大气压低温等离子体与胸腺嘧啶脱氧核苷的作用

胸腺嘧啶(Thymine)是遗传物质的组成成分之一,为了研究等离子体对遗传胸腺嘧啶(Thymine)的作用过程,利用大气压等离子体对作为遗传物质的胸腺嘧啶(Thymine)及对应的胸腺嘧啶脱氧核苷(Thymidine)进行处理,为了避免空气对遗传物质的影响,采用水中放电装置进行了相关研究。研究结果表明:不同气体等离子体处理后,胸腺嘧啶脱氧核苷会分解为胸腺嘧啶,且氮气等离子体处理时分解速率快于氩气等离子体处理;另外,空气等离子体与氧气等离子体处理后,胸腺嘧啶脱氧核苷会分解产生两种新产物,分别为胸腺嘧啶+OH和胸腺嘧啶脱氧核苷+OH。该研究对了解大气压等离子体对细菌失活的机制具有一定指导作用,同时对等离子体与生物体作用有着积极的指导意义。

氚－胸腺嘧啶脱氧核苷标记术在判断食管上皮癌变过程中的应用

本文总结了４次（１９８６～１９９０年）在食管癌高发区河南省辉县市孟庄镇，进行的食管癌前病变研究中，通过胃镜普查，将其中３７８例食管上皮活检标本进行３Ｈ—ＴｄＲ标记。结果表明，正常食管上皮１１６例，基底细胞增生２２１例，间变２２例，早期癌１９例，其平均标记指数随着病变的加重而递增。正常与不同病变之间差异有极显著性（Ｐ＜０．００５）；吸烟、年龄及早期癌患者激光治疗前后的标记指数，其差异有极显著性（Ｐ＜０．００５）。采用３Ｈ—ＨｄＲ标记技术显示食管上皮细胞，在肿瘤的多阶段发展过程中的变化，它与基因突变、扩增及染色体结构重组与缺乏等比较，是最容易检测的指标，较单纯组织学分析更客观地反映癌变的发展过程，可作为癌前病变干预试验、治疗的一种可靠的指标。

胸腺嘧啶二醇脱氧核苷单分子糖苷键断裂的理论研究

采用理论计算方法对c is-(5S,6R)胸腺嘧啶二醇脱氧核苷(dTg)单分子糖苷键断裂的热力学和动力学性质进行了研究.在气相中,所有稳定点的几何构型都采用B3LYP/6-31+G(d,p)方法进行全优化,并利用导电极化连续模型对气相优化构型进行单点计算确定水的溶剂效应,作者主要考虑了直接断裂和抽氢断裂两条路径.计算结果表明:两条反应机理均涉及较高的活化能,从而说明单分子分解并不能促进糖苷键的断裂,该研究为生物体内这一重要反应提供了更多有用的信息.

立体构型对5-羟基-6-氢过氧基-5,6-二氢胸腺嘧啶脱氧核苷热分解速率的影响

采用B3LYP/6-31 1++G(2d,p)方法对5-羟基-6-氢过氧基-5,6-二氢胸腺嘧啶脱氧核苷(5-OH-6-OOH-DHT)的trans-(5R,6R)、trans-(5S,6S)和cis-(5S,6R)三种构型的热分解机理进行了理论研究.同时利用CPCM模型对气相中的优化构型进行单点计算以确定水的溶剂效应.结果表明:与6R对的顺、反构型(5S,6R,5R,6R)相比,6S对的顺、反构型(5R,6S,5S,6S)均表现出相对较高的分解速率;此外,不论是6S对,还是6R对,它们的顺、反构型的反应速率十分接近.常温下这四种空间异构体在水溶液中分解速率的顺序为:cis-(5R,6S)>trans-(5S,6S)>trans-(5R,6R)>cis-(5S,6R).

二氢嘧啶脱氢酶和胸腺嘧啶核苷激酶的研究进展

目的:了解二氢嘧啶脱氢酶（DPD）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的研究现状和在临床肿瘤治疗中的意义。方法:综述近年来DPD和TK的研究现状及其在临床肿瘤治疗中的应用。结果:DPD存在的个体差异导致氟尿嘧啶治疗中肿瘤细胞对药物的敏感性的不同,从而导致疗效的不同;TK的活性高低一定程度上反映了细胞中DNA的合成速度,可以用于临床诊断肿瘤细胞增殖程度和解释应用嘧啶类化疗药物时的疗效和毒性反应。结论:认识和利用这两种酶的作用机制以及个体差异不仅可以指导临床的个体化治疗,减小药物的不良反应和增加疗效,而且可以辅助肿瘤的诊断和指导嘧啶类新药的开发。

4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷结构的光谱研究（英文）

采用拉曼和UV光谱研究了抗癌药物4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的特征结构,确定了药物在酸性、中性和碱性环境下的结构变化。研究结果表明,在酸性和中性溶液中,4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷被强烈质子化,而在碱性环境中则是去质子化,同时,4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的质子化和去质子化比4-硫代胸腺嘧弱,说明氢键的结合对4-硫代胸腺嘧的NH质子和溶液分子之间的相互作用具有重要影响。

脑胶质瘤组织中胸腺嘧啶核苷激酶1的表达和意义及其与细胞增殖抗原Ki67表达的关系

目的研究脑胶质瘤组织中胸腺嘧啶核苷激酶1(TK1)的表达和意义,以及其与细胞增殖抗原Ki67表达的关系。方法 202例脑胶质瘤患者,经病理检查进行脑胶质瘤病理分级及组织类型分型。采用免疫组化染色法检测脑胶质瘤组织中TK1和Ki67的表达。比较不同级别及类型患者脑胶质瘤组织中TK1表达的阳性率;分析TK1与Ki67表达的关系。结果本组患者脑胶质瘤按WHO分级:Ⅰ级12例,Ⅱ级85例,Ⅲ级60例,Ⅳ级45例;组织类型分型:少突胶质细胞瘤28例,星形胶质细胞瘤174例。本组患者TK1阳性119例(58.9%);其中良性组(WHOⅠ级)患者无TK1阳性,低度恶性组(WHOⅡ级)阳性31例(36.5%),高度恶性组(WHOⅢ、Ⅳ级)阳性88例(83.8%);三组间TK1阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05～0.001)。星形胶质细胞瘤及复发患者的TK1阳性率分别显著高于少突胶质细胞瘤和初发的患者(均P<0.05)。TK1与Ki67的表达水平呈正相关(r=0.711,P<0.01)。结论恶性程度高、星形胶质细胞瘤及复发的脑胶质瘤患者瘤组织中TK1的表达增高;提示TK1表达可作为脑胶质瘤病理分级、分型及复发的重要参考指标。TK1与Ki67正相关,提示TK1亦可反映脑胶质瘤细胞的增殖情况。

血清胸腺嘧啶核苷激酶的检测及临床意义

利用抗胸腺嘧啶核苷激酶 (TK)单克隆抗体 ,建立增强化学发光法 (ECLA) ,检测血清中的TK。在肿瘤病人中 ,肺癌的TK阳性率为 91 5 % ,直肠癌为 90 0 % ,胃癌为 90 6 % ,急性淋巴细胞性白血病 (ALL)、急非淋白血病 (ANLL)、淋巴瘤分别为 93 3% ,6 5 0 %和 91 6 % ;非肿瘤病人TK的阳性率为 4 2 %。 2 0 7例体检健康人群血清均为阴性 ,TK含量明显低于各肿瘤组病人 (P <0 0 0 1) ,而与非肿瘤病人无显著差异 (P >0 0 5 ) ;胃癌和直肠癌病人的TK阳性率明显高于癌胚抗原(CEA)的阳性检出率 (P <0 0 0 5 )。结论 :血清TK含量大于 5pmol/L可判定为异常 ;ECLA检测TK对ALL、淋巴瘤、肺癌、胃癌和直肠癌等有较高的诊断效果 ,将会成为肿瘤筛查、恶性程度和预后观察的工具。而且本法具有特异性好 ,结果易于观察且可长期保存的优点。

EB病毒特异性胸腺嘧啶核苷激酶与鼻咽癌

本文就EB病毒特异性胸腺嘧啶核苷激酶(EBV-TK)理化酶学特征的研究及其在鼻咽癌早期诊断中的价值等作简要介绍。

靶向非病毒载体一次及持续介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因转导卵巢癌细胞的比较

目的比较靶向非病毒载体GE7系统介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSV1-tk)基因一次及持续转导卵巢癌细胞的转导效率及杀伤效应。方法靶向非病毒载体系统GE7分别与标志基因β-半乳糖苷酶(β-gal)基因和治疗基因HSV1-tk基因构成载体复合物,一次及持续体外转导卵巢癌细胞CaOV3,通过5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖吡喃糖甙(X-gaI)染色比较GE7系统一次及持续转导外源基因的转导效率。将丙氧鸟苷(GCV)加入一次及持续转导HSV1-tk基因的卵巢癌细胞,通过细胞生长抑制曲线、流式细胞分析等,观察GCV对一次及持续转导GE7/HSV1-tk的卵巢癌细胞的杀伤作用。结果X-gal染色显示,GE7-次转导外源基因的平均转导效率可达80%,持续转导达85%。当GCV为1μg/mL时,GE7/HSV1-tk一次转导的生长抑制率达82%,凋亡指数为15,而持续转导可达90%,凋亡指数为30。在相同的GCV浓度下,持续转导GE7/pCMV-tk卵巢癌细胞生长抑制率显著高于一次转导(P<0.05)。结论GE7载体系统持续转导卵巢癌细胞较一次转导的平均转导效率高,持续转导的GE7/HSV1-tk/GCV基因治疗系统杀伤作用更大。

血清胸腺嘧啶核苷激酶1水平与肺癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨肺癌患者血清胸腺嘧啶核苷激酶(TK)1与肺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法肺癌患者80例为肺癌组,取66例健康者为对照组,采用化学发光法检测TK1表达,并收集患者临床病理特征与1、3年生存情况。结果肺癌患者中TK1阳性率为40.00%(32/80),显著高于健康对照组的13.64%(9/66)(P<0.05),肺癌患者TK1阳性率在性别、吸烟史、淋巴结转移及病理类型上未见统计学差异,而与远处转移及TMN分期有关(P<0.05);肺癌TK1阳性与阴性患者在1年生存率上未见统计学差异(P>0.05),但3年生存率阳性患者明显低于阴性患者(P<0.05)。结论血清TK1在肺癌患者中高表达,并与患者发生远处转移及TMN分期密切相关,且预后生存率低。因此,血清TK1可作为指导肺癌临床分期及判断预后的独立预测指标。

HSV对Carbocyclic Oxetanocin G的耐药性及耐药病毒的胸腺嘧啶核苷激酶的活性研究

目的探讨治疗疱疹病毒性角膜炎的新药CarbocyclicoxetanocinG(C.OXTG)耐药性的产生情况及产生耐药性的机制。方法将1型单纯疱疹病毒(HSV1)接种于非洲绿猴肾细胞,在含10μmol/LC.OXTG的环境中连续培养20代,通过空斑抑制试验测定各代病毒株对C.OXTG的敏感性,测定野生HSV1、培养20代后的HSV1的耐药性及其生物克隆株的胸腺嘧啶核苷激酶的活性。结果HSV1在含C.OXTG的环境中连续传代培养4代后,便出现了耐药性。培养20代后的病毒株及其克隆株的ED50为野生株的10倍,且病毒的TK酶活性远远低于野生病毒株。结论HSV1在含C.OXTG的环境中很快产生耐药性且耐药病毒株缺乏TK酶活性。

食管鳞状细胞癌中胸腺嘧啶核苷磷酸酶的表达意义及其与预后的关系

目的观察胸腺嘧啶核苷激酶(TP)与食管鳞状细胞癌(SCC)血管生成、细胞增殖、凋亡、临床病理学特征及患者存活率之间的关系。方法使用免疫组化法检测了66例SCC患者样本中TP的表达水平,并研究其与肿瘤血管、细胞增殖、凋亡、临床病理学特征和生存之间的关系。结果多数病例肿瘤细胞中TP在胞核或胞质都有表达,但在远离肿瘤的正常上皮细胞中没有表达。TP高表达(H-TP)和TP低表达(L-TP)肿瘤中微血管密度(MVD)没有显著差异。H-TP癌症患者Ki-67标记的增殖细胞比例明显高于L-TP患者(P=0.022 2)。H-TP癌症患者的凋亡指数(AI)要低于L-TP患者,但无显著差异(P=0.072 3)。同时TP的表达水平与肿瘤的侵袭模式有关(P=0.014 6),并与淋巴结转移有相关性(P=0.040 8)。H-TP患者(57%)的5年存活率低于L-TP患者(72%)。结论 TP在促进SCC患者肿瘤生长中起到重要作用,代表了肿瘤的侵袭和转移能力,与患者的预后相关密切。

胸腺嘧啶激酶/丙氧鸟苷体外杀伤携带胸腺嘧啶激酶基因的C6胶质瘤细胞时细胞凋亡的检测

目的:检测胸腺嘧啶激酶基因转染C6胶质瘤细胞后用丙氧鸟苷处理时细胞凋亡的发生。方法:用脂质体介导的基因转染将单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶基因转入C6胶质瘤细胞中,用G418筛选,建立稳定表达胸腺嘧啶激酶的C6细胞株;加入丙氧鸟苷作用不同时间,用原位末端标记、透射电镜和DNA凝胶电泳法检测。结果:用丙氧鸟苷作用72h发现有大量原位末端标记阳性的细胞,阳性信号呈块状或半月形位于核膜内侧;透射电镜发现肿瘤细胞核内染色质呈块状或帽状位于核膜内侧,非染色质部分呈空泡状,细胞质有的固缩,细胞器基本保持完整;有的则高度肿胀,细胞内亚单位遭到破坏;DNA凝胶电泳发现用丙氧鸟苷作用72h细胞基因组DNA呈梯状带。结论:实验结果提示胸腺嘧啶激酶/丙氧鸟苷系统作用于表达胸腺嘧啶激酶的C6细胞时该细胞主要是以凋亡的方式死亡的。

鼻咽癌患者血清中抗重组EB病毒胸腺嘧啶激酶IgA抗体含量变化的初步观察

将含有ＥＢ病毒ＤＮＡ中编码胸腺嘧啶激酶（ＴＫ）的基因片段重组到棒状病毒ＤＮＡ上，再感染蛾卵细胞株ＳＦ－９，可获得大量纯度较高的重组ＴＫ（ｒＴＫ）表达。以此为抗原作碱性磷酸酶ＥＬＩＳＡ检测血清中抗ＴＫ的ＩｇＡ抗体（ＴＫ／ＩｇＡ）。对７０例鼻咽癌患者２５０例非鼻咽癌供血者（包括１９６例正常人、４９例慢性鼻咽炎和５例其它鼻咽疾病）作了ＩｇＡ／ＴＫ检测，并与ＩｇＡ／ＶＣＡ检测结果作对比，证实鼻咽癌患者血清ＩｇＡ／ＴＫ平均相对吸光度值（０．６３７６±０．２０２６）明显高于非鼻咽癌病人（０．３９４３±０．１６４６）或慢性鼻咽炎病人（０．３７３０±０．１５４３），其差别具统计学意义（Ｐ＜０．０００１）。同时检测ＩｇＡ／ＴＫ和ＩｇＡ／ＶＣＡ的鼻咽癌血清样品５４例，两法结果没有相关性（Ｒ＝０．１５０４，Ｐ＝０．２７７５。在鼻咽癌组中，两法没有统计学上的差异，而在非鼻咽癌组（包括一部分正常人）和慢性鼻咽炎线，则ＩｇＡ／ＴＫ的ＥＬＩＳＡ检测有较高的似然比，提示在鼻咽癌普查工作中，ＩｇＡ／ＴＫ检测对ＩｇＡ／ＶＣＡ阳性对象似乎较能排除鼻咽癌患病的可能性，从而缩小划分高危人群的范围，无疑能大大减少普查工作量，且ＥＬＩＳＡ检测方法简便，?

非小细胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶定量测定的临床价值

目的探讨非小细胞肺癌患者血清胸腺嘧啶激酶(TK)水平变化在化疗疗效及预后评估中的价值。方法采用新型非放射性酶联免疫吸附试剂盒检测非小细胞肺癌患者血清TK水平。结果化疗后非小细胞肺癌患者血清TK水平明显低于化疗前(P<0.05)。结论非小细胞肺癌患者血清TK定量测定为非小细胞肺癌治疗的疗效评价和预后检测提供一个新的方法。

人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导胸苷激酶基因治疗人膀胱癌的动物实验研究

目的:探讨带有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HSV-tk)基因的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-tk结合无毒的环氧鸟苷(GCV)对人膀胱癌的治疗作用。方法:建立人膀胱癌细胞株253JBALB/C裸小鼠移植瘤模型,采用Ad-hTERT-HSV-tk裸鼠尾静脉注射,腹腔注射GCV治疗并观察结果。通过常规病理切片观察肿瘤破坏情况及安全性;通过TUNEL染色进一步观察肿瘤的凋亡情况,免疫组化法测定增值细胞核抗原(PCNA)。结果:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组,显示出明显的肿瘤抑制作用,其肿瘤体积、重量显著低于各对照组(P<0.05),抑瘤率明显。Ad-hTERT-HSV-tk/GCV治疗组凋亡指数高于其它各组,而增殖指数却明显低于其它各组。结论:Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,可以靶向性转入人膀胱癌细胞,治疗效果显著。

基于末端脱氧核苷酸转移酶扩增DNA-铜纳米簇荧光传感检测L-组氨酸

利用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)扩增形成聚胸腺嘧啶(T)DNA模板,制备了聚T铜纳米簇(TS-CuNCs),构建了一种用于L-组氨酸(L-His)检测的荧光传感分析新方法。TdT酶在d TTP存在下合成聚T单链DNA核苷酸序列。由于胸腺嘧啶和Cu^(2+)之间的亲合力,聚T单链DNA作为合成铜纳米簇(CuNCs)的模板,加入还原剂后形成CuNCs,荧光强度增强。在L-His存在下,L-组氨酸的咪唑基与Cu^(2+)螯合形成L-His-Cu^(2+)配合物,因而进入聚胸腺嘧啶序列中的Cu^(2+)量减少,使得合成的CuNCs数量减少,导致荧光信号减弱。实验结果表明,体系荧光响应信号与L-His浓度的对数值在5.0×10^(-9)~5.0×10^(-4)mol/L范围内呈线性关系,检出限达到3.4×10^(-9)mol/L。本方法用于实际尿液样品中L-组氨酸检测的回收率为97.4%~104.6%,在生物医学及临床诊断中具有潜在应用价值。

非病毒载体介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因治疗卵巢癌的体外研究

目的 探讨靶向非病毒载体GE7在卵巢癌细胞株CAOV3细胞中的转导效率 ,及其介导的Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 (HSV1 tk) /更昔洛韦 (GCV)基因治疗系统在卵巢癌治疗中的应用。方法 构建由表皮生长因子受体 (EGFR)介导的非病毒载体GE7,分别与外源基因 [即报告基因 β 半乳糖苷酶 (β gal)和治疗基因HSV1 tk]构成载体复合物 ,体外转导CAOV3细胞 ,通过 5 溴 4 氯 3 吲哚 β D半乳糖苷 (X gal)染色、核酸分子印记杂交分析 ,观察非病毒载体GE7对外源基因 β gal及HSV1 tk基因的转导情况 ;将GCV加入转导HSV1 tk基因的CAOV3细胞 ,通过细胞生长抑制曲线、流式细胞仪分析等 ,观察其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 β gal基因的转导效率可达 80 % ,呈瞬时表达 ;加入 10mg/L的GCV时 ,转导HSV1 tk基因的CAOV3细胞的生长抑制率可达 95 % ;流式细胞仪分析显示 ,CAOV3细胞S期比例上升 ,最高达 90 % ,凋亡指数高达 30。结论 GE7载体系统能高效地将外源基因导入CAOV3细胞 ,GE7/HSV1 tk /GCV基因治疗系统在卵巢癌治疗中可能具有良好的应用前景。