胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体信号通路在乳鼠先天性巨结肠相关性小肠结肠炎中的作用实验研究

目的:探讨胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体(GDNF/GFRα1)通路在乳鼠先天性巨结肠(HD)相关性小肠结肠炎(HAEC)中的作用研究。方法:21日龄内皮素受体(Ednrb)基因敲除乳鼠为HD模型组(实验组),同日龄野生型乳鼠为对照组,8只/组。取结肠组织,按照形态将实验组乳鼠结肠组织分为狭窄段、扩张段,对照组乳鼠结肠组织分为远段、近段。采用苏木精-伊红(HE)染色法评判两组肠管炎症程度;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测两组结肠组织白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫印迹法(WB)分别检测GDNF/GFRα1信号通路相关基因[GDNF、GFRα1、酪氨酸酶受体(RET)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、TNF-α]蛋白水平。结果:HE染色结果显示HAEC主要发生在结肠扩张段;ELISA法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管IL-10水平显著降低、TNF-α水平显著升高(均P<0.05);WB法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管GDNF、GFRα1、RET蛋白水平显著降低,NF-κBp65、TNF-α蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:HD模型乳鼠结肠扩张段炎症程度较为严重,机制可能与GDNF/GFRα1信号通路受抑制,肠神经免疫调节系统异常有关。

单核细胞趋化蛋白1、颗粒蛋白前体、胶质细胞源性神经营养因子水平与阿尔茨海默病认知功能、日常生活能力相关性分析

目的 分析血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、颗粒蛋白前体(PGRN)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平与阿尔茨海默病(AD)病人认知功能及日常生活能力的相关性,探讨其在AD中的诊断价值。方法 选取2019年7月至2021年6月入住苏州大学附属广济医院治疗的41例AD病人作为观察组,采用随机数字表法选取苏州大学附属广济医院同期经评估符合入组的41例健康志愿者作为对照组,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组研究对象血清MCP-1、PGRN、GDNF水平;采用简易智力状态检查表(MMSE)及日常生活量表(ADL)评估其认知功能及日常生活能力。分析观察组病人血清MCP-1、PGRN、GDNF水平与MMSE、ADL评分的相关性;并通过受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析MCP-1、PGRN、GDNF在AD中的诊断价值。结果 观察组MCP-1(321.7±51.1)ng/L、PGRN(42.6±8.5)μg/L水平较对照组MCP-1(242.6±35.2)ng/L、PGRN(26.5±6.1)μg/L显著增高,观察组GDNF(357.8±112.3)ng/L水平较对照组GDNF(468.0±106.6)ng/L显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示:观察组MMSE、ADL评分与血清MCP-1、PGRN水平均呈负相关(r=-0.46~-0.31,P<0.05),与PGRN水平呈正相关(r=0.47、0.46,P<0.05)。ROC曲线显示:MCP-1、PGRN、GDNF对AD的诊断价值较高,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.75、0.71,灵敏度分别为75.6%、75.6%、70.7%,特异度分别为61.0%、70.7%、63.4%,MCP-1、PGRN、GDNF三项标志物联合检测的AUC为0.83,灵敏度和特异度分别达到82.9%、75.6%。结论 AD病人血清MCP-1、PGRN水平表达明显增高,GDNF水平表达明显降低。这与AD病人认知功能和日常生活能力减退严重程度显著相关。三项指标联合检测在AD诊断中有着重要的参考价值.

IL-1β及TNF-α促进大鼠肠平滑肌细胞表达胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)并抑制其受体表达

目的研究白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对SD大鼠肠平滑肌细胞(ISMC)胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及其受体原癌基因受体酪氨酸激酶(Ret)和GDNF家族受体α1(GFRα1)表达的影响。方法改良酶消化法分离SD大鼠ISMC,免疫细胞化学染色法检测观察平滑肌细胞特异性标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及结蛋白(desmin)的表达;单独或联合使用IL-1β和TNF-α处理ISMC 48 h,用实时定量PCR检测各组GDNF、Ret及GFRα1 mRNA相对表达水平。结果利用改良酶消化法获得了高纯度的大鼠ISMC,其α-SMA及desmin阳性率均大于95%;与空白对照组相比,TNF-α能促进ISMC表达GDNF,抑制其表达GFRα1,而对Ret的表达无明显影响,IL-1β能抑制ISMC表达Ret,对GDNF及GFRα1的表达无明显影响;IL-1β联合TNF-α能显著促进ISMC表达GDNF,抑制其表达Ret及GFRα1。结论IL-1β联合TNF-α能促进ISMC表达GDNF,抑制其表达GDNF受体Ret及GFRα1。

抑郁症患者血清胶质细胞源性神经营养因子、胰岛素样生长因子1水平变化及其与睡眠障碍关系研究

目的:探究抑郁症患者血清胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平变化及其与睡眠障碍的关系。方法:选取抑郁症患者120例为抑郁症组,选取体检健康者120例为对照组。采用酶联免疫吸附法测定所有受试者血清GDNF、IGF-1水平。对所有受试者进行匹茨堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分,根据PSQI评分结果将抑郁症患者分为无睡眠障碍组(22例)和有睡眠障碍组(98例),其中轻度、中度、重度睡眠障碍组分别为28例、43例、27例。比较抑郁症组与对照组血清GDNF、IGF-1水平及PSQI评分,以及不同临床特征抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平。比较无睡眠障碍组与有睡眠障碍组抑郁症患者以及不同严重程度睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平及PSQI评分。分析抑郁症伴睡眠障碍患者血清GDNF、IGF-1水平与PSQI评分的相关性,抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平对睡眠障碍发生的预测价值,以及抑郁症患者睡眠障碍发生的影响因素。结果:抑郁症组血清GDNF、IGF-1水平低于对照组,PSQI评分高于对照组(均P<0.05)。抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平与自杀行为、发病次数、家族史无关(均P>0.05)。有睡眠障碍组血清GDNF、IGF-1水平低于无睡眠障碍组,PSQI评分高于无睡眠障碍组(均P<0.05)。轻度睡眠障碍组、中度睡眠障碍组和重度睡眠障碍组血清GDNF、IGF-1水平依次降低,PSQI评分依次升高(均P<0.05)。有睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF与IGF-1水平呈正相关,血清GDNF、IGF-1水平均与PSQI评分呈负相关(均P<0.05)。抑郁症患者血清GDNF、IGF-1单项及两者联合预测睡眠障碍发生的曲线下面积(AUC)分别为0.767、0.754、0.854,其中血清GDNF、IGF-1各自单独预测的AUC低于两者联合预测的AUC(均P<0.05)。GDNF低水平、IGF-1低水平均是抑郁症患者发生睡眠障碍的独立危险因素(均P<0.05)。结论:有睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF、IGF-1呈低水平,且两者与睡眠障碍严重程度有关。血清GDNF、IGF-1对抑郁症患者睡眠障碍的发生有较高预测价值。

不同月龄大鼠脑室下区胶质细胞源性神经营养因子受体α_1的表达

目的:观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)受体α1(Glial cell line-derived growth factor recepterα1, GFR-α1)在1、3、8、12月龄大鼠脑室下区(SVZ)中的表达。方法:取不同月龄大鼠SVZ行冰冻切片,采用GFRα1多克隆抗体结合5′-BrdU单克隆抗体免疫组织化学单标与双标的方法染色。结果:在不同年龄大鼠SVZ可见GFR-α1、BrdU单标与双标细胞,但主要分布在SVZ前部的背外侧部分。随着年龄的增长,3种标记细胞的数量逐渐减少,且12月龄组的减少更明显。结论:GDNF可能通过GFR-α1参与调节哺乳动物脑内SVZ细胞的增殖和分化。随着年龄的增加,GFR-α1表达逐渐减少,SVZ细胞增殖、分化的能力亦减弱。

5-HT_(1A)受体激动剂对青春期大鼠病理性攻击行为和前额叶皮质、海马内脑源性及胶质细胞源性神经营养因子的影响

目的探索5-羟色胺1A(5-HT1A)受体激动剂8-OH-DPAT对青春期大鼠病理性攻击行为及对前额叶皮质、海马内脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法出生后21d的雄性SD大鼠42只随机分为6组(n=7):模型组、正常组、模型+药物组、模型+生理盐水(NS)组、正常+药物组、正常+NS组。模型组、模型+药物组及模型+NS组采用早年慢性应激建立病理性攻击模型,余3组正常饲养。建模成功后对模型+药物组、正常+药物组及模型+NS组、正常+NS组分别行2周的8-OH-DPAT(0.5 mg/kg)或生理盐水(2mL/只)腹腔注射。用居住-入侵实验检测大鼠攻击行为,蛋白质印迹分析检测大鼠脑前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组攻击潜伏期缩短(P<0.01)、攻击持续时间及攻击总数增加(P<0.01)。模型+药物组攻击潜伏期较模型+NS组延长(P<0.05);模型+药物组攻击持续时间较正常+药物组增加(P<0.05);药物干预后攻击总数组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组前额叶皮质、海马内BDNF及GDNF表达水平均低于正常组(P<0.01),模型+NS组较正常+NS组降低(P<0.05,P<0.01),模型+药物组较模型+NS组升高(P<0.05,P<0.01)。结论前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF可能与早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为的发生有关。5-HT1A受体激动剂可上调前额叶皮质及海马内BDNF、GDNF的蛋白表达,并在一定程度上减轻早年慢性应激所致青春期大鼠病理性攻击行为。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因的克隆表达及其活性研究

为了获得重组胶质细胞源性神经营养因子受体α1(glialcellline derivedneurotrophicfactorreceptoralpha1,GFRα1)并研究其生物学活性 ,从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GFRα1cDNA .将GFRα1cDNA克隆至含T7启动子的质粒 pET 2 8a (+)中 ,构建表达质粒 pET GFRα1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得表达菌株BLGFRα1.表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导 3～ 5h后 ,GFRα1蛋白表达 ,并形成包涵体 .凝胶自动扫描分析表明 ,GFRα1表达量占全菌总蛋白的 2 1 5 % ,用Ni2 + NTA树脂纯化和复性后 ,纯度达 90 %以上 。

胶质细胞源性神经营养因子受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义。方法 :间隔 2 4d 2次腹腔注射白消安建立小鼠精子再生动物模型。根据第二次给药后的不同时间随机分为 1、2、3、4、6、8、10周共 7组 (8只 /组 ) ,8只正常小鼠作对照组 ,分别于相应时点取材 ,进行光镜和电镜的研究。采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测不同时间GFRα1mRNA的表达变化 ;并采用原位杂交技术检测GFRα1mRNA表达定位。 结果 :2次给药后第 1～ 2周 ,GFRα1mRNA的表达明显增强 ,在第 2周达到高峰 ;在给药后第 3～ 4周明显下降 ,比正常表达水平明显减弱 ,并在第 4周达到低谷 ;随后几周内表达又逐渐增强 ,于第 10周恢复到正常水平。原位杂交显示 ,GFRα1主要表达于未分化的精原细胞。 结论 :在小鼠精子再生过程中 ,GFRα1的表达参与调节精原干细胞的去向调节 ,高表达时促进其进行自我更新 ,低表达时降低对GDNF的反应性 ,促进其分化 。

白细胞介素-1β和胶质源性神经营养因子体外诱导鼠胚中脑神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化

目的：以白细胞介素1β（IL-1β）和胶质源性神经营养因子（GDNF）为诱导剂,探索小鼠胚胎中脑神经干细胞（M-NSCs）向多巴胺能神经元的的分化.为M-NSCs移植治疗帕金森病（PD）提供实验依据.方法： 在有血清条件下体外培养鼠胚M-NSCs,予以IL-1β和GDNF作诱导分化.酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学鉴定.流式细胞术检测TH阳性神经元的百分率.结果： GDNF组促进M-NSCs分化为TH阳性神经元的比例为13.53%,IL-1β组为9.66%,GDNF＋IL-1β联合培养组为16.22%,空白对照组仅3.46%,差异有统计学意义.结论： IL-1β和GDNF可明显促进M-NSCs分化成多巴胺能神经元.

小鼠肾发育中胶质细胞系源性神经营养因子家族受体α1和受体酪氨酸激酶的表达

目的研究小鼠肾发育过程中胶质细胞系源性神经营养因子家族受体α1(GFRα1)和受体酪氨酸激酶(RET)的表达及意义。方法应用免疫荧光和蛋白印迹技术检测各胚龄小鼠肾组织中GFRα1和RET的时空定位表达及蛋白含量变化。结果在肾发育早期,GFRα1和RET在输尿管芽上皮细胞开始表达,生后肾组织内仅见GFRα1表达。随着肾小体的发育,GFRα1在肾小体发育早期即小泡体、逗号小体和S小体均有表达,而在肾小体发育后期即毛细血管袢期肾小体和未成熟期肾小体表达减弱,在成熟肾小体未见表达。RET在各期肾小体均未见表达。随着早期髓质的出现,GFRα1在近端小管、远端小管和集合管有明显表达;RET在集合管表达。在成熟肾脏,GFRα1定位表达于近端小管、远端小管和集合管;RET定位表达于集合管。GFRα1和RET在肾脏的蛋白表达量随胚龄的增加而增加,生后1 d达峰值,随后两者的蛋白表达量随日龄的增加而逐渐减少。结论在肾发育中,GFRα1参与肾小体发生、早期发育过程及肾小管和集合管的发生、发育过程,并维持其正常生理功能。RET参与集合管的发生、发育过程,并维持其正常生理功能。

17β-雌二醇对血管性痴呆大鼠神经生长因子、脑源性神经营养因子和胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

目的:研究17β-雌二醇对血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能和脑组织神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。方法:将24只雄性Wistar大鼠随机分入假手术组、17β-雌二醇组和赋形剂组,每组8只。17β-雌二醇组腹腔注射17β-雌二醇(1mg/kg,2次/周),赋形剂组腹腔注射等量消毒花生油。采用结扎双侧颈总动脉法制备慢性前脑缺血即VaD动物模型,应用Y迷宫检测大鼠认知功能,应用免疫组化法检测脑组织中NGF、BNDF和GDNF的含量变化。结果:17β-雌二醇组60d后的认知功能明显好于赋形剂组(P<0.01),脑组织内NGF、BDNF和GDNF阳性神经元显著多于赋形剂组(P<0.01)。结论:腹腔注射17β-雌二醇可显著改善VaD大鼠的认知功能,增加VaD大鼠脑内的NGF、BDNF和GDNF的含量。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1定点突变体制备及其稳定转染细胞株的构建及鉴定

目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。 方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 B抗性筛选标记的 pc DNA3.1- RET质粒共转染野生型 PC12细胞 ,建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定PC12细胞株。经 Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入 PC12细胞中的各 r GFRα1突变体基因和 RET基因的表达进行鉴定。结果 :Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达。结论 :成功构建了 r GFRα1各突变体基因和 RET基因同时转入表达的稳定细胞株 ,为研究 r GFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)信号转导的作用奠定基础。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因在小鼠生精恢复过程中的表达变化

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子受体α1 (GFRα1 )基因在小鼠生精恢复过程中的表达变化及其与精原干细胞自增殖和分化的关系。方法 :间隔 2 4d 2次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型 ,第二次给药后随机分为 1 ,2 ,3,4 ,6 ,8,1 0周 7组 ,于相应时点及给药前取材 ,进行光镜和电镜研究 ,半定量逆转录聚合酶链反应和原位杂交检测。结果 :在生精恢复过程的第 1～ 2周 ,GFRα1mRNA的表达较给药前增强 ,其差异分别有显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1 )意义 ,其中第 2周达高峰 ,为 (1 0 4 .72± 2 4 .4 0 ) % ;第 3～ 4周 ,GFRα1mRNA的表达较给药前减弱 ,其差异也分别有显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1 )意义 ,其中第 4周达低谷 ,为(2 0 .77± 4 .2 5 ) % ;之后逐渐上升 ,于第 1 0周恢复至正常水平。GFRα1mRNA主要由未分化精原细胞表达。结论 :GFRα1在小鼠生精恢复过程中以剂量相关性调控着胶质细胞源性神经营养因子信息传入 ,从而调控着精原干细胞的去向 :高剂量时诱导其增殖 。

P2Y_1受体对缺血状态下星形胶质细胞产生胶质原纤维酸性蛋白与胶质细胞源性神经营养因子的影响及相关信号通路(英文)

目的研究P2Y1受体对缺血时星形胶质细胞产生胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)及胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)的影响及其相关信号通路。方法分别利用右侧大脑中动脉线拴阻塞及培养细胞缺氧无营养后恢复正常培养,造成体内、外缺血再灌注模型。用免疫荧光标记、实时定量 RT-PCR、Western blotting、酶联免疫吸附试验观察 P2Y1 受体、GDNF 定位,检测 GFAP、GDNF及信号分子的表达变化。结果与单纯性缺血组比较,用选择性拮抗剂 MRS2179 阻断 P2Y1 受体后,可使体内、外星形胶质细胞产生的GFAP减少,同时使其产生GDNF增加。体外缺氧无营养并阻断P2Y1受体后:可使磷酸化蛋白激酶B(Akt)及cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)升高,而使磷酸化JAK2及STAT3 (Ser727)降低;JAK2的抑制剂AG490在降低磷酸化STAT3(Ser727)的同时也降低GFAP表达水平;PI3-K的抑制剂LY294002可降低磷酸化的Akt及CREB; MEK1/2抑制剂U0126可同时降低磷酸化的JAK2、STAT3 (Ser727)、Akt及CREB。结论 P2Y1受体参与短时性缺血时星形胶质细胞GFAP及GDNF的产生过程,相关信号途径分别为JAK2/STAT3 和 PI3-K/AKT/CREB,并且两条途径存在串话。

中脑星形胶质细胞源性神经营养因子通过降低TNF-α和IL-1β保护脓毒症心肌损伤大鼠

目的研究中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)在脓毒症中的作用并探究其可能的作用机制。方法构建MANF过表达大鼠,建立脓毒症心肌损伤模型,分为对照组、模型组和MANF组,每组10只。取大鼠血清和心肌组织,分别检测心肌损伤标记物CK和cTnI,观察心肌病理组织,检测氧化应激标志ROS和MDA生成量,采用Western blot法检测TNF-α和IL-1β蛋白的表达。结果 MANF组心肌组织损伤程度明显轻于模型组(P<0.05);MANF组ROS和MDA生成量减少,TNF-α和IL-1β蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 MANF通过降低TNF-α和IL-1β等炎症因子的释放,缓解脓毒症的心肌损伤。

白介素-1α及与白介素-11、白血病抑制因子和胶质细胞源性神经生长因子联合诱导人神经干细胞向多巴胺神经元的分化

目的探讨细胞因子白介素-1α(IL-1α)及与白介素-11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)和胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)联合应用对体外诱导人神经干细胞定向分化为多巴胺神经元的影响。方法采用无血清培养技术和单细胞克隆技术、免疫荧光双标技术。结果对照组仅有极少量的神经干细胞分化为不成熟的多巴胺神经元;IL-1α组分化的多巴胺神经元较多,但细胞形态欠成熟;联合因子组分化的多巴胺神经元最多,细胞较为成熟。结论IL-1α具有诱导人神经干细胞向多巴胺神经元分化的作用,联合应用IL-1α、IL-11、LIF和GDNF对人神经干细胞向成熟的多巴胺神经元分化具有协同作用。

脑内胶质细胞源性神经营养因子及其受体复合物研究进展

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)在脑内广泛分布,通过其受体复合物介导激活细胞内信号转导通路,发挥维持神经元功能和损伤修复等作用。胶质细胞源性神经营养因子家族受体α(GD-NF family receptorα,GFRα)和RET是其受体复合物的主要成员。GDNF和其受体复合物可能参与多种脑部病变的病理生理过程,是潜在的治疗靶点之一。

胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β体外诱导中脑神经干细胞的分化

背景：在神经干细胞移植治疗帕金森病中,移植细胞的数量及多巴胺能神经元的分化比率是必须解决的问题,而有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的大量定向诱导分化是解决问题的关键所在。目的：探讨胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β体外诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化。方法：分离妊娠12d小鼠胚胎腹侧中脑,经胰酶消化和机械吹打制成单细胞悬液,离心过滤后机械方法传代培养5~7d的神经球,分组进行诱导分化10~12d,待80%细胞从神经球迁移出来,分化为单细胞时,进行免疫细胞化学鉴定及流式细胞术检测酪氨酸羟化酶阳性细胞率。结果与结论：神经球细胞表达巢蛋白抗原,能分化为神经元特异性烯醇化酶和胶原纤维酸性蛋白阳性细胞。胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β在体外能明显提高中脑神经干细胞分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元的比例,胶质源性神经营养因子诱导组、白细胞介素1β诱导组和两者联合应用均较空白对照组比例高,尤其是两者联合应用作用更显著,说明胶质源性神经营养因子、白细胞介素1β可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元。

毛果芸香碱致癎大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子及其受体α和Ret蛋白的表达

目的 :观察大鼠癫持续状态 (SE)后脑内胶质细胞原性神经营养因子 (GDNF)及其受体的动态表达。方法 :采用氯化锂—毛果芸香碱 (匹罗卡品 )诱发Wistar大鼠SE模型 ,根据不同时点进行分组 ,用抗生蛋白链菌素—过氧化物酶免疫组化法 (SP法 )观察皮质区和海马区的GDNF、GDNFRα和Ret的动态表达 ,并分析海马CA3区和门区GDNF阳性细胞与神经元变性坏死之间的关系。结果 :大鼠SE 1h后在皮质区和海马CA3区即有GDNF阳性细胞出现 ,1～ 3d达到高峰 ,7d接近正常水平 ;SE 2h后皮质区的GDNFRα阳性细胞达到高峰 ,在海马区极少见到 ;SE后在皮质区和海马CA3区均能见到Ret阳性细胞 ,6～ 8h最多 ;GDNF的表达水平与神经元变性坏死之间具有一定的关系。结论 :SE后的大鼠 ,其大脑皮质区和海马区的GDNF及其受体表达呈时间依赖性上调 ,GDNF、GDNFRα和Ret参与SE后神经损伤的反应应答过程 。

胶质细胞源性神经营养因子联合转化生长因子β1体外诱导大鼠脊髓源性神经干细胞的分化(英文)

背景:胶质细胞源性神经营养因子与转化生长因子β1同属于转化生长因子β超家族,两者在哺乳动物中枢与外周神经系统发育、分化及细胞周期的调节中扮演重要角色。目的:观察胶质细胞源性神经营养因子联合转化生长因子β1体外诱导脊髓源性神经干细胞的分化,并与单一因子诱导培养液比较。设计:对照观察。单位:南方医科大学附属深圳医院中心实验室。材料:选用10只清洁级孕16d的SD大鼠,由华中科大同济医学院动物中心提供。主要试剂及材料:DMEM/F12,B27(GIBCO);碱性成纤维细胞生长因子,EGF,胶质细胞源性神经营养因子,转化生长因子-β1(PeproTech);胎牛血清(Hyclone);神经巢蛋白(nestin)多抗(武汉博士德);胶质纤维酸性蛋白(GFAP)多抗,神经丝蛋白(NF-200)单抗(Sigma)。方法:实验于2005-10/2006-09在南方医科大学附属深圳医院中心实验室完成。无菌条件下分离大鼠胚胎,进行脊髓源性神经干细胞的分离培养。实验分①基础培养基组:含青霉素、链霉素、两性霉素B及体积分数为0.02 B27添加液的DMEM/F12。原代培养1周后,获取体外稳定增殖的鼠脊髓源性神经干细胞克隆。②对照组:在基础培养基中加入体积分数为0.1的胎牛血清。③碱性成纤维细胞生长因子组。④转化生长因子β1组。⑤胶质细胞源性神经营养因子+转化生长因子β1组。换用诱导培养基,即分别在基础培养基中加入20μg/L碱性成纤维细胞生长因子、2μg/L转化生长因子β1、10μg/L胶质细胞源性神经营养因子+2μg/L转化生长因子β1。①光镜观察在不同因子诱导情况下脊髓源性神经干细胞的分化情况。②免疫细胞化学染色标记检测神经元与星状胶质细胞的表达。③通过荧光激发流式细胞仪分选技术对分化细胞计数,检测不同诱导环境下神经干细胞分化为神经元及星状胶质细胞的阳性百分率。主要观察指标:①各组细胞分化的形态学特点。②各组神经干细胞免疫组织化学检测结果。③各组神经干细胞分化为神经元及星状胶质细胞的阳性百分率。结果:①细胞分化形态:分化早期可见神经球贴壁,大量细胞向四周爬出,1周后迁徙的大部分细胞完全贴壁,完成分化过程。在细胞密度较低区域可辨认出神经元样细胞、星状胶质样细胞、寡突胶质样细胞。②免疫组织化学检测结果:对照组、转化生长因子β1组存在大量胶质纤维酸性蛋白染色阳性的星状胶质细胞;而碱性成纤维细胞生长因子组及胶质细胞源性神经营养因子+转化生长因子β1组分化的神经元细胞数量较多,神经丝蛋白染色阳性。③神经元及星状胶质细胞的阳性百分比:诱导1周后,胶质细胞源性神经营养因子+转化生长因子β1组神经元阳性百分比高于血清对照组、碱性成纤维细胞生长因子组及转化生长因子β1组(χ2=24.15,19.56,25.32,P<0.05～0.01),星状胶质细胞阳性百分比低于血清对照组及转化生长因子β1组(χ2=24.45,23.79,P<0.01)。结论:体外胶质细胞源性神经营养因子与转化生长因子β1的联合诱导有利于脊髓源性神经干细胞向神经元的分化,说明两者具有协同作用。