胸腺素β4联合水胶体敷料对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合及p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响

目的 探讨胸腺素β4(thymosin β4,Tβ4)联合水胶体敷料对深Ⅱ度烧伤大鼠早期创面愈合及p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号传导通路的影响。方法 选取常规适应性喂养的健康Wister雄性大鼠40只作为研究对象,随机抽取10只作为对照组,其余30只按照随机数字表法分为烧伤组、Tβ4+水胶体敷料组、p38MAPK激动剂组,每组10只。除对照组外,其余大鼠均制作深Ⅱ度烧伤模型,造模成功后进行后续试验,Tβ4+水胶体敷料组给予外涂6μg Tβ4+安普贴贴敷,p38MAPK激动剂组给予外涂6μg Tβ4+安普贴贴敷+外涂p79350(1μg/kg),烧伤组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液外涂。给药3、7、10、14 d对创面进行拍照,采用MoticMed6软件及Photoshop软件处理照片并计算各组大鼠早期创面愈合率;免疫组织化学法检测创面肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)等炎症因子水平;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测创面转化生长因子β1蛋白(transforming growth factor β1 protein, TGF-β1)mRNA、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blotting, WB)检测p38MAPK信号传导通路关键蛋白p38MAPK、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)、半胱氨酸蛋白酶3(cysteine protease 3,caspase-3)表达情况。结果 给药3、7、10、14 d后,Tβ4+水胶体敷料组的创面愈合率均高于烧伤组和p38MAPK激动剂组(P<0.05)。与对照组比较,烧伤组、Tβ4+水胶体敷料组、p38MAPK激动剂组各时点TNF-α、IL-10水平均较高(P<0.05);给药后12、24、48 h,烧伤组、p38MAPK激动剂组TNF-α水平高于Tβ4+水胶体敷料料组(P<0.05),IL-10水平低于Tβ4+水胶体敷料组(P<0.05);而烧伤组、p38MAPK激动剂组各时点TNF-α、IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,烧伤组、Tβ4+水胶体敷料组、p38MAPK激动剂组各时间点TGF-β1 mRNA、VEGF mRNA表达均上调(P<0.05);与烧伤组比较,Tβ4+水胶体敷料组各时间点TGF-β1 mRNA表达均下调(P<0.05)、VEGF mRNA表达均上调(P<0.05);烧伤组、p38MAPK激动剂组各时间点TGF-β1 mRNA、VEGF mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,烧伤组、Tβ4+水胶体敷料组、p38MAPK激动剂组p38MAPK、NF-κB、caspase-3蛋白表达量均较高(P<0.05);与烧伤组比较,Tβ4+水胶体敷料组p38MAPK、NF-κB、caspase-3蛋白表达量均较低(P<0.05);但烧伤组、p38MAPK激动剂组p38MAPK、NF-κB、caspase-3蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 胸腺素β4联合水胶体敷料有助于促进深Ⅱ度烧伤创面愈合,其机制可能与抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路、降低炎性因子表达有关。

重组人胸腺素β4对急性放射损伤小鼠多组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响

目的探讨重组人胸腺素β4(rh-Tβ4)对急性放射损伤小鼠小肠、肺和脑组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响。方法C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组、放射损伤模型组和模型+rh-Tβ4组。8 Gy 60Coγ射线单次全身照射小鼠制备急性放射损伤模型,模型+rh-Tβ4组于照射后24 h立即ip给予rh-Tβ45μg·kg^(-1),每天1次,连续3 d。用放射免疫法检测小鼠小肠、肺和脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL^(-1)8)、IL-4、IL^(-1)3和转化生长因子β(TGF-β)等炎症细胞因子含量,用炎症小体和凋亡PCR芯片分别检测各组织中炎症小体和凋亡相关差异基因,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证部分差异基因。结果与正常对照组相比,模型组小鼠小肠、肺及脑组织中TNF-α,TGF-β和IL^(-1)8含量显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺及脑组织中TNF-α含量显著降低(P<0.05),小肠和脑组织中TGF-β和IL^(-1)8含量显著降低(P<0.05,P<0.01)。炎症小体PCR芯片结果显示,与正常对照组相比,模型组小鼠小肠、肺和脑组织中差异基因分别为13,9和11个;与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为1,4和20个;与正常对照组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组组织中差异基因分别为5,3和3个。RT-qPCR验证结果显示,组间存在显著差异且与PCR芯片变化趋势一致的基因为:小肠组织中,模型组炎症小体相关基因炎症小体负向调节基因Bcl2样1(Bcl2l1)mRNA较正常对照组显著下调(P<0.01),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著上调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异;脑组织中,模型组炎症小体相关基因NLR家族凋亡抑制蛋白1(Naip1)、炎症小体负向调节基因MEFV先天免疫调节因子(Mefv)及肿瘤坏死因子配体超家族成员11(Tnfsf11)mRNA较正常对照组显著上调(P<0.05);模型+rh-Tβ4组Tnfsf11 mRNA较模型组显著下调(P<0.05)。凋亡PCR芯片结果显示,与正常对照组相比,模型组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为3,6和12个,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为10,4和1个;与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠和肺组织中无差异基因,脑组织中差异基因4个。RT-qPCR验证结果示,组间存在显著差异且与PCR芯片变化趋势一致的基因为:肺组织中,模型组抗凋亡基因肿瘤坏死因子配体超家族成员10(Tnfsf10)mRNA较正常对照组显著上调(P<0.01),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著下调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异;模型组及模型+rh-Tβ4组抗凋亡基因CD40配体(Cd40lg)mRNA较正常对照组显著下调(P<0.01);模型组促凋亡基因凋亡相关因子配体(Fasl)较正常对照组显著下调(P<0.05),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著上调(P<0.05)。脑组织中,模型组抗凋亡基因Tnfsf10 mRNA较正常对照组显著上调(P<0.05);模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著下调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异;模型组抗凋亡基因Cd40lg mRNA较正常对照组显著下调(P<0.05),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著上调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异。结论rh-Tβ4抑制照射所致促炎细胞因子表达,并可调节炎症小体和凋亡相关基因表达。

胸腺素β10与人类恶性肿瘤关系研究进展

胸腺素β10(TMSB10)对细胞迁移的G-肌动蛋白具有较高亲和力,是一种肌动蛋白结合蛋白。TMSB10在促进细胞迁移、血管生成、抗炎和抗凋亡作用、促进伤口愈合中发挥着重要作用。TMSB10在多种类型实体肿瘤组织中,有明显升高表现,而且这一物质在肿瘤发生、转移、侵袭及凋亡中,均发挥着重要作用。可以说,TMSB10水平直接影响肿瘤分期,同时影响患者预后情况,可能作为预测患者不良预后的独立危险因素,并有望成为潜在的肿瘤治疗靶点。本研究基于国内外研究成果,对胸腺素β10与人类恶性肿瘤关系进行探索。

突触素、胸腺素β4与非小细胞肺癌病理特征的关系

目的探讨突触素(SYN)、胸腺β4(Tβ4)与非小细胞肺癌(NSCLC)病理特征的关系。方法选取2020年3月~2021年3月收治的NSCLC患者96例,均经病理确诊。通过SYN、Tβ4表达分为观察组和对照组。分析两组SYN、Tβ4表达及SYN、Tβ4与病理特征及预后的关系。结果观察组SYN阳性表达率低于对照组,观察组Tβ4阳性表达率高于对照组(P<0.05);NSCLC组织中淋巴结转移者:TNM分期(Ⅲ期)者SYN阴性占比较高(P<0.05);TNM分期(Ⅲ期)者Tβ4阴性占比较高(P<0.05)。预后良好69例(71.88%),预后不良27例(28.13%)。多元Logistic分析;淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期、SYN阴性表达、Tβ4阳性表达是影响NSCLC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论Tβ4、SYN表达与NSCLC淋巴结转移、TNM分期密切关系,通过检测两者水平,可为临床诊疗NSCLC提高可靠资料。

胸腺素β4在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨胸腺素β4 (Tβ4)在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用免疫组织化学染色法检测67例女性乳腺癌患者癌组织中Tβ4蛋白表达情况。人乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、siRNA-control组和siRNA-Tβ4组,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Tβ4 mRNA表达水平,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭细胞数,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率。结果:67例乳腺癌患者中有59例患者癌组织中Tβ4呈阳性表达(88.06%)。Tβ4阳性表达率与乳腺癌患者的T分期、N分期和临床分期有关联(P<0.05),与患者年龄、雌激素受体(ER)表达、人表皮生长因子受体2 (HER2)表达和Ki-67表达无关联(P>0.05)。与空白对照组和siRNA-control组比较,siRNA-T β 4组细胞中Tβ4 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01)。结论:Tβ4在乳腺癌细胞中呈高水平表达,Tβ4表达与乳腺癌患者T分期、N分期和临床分期有密切关联,靶向沉默Tβ4可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

胸腺素β4在治疗缺血性脑卒中的作用机制及进展

胸腺素β4是一种由43个氨基酸残基组成的小分子肽,存在于各种组织中,在大脑、肝脏、肾脏、睾丸、心肌、血小板和白细胞中高度表达,其中Tβ4的前四个氨基酸具有调节抗炎和抗纤维化作用:1~15氨基酸片段可抑制细胞凋亡,减少对细胞的毒性诱导损伤。由氨基酸17~23编码的活性片段触发血管生成和毛囊生长。胸腺素β4作为人体内主要的肌动蛋白调节分子之一,具有多重生物学功能,在以往研究中已证实其具有促进组织再生、重塑、创伤愈合的作用,在维持肌动蛋白平衡、肿瘤发病与转移、细胞凋亡、炎症、血管生成、毛囊发育等生理病理过程中扮演着极为重要的角色,近年来多位学者报道了其神经保护作用,可作为神经损伤和神经退行性疾病的修复/再生疗法。本文将综述胸腺素β4在缺血性卒中治疗中的作用机制及在临床应用中的前景。

胸腺素β_(10)在乳腺癌患者中的表达及与淋巴结转移的相关性研究

目的探究乳腺癌患者体内胸腺素β_(10)(Tβ_(10))的表达及与淋巴结转移的相关性。方法选取2019年1月至2020年5月于本院就诊的67例乳腺癌患者作为观察组,另选取同期于本院就诊的64例乳腺良性病变患者作为对照组,所有患者均经病理穿刺活检确诊病情。比较两组病理组织切片中Tβ_(10)表达情况,比较观察组不同临床病理Tβ_(10)表达情况,采用Spearman分析Tβ_(10)阳性表达与患者临床病理学特征和淋巴结转移的相关性,比较不同淋巴结转移数量下乳腺癌患者血清中Tβ_(10)水平。结果观察组阳性率为80.60%,高于对照组的17.19%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不同组织学分型、TNM分期、分化程度的乳腺癌患者及发生/未发生血行转移、淋巴结转移的乳腺癌患者Tβ_(10)表达分级结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,Tβ_(10)表达与乳腺癌患者病理组织学分型、TNM病理分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。Tβ_(10)表达量与乳腺癌患者淋巴结转移数量无相关性。淋巴结转移数量>10个患者血清Tβ_(10)水平高于淋巴结转移数量4~10个患者、淋巴结转移数量1~3个患者、未发生淋巴结转移的患者,淋巴结转移数量4~10个患者血清Tβ_(10)水平高于淋巴结转移数量1~3个患者、未发生淋巴结转移患者,且淋巴结转移数量1~3个患者血清Tβ_(10)水平高于未发生淋巴结转移的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌患者肿瘤组织内部Tβ_(10)呈现阳性表达,且该指标与病理组织学分型、TNM病理分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移呈正相关,患者血清Tβ_(10)表达水平随淋巴结转移数量发生变化。

胸腺素β4和β10表达促进小鼠乳腺癌细胞转移

目的研究胸腺素β4(Tβ4)和β10(Tβ10)对小鼠乳腺癌转移的影响。方法用对照腺病毒(pENTER组)、过表达Tβ4腺病毒(TMSB4X组)或Tβ10腺病毒(TMSB10组)感染小鼠乳腺癌细胞4T1,分别作用24,48和72 h后,MTT和甲紫(结晶紫)法体外检测Tβ4和Tβ10对4T1细胞增殖的影响;划痕法检测Tβ4和Tβ10对4T1细胞迁移能力的影响;Transwell法检测Tβ4和Tβ10对4T1细胞侵袭能力的影响;RT-PCR法检测不同腺病毒感染后4T1细胞中与细胞增殖及迁移相关基因基质金属蛋白酶2(MMP2),MMP9,信号转导与转录活化因子3(Stat3),癌基因(c-myc)和骨髓基质细胞衍生因子1(Sdf1)mRNA水平的变化。通过在雌性裸鼠乳腺脂肪垫下分别接种感染了对照腺病毒、过表达Tβ4或过表达Tβ10腺病毒的荧光素酶标记的4T1细胞(4T1-Luc),建立小鼠乳腺癌模型。造模成功后,每周于小鼠瘤体内注射10μL相应腺病毒(连续5周),每5 d测量小鼠肿瘤体积。小动物活体成像法观察小鼠肿瘤生长和转移。结果与pENTER组相比,TMSB4X和TMSB10组4T1细胞增殖抑制率及穿过小室细胞数无明显变化,提示Tβ4和Tβ10对4T1细胞的增殖和侵袭无明显影响;与pENTER组细胞迁移率(22±7)%相比,另两组细胞迁移率明显升高(P<0.05),分别为(36±6)%和(36±4)%,提示Tβ4和Tβ10促进了细胞迁移;TMSB4X和TMSB10组4T1细胞MMP2,MMP9,Sdf1和Stat3 mRNA水平显著上调(P<0.05,P<0.01)。动物实验表明,TMSB4X和TMSB10组小鼠比pENTER组更早出现乳腺癌肺转移,肺部转移灶数量在35 d时明显增多(P<0.05)。结论Tβ4和Tβ10均能促进小鼠乳腺癌细胞的迁移,体内促进小鼠乳腺癌的转移。

胸腺素β_4及胸腺素β_(10)与非小细胞肺癌转移和预后关系

目的研究胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)和胸腺素β10(thymosinβ10,Tβ10)在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达的临床意义及其与肺癌转移和预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测Tβ4、和Tβ10在NSCLC中的表达,并结合临床资料分析Tβ4和Tβ10表达意义。结果NSCLC中,Tβ4和Tβ10主要表达在癌细胞质中,癌组织的表达率分别为76.3%和72.4%。统计分析显示:Tβ4表达水平与肺癌的分化程度呈明显负相关;Tβ10的表达水平与与淋巴结转移呈明显正相关,二者单独表达均与患者的年龄、性别、肺癌的分型无关。Tβ4与Tβ10具有明显相关性,二者共表达时与肺癌的分化程度、淋巴结转移具有更显著相关性。Tβ4、Tβ10、、Tβ4/Tβ10的高表达组5年生存率明显低于低表达组(P<0.05)。同时Tβ4可作为肺癌患者预后评估的独立指标。结论Tβ4和Tβ10的高表达明显增强肺癌的恶性度,促进肺癌转移,使患者预后更差。通过研制降低两者表达的药物将为肺癌的治疗提供新的靶点。

胸腺素β10在人类乳腺癌中的表达

目的:探讨胸腺素β10(Thymosinβ10,Tβ10)在人类乳腺癌中的表达及其临床病理意义。方法:采用兔抗人Tβ10多克隆抗体,ABC免疫组织化学方法检测经福尔马林固定、石蜡包埋的10例乳腺增生症、76例原发性乳腺癌及27例淋巴结转移性乳腺癌中Tβ10的表达状况,同时检测两种恶性度、转移潜能以及雌激素受体表达状况均不相同的乳腺癌细胞系中Tβ10蛋白的表达水平;此外,我们还检测了76例原发性乳腺癌临床病例中ER和c-erbB-2的蛋白水平。结果:Tβ10表达定位于胞浆中,10例乳腺增生症组织表达为阴性或仅在肌上皮内有非常微弱的表达。临床乳腺癌病例的阳性率为100%(76/76),但表达强弱有差别:伴早期浸润的原位癌弱于普通浸润癌,二者具有显著性差异(P<0.01);高分化组染色弱于中低分化组(P<0.05);虽然淋巴结转移灶内的染色强于原发癌,但此差异不具有统计学意义。伴/不伴淋巴结转移的组间差异无统计学意义(P>0.05)。在乳腺癌细胞系中,雌激素依赖性、恶性度和转移潜能较低的MCF-7细胞的Tβ10表达弱于雌激素不依赖性、恶性度和转移潜能较高的MDA-MB-231细胞。未发现Tβ10与ER和c-erbB-2的表达具有相关性。结论:虽然乳腺正常的肌上皮细胞中可存在少量Tβ10蛋白,但此蛋白在乳腺组织发生癌变和浸润的过程中会逐渐增高。

重组胸腺素β4调节创伤皮肤层粘连蛋白5表达的研究

目的探讨重组胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)调节层粘连蛋白5(laminin5,LN-5)表达促进创伤愈合的机制。方法成年雄性SD大鼠60只,体重200～250g,采用直径8mm自制打孔器于脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型。根据伤口用药的不同,随机分为实验组(45只)和对照组(15只),实验组再根据用药剂量不同分为低、中、高剂量组,每组15只。实验组于模型制备后即刻、每天7:00、19:00分别予每个伤口表面滴加50μLTβ4,低、中、高剂量组Tβ4浓度分别为2、6、18μg/50μL,对照组同法滴加等量PBS液(pH7.2),共滴加7d。造模后观察大鼠大体情况,术后2、4、7d观察大鼠伤口愈合情况及取材行免疫组织化学观察。结果除高剂量组1只大鼠于术后7d死亡,余均存活至实验完成。术后7d,中剂量组伤口明显缩小,多数伤口与创缘皮肤衔接良好。术后2d,对照组和低、中、高剂量组伤口愈合率分别为7.67%±5.46%、29.01%±7.43%、26.54%±11.49%、10.39%±3.96%;术后4d分别为28.16%±13.76%、37.99%±13.05%、42.00%±9.56%、39.58%±12.74%;术后7d分别为59.08%±19.02%、64.15%±17.92%、77.39%±8.45%、69.78±8.45%。术后2d,低、中、高剂量组伤口愈合率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后2d,各组均可见较多LN-5阳性表达,对照组与低剂量组阳性表达强(P<0.05),中剂量组阳性表达最少;术后4d,中剂量组阳性表达最强(P<0.05);术后7d,中剂量组仍有较强阳性表达(P<0.01)。结论重组Tβ4早期抑制LN-5表达,有利于细胞的增殖、分化,中晚期上调LN-5表达,改善基质环境,促进表皮细胞迁移和创伤愈合。

胸腺素β_4与非小细胞肺癌转移和预后的关系

目的 探讨胸腺素 β4(thymosinβ4,Tβ4)在人非小细胞肺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征之间的关系 ,明确其对肺癌患者预后的意义。方法 对 76例非小细胞肺癌癌组织及 3 0例癌旁组织进行Tβ4免疫组织化学染色 (S P法 )检测 ,结合临床和病理资料 ,用 χ2 检验、Cox比例风险回归分析和生存曲线等方法分析Tβ4在肺癌组织中的表达意义。结果 Tβ4主要表达在癌细胞质中 ,在 76例非小细胞肺癌癌组织中有 5 8例 (76.3 % )呈Tβ4高表达 ,在癌旁正常支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞中为低表达。 χ2 检验显示Tβ4的表达水平与肺癌的临床分期 (TNM )呈显著正相关 (r =0 .2 3 9,P =0 .0 3 2 ) ,与淋巴结转移呈显著正相关(r =0 .2 43 ,P =0 .0 2 9) ,与血行转移呈显著正相关 (r =0 .2 2 4,P =0 .0 45 ) ,与肺癌的分化程度呈显著负相关(r =-0 .3 68,P =0 .0 0 2 ) ,与患者的年龄、性别、肺癌的分型无明显相关性。Tβ4的高表达与生存时间、5年生存率呈显著负相关 (P <0 .0 5 )。结论 Tβ4在人非小细胞肺癌癌组织中的表达较非小细胞癌旁正常组织明显上调 ,并与其临床分期、分化、转移和预后相关 ,检测肺癌组织中Tβ4表达有助于预测患者预后。

缺氧环境中胸腺素β4基因转染骨髓间充质干细胞凋亡率及Bax和Bcl-2的表达

背景:研究表明体外培养细胞加入胸腺素β4能增加细胞的抗凋亡能力,若在缺氧环境中上调胸腺素β4基因在骨髓间充干细胞中的表达,其抗凋亡能力如何改变,目前鲜见报道。目的:观察胸腺素β4基因修饰的骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的凋亡率改变,并探讨其是否通过调控Bax、Bcl-2表达影响凋亡能力。方法:将携带有胸腺素β4基因的慢病毒转染骨髓间充质干细胞,转染完毕后利用Western blot法检测胸腺素β4在骨髓间充质干细胞中的表达。将细胞分为胸腺素β4转染组、对照病毒组、未转染组,分别置于缺氧环境中。流式细胞仪检测3组细胞凋亡率;Western blot法检测3组细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果与结论:Western blot检测结果示,胸腺素β4基因在骨髓间充质干细胞中成功表达。流式细胞仪结果示,胸腺素β4转染组细胞凋亡率较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组凋亡率差异无显著性意义。Western blot结果显示,Bcl-2蛋白在胸腺素β4转染组中表达量较对照病毒组、未转染组高,Bax蛋白在胸腺素β4转染组表达量较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组中Bax、Bcl-2表达差异无显著性意义。提示过表达胸腺素β4基因可增加骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的抗凋亡能力,其可能的作用机制是调控Bax和Bcl-2蛋白表达水平。

瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中胸腺素β4基因表达变化及其意

目的 观察病理性瘢痕中胸腺素β4 (TMSB4 ) m RNA的表达水平 ,探讨其表达水平与病理性瘢痕形成的关系。方法 以组织块培养法于体外培养原代成纤维细胞。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术 ,比较瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其培养的 3组成纤维细胞中 TMSB4 m RNA表达水平的变化。结果 在上述 3种组织中 ,TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩中的表达量显著少于在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达 (P均 <0 .0 1) ,瘢痕疙瘩 TMSB4 m RNA表达的平均值比增生性瘢痕减少 6 6 .98% ,比正常皮肤减少 6 2 .4 8%。在上述 3种组织培养的成纤维细胞中 ,TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量显著少于增生性瘢痕 ,平均减少 2 7.13% (P<0 .0 1) ;比在正常皮肤成纤维细胞中的表达平均减少 16 .0 7% ,但差异无显著性。结论 TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩组织及其培养的成纤维细胞中的表达说明其与瘢痕疙瘩形成密切相关 ;TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩中表达减少可能是瘢痕疙瘩发病的重要致病因素之一。

克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞

【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整ORF,编码44个氨基酸残基,氨基酸序列与已报道的牛胸腺素β4(NM_001002885)同源性为100%。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KT中,Tβ4基因正确连接在皮肤特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和Tβ4基因整合到细胞基因组中,筛选出的转基因细胞高效表达红色荧光蛋白。【结论】克隆得到内蒙古白绒山羊Tβ4基因并构建成功其真核表达载体,可稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过核移植方法获得转胸腺素β4基因绒山羊提供了条件。

胸腺素β4通过提高Akt磷酸化促进局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质eNOS和CD31表达

目的探讨胸腺素β4(Tβ4)对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质血管再生影响及其机制。方法用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(IR组)、Tβ4组(IRT组)、Tβ4+LY294002组(IRTL组)、0.9%氯化钠注射液组(IRN组),缺血2 h后把IR、IRN和IRT组分为3和7 d两亚组。Western blot检测Akt磷酸化水平和eNOS蛋白表达;免疫组化检测Tβ4和CD31蛋白表达;荧光定量PCR检测eNOS、SDF-1及CXCR4 mRNA表达;Longa法检测神经功能。结果与IRN组相比,IRT 3 d Tβ4蛋白表达显著增多(P<0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d Akt磷酸化水平和eNOS蛋白显著增高(P<0.05),但IRTL组与其比较p-Akt和eNOS蛋白表达显著减少(P<0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d eNOS、SDF-1和CXCR4 mRNA表达显著升高(P<0.05);与IRN组比较,IRT 3和7 d组微血管密度显著增高(P<0.05),大鼠神经功能缺损在第7天改善最明显(P<0.05)。结论 Tβ4可能通过提高局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质Akt磷酸化水平、eNOS基因和蛋白的表达,促进大鼠大脑皮质缺血半暗带血管再生和神经功能恢复。

重组胸腺素β4在干眼模型中对炎症反应的调节作用及对眼表修复的影响

背景研究证实炎症与干眼的发生和发展相关，其中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）是重要的炎症因子。胸腺素β4（Tβ4）具有促进上皮细胞迁移和抑制炎症反应的作用，但其对干眼眼表修复的影响及其机制尚未阐明。 目的观察重组Tβ4对干眼模型鼠眼中TNF-α和IFN-γ表达的调控作用及其对眼表修复的影响。 方法选用清洁级雄性成年SD大鼠50只，用质量分数0.3%苯扎氯铵溶液连续点左眼7 d以诱导干眼模型，以泪膜破裂时间（BUT）、角膜荧光素染色评分、Schirmer试验Ⅰ（SⅠt）结果评估造模情况。将造模成功的36只眼按随机数字表法分为模型对照组、重组人表皮生长因子（rhEGF）点眼组、Tβ4点眼组及PBS点眼组，按照分组分别用5 μl Tβ4溶液（9 μg/ml）、rhEGF滴眼液、无菌PBS点眼，每日3次，连续7 d，大鼠右眼不进行任何干预作为正常对照组。各组大鼠均于点眼后7 d行BUT、角膜上皮荧光素染色和SⅠt检查。点眼后7 d以过量麻醉法处死动物，制备大鼠眼表组织切片，采用苏木精－伊红染色法观察各组大鼠角膜和结膜组织形态学变化；采用过碘酸希夫染色法计数结膜组织中杯状细胞的数目；透射电子显微镜下观察大鼠角膜和结膜细胞超微结构改变；分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测大鼠结膜组织中TNF-α mRNA和IFN-γ mRNA及其蛋白的表达。 结果正常对照组、模型对照组、rhEGF点眼组、Tβ4点眼组和PBS点眼组大鼠BUT分别为（10.42±0.66）、（7.46±0.49）、（8.71±0.50）、（9.59±0.35）和（8.63±0.68）s，总体比较差异有统计学意义（F＝5.65，P＝0.00），其中模型对照组大鼠BUT明显短于正常对照组，rhEGF点眼组和Tβ4点眼组大鼠BUT明显较模型对照组大鼠延长，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。各组间大鼠SⅠt和角膜荧光素染色评分的总体比较差异均无统计学意义（F＝0.42，P＝0.79；F＝136.77，P＝0.00）。苏木精－伊红染色显示，模型对照组大鼠角膜、结膜上皮缺损，角膜基质层水肿；rhEGF点眼组和Tβ4点眼组大鼠角膜、结膜上皮细胞形态不规则，呈过度增生状。各组大鼠结膜组织中杯状细胞数量的总体比较差异有统计学意义（F＝3.16，P＝0.04），其中模型对照组和rhEGF点眼组大鼠结膜组织中杯状细胞数量均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），而Tβ4点眼组大鼠结膜杯状细胞数量与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。透射电子显微镜下观察可见，模型对照组大鼠角膜、结膜上皮细胞的微绒毛和微皱襞肿胀、融合、卷曲、断裂和脱落，Tβ4点眼组角膜、结膜上皮细胞微绒毛呈增生修复状态。各组大鼠结膜组织中TNF-α mRNA和IFN-γ mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义（F＝43.08、371.69，均P＝0.00），各组大鼠结膜组织中TNF-α和IFN-γ蛋白表达量总体比较，差异均有统计学意义（F＝34.27、43.52，均P＝0.00），其中模型对照组大鼠结膜组织中TNF-α mRNA和IFN-γ mRNA及其蛋白的表达量均明显高于正常对照组，而Tβ4点眼组上述因子的表达量均明显低于模型对照组和rhEGF点眼组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。 结论Tβ4局部点眼可通过下调干眼大鼠结膜组织中TNF-α和IFN-γ的表达而增加泪膜的稳定性，促进眼表损伤的修复。

胸腺素β4基因片断mRNA在人瘢痕及皮肤组织中的表达定位

目的研究胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)基因片断mRNA在人包皮及其他部位正常皮肤、瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织中的表达,探讨其表达与病理性瘢痕发生的相关性。方法采用地高辛标记Tβ4基因片断[BM005698(EST)基因]探针,利用组织切片的原位杂交技术显示Tβ4 mRNA的表达,分别进行定性和体视学半定量分析4组标本的Tβ4表达情况。结果Tβ4基因片断的mRNA在大部分包皮及其他部位正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中表达,瘢痕疙瘩的成纤维细胞表达Tβ4的阳性标本比率(2/10)仅为包皮(8/10)的25%,为其他部位正常皮肤(7/10)的28.6%,其真皮的表达多于表皮;Tβ4在成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞中表达较多。表达阳性标本真皮的平均光密度值,Tβ4基因片断在瘢痕疙瘩的表达为0.03±0.01,比它在正常皮肤0.09±0.03和增生性瘢痕0.09±0.02的表达分别明显减少(P=0.000;P=0.000);包皮组Tβ4基因表达为0.30±0.08,比其他部位正常皮肤增高231.5%(P<0.001)。4组的积分光密度值分析结果与平均光密度值比较结果基本相同。Tβ4基因在增生性瘢痕组中的表达阳性率(3/10)与包皮外其他部位正常皮肤中的表达差异不显著,但4组的表达量均存在显著差异;Tβ4表达量在包皮组中最高,在其他部位的正常皮肤和增生性瘢痕中次之,瘢痕疙瘩表达最少。结论Tβ4基因片断mRNA在瘢痕和正常皮肤中均有表达。Tβ4基因片断在瘢痕疙瘩中表达减少,在包皮中表达增加,说明Tβ4基因片断可能涉及瘢痕疙瘩形成的病理机制,可能是一个影响瘢痕疙瘩的重要因素。

胸腺素β4真核表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的:构建人胸腺素β4基因的真核表达载体,初步探讨胸腺素β4对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,以进一步研究其在肿瘤侵袭转移中的作用机制。方法:用DNA重组技术构建真核表达载体PsecTag2B/Tβ4,并采用脂质体转染技术瞬时转染SW480细胞,采用Western blot法检测胸腺素β4重组蛋白的表达,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞计数法,分析SW480细胞瞬时转染培养上清液对HUVECs增殖的影响。结果:成功构建了胸腺素β4真核表达载体PsecTag2B/Tβ4,并在SW480细胞中瞬时转染,Western blot法检测到胸腺素β4蛋白表达,MTT法和细胞计数法检测胸腺素β4转染后的SW480细胞培养上清液能够促进HUVECs增殖。结论:胸腺素β4能显著促进人血管内皮细胞增殖,在肿瘤血管生成中起着一定的作用。

重组胸腺素β4对大鼠心肌梗死心微血管及血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨重组胸腺素β4（Tβ4）对心肌梗死大鼠心微血管形成及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法：SD大鼠随机分为对照组、低剂量Tβ4组（0.08μg/100g）和高剂量Tβ4组（0.8μg/100g）,结扎大鼠左冠状动脉前降支,造成永久心肌梗死模型.对照组予PBS,低剂量组和高剂量组予Tβ4腹腔注射,1、5、10d在结扎线以下的部位取材,行碱性磷酸酶和VEGF免疫组织化学显色.结果：各组微血管面积、VEGF阳性细胞平均光密度（AOD）1d差异无统计学意义,给药组10d微血管密度高于对照组,高剂量组5、10d微血管密度高于低剂量组,高剂量组10dVEGF阳性细胞平均光密度高于对照组和低剂量组.结论：Tβ4能促进心肌梗死后微血管形成,增加心肌微血管密度,上调VEGF的表达,从而改善心功能.