TCRαβ^+CD4^-CD8^-细胞在胚胎胸腺器官培养中的发育特征

为研究TCRαβ^+CD4^- CD8^-双阴性(DN)胸腺细胞在胚胎胸腺中的发育特征,采用胚胎胸腺器官培养(FTOC)体系、免疫荧光标记与流式细胞仪检测技术,对FTOC体系中不同发育阶段(第9天和第18天)的TCRαβ^+DN细胞的增殖、分化及凋亡特性进行了分析。结果表明,抗CD3单抗能够显著促进FTOC第18天的TCRαβ^+DN细胞的增殖,对FTOC第9天的TCRαβ^+DN细胞作用相对较弱。IL-7能够促进FTOC第9天的TCRαβ^+DN细胞向TCRαβ^+CD4^+/CD8^+SP细胞分化;对FTOC第18天的TCRαβ^+DN细胞促分化作用明显减弱。胸腺基质细胞系MTEC5细胞可调节IL-7的促分化作用。同时,实验发现在FTOC体系中的TCRαβ^+DN细胞是一群不易凋亡的细胞,从而对该特殊亚群胸腺细胞的发育分化特性获得了新的认识。

IL-7对胸腺T细胞及树突状细胞体外分化发育的影响

目的:探讨IL-7对胸腺T细胞及胸腺树突状细胞分化的影响。方法:摘取15～16日龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胚胎胸腺器官培养-FTOC),分别将细胞因子IL-7和培养基滴加在胸腺小叶上,12天后收集不同条件下经FTOC培养获得的胸腺细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子CD4、CD8、CD11c、B220、Ia等的表达,通过光学显微镜观察细胞形态,通过细胞计数检测细胞数目的变化。再将经FTOC培养获得的胸腺细胞和异源的T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过MTT法检测T细胞的增殖情况。结果:细胞计数结果表明添加外源性IL-7组的胸腺细胞数目明显减少,流式细胞仪检测结果显示其中胸腺CD4-CD8-双阴性细胞及CD8+单阳性细胞比例有所增加,而CD4+CD8+双阳性细胞比例显著下降,CD4+单阳性细胞比例没有明显变化;此外,B细胞和树突状细胞、NK细胞数量均有不同程度的增加。结论:IL-7在胸腺T细胞及胸腺树突状细胞的分化发育中发挥重要的调节作用。

CCL20在胸腺CD4^＋CD25^＋T细胞发育过程中的作用及其意义

目的:研究趋化因子CCL20对小鼠胸腺CD4+CD25+双阳性T细胞发育的影响,为天然调节性T细胞调控的研究提供基础数据。方法:采用14.5d龄胚鼠胸腺进行体外培养,以流式细胞术(FCM)检测不同时间点胸腺CD4+CD25+细胞的变化,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果:体外胸腺培养的第1～6天胸腺细胞比例,细胞数量趋势变化与胸腺体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例,细胞数量的趋势变化相似;在胸腺体外培养的第1～6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%,这一发育趋势与体内结果具有一致性。在4mg/L的CCL20干预下,胸腺体外培养的第3、6天CD4+CD25+胸腺细胞分别从3.24±0.18、3.96±0.24下降至1.27±0.11、1.76±0.22(P<0.001)。结论:体外培养的CD4+CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,CCL20明显下调胸腺CD4+CD25+的表达,这将为天然调节性T细胞的调控研究提供有效的参考依据。

视黄酸对人胸腺细胞分化作用及其机理的研究

目的 :研究视黄酸调节胸腺细胞分化的作用及其机理。方法 :采用体外胸腺器官培养体系 ,在培养体系中加入视黄酸或受体拮抗剂。在培养的不同时间收集胸腺细胞 ,用荧光标记的抗 CD3、CD4、CD8抗体染色 ,并进行流式细胞仪分析 ,观察胸腺细胞成熟分化的变化。胸腺细胞抽提的 RNA采用实时定量 PCR法检测视黄酸受体 α( RARα) m RNA的表达。结果 :体外胸腺器官培养体系能支持胸腺细胞的发育成熟。 RA在培养的 2 4h促进胸腺细胞向 CD4+分化发育 ,并且该作用可被 RARα特异性拮抗剂 Ro41- 5 2 5 3所拮抗。实时定量 PCR结果显示 ,胸腺细胞表达 RARα m RNA,RA能促进 RARα m RNA的表达 ,并且 RARα m RNA表达水平与 CD4+ CD8+ 胸腺细胞百分数之间存在正相关 ( r=0 .5 93 ,P=0 .0 42 )。结论 :RA对胸腺细胞分化发育具有重要的调节作用 ,RA可能通过影响 RARαm

CD4^+CD25^+T细胞发育调控模型的建立及其意义

目的建立小鼠胸腺CD4+CD25+双阳性T细胞发育调控的模型,为天然调节性T细胞调控研究提供基础平台。方法采用14.5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺CD4+CD25+细胞的变化,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果体外胸腺培养的第1-6天胸腺细胞比例、细胞数量趋势变化与胸腺体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例、细胞数量的趋势变化相似;在胸腺体外培养的第1-6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%,这一发育趋势与体内结果具有一致性。结论体外培养的CD4+CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,这将为天然调节性T细胞的调控研究提供有效的参考依据。