SHG-44细胞PKC和雌激素受体(ER)的表达用免疫组化,细胞活性分析用四唑盐比色试验,细胞增殖和凋亡通过流氏细胞仪检测,氯通通电流的记录应用全细胞膜片钳技术。结果:细胞PKC表达阳性,ER表达阴性,加入他莫昔芬后,SHG-44细胞变老、脱落,细胞总数减少,G2/M期细胞增多,凋亡细胞比例增加,氯离子通道电流受到抑制。结论:他莫昔芬对人胶质瘤细胞SHG-44有明显的抑制作用,其机制可能是通过对PKC及氯通道的抑制。

脑胶质瘤SHG-44细胞株受照后代辐射抗性的研究

放射抗拒是目前脑胶质瘤治疗的一大障碍，阐明其原理就有可能设计出针对性的放疗方案，提高疗效。人们既往对胶质瘤进行辐射敏感性的研究时大都采用单株细胞或不同种系不同脑胶质瘤细胞株进行比较，这些方法为探讨其辐射抗拒的机制提供了不少信息。如果以同一来源不同放射敏感性的一对细胞为对象进行对照研究，将有更多优势。

β-1,4-半乳糖基转移酶V对胶质细胞瘤细胞SHG-44粘附的影响

目的 :研究 β 1,4 半乳糖基转移酶V(β 1,4 GalTV)对星形胶质瘤细胞株粘附能力的影响及其与细胞恶性行为的关系。方法 :将转染正义、反义 β 1,4 GalTV和空载体的SHG 4 4细胞株接种于包被有纤连蛋白 (FN)或层连蛋白 (LN)的板上 ,观察细胞粘附力的变化。采用WesternBlot的方法检测整合蛋白 β1表达变化及局部粘着斑激酶 (FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果 :在FN和LN包被的板上 ,与转空载体的SHG 4 4细胞株相比 ,转正义 β 1,4 GalTV比转反义 β 1,4 GalTV的细胞在纤连蛋白和层连蛋白上的粘附能力增高 ,β1蛋白表达水平升高 ,FAK及其酪氨酸磷酸化水平增强。结论 :β 1,4 GalTV对SHG 4 4细胞的粘附能力确有影响 ,提示 β 1,4