胃癌根治术后血清微小RNA-92a、X型胶原α1链、胃泌素、胃动素水平与其预后的关系

目的 探究胃癌根治术后血清微小RNA-92a(miR-92a)、X型胶原α1链(COL10A1)、胃泌素(gastrin,GAS)与胃动素(motilin,MOT)水平与其预后的关系。方法 将2017年1月至2022年1月于山西省临汾市中心医院行胃癌根治术的65例患者作为研究对象,比较术前及术后3d血清miR-92a、COL10A1、GAS及MOT水平,随访患者术后1年的预后情况,将患者分为预后良好组与预后不良组,比较两组血清miR-92a、COL10A1、GAS及MOT水平,并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析其对预后的预测价值。结果 胃癌根治术后患者血清miR-92a、COL10A1、GAS及MOT水平均较术前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组肿瘤直径≥5cm、TNM分期为Ⅲ期、miR-92a及COL10A1水平高于预后良好组(P<0.05),GAS、MOT水平低于预后良好组(P<0.05);两组患者的年龄、性别、肿瘤位置之间的差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,肿瘤直径、TNM分期、miR-92a、COL10A1、GAS、MOT是患者预后不良的影响因素(P<0.05)。绘制ROC特征曲线显示,血清miR-92a、COL10A1、GAS、MOT对预后不良均具有一定的预测效能。结论 血清miR-92a、COL10A1水平上调,GAS、MOT水平下调会增加胃癌根治术后预后不良的发生风险,四项指标对胃癌根治术后预后水平均具有一定预测价值。

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色在诊断Alport综合征中的应用

目的对Alport综合征(AS)患者肾脏穿刺组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学检测,探讨其临床应用价值。方法选取2018年11月至2022年7月浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心确诊的10例AS患者(AS病例组)、10例心脏死亡器官捐献者(DCD)供肾及10例确诊为免疫球蛋白A肾病患者(对照组)的肾组织进行石蜡切片Ⅳ型胶原α1、α3、α5链全自动免疫组织化学染色,将其与冰冻切片免疫荧光染色结果进行比较。将对照组肾组织石蜡切片分别采用多种方法进行抗原修复,比较修复效果。结果对照组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1、α3、α5链染色在肾小球基底膜(GBM)中均为连续线状阳性表达。AS病例组肾组织2种染色方法Ⅳ型胶原α1链染色在GBM均呈连续线状阳性表达,α3、α5链染色在GBM为阴性或节段弱阳性表达。2种染色方法染色结果具有较高的一致性(Kappa=0.615,P=0.035)。结论石蜡切片全自动免疫组织化学检测Ⅳ型胶原α1、α3和α5能较好地用于AS的诊断,为AS的诊断和研究提供了一种可靠的技术手段。

胶原蛋白Ⅴ型2链对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用

目的 探究胶原蛋白Ⅴ型2链(COL5A2)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用。方法 于2022年1―3月开展研究,基于TCGA数据库分析COL5A2在胃癌组织、正常组织中的表达差异,COL5A2对胃癌分期的作用及对病人预后的价值。荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(WB)检测正常人胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803、MKN-45、SGC7901中COL5A2的表达。慢病毒介导稳定转染shRNA-COL5A2、shRNA、NC的MKN-45细胞。克隆形成实验、细胞计数试剂盒(CCK8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期分布;Transwell实验、伤口愈合实验检测细胞的迁移、侵袭能力;裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长;免疫组织化学实验检测肿瘤组织PCNA蛋白。结果 胃癌组织COL5A2相对表达量为4.74±0.45,显著高于正常组织的2.53±0.26(P<0.05),与正常组织相比,胃癌组织中COL5A2升高,与病人临床分期、预后差有关。GES-1组COL5A2相对表达量为0.25±0.04,显著低于胃癌细胞中MGC-803组0.47±0.05、MKN-45组0.72±0.08、SGC7901组0.54±0.04(P<0.05),其中MKN-45升高幅度最大。与shRNA组细胞相比,shRNACOL5A2组细胞COL5A2表达降低,细胞的克隆形成数、在48、72 h的活性、EdU阳性率、迁移和侵袭数量、划痕愈合率均降低,细胞周期阻滞G1/S期,CyclinD1和CDK4表达降低(P<0.05)。异种移植裸鼠成瘤的体积、质量均降低,肿瘤PCNA表达也降低。结论 COL5A2在胃癌中高表达,下调COL5A2抑制癌细胞增殖、迁移侵袭及肿瘤的生长。

胶原十二型α1链在结肠癌中的表达及意义

目的探讨胶原十二型α1链(COL12A1)在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌患者临床病理学特征、预后的关系。方法采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析结肠癌组织与癌旁组织的COL12A1表达水平差异,采用TIMER数据库分析COL12A1与肿瘤微环境、免疫浸润的关系。利用基因集富集分析(GSEA)探讨COL12A1在结肠癌中发挥其生物学功能所依赖的相关信号通路。采用免疫组织化学(IHC)评估47例结肠癌及癌旁正常结肠黏膜组织中COL12A1的表达水平,并分析其与结肠癌患者临床病理学特征的关系;采用蛋白印迹法(WB)检测结肠癌细胞系和正常结肠黏膜细胞系中COL12A1表达水平。利用GEPIA和PrognoScan在线分析网站分析COL12A1表达与结肠癌患者预后的关系。结果TCGA数据库结肠癌数据集分析显示,COL12A1在结肠癌组织中的表达高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.001);IHC结果显示,COL12A1在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.0001)。在结肠癌组织中,COL12A1表达水平与神经/血管浸润(P=0.029)、淋巴结转移(P=0.003)、TNM分期(P=0.001)有关。在线数据库分析显示,COL12A1高表达患者的无病生存期较短。COL12A1表达与结肠癌微环境中CD8^(+)T细胞、B细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及树突状细胞呈正相关(P<0.001)。基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析表明,COL12A1表达涉及细胞黏附、化学突触传递、细胞因子受体相互作用、细胞基质受体相互作用、自噬调节等信号通路。结论COL12A1在结肠癌细胞系及组织中呈高表达,并且与患者不良预后呈正相关。COL12A1的表达与结肠癌微环境的免疫细胞浸润呈正相关,COL12A1或可作为结肠癌预后的一种新的标志物,并可能成为免疫治疗的潜在靶点。

Ⅲ型胶原α链基因mRNA的表达与舌苔形成的关系研究

目的研究Ⅲ型胶原α链基因表达水平与舌苔形成之间的关系。方法应用基因芯片技术和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测Ⅲ型胶原α链在不同舌苔中的表达水平。结果基因芯片显示,常见舌苔中Ⅲ型胶原α链表达水平差异有统计学意义;实时荧光定量PCR证实从高到低依次为:黄厚苔>白薄苔>白厚苔>无苔>黄薄苔>胎儿白薄苔。结论常见舌苔中,Ⅲ型胶原α链表达水平有差异,提示Ⅲ型胶原α链基因表达水平的调控在舌苔形成过程中可能有一定的意义。

成骨不全一家系1型胶原α1链基因新突变

目的检测一个非近亲婚配的成骨不全家系中5例患者的1型胶原α1链(COL1A1)基因突变位点。方法收集一个成骨不全家系的临床资料,每例患者采用双能X线吸收仪检测其L1～L4、股骨颈和全髋部位的骨密度(BMD),并采用聚合酶链反应及直接测序法对家系内成员及50名对照者进行COL1A1基因突变位点检测。结果根据临床表现和放射学资料,该家庭中5例患者被诊断为Ⅰ型成骨不全显性遗传。该家系中成骨不全患者均存在COL1A1基因的第28外显子的两个碱基(AG)缺失造成的突变(p.Gly632x),均为杂合突变,导致632Gly之后的氨基酸编码提前终止,而在家系内正常个体及其他正常对照者中均未发现该突变。除先证者姨妈和表哥的L1～L4BMD低于同龄正常人外,其他患者的BMD基本与同龄正常人相似。结论本研究首次发现了位于COL1A1基因第28外显子的新突变位点可导致Ⅰ型成骨不全,为进一步探讨COL1A1基因型和成骨不全表型的关系提供了依据。

绝经后妇女骨密度与Ⅰ型胶原α_1链及α_2链基因多态性相关性研究

目的探讨人Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)及α2链(COL1A2)基因型与绝经后妇女骨密度相互关系。方法选取年龄≥42岁绝经后妇女(自然绝经≥2年)231例,采用双能X线吸收法(DEXA)测定其全身、腰椎2～4(L2～4)、股骨颈(Neck)、Ward?三角和大转子区等部位的骨密度(BMD)值,并采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测外周血白细胞基因组Ⅰ型胶原α1链及α2链基因型。结果231例受试对象中,Ⅰ型胶原α1链PCR扩增产物未发现ACCB7I酶切位点,SpⅠ结合位点不存在G→T突变,Ⅰ型胶原α1链基因型均为SS型;Ⅰ型胶原α2链基因型分别为EE型113例,Ee型91例,ee型27例(分别占48.9%、39.4%、11.7%),等位基因频率E和e各为68.6%、31.4%。基因型分布符合Hardy-weinberg定律。携带EE基因型的个体比Ee基因型和ee基因型个体的骨密度值为低,但只在腰椎侧位(L2-L4)、股骨颈(Neck)、大转子(Troch)、Ward?s三角(Ward?s)等部位的骨密度值EE基因型比Ee基因型携带者明显降低(P<0.05)。结论广州地区绝经后妇女COL1A1SpⅠ结合位点不存在G→T突变。COL1A2基因EE型个体较Ee基因型及ee基因个体的骨密度值低,绝经后妇女骨密度与COL1A2基因多态性存在一定相关性。

基质金属蛋白酶-3和Ⅰ型胶原α1链基因多态性对原发性冻结肩易感性的影响

目的目前原发性冻结肩的病因及发病机制在基因及分子生物学领域的研究报道较少。文中旨在探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和I型胶原α1链(COL1A1)基因多态性对原发性冻结肩的易感性的影响。方法选择2016年1月至6月来南京军区南京总医院骨科就诊的42名原发性冻结肩患者为病例组,50名健康受试者作为对照组。对所有研究对象的MMP-3基因多态性rs679620及rs522616与COL1A1基因多态性rs1107946,分别进行基因型测定。结果 MMP-3多态性位点rs679620基因型分布与原发性冻结肩易感性无明显相关性(P>0.05)。等位基因A与G比较,差异有统计学意义(OR=0.54,95%CI:0.30~0.99,P=0.044)。COL1A1多态性位点rs1107946基因型及等位基因频率与原发性冻结肩易感性无明显相关性(P=0.994、0.920)。与隐性遗传模型GG相比,GT、TT和GT+TT差异无统计学意义;等位基因T与G比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-3基因多态性rs679620等位基因A是原发性冻结肩发病的保护性因素。MMP-3基因多态性rs522616和COL1A1基因多态性rs1107946与原发性冻结肩易感性无关。

皮肤及肾组织Ⅳ型胶原α链测定在早期诊断遗传性肾病的意义

目的 探讨皮肤及肾组织基底膜Ⅳ型胶原α链在薄基底膜肾病 (TBMN)患儿中早期诊断Alport′s综合征 (AS)中的作用。方法 对 2 1例有肾脏病家族史且诊断为TBMN患儿采用间接免疫荧光法检测皮肤基底膜 (EBM)及肾小球基底膜 (GBM )Ⅳ型胶原α链分布情况。结果 2 1例中 18例EBMα1α5(+)连续 ,GBMα1α3 α5(+)连续。另 3例中 1例男童肾炎性肾病 :EBMα1(+)连续、α5(- ) ,GBMα1(+)连续、α3 α5(- ) ;2例女童孤立性血尿 :EBMα1(+)连续、α5(+)不连续 ,GBMα1(+)连续、α3 α5(+)不连续。此 3例最后确诊为AS。结论 对TBMN患儿行皮肤及肾活检检测基底膜α1、α3 、α5链 。

胃癌患者血清Ⅺ型胶原α1链的表达及临床意义

目的:检测胃癌患者血清Ⅺ型胶原α1链(COL11A1)的表达并探讨其临床意义。方法:实时荧光定量PCR法检测COL11A1基因在健康体检者(n=25)、浅表性胃炎患者(n=25)和胃癌患者(n=50)血清中的表达水平,分析其与临床病理参数的相关性,并采用ROC曲线分析其诊断效能。结果:胃癌患者术前血清COL11A1表达(5.196±1.417)明显高于健康体检者(1.398±0.182,t=2.659,P<0.05),并与肿瘤浸润深度(P<0.05)和TNM分期(P<0.05)相关。浅表性胃炎患者血清COL11A1表达(1.011±0.129)与健康体检者相比差异无统计学意义(t=1.791,P>0.05)。胃癌患者血清COL11A1的ROC曲线下面积为0.811,95%可信区间(CI)为0.680～0.942,当临界值为1.583时,敏感性为75%,特异性为76.5%。结论:胃癌患者血清COL11A1基因高表达,且与肿瘤浸润深度和TNM分期密切相关,有望成为新的临床诊断指标。

靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链分子的shRNA真核表达载体的构建与鉴定

目的构建靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)分子的shRNA真核表达载体并检测其对靶分子的干扰效应。方法根据靶分子COL1A1基因序列,设计、合成编码其shRNA的互补寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSilencerTM2.1-U6 neo载体中并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定;脂质体介导重组质粒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,RT-PCR及Western blot法检测其对靶分子COL1A1表达的影响。结果酶切及DNA测序证实重组质粒pshRNA-COL1A1序列正确。与对照组比较,重组表达质粒pshRNA-COL1A1-1和pshRNA-COL1A1-2在mRNA和蛋白水平均能显著抑制COL1A1基因的表达(P<0.05),抑制率分别为(44.41%±3.90%,63.05%±3.13%)及(45.50%±2.71%,66.98%±2.08%)。结论成功构建靶向人乳腺癌MDA-MB-231细胞COL1A1基因的shRNA真核表达载体。

Ⅲ型胶原蛋白α1链基因rs1800255多态性与颅内动脉瘤发病关系的系统评价

目的系统评价Ⅲ型胶原蛋白α1(COL3A1)基因rs1800255 G>A多态性与颅内动脉瘤(IA)发病关系。方法截止2017年7月31日,联合检索NCBI PubMed、中国引文数据库(CNKI)及万方数据库等关于rs1800255G>A多态性与颅内动脉瘤发病相关病例-对照研究。应用Stata 12.0软件检测所纳入研究进行发表偏倚及异质性检验,以合并效应的OR及95%置信区间(95%CI)评估rs1800255 G>A多态性与颅内动脉瘤发病风险的关系。结果共6个研究数据,包含3 664例研究对象纳入研究。Meta合并分析结果显示,在显性遗传模型下,rs1800255 G>A多态性与颅内动脉瘤发病相关,与GG基因型比较,A等位基因携带者颅内动脉瘤的发病风险增高,整体合并效应的风险比[OR=1.68(95%CI:1.43,1.98)];隐性模型下,与GG+GA基因型比较,AA基因型可升高颅内动脉瘤的发病风险,合并效应的风险比[OR=1.62(95%CI:1.12,2.35)]。结论 COL3A1基因rs1800255 G>A多态性可能影响个体对颅内动脉瘤的易感性。

中国专业长跑运动员Ⅴ型胶原蛋白α1链基因多态性分析

目的:解析中国专业长跑运动员Ⅴ型胶原蛋白α1链(COL5A1)基因rs12722、rs13946多态位点,探讨COL5A1基因多态性与杰出有氧运动能力的关联性。方法:采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术解析rs12722、rs13946单核苷酸多态性在201名专业长跑运动员和337名对照组中的分布特征。结果:(1)COL5A1 rs12722基因型在专业长跑运动员中的分布频率与对照组相比无显著性差异,但马拉松组T等位基因频率显著高于对照组。(2)COL5A1 rs13946等位基因和基因型在专业长跑运动员中的分布频率与对照组无显著性差异。(3)rs13946和rs12722位点组成的TC单体型在5 km、10 km组中的分布频率显著高于对照组。结论:rs12722位点T等位基因与马拉松跑能力有关联。

汉族人和法国人Ⅰ型胶原α链Spl结合序列MscⅠ酶切位点基因多态性的比较

目的 了解中国汉族人和法国人Ⅰ型胶原α链Spl结合序列MscⅠ酶切位点基因多态性分布的异同。方法 对 96例中国汉族人和 78例法国人用DXA骨密度仪进行BMD测量 ,同时采集全血并抗凝保存。用聚合酶链式反应、限制性酶切技术对Ⅰ型胶原α链Spl结合序列基因型进行分析。结果 96例汉族人的基因型均为SS ,78例法国人的基因型为 5 3例SS、2 2例Ss和 3例ss,经Fisherχ2 检验 ,显示差异有非常显著性 (P <0 0 1)。结论 汉族人和法国人的Ⅰ型胶原α链Spl结合序列MscⅠ酶切位点基因多态性显著不同。汉族人Ⅰ型胶原α链Spl结合序列MscⅠ酶切位点稀少。

贵阳市区绝经后女性Ⅰ型胶原α1链Sp1结合位点基因多态性的研究

目的探讨贵阳地区汉族绝经后女性I型胶原α1链(COL1A1)第一个内含子内Sp1结合位点基因多态性与超声骨量及骨代谢状态的关系。方法采用PCR-RFLP法检测COL1A1的Sp1结合位点基因多态性:用sunlight omnisense 7000TM型超声骨密度仪测量其左侧桡骨远端、左侧中指第三指骨、右侧胫骨中段SOS;血清骨钙素(BGP)测定采用放射免疫法,血清甲状旁腺激素(PTH)及I型胶原氨基末端前肽(PINP)的测定采用酶联免疫法。结果COLlAl SPI结合位点的基因型均为SS型,未发现Ss和ss基因型。结论COLlAl基因多态性可能存在较大的种族差异,贵阳地区汉族绝经后女性COL1A1基因Spl位点多态性与骨量及骨折的关系尚不明确,该基因尚不能作为筛查贵阳地区骨质疏松高危人群的候选基因。

检测基底膜Ⅳ型胶原α链对Alport综合征诊断的意义

Alport综合征(AS)是一种进行性的遗传性肾脏病,患者因肾功能进行性减退,而需接受透析治疗和肾移植以维持生命.来自美国部分地区的资料曾显示AS发生率约为10～20/10万,我国尚无有关AS发病率的报道.因而AS预后差、危害大,并不罕见.

天然橡胶供应链风险管理研究

近期天然橡胶(简单天胶)价格波动剧烈,天胶供应链上下游企业面临生产和采购的巨大风险和不确定性。本文分析了天胶的供应链及其风险因素,并提出通过保险、期货套保、供应链整合等手段应对天胶供应链上的风险,减缓天胶供应链的波动,实现天胶供应链长久稳定的发展。

毕赤酵母中人Ⅲ型胶原蛋白α链与病毒羟脯氨酸酶的共表达

将人Ⅲ型胶原α链与一种来源于病毒的4-羟脯氨酸酶在毕赤酵母中共表达,以获得能满足应用需求的羟基化胶原蛋白。分别构建包含酶与胶原基因的重组质粒p PICZBL593和pPIC9K-COL3A1,并将质粒均转入毕赤酵母GS115中以表达这两种蛋白。质粒测序结果表明目的基因成功插入到载体中;实时定量PCR结果显示两种基因均在mRNA水平表达;SDS-PAGE和Western Blot进一步证实两种蛋白在毕赤酵母GS115中的成功表达;氨基酸组成分析和质谱结果证实表达的胶原中含有羟脯氨酸。获得羟基化的胶原蛋白。

血清X型胶原蛋白α1链对骨关节炎软骨损伤的诊断价值分析

目的分析血清X型胶原蛋白α1链(COL10A1)水平变化对骨关节炎软骨损伤的诊断价值。方法选取2015年1月至2016年12月该院收治的35例骨关节炎软骨损伤患者和30例体检健康者分别作为研究组和对照组,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测两组研究对象血清COL10A1水平,同时将研究组按照Kellgren-Lawrence评估标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级,并比较不同分级患者的血清COL10A1水平变化情况。结果研究组血清COL10A1水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级骨关节炎软骨损伤患者血清COL10A1水平分别是(0.52±0.11)、(1.96±0.36)、(1.89±0.33)和(0.79±0.24)ng/mL。Ⅱ、Ⅲ级骨关节炎软骨损伤患者血清COL10A1水平明显高于Ⅰ、Ⅳ级骨关节炎软骨损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ级骨关节炎软骨损伤患者血清COL10A1水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清COL10A1水平可作为骨关节炎软骨损伤患者的诊断指标,具有临床诊断价值,值得推广应用。

基于多数据集分析10型胶原α1链和分泌型磷蛋白1在肺腺癌中的表达及临床意义

目的分析10型胶原α1链(COL10A1)和分泌型磷蛋白1(SPP1)在肺腺癌(LUAD)组织中的表达情况及临床价值。方法本研究基于癌症基因图谱(TCGA)数据库中594例LUAD患者的数据筛选表达差异基因,并采用Kaplan-MeierPlotter数据库719例患者的完整生存时间信息,分析不同COL10A1和SPP1表达情况患者的生存情况。利用人类蛋白质表达图谱(HPA)数据库分析LUAD组织中SPP1蛋白质情况。分析LUAD患者预后的影响因素。采用基因集富集分析(GSEA)方法分别预测COL10A1和SPP1调控的机制。结果基于TCGA数据库分析,LUAD组织中COL10A1和SPP1表达量均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。COL10A1和SPP1高表达LUAD患者的生存期均明显长于低表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Cox多因素分析结果表明,肿瘤分期是LUAD患者预后的影响因素(P﹤0.01)。GSEA分析结果表明,COL10A1和SPP1功能均富集在血管新生、上皮-间充质转变和转化生长因子-β(TGF-β)信号通路等基因集。结论在LUAD患者中,COL10A1和SPP1均呈高表达,并在肿瘤形成过程中发挥重要作用,且SPP1与患者生存期有关,其有望成为判断LUAD患者预后的有效生物标志物或者治疗靶点。