替比夫定联合胸腺素-α1与单用替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的比较研究

目的探讨替比夫定联合胸腺素-α1治疗HBe Ag阳性慢性乙型肝炎的疗效及安全性。方法 106例HBe Ag阳性的慢性乙型肝炎患者随机分为替比夫定联合胸腺素-α1治疗组(联合用药组)52例和单用替比夫定治疗组(单用药组)54例,观察两组治疗24周、48周时ALT复常率、HBV-DNA转阴率、HBe Ag转阴率、HBe Ag血清学转换率及不良反应。结果治疗24周时,联合用药组和单用药组HBV-DNA转阴率分别为75.0%(39/52)、77.8%(42/54),差异无统计学意义(P>0.05);联合用药组HBe Ag转阴率为26.9%(14/52),HBe Ag血清学转换率为25.0%(13/52)与单用药组的18.5%(10/54)、16.7%(9/54)相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗48周时,两组HBV-DNA转阴率比较差异无统计学意义[88.5%(46/52)、79.6%(43/54),P>0.05];联合用药组的HBe Ag转阴率为38.5%(20/52),HBe Ag血清学转换率为36.5%(19/52),与单用药组的20.4%(11/54)和18.5%(10/54)相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗过程中,两组均未发生严重不良反应。结论替比夫定联合胸腺素-α1治疗HBe Ag阳性慢性乙型肝炎疗效优于单用替比夫定,是安全有效的治疗方法。

胸腺素-α1联合干扰素-α治疗181例慢性乙型肝炎的临床观察

目的探讨胸腺素联合干扰素-α1b(IFN-α1b)治疗慢性乙型肝炎(CHB)的临床疗效。方法181例CHB患者被随机分为胸腺素联合IFN-α1b组(A组)60例、IFN-α1b组(B组)58例和非抗病毒组(C组)63例。A组给予胸腺素1.6mg皮下注射,每周2次,连续24周,干扰素-α1b5MU,肌肉注射,每日一次,连续2周后,改为隔日1次,连续22周;B组给予干扰素-α1b,方法同A组;C组只给予护肝治疗。治疗结束和随访24周时观察分析疗效。结果治疗结束时,A、B、C三组ALT复常率分别为81.7%、77.6%、74.6%,随访结束时,分别为78.3%、62.1%、50.8%,治疗结束时,HBVDNA阴转率分别为65.0%、43.1%、4.8%,随访结束时分别为61.7%、32.7%、3.2%;治疗结束时,HBeAg阴转率分别为63.3%、36.2%、3.2%,随访24周时分别为60.0%、29.3%、1.6%。结论胸腺素联合IFN-α1b治疗CHB疗效优于单用IFN-α1b。

超声引导下经皮微波消融联合胸腺素-α1治疗原发性肝癌的临床分析

目的:探析超声引导下经皮微波消融联合胸腺素-α1治疗原发性肝癌的临床效果。方法:收治70例原发性肝癌患者,参照组:实施超声引导下经皮微波消融治疗;探析组:超声引导下经皮微波消融联合胸腺素-α1治疗;比较两种治疗方案对患者肝功能的影响与治疗不良反应发生率情况。结果:治疗后,两组患者在AST、ALB与ALT指标方面互比,有差异性(P<0.05);两组在TBIL指标互比,无差异性(P>0.05)。探析组在不良反应发生率低于参照组,有差异性(P<0.05)。结论:针对原发性肝癌疾病选择胸腺素-α1联合超声引导下经皮微波消融治疗效果理想,能提高肝脏能力,不良反应少,符合临床需求。

七彩神仙鱼β-胸腺素基因克隆及表达分析

为了探究胸腺素基因在七彩神仙鱼(Symphysodon aquifasciatus)中的特征、进化和功能,基于转录组序列比对及生物信息学的方法对七彩神仙鱼的胸腺素进行了鉴定、基因与蛋白结构分析、系统发生分析,通过RACE技术克隆获得了七彩神仙鱼胸腺素基因全长,利用qRT-PCR技术研究其在各组织中的表达规律,通过病原感染实验,研究了七彩神仙鱼β-胸腺素基因在病原胁迫下的表达规律。结果显示,七彩神仙鱼的胸腺素基因鉴定为胸腺素β1型,命名为dfTβ。克隆结果显示,dfTβ的全长为779 bp,ORF区序列长度为303 bp,编码100个氨基酸,其5′-UTR为43 bp,3′-UTR为433 bp,含有22个poly-A。系统发育进化分析结果显示,七彩神仙鱼β-胸腺素同尼加拉瓜湖始丽鱼β-胸腺素聚为一簇。qPCR结果显示,β-胸腺素在七彩神仙鱼各组织中均有表达,其中在肠、皮肤、鳃中表达最高,在头肾和脾中表达最低。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,七彩神仙鱼皮肤、头肾、脾和肠中dfTβ均在短时间内显著上调,并随着时间出现先上升后下降的趋势,但各组织中上调倍数最高峰的时间不同。研究结果表明,dfTβ基因参与了七彩神仙鱼受病原刺激后的免疫应答,且表达模式不同,表明其可能在不同组织、免疫的不同阶段发挥不同的作用。

仿刺参β-胸腺素基因的克隆和表达分析

β-胸腺素是一种具有抗菌活性的多肽。采用RACE方法克隆仿刺参β-胸腺素(β-Thymosin),命名为Ajβ-Thymosin。Ajβ-Thymosin基因的序列全长1877 bp,开放阅读框为126 bp,编码41个氨基酸;分子质量为4.6 ku,理论等电点为5.25。仿刺参β-胸腺素中存在着保守的功能序列EVASFD-KSKLK和保守的G-actin结合结构域LKKTET。系统发育进化分析结果显示,仿刺参β-胸腺素和紫色球海胆的β-胸腺素聚为一支。采用实时荧光定量PCR检测Ajβ-Thymosin基因在仿刺参不同组织和不同发育时期的表达量,发现其在体腔细胞中的表达量最高,在小耳幼虫期开始高表达。经过假交替单胞菌、灿烂弧菌、蜡样芽孢杆菌和希瓦氏菌4种病原菌刺激后,仿刺参体腔细胞中Ajβ-Thymosin基因的表达量在4 h均受到抑制;在蜡样芽孢杆菌和希瓦氏菌组,Ajβ-Thymosin基因的表达量在12 h开始上调;在假交替单胞菌组,Ajβ-Thymosin基因的表达量在24 h开始上调;在灿烂弧菌组,Ajβ-Thymosin基因的表达量在48 h才开始上调。病原刺激产生的动态表达模式表明,Ajβ-Thymosin基因参与仿刺参体腔细胞免疫应答的过程,并且对不同病原菌的免疫应答能力不同。对Ajβ-Thymosin基因的序列和表达进行分析,可为新型抗菌肽和养殖病害防控策略的研发奠定基础。

大鲵胸腺素β-4全长基因的分离与表达研究

【目的】对大鲵胸腺素β-4基因进行生物信息学分析和原核表达载体构建,为大鲵胸腺素β-4蛋白生理活性的深入研究奠定基础。【方法】从大鲵皮肤cDNA文库中分离获得了大鲵胸腺素β-4基因全长序列,采用多种生物软件对其进行生物信息学分析,用定量PCR研究胸腺素β-4基因在不同组织的表达情况,并以pET32a为载体构建该基因原核表达载体。【结果】胸腺素β-4基因全长共699bp,其中开放阅读框135bp,5′-UTR 87bp,3′-UTR为474bp,该基因编码45个氨基酸,表达蛋白的理论分子质量为5 141.59u,等电点为5.34;结构分析发现,大鲵胸腺素β-4蛋白氨基酸序列的第7～43位处有"THY"特征模体,没有跨膜螺旋区、细胞膜外在跨膜结构域。氨基酸序列进化关系表明,大鲵与人、大鼠、牛、猩猩、鸡、倭蛙等动物亲缘关系较近,氨基酸同源性高于85%;与猪和爪蟾的亲缘关系次之,氨基酸同源性均为83%;而与虹鳟、大菱鲆、斑马鱼等鱼类的亲缘关系较远,氨基酸同源性低于80%。荧光定量PCR检测结果表明,胸腺素β-4基因在大鲵肺中的相对表达量最高。SDS-PAGE电泳结果表明,构建的大鲵胸腺素β-4原核表达重组菌株pET32a-Tβ4,在37℃条件下,用终浓度1.0mmol/mL IPTG诱导4h后,大鲵胸腺素β-4基因获得了较高的表达。【结论】分离获得了大鲵胸腺素β-4基因全长cDNA序列,该基因氨基酸序列与人等高等动物的同源性最高,能在大鲵肺中及大肠杆菌中获得高效表达。

胸腺素α1-胸腺五肽在大肠杆菌中的表达及表达条件优化

目的探讨胸腺素α1-胸腺五肽(Tα1-TP5)在大肠杆菌中的表达及表达条件优化。方法将化学合成的Tα1-TP5基因与原核表达载体pGEX-4T-1融合并转化至E.coliBL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统研究培养基组成、诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度及诱导时间等条件对融合蛋白表达量的影响。融合蛋白经GST琼脂糖珠亲和色谱纯化及重组肠激酶切割后,电喷雾质谱鉴定Tα1-TP5。结果选用TB培养基,在菌体对数生长中后期加入终浓度为0.05 mmol/L的IPTG,37℃诱导5 h,GST融合蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的35.8%,且主要以可溶形式表达。Tα1-TP5的分子质量与理论值相似。结论 Tα1-TP5成功在E.coli中表达,并确定了最佳表达条件。

HPLC测定胸腺素α1-胸腺五肽融合肽的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定胸腺素α1-胸腺五肽融合肽含量的方法。方法采用Agilent ZORBAX 80A Extend-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调p H至7.5)-乙腈(9:1,v/v)为流动相,进样量为20μl,检测波长为208 nm,流速为0.6 ml/min;以峰面积归一化法计算含量。结果胸腺素α1-胸腺五肽融合肽在0.479~1.367 mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9998),定量限为19.14 ng/ml,检出限为6.38 ng/ml。结论该方法专属性强,重复性和精密度均较好,结果准确,可用于测定胸腺素α1-胸腺五肽融合肽的含量。

无脊椎动物β-胸腺素的功能研究进展

β-胸腺素(β-thymosin)是肌动蛋白单体(G-actin)的锚定因子,它可以阻止后者多聚化形成微丝。当前关于β-胸腺素的研究主要集中在脊椎动物中,发现其在淋巴系统的发育、维持免疫系统的平衡、中枢神经系统的发育等生命过程中起着重要作用。人体中胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)参与了机体抗菌过程,并且能促进伤口愈合,组织、器官的修复重塑。在无脊椎动物中,也发现了β-胸腺素的存在,研究发现这类蛋白与Tβ4具有一定的相似性,但是在结构及功能上却比Tβ4更为复杂,详细讨论了β-胸腺素在无脊椎动物中的研究进展。

苦参素联合α_1-胸腺素治疗慢性乙型肝炎的疗效

目的 观察苦参素联合α1 胸腺素治疗慢性乙型肝炎的疗效。 方法 将 72例慢性乙型肝炎患者分为两组 :联合组 38例 ,用苦参素及α1 胸腺素治疗 ;苦参素组 34例 ,单用苦参素治疗。比较两组在治疗后 3、6、9个月HBeAg及HBVDNA转阴情况。 结果 治疗 3个月后 ,两组HBeAg、HBVDNA的转阴率均为 15 .9%vs14 .7% ,差异无显著性 (χ2 =0 .0 12 ,P >0 .0 5 )。治疗 6个月和 9个月后 ,两组HBeAg、HBV DNA的转阴率差异均有显著性 (6个月后分别为 36 .8%vs 2 0 .6 % ,χ2 =4 .4 0 3,P <0 .0 5 ;39.5 %vs2 3.5 % ,χ2 =4 .2 91,P <0 .0 5。 9个月后分别为 4 7.4 %vs 2 9.4 % ,χ2 =4 .874 ,P <0 .0 5 ;5 2 .6 %vs 32 .4 % ,χ2 =7.2 13,P <0 .0 1)。 结论 苦参素联合α1 胸腺素治疗慢性乙型肝炎的疗效比单用苦参素好。

超声引导下经皮微波消融治疗原发性肝癌患者疗效分析

目的探讨超声引导下经皮微波消融联合胸腺素-α1治疗原发性肝癌(PLC)患者的疗效。方法 2011年3月~2013年3月我院收治的PLC患者104例,随机分为观察组52例和对照组52例。对照组采用超声引导下经皮微波消融术治疗,观察组于术后皮下注射胸腺素-α1 4周。比较治疗前和治疗后外周血T淋巴细胞亚群、肝功能、甲胎蛋白(AFP)水平变化和两组肿瘤复发或转移及3年生存情况。结果在治疗4周时,观察组外周血CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+比值分别为71.49±6.57%、43.12±2.89%、15.89±3.24,显著高于对照组的43.21±3.74%、24.56±2.36%、5.42±2.13(P<0.05);观察组血清白蛋白(ALB)为39.84±2.56 g/L,显著高于对照组的34.12±1.87 g/L,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、AFP水平分别为34.87±3.08 U/L、43.39±2.08 U/L、85.42±10.42μg/L,显著低于对照组的61.39±3.64 U/L、56.74±3.46 U/L、164.29±14.35μg/L;随访3年,观察组肿瘤复发率和转移率分别为30.8%和15.4%,显著低于对照组的50.0%和32.7%(P<0.05),观察组生存率为23.1%(12/52),显著高于对照组的5.8%(3/52,P<0.05)。结论超声引导下经皮微波消融后继续接受α-1胸腺素治疗PLC患者效果显著,可降低肿瘤复发或转移,延长生存时间,值得研究。