大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法改良

目的建立大鼠大脑皮层星形胶质细胞(As)的培养方法,以进一步对大脑皮层As进行体外实验研究。方法在M cCarthy方法基础上改用出生后5 d的SD大鼠的大脑皮层,制备单细胞悬液后,接种于培养瓶,培养箱中1 h后换瓶,3 d后换液,细胞融合成单层后传代,传3代后采用间接免疫荧光法监测As特异性标志胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。阳性细胞确认为As。结果体外培养的大脑皮层As经历了贴壁、去除成纤维细胞、纯化和传3代,GFAP阳性细胞达95%以上。结论大脑皮层As体外培养成功,并有较高的纯度,为进一步进行As的研究创造了条件。

正常灌注压突破综合征

正常灌注压突破综合征是脑血管疾病术中或术后的严重并发症。本文就近年来正常灌注压突破综合征的研究进展进行综述,重点探讨其发病机制、预测和预防。

丹参与电针对脑缺血再灌注损伤大鼠GFAP和iNOS表达的影响

目的:观察脑缺血再灌注损伤后大鼠脑胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,以及丹参与电针对其表达的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参组、电针组、丹参+电针组,采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注模型。造模后,丹参组给予丹参注射液5g/kg腹腔注射,电针组刺激"百会"、"大椎"穴,疏密波,频率2~15Hz,持续30min,丹参+电针组给予丹参注射液腹腔注射和电针,各组治疗均每天1次,连续4d。进行神经功能缺损评分、干湿重法测脑组织含水量,采用HE染色观察脑组织的病理形态学变化,免疫组织化学染色法检测各组大鼠纹状体GFAP、iNOS的表达。结果:模型组神经功能缺损评分和脑组织含水量均明显高于假手术组(P<0.01);与模型组比较,丹参组、电针组、丹参+电针组神经功能缺损评分和脑组织含水量均显著降低(P<0.05或P<0.01),并且丹参+电针组的评分和含水量显著低于丹参组、电针组(P<0.05或P<0.01);HE染色显示的病理形态学改变与上述一致。模型组GFAP、iNOS的表达均明显高于假手术组(P<0.01);与模型组比较,丹参组、电针组、丹参+电针组GFAP、iNOS的表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),并且丹参+电针组的表达明显低于丹参组、电针组(P<0.05或P<0.01)。结论:丹参和电针对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,可能与其抑制星型胶质细胞的过度活化,降低iNOS的表达有关,且二者合用效果更佳。

重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤后AQP4和GFAP表达的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rh G-CSF,瑞白,150μg,山东齐鲁药业)对SD大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护机制。方法将雄性SD大鼠48只随机分为:假手术组、模型组和治疗组,每组16只,利用改良Longa线栓法制作大鼠中动脉缺血模型,治疗组于缺血2 h后实施再灌注并给予rh G-CSF(50μg/kg)腹部皮下注射,假手术组及模型组给予同等剂量生理盐水。采用Longa 5分制评分标准进行神经功能评分,利用分光光度仪计算缺血大脑半球脑组织内中伊文思蓝含量,免疫组化法检测各组大鼠脑组织中水通道蛋白-4(AQP4)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)含量变化和电镜下观察血脑屏障的超微结构。结果治疗组神经功能评分(1.36±0.63)低于模型组(2.50±0.65)(U=16,P<0.01);与假手术组右侧脑组织内伊文思蓝含量(7.38±2.71)相比较,模型组右侧伊文思蓝的含量(37.15±2.30)明显增多(t=30.60,P<0.01),治疗组伊文思蓝的含量(22.75±4.61)较模型组降低(t=-16.73,P<0.05);治疗组AQP4、GFAP表达的灰度值(180.67±7.72、160.64±5.07)均较模型组增高(t=24.16,P<0.01;t=17.98,P<0.01);假手术组大鼠脑组织AQP4、GFAP表达的灰度值(202.08±5.80、173.73±4.40)高于模型组(t=46.07,P<0.01;t=31.07,P<0.01),电镜下观察到假手术组内皮细胞紧密连接完整,血脑屏障周围组织完好,而模型组和治疗组脑血管内皮细胞连接间隙增加,且连接内皮细胞的基质和基膜完整性缺失。结论 rh G-CSF对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,推测其可能机制为rh G-CSF通过抑制星形胶质细胞过度活化,下调GFAP、AQP4的表达,减轻脑水肿,从而保护血脑屏障完整性。