胶质细胞成熟因子β在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:胶质细胞成熟因子β(GMFB)是一种17 kDa、高度保守的脑蛋白,近年来研究发现,GMFB在多种恶性肿瘤中表达上调且与患者的不良预后密切相关。然而,GMFB在肝细胞癌(HCC)中的表达及其作用的研究尚不够深入。本研究通过检测GMFB在HCC组织中的表达,分析其与患者临床病理特征、预后以及Ki-67表达的关系,探讨GMFB在HCC中的临床意义。方法:用qRT-PCR和Western bolt方法检测36对新鲜冷冻HCC组织及其癌旁组织中GMFB的mRNA和蛋白的表达。用免疫组化法分别检测91例HCC组织及其癌旁组织石蜡组织标本中GMFB和Ki-67蛋白的表达,用统计学方法分析GMFB与HCC患者临床病理因素、术后生存时间的关系以及与Ki-67表达的相关性。结果:qRT-PCR和Western bolt结果显示,HCC组织中GMFB mRNA与蛋白的相对表达量较癌旁组织均明显升高(均P<0.001)。免疫组化结果显示,GMFB和Ki-67在HCC组织中的阳性表达率均较癌旁组织明显升高(均P<0.001);GMFB的表达与HCC微血管侵犯(P=0.045)、Edmondson分级(P=0.032)、BCLC分期(P=0.012)明显有关;在HCC组织中,GMFB和Ki-67的表达呈正相关(rs=0.265,P=0.011)。Kaplan-Meier生存分析显示,GMFB阳性表达患者的无病生存时间(DFS)及总生存时间(OS)均明显短于GMFB阴性表达患者(DFS:4.52个月vs.10.48个月,P=0.001;OS:27.67个月vs.39.75个月,P=0.007);Cox多因素回归模型分析显示,GMFB与Ki-67的表达上调是影响HCC患者DFS(HR=0.441,95%CI=0.242~0.801,P=0.007;HR=1.818,95%CI=1.012~3.269,P=0.046)与OS(HR=0.504,95%CI=0.287~0.886,P=0.017;HR=1.787,95%CI=1.083~2.935,P=0.023)的独立危险因素。结论:GMFB在HCC中呈现高表达,且与HCC进展及患者的不良预后密切相关,GMFB的表达与Ki-67的表达呈正相关,故推测其可能通过对肿瘤细胞增殖活性的调控发挥作用。

星形胶质细胞瘤中神经胶质细胞成熟因子β和Ki-67表达的相关性及其在预后评估中的意义

目的了解星形胶质细胞瘤中神经胶质细胞成熟因子β(glia maturation factor-β,GMF-β)和Ki-67表达的相关性,并探讨GMF-β/Ki-67联合检测应用于胶质瘤预后评估的意义。方法收集陆军军医大学(原第三军医大学)西南医院2006—2009年胶质瘤病例140例(WHOⅡ~Ⅳ级)的组织样本、临床病理信息和3年随访资料;免疫组织化学单标、双标染色检测肿瘤细胞GMF-β和Ki-67的表达,统计学分析两者的相关性以及对患者预后的影响。结果星形胶质细胞瘤GMF-β表达水平与肿瘤级别、Ki-67表达均相关(均P<0.05);Kaplan-Meier生存率分析显示,GMF-β、Ki-67表达水平分别与患者3年生存率呈负相关(均P<0.01)。进一步分析证实两者共同影响生存期长短,呈现GMF-β低表达+Ki-67低表达组>GMF-β高表达+Ki-67低表达组>GMF-β低表达+Ki-67高表达组>GMF-β高表达+Ki-67高表达组的3年生存率趋势,组间差异均有统计学意义(分别P<0.05,P<0.01)。结论星形胶质细胞瘤GMF-β和Ki-67的表达水平正相关,GMF-β/Ki-67联合检测可应用于胶质瘤的临床预后评估。

GMFB在氧化应激诱导的ARPE19细胞中的表达及意义

目的 探讨胶质细胞成熟因子beta（GMFB）在氧化应激诱导的ARPE19细胞中的表达及意义。方法 用0、0.25、0.5、1、2 mmol乙二醛处理ARPE19细胞24 h,其中对照组用0 mmol/L乙二醛处理,实验组以0.25~2 mmol/L乙二醛处理,用Western印迹法检测GMFB的表达;实验组用1μg/ml GMFB处理ARPE19细胞24 h,对照组不做处理,进行RNAseq,比较实验组和对照组基因表达的差异,选取其中表达差异大于1.5倍且P〈0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行GO及KEGG富集分析。结果 经乙二醛处理的各组ARPE19细胞GMFB表达上调,以0.5 mmol/L处理组的GMFB上调最为显著。对GMFB处理的ARPE19细胞进行全基因表达谱检测,结果显示,在被检测的19 966个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达（改变1.5倍）的基因有583个。与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有265个,下调的有318个。GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关。KEGG分析显示,GMFB与细胞代谢通路、癌症通路、Wnt信号通路、趋化因子信号通路等多条信号通路密切相关。炎症基因CCL26、CXCL8和NF-κB1表达升高,提示GMFB与炎症相关。结论 GMFB在氧化应激诱导的ARPE19细胞中表达明显上调,GMFB可能影响细胞间连接,参与Wnt信号通路、肿瘤相关信号通路和趋化因子信号通路等。

GMFB在高糖处理的Müller细胞中的表达及其对Müller细胞的影响

目的:利用高糖处理Müller细胞,研究高糖条件下胶质细胞成熟因子B(glia maturation factor-β,GMFB)的表达情况和GMFB对Müller细胞的影响,揭示GMFB细胞在糖尿病视网膜病变中可能的作用机制,为糖尿病视网膜病变的治疗提供新的策略。方法:(1)用25mmol/L葡萄糖处理Müller细胞0,1,2,4和6 h,采用Western Blot检测GMFB的表达;(2)用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染Müller细胞后,1μg/ml重组蛋白GMFB处理Müller细胞0,2,4,8,12 h,采用Western Blot和免疫荧光检测自噬情况;(3)1μg/ml GMFB处理Müller细胞24 h为实验组,以未处理组作为对照组,进行RNAseq,检测其基因差异表达谱,选取其中表达差异大于1.5倍且P<0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行基因本体论(gene ontology,GO)分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果:(1)经高糖处理的Müller细胞早期出现GMFB表达上调,以2 h处理组的GMFB上调最为显著,提示高糖刺激早期能引起Müller细胞的GMFB表达升高;(2)重组蛋白GMFB处理Müller细胞后,Western Blot在第4 h检测到自噬被诱导,但很短暂。我们在24 h用免疫荧光检测,没有发现红绿荧光强度变化,提示双标自噬系统检测未检测到自噬发生,可能与不同检测方法的敏感性不同有关。(3)对GMFB处理24 h的Müller细胞抽提总RNA,进行RNAseq检测,显示在被检测的14411个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达的基因有152个。与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有103个,下调的有44个。通过GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关。KEGG分析进一步发现GMFB与细胞黏附分子、轴突导向和胞质DNA感受通路等多条信号通路密切相关。同时,炎症基因IL-33表达降低,提示GMFB有神经保护的作用。结论:GMFB在高糖诱导的Müller细胞中表达明显上调,说明GMFB可能影响细胞间连接,参与炎症反应信号通路等。该工作为理解GMFB在糖尿病视网膜病变中的作用机制提供了有益的线索。GMFB在糖尿病视网膜病变的作用机制需要进一步验证。

赤芍总苷通过调控miR-338-3p/GMFB表达对结直肠癌SW-480细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨赤芍总苷(total paeony glucosides,TPG)通过调控miR-338-3p/胶质细胞成熟因子β(glia maturation factorβ,GMFB)表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法:体外培养人结直肠癌SW-480细胞株,使用不同浓度的TPG处理细胞,平板克隆实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测细胞中miR-338-3p和GMFB的表达,双荧光素酶报告基因检测miR-338-3p和GMFB的靶向关系。结果:与对照组比较,TPG低剂量组、中剂量组和高剂量组的克隆形成数量、细胞愈合率、迁移数量明显降低(P<0.001),其中TPG高剂量组的克隆形成数量、细胞愈合率和迁移数量降低最明显;与对照组比较,TPG低剂量组、中剂量组和高剂量组的细胞凋亡率显著增加(P<0.001),其中TPG高剂量组的细胞凋亡率增加最明显;与对照组比较,TPG低剂量组、中剂量组和高剂量组的miR-338-3p表达明显升高(P<0.001),其中TPG高剂量组的miR-338-3p表达升高最明显;与对照组比较,TPG低剂量组、中剂量组和高剂量组的GMFB mRNA表达显著降低(P<0.001),其中TPG高剂量组的GMFB mRNA表达降低最明显;与miR-con组比较,anti-miR-338-3p组的克隆形成数量、细胞愈合率和迁移数量显著增加,细胞凋亡率明显降低(P<0.001);miR-338-3p显著降低GMFB-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对GMFB-MUT的荧光素酶活性没有产生影响(P>0.05);与TPG高剂量+miR-con组比较,TPG高剂量+anti-miR-338-3p组的克隆形成数量、细胞愈合率和迁移数量明显升高,细胞凋亡率显著下降(P<0.001)。结论:TPG可能通过调控miR-338-3p/GMFB抑制结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移。

miR-34a-5p靶向GMFB抑制细胞增殖对先天性巨结肠的治疗意义

目的探讨miR-34a-5p通过靶基因GMFB调控神经嵴细胞的增殖。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-5p在先天性巨结肠症(HSCR)和正常结肠组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-5p的靶基因,SH-SY5Y细胞转染miR-34a-5p mimics及对照miR-NC,并转染GMFB表达载体,通过CCK8检测miR-34a-5p和GMFB对神经嵴细胞增殖的影响,并通过Western Blot检测miR-34a-5p对GMFB蛋白表达的影响。采用t检验和单因素方差分析。结果荧光定量PCR结果显示,HSCR结肠组中miR-34a-5p的相对表达量为0.43±0.10,低于正常结肠组1.15±0.18,差异具有统计学意义(t=3.50,P <0.01)。CCK8结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞在培养24 h和48 h后细胞A450值分别为0.53±0.03和0.87±0.04,低于miR-NC对照组0.87±0.03,1.42±0.04。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-34a-5p mimics与GMFB 3'UTR WT载体共转染组荧光强度为0.44±0.03,低于对照miRNC与WT载体共转染组1.02±0.06。CCK8结果所示,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞培养24 h和48 h后,A450值分别为0.99±0.02和1.50±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.53±0.03,0.87±0.04,差异具有统计学意义(t=7.07,P <0.01;t=9.14,P <0.01)。Western Blot检测结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞的GMFB蛋白表达量为0.25±0.01,低于miR-NC对照组0.90±0.03,差异具有统计学意义(t=35.60,P <0.01),miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞GMFB蛋白表达量为1.03±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.25±0.01,差异具有统计学意义(t=42.74,P <0.01)。结论 miR-34a-5p能够通过抑制靶基因GMFB的表达,抑制神经嵴细胞SH-SY5Y的增殖。