对虾白斑综合征病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因的系统进化分析

目的为了对对虾白斑综合征病毒 (whitespotsyndromevirus,WSSV)中最为保守的胸腺嘧啶核苷酸合成酶 (WSV TS)基因 ,进行该病毒的系统发育学研究。方法通过GenBankTM 数据库和DNAMAN分析系统 ,对不同生物来源的胸腺嘧啶核苷酸合成酶进行同源性比较并构建了该基因的系统发育进化树。结果 :WSV TS的氨基酸序列与来自高等生物 ,特别是同哺乳动物有着很高的同源性 ,而与多种病毒的同源性较低。结论WSV ts基因是WSSV基因组中最为保守的基因 ,其进化树的构建对于理解WSSV的进化地位有重要的帮助。

食管及贲门癌变患者亚甲基四氢叶酸还原酶、胸腺嘧啶合成酶基因多态性分析

目的：探讨血清叶酸代谢关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）与胸腺嘧啶合成酶（TS）基因多态性与食管及贲门癌易感性的关系。方法：选取安阳地区病理证实的275例食管鳞癌（SCC）及129例贲门腺癌（GCA）患者和315例年龄性别与其匹配的正常对照人群，采用PCR基础上的限制性片段多态检测法（PCR—RFLP）对其NTHFR和TS各基因型进行分析。结果：①对照组MTHFR677CC、CT及TT基因型的分布频率分别为24％、45％和31％；SCC组分别为19％、38％和43％；GCA组分别为19％、35％和46％。对照组TSER3R／3R（4R）、2R／3R及2R／2R基因型的分布频率分别为64％、34％和2％；SCC组分别为62％、35％和4％；在GCA组，分别为63％、30％以及7％。②与MTHFR677CC及MTHFR677CT两基因型相比，TT携带者患SCC的危险度升高1．62倍（OR=1．62，95％可信区间（CI）为1．15～2．30，P=0．006），而GCAOR=1．8l（95％CI为1．17—2．81，P=0．008）。③与其他基因型相比，纯合突变型（TSER2R／2R）患SCC的危险度升高2．44倍（OR=2．44，95％CI为0．89～6．73，P=0．084），患GCA的危险度升高3．94倍（OR=3．94，95％CI为1．29～12．0，P=0．016）。④相对于无基因突变者，仅有MTHFR677TT者患SCC的危险度升高1．60倍（95％CI为1．13—2．28），患GCA的危险度升高1．84倍（95％CI为1．17～2．88），仅有TSER2R／2R者患SCC的危险度升高1．89倍（95％CI为0．62—5．79），差异无统计学意义，但患GCA的危险度升高3．56倍（95％CI为1．03～12．3），双突变型组合（MTHFR677TT和TSER2R／2R）携带者在SCC组中占1．5％，在GCA组中占3．1％，在对照组中未检测到。结论：突变型MTHFR677TT及TSER2R／2R增加安阳地区人群SCC与GCA的易感性，当二者共同存在时，肿瘤的易感性更高。MTHFR与TS基因多态的存在可能是SCC与GCA地理分布一致性的遗传学基础之一。

氧化苦参碱清除·OH自由基作用及对胸腺嘧啶核苷酸辐射防护作用的ESR研究

本实验利用ＥＳＲ技术研究了氧化苦参碱清除·ＯＨ作用及辐射对胸腺嘧啶核苷酸（５′－ＴＭＰ）间接损伤的防护作用。结果表明：氧化苦参碱有较好的清除·ＯＨ作用，且呈明显量效关系。通过清除·ＯＨ。

二氢嘧啶脱氢酶(DPD)与胸苷酸合成酶(TS)在结直肠癌中的表达及预后价值

目的:探讨5-FU代谢酶在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法:44例结直肠癌根治术后分别施以5-FU为主的辅助化疗,并通过免疫组化检测二氢嘧啶脱氢酶(DPD)和胸苷酸合成酶(TS)的表达。结果:DPD阳性表达的结直肠癌无病生存期显著缩短(P=0.047),而总生存期也有缩短的趋势,但差异无显著意义(P=0.136)。而TS表达与预后无关(P>0.05),但TS在晚期肿瘤中表达较高(P<0.05)。结论:在接受5-FU为主辅助化疗的结直肠癌患者中,DPD表达可作为预后的重要指标。TS表达与临床分期密切相关,可视为结直肠癌进展的生物学标志。

胸苷酸合成酶和二氢嘧啶脱氢酶的表达与乳腺癌临床病理特征及预后的相关性

目的:探讨胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)和二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD)在南疆地区乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学染色法检测60例乳腺癌患者癌组织及其配对的癌旁组织中TS和DPD的蛋白表达;分析TS和DPD表达与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析TS和DPD蛋白表达与患者生存时间的关系。结果:乳腺癌组织中TS和DPD阳性表达率分别为56.67%(34/60)、46.67%(28/60),均显著高于癌旁组织[36.67%(33/60)、26.67%(16/60),均P<0.05];癌组织TS的表达与临床分期、组织分化程度和淋巴结转移显著相关(P<0.01或P<0.05),而DPD表达仅与淋巴结转移显著相关(P<0.05)。TS阳性表达患者生存时间显著低于阴性患者(P<0.05),而DPD表达与生存期无明显相关(P>0.05)。结论:乳腺癌组织中TS和DPD异常高表达,TS表达与部分临床病理特征以及患者生存时间相关。

外周血胸苷酸合成酶mRNA和二氢嘧啶脱氢酶mRNA临床价值探讨

目的探讨外周血胸苷酸合成酶(TS)mRNA和二氢嘧啶脱氢酶(DPD)mRNA检测的临床价值。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例肿瘤患者和32例对照患者TS mRNA和DPD mRNA的表达,并作统计学分析。结果肿瘤组TS mRNA和DPD mRNA的表达率分别为27.7%和23.4%,对照组为9.38%和0.00%,肿瘤组高于对照组(P<0.05)。TS mRNA和DPD mRNA的表达水平与肿瘤的大小、有无淋巴结转移、组织学分级和临床分期均无相关性。结论用RT-PCR检测外周血TS mRNA和DPD mRNA,操作简便,可反复采样检测,便于临床追踪。

原发性肝癌癌旁组织胸腺嘧啶核苷磷酸化酶表达与微血管密度的关系

目的探讨原发性肝癌癌旁组织胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)与微血管密度(MVD)的关系。方法选取海南医学院附属医院普外科切除的肝癌标本40例,采用免疫组织化学方法检测原发性肝癌癌旁组织蜡块中的TP和MVD的表达水平,并在高倍镜下计数微血管数。结果 TP阳性原发性肝癌癌旁组织的MVD明显高于TP阴性原发性肝癌癌旁组织。结论原发性肝癌癌旁组织中TP具有促进组织中血管增生作用,TP阳性原发性肝癌患者术后可选用卡培他滨化疗。

大肠杆菌胸腺嘧啶合成酶thyA缺失突变菌株的构建

大肠杆菌K 1 2DY330菌株的染色体上整合有一种新型的同源重组系统———缺陷型λ原噬菌体同源重组系统。以DY330为出发菌 ,通过同源重组构建大肠杆菌thyA- 株DY330 TI,其基因组特点是 :thyA基因除保留N端的1～ 4 9氨基酸残基相对应的必需核苷酸序列外 ,将其余部分全部缺失 ;此外 ,还敲除了DY330 TI中与缺陷型λ原噬菌体同源重组功能相关的基因 ,从而尽可能避免了通过同源重组产生回复突变的可能性。通过大肠杆菌thyA基因对该突变株的转化实验 ,检测转化子的回复突变率 ,进一步证实该突变株的突变性状稳定 ,为构建以thyA为选择标志的大肠杆菌染色体

食管鳞状细胞癌中胸腺嘧啶核苷磷酸酶的表达意义及其与预后的关系

目的观察胸腺嘧啶核苷激酶(TP)与食管鳞状细胞癌(SCC)血管生成、细胞增殖、凋亡、临床病理学特征及患者存活率之间的关系。方法使用免疫组化法检测了66例SCC患者样本中TP的表达水平,并研究其与肿瘤血管、细胞增殖、凋亡、临床病理学特征和生存之间的关系。结果多数病例肿瘤细胞中TP在胞核或胞质都有表达,但在远离肿瘤的正常上皮细胞中没有表达。TP高表达(H-TP)和TP低表达(L-TP)肿瘤中微血管密度(MVD)没有显著差异。H-TP癌症患者Ki-67标记的增殖细胞比例明显高于L-TP患者(P=0.022 2)。H-TP癌症患者的凋亡指数(AI)要低于L-TP患者,但无显著差异(P=0.072 3)。同时TP的表达水平与肿瘤的侵袭模式有关(P=0.014 6),并与淋巴结转移有相关性(P=0.040 8)。H-TP患者(57%)的5年存活率低于L-TP患者(72%)。结论 TP在促进SCC患者肿瘤生长中起到重要作用,代表了肿瘤的侵袭和转移能力,与患者的预后相关密切。

微波辐射下4-硫胸腺嘧啶核苷的合成研究

提出了一种高效合成3',5'-O-二乙酰基-4-硫胸腺嘧啶核苷的方法,该方法具有反应时间短、操作简便等优点,目标产物产率可达93.9%以上。以二氧六环做溶剂,反应温度102℃,乙酰化胸腺嘧啶核苷与P2S5的摩尔比为1∶1.2,微波功率700W辐射8分钟,即可高收率得到3',5'-O-二乙酰基-4-硫胸腺嘧啶核苷。

胸腺嘧啶核苷磷酸化酶与子宫内膜癌关系的研究

目的 :探讨胸腺嘧啶核苷磷酸化酶 (TP)与子宫内膜癌的临床病理特征、无瘤生存率、微血管密度 (MVD)的关系。方法 :采用免疫组织化学方法检测 40例子宫内膜癌蜡块组织中的TP的表达水平及MVD。结果 :TP阳性肿瘤的MVD明显高于TP阴性肿瘤。病理分级G1的TP阳性率明显高于G2 、G3 ,肌层未受累或侵犯肌层≤ 1/ 2的TP阳性率明显高于侵犯肌层 >1/ 2者 ,手术分期Ⅰ期、Ⅱ期总的TP阳性率明显高于Ⅲ期。结论 :TP具有促血管增生作用 。

胸苷酸合成酶mRNA和二氢嘧啶脱氢酶mRNA在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨胸苷酸合成酶(thymidylatesynthase,TS)mRNA和二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidinedehydrogenase,DPD)mRNA在结直肠癌中的表达及其与临床病理的关系。方法:采用半定量RT-PCR检测54例结直肠癌肿瘤及临近正常肠黏膜中TSmRNA和DPDmRNA的表达,比较酶表达水平与临床病理间的关系,并对其中10例采用免疫组化进行蛋白表达定位。结果:结直肠癌组织中TSmRNA含量(1.37±0.72)显著高于正常肠黏膜(0.97±0.59)(P<0.001),DPDmRNA在肿瘤组织中的表达(0.75±0.38)低于正常组织(0.91±0.47),但差异无统计学意义(P=0.055);TSmRNA与淋巴结转移程度(P<0.001)和Dukes分期(P=0.003)密切相关,DPDmRNA在男性患者(P=0.005)和直肠癌(P=0.034)中表达含量显著升高。免疫组化发现TS在肿瘤细胞核与胞质中均有表达,而DPD仅表达于肿瘤细胞胞质中。结论:结直肠癌TSmRNA水平显著高于正常肠黏膜;而DPDmRNA在肿瘤与正常组织间无显著差异。TSmRNA表达与临床分期密切相关,女性或结肠癌患者的DPDmRNA表达水平较低。

胃癌组织中胸腺嘧啶合成酶和双氢嘧啶脱氢酶的表达及临床意义

目的了解胸腺嘧啶合成酶(TS)和双氢嘧啶脱氢酶(DPD)mRNA在胃癌组织及癌旁非肿瘤组织中的表达情况以及与临床病理学特征的关系。方法采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定50例胃癌患者TS、DPD mRNA在胃癌及癌旁非肿瘤组织的表达。结果胃癌组织中TS mRNA水平明显高于非肿瘤组织中的水平(P=0.001),DPD mRNA水平略高于非肿瘤组织但无明显差异(P=0.107)。肿瘤和非肿瘤组织中TS mRNA水平(P=0.382)、DPD mRNA水平之间(P=0.227)以及肿瘤组织中TS和DPD mRNA水平(P=0.412)、非肿瘤组织TS和DPD mRNA水平之间(P=0.412)无显著相关性。对比临床病理学特征与TS mRNA水平,Ⅲb期与Ⅳ期的水平无明显的差异(P=0.106),但却高于Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲb期水平(P=0.045);在分化程度上未分化型中TS mRNA水平要高于已分化的细胞类型(P=0.017),而DPD mRNA与临床病理学特征无显著相关性。结论胃癌组织中TS mRNA的水平高于非肿瘤组织中的水平;TS mRNA水平与临床分期有关,Ⅲb期水平高于Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ期的水平,而与Ⅵ期水平无明显差异;同时TS mRNA水平与肿瘤细胞的组织学类型有关。

胸腺嘧啶及其核苷、核苷酸激光直接激发和丙酮敏化光解的比较研究(英文)

DNA及其组分由于激发态量子产额低，其激发三重态的研究遇到很大困难。直到本世纪九十年代，中国科学院辐射化学开放实验室采用丙酮敏化激发以增大其三重态量子产额方法，相继得到DNA除胸腺嘧啶外的其它三个碱基及其衍生物的激发三重态吸收光谱及其衰减动力学常数。然而，这种敏化激发的方法是否与直接激发所得到的结果一致，还没有这方面的研究报道。本研究采用纳秒级激光光解瞬态吸收光谱法研究了胸腺嘧啶及其核苷、核苷酸的激光直接激发和丙酮敏化光解，同时得到两种研究方法的胸腺嘧啶及其核苷、核苷酸三重态的单分子衰减常数（ko）和被其基态的自猝灭常数（Ksp），其中胸腺嘧啶、胸苷的丙酮敏化结果和胸腺嘧啶、胸苷酸的直接激发结果均是首次得到的。从两种方法得到的数据看，它们的偏差在实验误差范围内，因而两种方法得到的结果是一致的。并且，由于丙酮敏化所得到的三重态量子产额高，因而其瞬态吸收谱的信号强、测量精度高。故可认为丙酮敏化方法得到的结果更真实可靠。

二氢嘧啶脱氢酶、胸苷酸合成酶、c-myc和p53基因在小鼠肝组织中表达的昼夜节律性研究(英文)

背景与目的:5-Fluorouracil(5-FU)主要通过抑制胸苷酸合成酶发挥抗癌作用,而二氢嘧啶脱氢酶是5-FU体内代谢的一个起始酶和限速酶。在本研究中,我们对二氢嘧啶脱氢酶、胸苷酸合成酶、c-myc和p53基因在小鼠肝脏中表达的昼夜节律进行研究。方法:本实验共采用了24只雄性B6D2F1小鼠。所有实验动物在实验中进行了4周光照同步化(12h光照:12h黑暗)。体温和休息-活动节律通过腹腔埋置的微型感受器进行动态监测。动物分别在3,7,11,15,19,23HALO(灯亮后小时数)被处死并取出肝脏冻存。肝脏标本中抽提的总RNA用LightCycler-SYBRGreenITM扩增系统进行实时定量RT-PCR。结果:小鼠的体温和休息-活动均呈现明显和相似的昼夜节律,其峰值均位于黑暗期(相当于小鼠活动相),谷值则位于光照期(相当于小鼠休息相)。二氢嘧啶脱氢酶在mRNA水平呈现出明显的昼夜节律性,其峰值时间位于16HALO左右即位于小鼠活动相(P=0.0012)。胸苷酸合成酶在mRNA水平具有昼夜节律表达的趋势,其峰值时间出现在光照期(P=0.079)。C-myc和p53在mRNA水平的节律性表达在本实验中无统计学意义。结论:二氢嘧啶脱氢酶和胸苷酸合成酶在mRNA水平呈现出昼夜节律性,二者峰值时间相差约12h,这一结果提示可以利用二者在转录水平的时间差异用5-FU进行时间化疗。

卡氏肺孢子胸腺嘧啶核苷酸合酶基因siRNA表达载体的构建和鉴定

目的:构建和鉴定大鼠卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)胸腺嘧啶核苷酸合酶(Thymidylate synthase,TS)基因的siRNA(Short interfering RNA)表达载体。方法:人工合成针对PCTS基因的1对shRNA(Short hairpin RNA)序列并定向克隆到空载体pTZU6+1上,构建siRNA表达重组质粒pPC-TS,并采用双酶切产物凝胶电泳和基因测序法鉴定。结果:酶切电泳和基因测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致。结论:成功构建卡氏肺孢子胸腺嘧啶核苷酸合酶基因siRNA表达载体。

聚胸腺嘧啶寡核苷酸介导的铜纳米粒子荧光探针高灵敏检测L-半胱氨酸

以聚胸腺嘧啶寡核苷酸为模板分子，利用一步法温和快速合成了稳定性好、荧光性能优异的铜纳米粒子。基于L-半胱氨酸能通过巯基高选择性地与铜纳米粒子发生相互作用形成Cu—S键，从而淬灭铜纳米粒子荧光的现象，建立了测定L-半胱氨酸的荧光检测新方法。此方法测定L-半胱氨酸的线性范围为3～50μmol／L，检出限为0．56／μmol／L，可望用于尿液中L-半胱氨酸含量的测定。

二氢嘧啶脱氢酶和胸腺嘧啶核苷激酶的研究进展

目的:了解二氢嘧啶脱氢酶（DPD）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的研究现状和在临床肿瘤治疗中的意义。方法:综述近年来DPD和TK的研究现状及其在临床肿瘤治疗中的应用。结果:DPD存在的个体差异导致氟尿嘧啶治疗中肿瘤细胞对药物的敏感性的不同,从而导致疗效的不同;TK的活性高低一定程度上反映了细胞中DNA的合成速度,可以用于临床诊断肿瘤细胞增殖程度和解释应用嘧啶类化疗药物时的疗效和毒性反应。结论:认识和利用这两种酶的作用机制以及个体差异不仅可以指导临床的个体化治疗,减小药物的不良反应和增加疗效,而且可以辅助肿瘤的诊断和指导嘧啶类新药的开发。