重组人胸腺素β16工程菌株的遗传稳定性研究

目的研究重组人胸腺素β16(Tβ16)工程菌株的遗传稳定性,为重组人Tβ16产业化提供依据。方法利用在有选择压力(AMP+)的条件下,对含有Tβ16-pET表达质粒的工程菌在LB固体斜面上连续传代100代,每隔20代取样进行菌体形态、革兰染色、提取质粒、酶切和进行表达量检测。结果第100代菌株与原始菌株在各项检测指标上一致,无显著差别。结论Tβ16-pET质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中有很好的遗传稳定性,为重组人Tβ16的应用奠定了基础。

重组人胸腺素β16的表达、纯化及其生物学活性研究

目的:人工合成人胸腺素β16(Thymosin β16,Tβ16)的DNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pET3c中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、层析纯化、酶切后获得了Tβ16表达产物,并研究其体内外生物学活性。方法:将构建的重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白的表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。表达的融合蛋白经超声破碎、离子交换和金属亲和层析进行纯化后,用His-SUMO蛋白酶酶切,再经金属亲和层析和Superdex30凝胶层析,获得胸腺素β16。对胸腺素β16进行体内外生物学活性研究。结果:重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白为可溶性表达,Tβ16比活性为5.3×105U/mg,在体外可促进BALB/c3T3细胞增殖,促进兔角膜细胞的增殖,促进血管内皮细胞的增殖和迁移以及促进鸡胚绒毛膜血管的增殖;在体内可促进家兔碱烧伤皮肤愈合。结论:成功构建了重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白的大肠杆菌表达载体,获得了重组Tβ16蛋白,其具有很好的修复作用,为进一步Tβ16产业化开发奠定了基础。