TIM-1-Fc融合蛋白对哮喘小鼠Th1/Th2和Th17/Treg免疫失衡的调节

目的制备T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域1(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-1,TIM-1)-Fc融合蛋白并探讨TIM-1-Fc融合蛋白对卵白蛋白(ovabumin,OVA)诱导的哮喘小鼠的干预作用及潜在作用机制。方法通过基因工程技术获得TIM-1-Fc融合蛋白。采用腹腔注射OVA氢氧化铝溶液致敏建立过敏性哮喘小鼠模型,随机分为对照组、哮喘组和TIM-1-Fc干预组。每次干预前20 min,使用40μL卵白蛋白生理盐水溶液(OVA-NS)滴鼻,TIM-1-Fc融合蛋白干预包括TIM-1-Fc滴鼻组(每只小鼠每次给予1μg/40μL TIM-1-Fc滴鼻)和TIM-1-Fc注射组(每只小鼠每次给予6μg/200μL TIM-1-Fc腹腔注射),每天1次,连续7 d,对照组用生理盐水替代。采用苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;采用流式细胞术检测小鼠外周血中辅助性T细胞2(type 2 T helper cells,Th2)、辅助性T细胞17(type 17 T helper cells,Th17)和调节性T细胞(Treg)比例及相关细胞因子水平。结果成功构建TIM-1-Fc融合蛋白,成功构建OVA诱导的过敏性哮喘小鼠模型。与哮喘组相比,TIM-1-Fc融合蛋白干预后显著减轻了哮喘小鼠气道炎性损伤和肺组织损伤;TIM-1-Fc融合蛋白干预能显著降低外周血中TIM-1^(+)CD4^(+)T细胞和TIM-1^(+)Th17细胞比例,使TIM-1^(+)Treg细胞增多,显著降低Th2、Th17细胞比例,提高Treg细胞比例,调节哮喘中Th1/Th2和Th17/Treg免疫失衡。结论TIM-1-Fc融合蛋白改善OVA诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症和肺组织损伤,其作用机制可能与TIM-1-Fc融合蛋白对Th1/Th2和Th17/Treg的免疫调节有关。

硫氧还蛋白1、活化T细胞趋化因子在脑梗死病人血清中的水平及与认知功能、预后的关系

目的探究硫氧还蛋白1(Trx1)、活化T细胞趋化因子(RANTES)在脑梗死病人血清中的水平及与认知功能、预后的关系。方法选取2020年3月至2022年6月在无锡市人民医院诊治的168例脑梗死病人作为观察组,及同期165例健康体检志愿者作为对照组进行研究。参照蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分对所有病人的认知能力进行评估,分为认知功能障碍组112例,认知功能正常组56例;根据改良Rankin量表(MRS)评分分为预后良好组90例,预后不良组78例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清Trx1、RANTES水平;Spearman法分析脑梗死病人血清中Trx1、RANTES水平与MoCA评分的相关性;对影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的因素进行logistic回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清Trx1、RANTES水平对脑梗死病人发生认知功能障碍的诊断价值。结果与对照组相比,观察组病人血清Trx1水平显著降低[(6.78±1.62)μg/L比(11.05±1.89)μg/L,P<0.05],RANTES水平明显升高[(35.12±4.84)ng/L比(23.51±3.28)ng/L,P<0.05];认知功能障碍组脑梗死病人血清Trx1水平明显低于认知功能正常组[(6.02±1.59)μg/L比(8.30±1.68)μg/L,P<0.05],RANTES水平显著高于认知功能正常组[(38.57±5.25)ng/L比(28.22±4.02)ng/L,P<0.05];与预后良好组对比,预后不良组脑梗死病人血清Trx1水平明显降低[(5.42±1.55)μg/L比(7.96±1.68)μg/L,P<0.05],血清RANTES水平显著升高[(38.58±5.29)ng/L比(32.12±4.45)ng/L,P<0.05];脑梗死病人血清Trx1水平与MoCA评分呈正相关(rs=0.40,P<0.05),RANTES水平与MoCA评分呈负相关(rs=−0.56,P<0.05);logistic回归分析显示,受教育程度、Trx1是影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的保护因素(P<0.05),脑梗死区域、RANTES是影响脑梗死病人发生认知功能障碍及预后的危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清Trx1、RANTES、二者联合诊断脑梗死病人发生认知功能障碍的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.82、0.94、0.97,二者联合诊断均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Trx1)=4.00,P<0.001;Z_(二者联合-RANTES)=2.03,P=0.021)。结论脑梗死病人血清Trx1水平降低,RANTES水平升高,二者均与认知功能及预后有密切关系。

帕金森病患者免疫球蛋白、Th9亚群水平变化及其与IGF-1、S-100B蛋白的相关性

目的:研究帕金森病(PD)患者免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)、辅助性T细胞亚群Th9水平变化及其与胰岛素生长因子-1(IGF-1)、S-100B蛋白的相关性。方法:选取2020年12月至2022年12月期间在河北省中医院确诊的108例PD患者,将其作为研究组,并根据患者病变程度分为轻度组(35例)、中度组(44例)和重度组(29例);另选108例健康成人作为对照组。对比研究组和对照组免疫球蛋白和Th9亚群水平,以及轻度组、中度组及重度组免疫球蛋白、Th9亚群、IGF-1和S-100B蛋白水平,采用Pearson相关性分析免疫球蛋白、Th9亚群和IGF-1、S-100B蛋白的相关性。采用Spearman相关性分析PD患者疾病程度和所有差异指标间的相关性。结果:研究组IgM水平较对照组低,且重度组低于中度组,中度组低于轻度组(P<0.05);研究组IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平较对照组高,且重度组高于中度组,中度组高于轻度组(P<0.05)。重度组IGF-1水平低于中度组,中度组低于轻度组;重度组S-100B蛋白水平高于中度组,中度组高于轻度组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PD患者IgM水平与IGF-1水平呈正相关,与S-100B蛋白水平呈负相关;IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平均与IGF-1水平呈负相关,与S-100B蛋白水平呈正相关(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,PD患者疾病程度与IgM、IGF-1水平呈负相关,与S-100B蛋白、IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平呈正相关(P<0.05)。结论:PD患者IgM水平降低,IgG、IgA、Th9亚群水平升高,且其水平变化与IGF-1、S-100B明显相关,可以用于评估病情的严重程度。

梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。

川崎病患儿血清CaN、NFATc1水平与免疫球蛋白治疗反应的相关性

目的探讨川崎病患儿血清钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)水平与免疫球蛋白(IVIG)治疗反应的相关性,以期为临床改善治疗效果提供理论参考。方法采用前瞻性研究,选取平顶山市第一人民医院2018年1月至2023年1月100例川崎病患儿作为研究对象,检测入院时患儿的血清CaN、NFATc1水平,同时收集患儿的一般资料,根据IVIG治疗反应情况分为IVIG治疗敏感组与IVIG治疗无反应组。比较两组患儿的血清CaN、NFATc1水平及一般资料,采用点二列相关性检验血清CaN、NFATc1水平与IVIG治疗反应之间的关系,并采用logistic回归性检验二者对IVIG治疗反应的影响。结果100例患儿中有20例为IVIG治疗无反应,占比为20%(20/100)。IVIG治疗无反应组患儿入院时血清CaN、NFATc1及C反应蛋白(CRP)水平高于IVIG治疗敏感组(P<0.05)。经点二列相关性检验显示血清CaN、NFATc1水平与川崎病患儿IVIG治疗无反应存在正相关关系(r>0,P<0.05)。经logistic回归性分析检验显示高水平血清CaN、血清NFATc1是导致患儿IVIG治疗无反应的影响因素(P<0.05)。结论川崎病患儿IVIG治疗无反应发生风险较高,且与血清CaN、血清NFATc1存在关系,二者的高水平表达是导致IVIG治疗无反应的影响因素。

重组人胸腺素α_1融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化(英文)

为提高人胸腺素α1(Tα1)融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,研究了本实验室构建的pET39-Tα1重组质粒在E.coli BL21(DE3)宿主菌中的表达条件。经SDS-PAGE和凝胶成像系统GDS-8 000分析结果表明,重组菌以LB为培养基,卡那霉素浓度为50 mg/L,开始诱导时的菌体密度为OD600=0.5,所加IPTG的浓度为0.5 mmol/L,27.5℃摇床200 r/min振荡诱导培养10 h时,可在周至空间中获得高效表达的可溶的Tα1融合蛋白,占周质蛋白总量的64.7%,为下一步纯化工作提供了方便。

胸腺素α_1-硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

胸腺素α1(thymosinalpha 1,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛。为了大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成Tα1基因 ,克隆于 pUC19的EcoRI和PstI位点 ,经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克隆入 pThioHisA的EcoRI和PstI位点 ,转化大肠杆菌TOP10菌种 ,酶切鉴定证明正确后 ,经 1mmol/LIPTG诱导 4h ,获得硫氧还蛋白与Tα1④的融合表达 ,并经Westernblot分析证实。用离子交换柱层析可纯化出硫氧还蛋白与Tα1④的融合蛋白 ,利用3H -TdR掺入法证实 ,该融合蛋白具有刺激小鼠脾淋巴细胞的活性。

补料分批培养大肠杆菌表达胸腺素α_1融合蛋白

在摇瓶培养含有trymosin α1基因的重组pET32a质粒的工程菌BL21表达胸腺素α1融合蛋白的基础上，确定了分批发酵的基本培养条件．分别在B．Braun 5L自控发酵罐中进行了分批发酵和补料分批发酵，针对发酵过程中工程菌生长较旺盛而表达量小的情况，改变了培养方式．比较了不同的培养条件和方式下的工程菌的生长状况和融合蛋白的表达量，得到了高产量和高表达的培养条件：在培养过程中始终保持DO值〉30％，在对数生长期溶氧供给不足的情况下，提高搅拌速度到最大并适当补充纯氧；（2）限制性流加葡萄糖；（3）培养温度35℃，诱导表达温度30℃；（4）对数中期诱导，表达时间为4～5h；（5）在诱导前加入新鲜培养基，稀释发酵液一倍，并以稀释后的发酵液体积为准加入诱导剂．最终使菌体的干重达10g／L，融合蛋白表达量达23．25％．

骨形态构建蛋白2型受体下调单核细胞趋化蛋白1/CC类趋化因子受体2通路对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2平衡的影响

目的探究骨形态构建蛋白2型受体(BMPR2)对小鼠哮喘模型气道炎症和Th1/Th2平衡的影响及其机制。方法于2021年9月至2022年11月选用24只C57BL/6小鼠尾静脉注射BMPR2腺病毒,随后卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;采用随机数字表法分为对照组(生理盐水替代OVA造模)、OVA模型组(OVA诱导小鼠哮喘模型)、OVA+载体(Vector)组(空载慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠)、OVA+BMPR2组(BMPR2过表达慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠),每组6只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。免疫组织化学检测肺组织BMPR2表达水平;苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变;瑞氏染色后计数BALF中各类炎症细胞数目;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测BALF中白细胞介素(IL)-4,IL-5和IL-13炎症因子水平;蛋白质印迹法检测肺组织和气道上皮细胞16HBE中BMPR2、单核细胞趋化蛋白-1(MCP1)及其受体CC类趋化因子受体2(CCR2)蛋白表达水平。免疫共沉淀实验检测BMPR2与MCP1相互作用。结果与对照组相比,OVA模型组肺组织BMPR2(0.36±0.05比1.04±0.04)显著降低(P<0.01);小鼠肺泡破坏程度严重,肺组织有大量的淋巴细胞浸润;BALF中炎症细胞总数[(93.25±9.32)×10^(4)个/毫升比(4.79±0.41)×10^(4)个/毫升,P<0.001]、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均升高;Th1相关炎症因子γ干扰素(IFN-γ)水平降低,Th2相关炎症因子IL-4,IL-5和IL-13水平升高。过表达BMPR2可降低肺泡破坏程度和淋巴细胞浸润程度。与OVA+Vector组相比,OVA+BMPR2组BALF中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均降低;ELISA结果表明,OVA+BMPR2组BALF中IFN-γ水平升高,IL-4,IL-5和IL-13水平降低,提示过表达BMPR2可上调Th1百分比,下调Th2细胞百分比。进一步研究表明,BMPR2过表达显著下调了MCP1及其受体CCR2的表达水平,且BMPR2与MCP1存在相互作用。结论BMPR2可通过下调MCP1/CCR2通路降低哮喘小鼠气道炎症,并调节Th1/Th2平衡。

卵巢癌患者外周血HDAC2、PD-L1蛋白及调节性T细胞水平与临床病理特征和预后的关系分析

目的探讨卵巢癌(OC)患者外周血组蛋白脱乙酰基酶(HDAC2)、程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白及调节性T细胞(Treg)水平与临床病理特征和预后的关系。方法选取2018年7月至2019年9月在张家口市第一医院确诊治疗的60例OC患者作为研究组,根据随访3年患者生存情况分为生存组(n=43)、死亡组(n=17);另选取同期同一医院确诊的60例卵巢良性肿瘤患者作为对照组。采用流式细胞术检测外周血Treg、辅助性T细胞17(Th17)和Th17/Treg水平,采用酶联免疫吸附试验法检测HDAC2和PD-L1蛋白水平。分析Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平与临床病理特征间的关系;治疗后随访3年,分析比较生存组和死亡组患者外周血Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平;采用Logistic回归分析OC患者预后的影响因素。结果研究组患者Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1水平均显著高于对照组(P<0.05);OCⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平均依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。临床分期、残存病灶大小、淋巴结转移、Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平均为OC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白参与并影响OC的发展,与患者预后密切相关。

重组糖蛋白激素β5/α2调控cAMP/PKA/CREB通路促进3T3-L1细胞脂肪分解的作用及机制研究

目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内甘油三酯(TG)及培养上清中甘油的水平,油红O染色观察脂滴变化。Western blot检测各组脂肪细胞中HSL和ATGL脂解蛋白的表达水平。不同浓度rCGH加或不加PKA抑制剂H89对已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行联合干预实验,将培养细胞分为对照组、H89预处理组、1μmol·L^(-1)rCGH组和(1μmol·L^(-1)rCGH+H89)联合干预组。酶法测定胞内TG及游离甘油的含量,Western blot检测CREB及脂解相关蛋白的表达。结果不同浓度rCGH(0.25、0.5、1、2μmol·L^(-1))对脂肪细胞细胞活力无显著影响(P>0.05);与对照组相比,rCGH处理显著降低了脂滴大小和细胞内TG含量,同时显著升高了细胞上清液中的甘油浓度。rCGH处理还刺激了p-HSL、ATGL和p-PKA的蛋白表达。此外,加入PKA抑制剂H89,减弱了rCGH对游离甘油水平、细胞内TG含量以及p-HSL、p-PLIN1和p-CREB表达的影响。结论rCGH通过上调HSL、ATGL和PKA活性促进3T3-L1脂肪细胞的脂质分解,促进甘油释放,抑制TG合成和脂质积累,其作用机制与cAMP/PKA/CREB信号通路激活有关。

系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞Mg^(2+)转运蛋白1水平表达及临床价值研究

目的探讨Mg^(2+)转运蛋白1(magnesium transporter protein 1,MagT1)在系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞中的表达情况,并阐述其临床意义。方法选取西双版纳傣族自治州人民医院2019年1月~2021年6月收治的79例SLE患者作为研究对象,依据SLE疾病活动指数(SLE disease activityindex,SLEDAI)评分将SLE患者分为中重度组(SLEDAI≥10,n=32)和轻度组(SLEDAI<10,n=47),另选取同期体检健康者40例作为对照组。记录患者临床生化和血清免疫相关指标水平;采用实时定量PCR(quantitative realtimePCR,qRT-PCR)法和Western Blot法检测患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达情况;Pearson相关性分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白与生化免疫相关指标表达的关系;绘制受试者工作特征(receiver operatingcharacteristic,ROC)曲线分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达对SLE及其严重程度的诊断价值。结果与对照组比较,轻度组和中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA[0.65(0.36,0.99),0.23(0.07,0.36)vs 1.20(0.83,1.37)]和MagT1蛋白[0.35(0.22,0.42),0.22(0.15,0.27)vs 0.53(0.40,0.63)]表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.247,7.078;5.128,7.257,均P<0.05);与轻度组比较,中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.169,3.599,均P<0.05)。Pearson相关性结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平与血清血红蛋白(hemoglobin,HGB)及补体3(complement 3,C3)和补体4(complement 4,C4)水平呈正相关(r=0.496,0.637,0.588,均P<0.05);与红细胞沉降速率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、超敏C反应蛋白(hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)、免疫球蛋白(immunoglobulin G,IgG)水平和SLEDAI呈负相关(r=-0.598,-0.476,-0.646,-0.514,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平诊断SLE曲线下面积为0.893(95%CI:0.838~0.948),敏感度和特异度分别为90.0%,67.1%,诊断SLE严重程度曲线下面积为0.739(95%CI:0.631~0.848),敏感度和特异度分别为57.4%,84.4%。结论外周血T淋巴细胞MagT1在SLE患者中表达下调,且与SLE严重程度呈负相关,对SLE诊断和病情严重程度具有一定的诊断价值。

抗PD-L1/TGF-βR融合蛋白(SHR-1701)增强弱淋巴细胞恢复力型肺癌免疫治疗敏感性及其机制研究

背景与目的目前已经研发出第二代程序性死亡受体1/程序性死亡配体1(programmed cell death-protein 1/programmed death-ligand 1,PD-1/PD-L1)抑制剂用于同时阻断PD-1/PD-L1和转化生长因子β/转化生长因子β受体(transforming growth factor-beta/transforming growth factor-beta receptor,TGF-β/TGF-βR),例如bintrafusp alfa(M7824)、SHR-1701和YM 101。因此,我们有必要确定对PD-1/PD-L1抑制剂耐药但对双抗药物敏感的肺癌患者的预测因素。本研究的目的是寻找这种预测因子。方法通过多因素Cox回归模型研究肺癌患者接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗后的临床结局与其淋巴细胞恢复能力之间的相关性。通过慢病毒转染使小鼠CMT167肺癌细胞系稳定表达萤火虫荧光素酶基因,并原位种植在同源小鼠的肺组织。利用生物发光成像、流式细胞术和免疫组织化学技术测定免疫治疗的有效性及肿瘤浸润免疫细胞的功能。结果对于接受抗PD-1/PD-L1抗体治疗的肺癌患者,弱淋巴细胞恢复力与较短的无进展生存期(PFS;P<0.001)、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的累积及外周血中CD8+T细胞的减少有关。化疗后淋巴细胞恢复力较弱的小鼠的肿瘤和外周免疫器官中CD8+T细胞与Treg细胞处于非平衡状态。这类小鼠对抗PD-1抗体无应答,但对抗PD-L1/TGFβR融合蛋白(SHR-1701)敏感。同时,SHR-1701(而非抗PD-1抗体)显著增强了淋巴细胞恢复力受损患者外周血CD8+T细胞中IFN-γ的产生和Ki-67的表达。结论弱淋巴细胞恢复力和既往化疗后持续性淋巴细胞减少的肺癌患者对抗PD-1/PD-L1抗体耐药,但可能对第二代药物(如SHR-1701)敏感。

IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用

目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。

COPD急性加重期患者外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA及血清cTnT、尿酸水平变化分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者外周血单个核细胞中细胞因子信号抑制蛋白-1(SOCS-1)、Toll样受体4(TLR4)mRNA水平及血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)、尿酸水平变化。方法收集COPD急性加重期(组)患者70例,COPD稳定期(组)患者40例,对照组健康志愿者40名。检测外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度;行肺功能检查并记录相关指标(FEV1、FEV1%、FEV1/FVC%)。对COPD急性加重期患者进行1 a随访,分为预后不良组和预后良好组。对外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA水平、血清cTnT、尿酸浓度行Pearson相关性分析,并对COPD急性加重期患者预后评估价值进行ROC曲线分析。结果COPD急性加重期组SOCS-1 mRNA表达水平明显低于COPD稳定期组、对照组,TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度明显高于COPD稳定期组和对照组(均P<0.01)。COPD急性加重期组FEV1、FEV1%、FEV1/FVC%明显低于COPD稳定期组和对照组(P<0.05)。COPD急性加重期患者FEV1/FVC%与外周血单个核细胞SOCS-1 mRNA表达水平呈正相关关系(P<0.01),与外周血单个核细胞TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度呈负相关关系(P<0.01)。预后不良组SOCS-1 mRNA水平明显低于预后良好组,TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸浓度明显高于预后良好组(P<0.05)。外周血单个核细胞SOCS-1、TLR4 mRNA水平及血清cTnT、尿酸联合检测对COPD急性加重期患者预后具有较高的评估价值。结论COPD急性加重期患者SOCS-1低表达,TLR4、cTnT、尿酸高表达,且与肺功能水平密切相关,联合检测对患者预后具有较高的评估价值。

血清Th1/Th2、Hmga1、PKM2表达水平及其联合HPV诊断宫颈癌的价值

目的探讨辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)、高迁移率族蛋白A1(Hmga1)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)水平及联合人乳头状瘤病毒(HPV)对宫颈癌的诊断价值。方法选取2022年3月至2023年3月在河南省中医院就诊的186例宫颈疾病患者作为研究对象,根据疾病类型分为宫颈炎组(n=62)、宫颈癌前病变组(n=58)和宫颈癌组(n=66),另选取60例同期健康体检者作为对照组,比较四组及宫颈癌前病变组和宫颈癌组合并、未合并HPV感染患者入院时Th1/Th2因子[血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)]、Hmga1、PKM2水平,分析血清Th1/Th2、Hmga1、PKM2水平表达与肿瘤病理特征的关系及联合HPV对宫颈癌合并HPV感染的诊断价值。结果四组受检者入院(体检)时的血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2水平比较,宫颈癌组>宫颈癌前病变组>宫颈炎组>对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);与未合并HPV感染患者比较,宫颈癌前病变组、宫颈癌组合并HPV感染患者入院时的血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05);不同肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移宫颈癌合并HPV感染患者入院时的血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);HPV感染对宫颈癌诊断灵敏度为84.85%(54/66),特异度为72.41%(16/28),准确度为56.45%(70/124);血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、Hmga1、PKM2、HPV感染对宫颈癌、宫颈癌前病变诊断AUC分别为0.761、0.730、0.745、0.806、0.819、0.707、0.786,HPV感染联合各血清指标诊断AUC为0.908,大于单一指标诊断。结论血清Th1/Th2、Hmga1、PKM2水平检测对宫颈癌具有一定的诊断价值,临床可通过其联合HPV感染情况早期辅助诊断宫颈病变,为临床针对性制定干预方案提供参考。

HBV相关慢加急性肝衰竭患者sPD-1/sPD-L1与T细胞的相关性分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)患者病程中可溶性程序性死亡蛋白1(soluble Programmed cell death protein1,sPD-1)、可溶性程序性死亡蛋白配体-1(soluble Programmed cell death ligand1,sPD-L1)、T淋巴细胞、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达水平及各指标间的相关性。方法:收集71例确诊为HBV-ACLF患者的资料及外周血标本,根据研究对象28 d的随访结果,分为存活组40例和死亡组31例。采用流式细胞术检测研究对象外周血CD4+T及CD8+T细胞的比例。采用流式液相多重蛋白定量(cytometric bead array,CBA)技术检测sPD-1和sPD-L1的表达。采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测TGF-β和IL-10的表达。Pearson法分析HBVACLF患者血清中sPD-1/sPD-L1与患者MELD评分、T细胞及细胞因子水平的相关性。结果:死亡组外周血及血清中CD4+T细胞百分比、sPD-1、sPD-L1、IL-10和TGF-β高于存活组,而CD8+T细胞百分比低于存活组(P均<0.05)。经相关性分析显示,sPD-1水平与IL-10、TGF-β和CD4+T细胞百分比呈正相关,与CD8+T细胞百分比呈负相关。sPD-L1水平与终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分、IL-10、TGF-β和CD4+T呈正相关,与CD8+T细胞比例呈负相关(P均<0.05)。结论:sPD-1/sPDL1可能参与了HBV-ACLF发生、发展过程中的免疫应答,通过综合考虑患者sPD-1和sPD-L1水平可以为HBV-ACLF患者开展及时有效的治疗提供一定的参考。

蛋白激酶全抑制分析揭示KG-1细胞增殖的分子机制

目的:通过分析KG-1细胞对各种蛋白激酶抑制剂的反应,探讨其增殖的分子机制。方法:采用CCK-8法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot检测各种蛋白激酶抑制剂对KG-1细胞增殖、相关基因mRNA表达水平以及FGFR1下游信号通路蛋白磷酸化水平的影响。结果:NVP-BGJ398和PD173074有效抑制KG-1细胞的增殖,表明FGFR及其下游信号通路在KG-1细胞增殖过程中具有关键作用。使用FGFR抑制剂处理后,p-FGFR1和p-STAT5水平显著下降(P<0.001),p-Akt水平稍有下降(P<0.05),并未影响p-ERK水平(P>0.05)。结论:FGFR1OP2-FGFR1主要作用于下游STAT5信号通路,以促进细胞增殖。蛋白激酶全抑制分析是一种可靠而直接的方法,可用于确定癌细胞增殖的分子机制。

术前血清sTim-3、HMGB1水平与肌层浸润性膀胱癌根治术后预后的关系

目的探讨术前血清可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(sTim-3)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平与肌层浸润性膀胱癌(MIBC)根治术后预后的关系。方法选取2019年6月至2020年6月该院收治的85例MIBC患者作为MIBC组,另选取同期在该院体检的85例健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有受试者血清sTim-3、HMGB1水平;根据血清sTim-3、HMGB1水平均值将MIBC患者分为sTim-3高表达组(≥均值)和sTim-3低表达组(<均值)、HMGB1高表达组(≥均值)和HMGB1低表达组(<均值)。对比各组血清sTim-3、HMGB1水平,以及不同sTim-3、HMGB1水平与MIBC患者病理特征的关系。采用Pearson相关分析MIBC患者血清sTim-3水平与血清HMGB1水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清sTim-3、HMGB1水平MIBC患者的生存预后情况。结果MIBC组患者血清sTim-3、HMGB1水平高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MIBC组患者血清sTim-3水平与血清HMGB1水平呈正相关(r=0.405,P<0.001)。不同年龄、性别、肿瘤最大径及是否发生淋巴结转移MIBC患者的血清sTim-3、HMGB1水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而不同TNM分期、组织分级、淋巴结状态MIBC患者的血清sTim-3、HMGB1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据血清sTim-3、HMGB1水平的均值将85例MIBC患者分为sTim-3高表达组(≥3.67 ng/mL,n=44)和sTim-3低表达组(<3.67 ng/mL,n=41)、HMGB1高表达组(≥14.91 ng/mL,n=47)和HMGB1低表达组(<14.91 ng/mL,n=38)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,sTim-3低表达组患者的3年生存曲线高于sTim-3高表达组患者(Log-rankχ^(2)=6.175,P=0.013),HMGB1低表达组患者的3年生存曲线高于HMGB1高表达组患者(Log-rankχ^(2)=4.056,P=0.044)。sTim-3高表达组与sTim-3低表达组MIBC患者的3年生存率分别为52.27%、78.05%,HMGB1高表达组与HMGB1低表达组MIBC患者3年生存率分别为55.32%、76.31%。结论血清sTim-3、HMGB1在MIBC患者中呈高表达,且二者水平呈正相关,可作为评估MIBC患者预后不良的重要指标。

腰椎椎管狭窄症黄韧带组织中高迁移率族蛋白B1的表达及其与术后疾病转归的相关性

目的探讨腰椎椎管狭窄症(LSS)患者黄韧带组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平与术后疾病转归的相关性。方法选取2021年2月—2022年2月唐山市第二医院收治的232例接受经椎间孔入路腰椎椎间融合术(TLIF)治疗的LSS患者进行前瞻性队列研究,收集术中黄韧带组织并测定其中HMGB1表达水平,根据HMGB1水平四分位数将患者分为4组,每组58例。术后1年采用MacNab标准评估疾病转归情况,分析黄韧带组织中HMGB1表达水平对LSS患者术后1年疾病转归的影响与预测价值。结果所有患者术后1年疗效优良率为78.88%。年龄、是否合并糖尿病、是否合并骨质疏松症、不同Schizas分型及不同黄韧带组织中HMGB1表达水平是患者术后疗效的影响因素。经Kendall’s tau-b相关性检验发现,黄韧带组织中HMGB1表达水平与Schizas分型呈正相关(r=0.340,P<0.001),与术后1年MacNab标准分级呈负相关(r=-0.316,P<0.001)。经分层回归分析发现,校正了上述因素后,黄韧带组织中HMGB1高表达是LSS患者术后转归不良的独立危险因子。绘制受试者工作特征(ROC)曲线与决策曲线发现,黄韧带组织中HMGB1表达水平对LSS患者术后疾病转归具有一定预测价值。结论黄韧带组织中HMGB1表达水平与LSS患者Schizas分型有关,对患者术后疾病转归有一定预测价值。