胸腺细胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸铍致人胚肺成纤维细胞纤维化中作用研究

目的通过观察硫酸铍刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞)所致胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化改变情况,探讨Thy-1在硫酸铍致肺纤维化中的作用。方法建立离体MRC-5细胞培养实验模型,以终浓度分别为1.0、10.0和100.0μmol/L的硫酸铍染毒(设为低、中、高剂量组),对照组不作染毒处理;另设甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预组(予终浓度为10.0μmol/L硫酸铍和10.0μmol/L AZC处理)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预组(予终浓度为10.0μmol/L硫酸铍和0.5μmol/L TSA处理)。分别在染毒24、48和72 h后收集细胞,采用实时定量式聚合酶链式反应检测胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Thy-1的mRNA相对表达水平,巢式降落式甲基化特异性聚合酶链式反应检测Thy-1 DNA甲基化水平。结果在24 h时间点,MRC-5细胞中胶原蛋白ⅢmRNA相对表达水平呈随染毒剂量增加而增加的趋势(P<0.05);在48和72 h时间点,MRC-5细胞中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-SMA的mRNA相对表达水平均呈随染毒剂量增加而增加的趋势(P<0.05);3个剂量组MRC-5细胞上述3个指标均呈随着染毒时间的增加而增加趋势(P<0.05)。3个剂量组MRC-5细胞Thy-1 mRNA相对表达水平均低于对照组(P<0.05),高剂量组MRC-5细胞Thy-1 mRNA相对表达水平低于低剂量组(P<0.05)。中、高剂量组Thy-1 DNA甲基化水平均高于对照组(P<0.05),3个剂量组Thy-1 DNA甲基化水平呈随染毒剂量增加而增加趋势(P<0.05)。2个干预组MRC-5细胞Thy-1 DNA甲基化水平均高于对照组(P<0.05),但与中剂量组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论硫酸铍刺激可导致MRC-5细胞纤维化的发生;该过程中Thy-1 DNA甲基化程度升高,Thy-1 mRNA表达水平降低,可能是硫酸铍致肺纤维化的重要机制之一。

尘肺患者外周血胸腺细胞分化抗原-1 DNA甲基化的改变及意义

[目的 ]尘肺是严重影响我国职业人群健康的一种发病率较高的职业病。通过检测尘肺患者外周血胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化水平,旨在探讨其与尘肺发病的关系。[方法 ]对84例确诊为尘肺病的男性患者以及具有相同接尘史且同地点工作的75例健康男性工人进行调查。尘肺患者分为煤工尘肺组(40人)和矽肺组(44人),健康工人作为对照组。在知情同意的情况下收集血液样本进行研究。采用ELISA法检测人胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅱ(ICOL-Ⅲ)、Smad蛋白2/3(Smad2/3)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达,qRT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)、DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)及甲基结合蛋白-2(MeCP2)基因mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR法检测Thy-1 DNA甲基化水平。[结果 ]矽肺组工人COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达水平高于煤工尘肺组和对照组(P <0.05),后两者间差异无统计学意义(P> 0.05)。矽肺组工人Smad2/3、TGF-β1、TNF-α,煤工尘肺组工人TGF-β1、TNF-α蛋白表达水平均较对照组提高(P <0.05),且矽肺组Smad2/3、TGF-β1蛋白表达水平也高于煤工尘肺组(P <0.05)。甲基转移酶中:DNMT1、DNMT3A基因mRNA表达水平3组间未呈现差异(P> 0.05),但煤工尘肺组、矽肺组DNMT3B基因mRNA表达较对照组升高(P <0.05)。矽肺组MeCP2基因的mRNA表达也较对照组升高(P <0.05)。与对照组相比,煤工尘肺组、矽肺组工人Thy-1 DNA甲基化水平均升高(P <0.05)。Thy-1 DNA甲基化水平与TGF-β1、Smad2/3、TNF-α蛋白表达呈正相关关系(r=0.25、0.17、0.31,均P <0.05)。[结论]基于尘肺患者Thy-1 DNA甲基化的表达检测,本研究认为Thy-1 DNA甲基化水平发生变化,可能是调控尘肺病发展进程中表观遗传学机制之一。

脂多糖对肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1及整合素β3表达的调控并抑制自噬的研究

目的 明确脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）对小鼠肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1（thymocyte differentiation antigen-1, Thy-1）和整合素β3蛋白表达的调控作用，并观察其与肺成纤维细胞自噬抑制的关系。 方法 将原代培养的小鼠肺成纤维细胞采用随机数字法分为4组（每组3孔）：PBS对照组（Con组）、0.25 mg/L LPS组（LPS0.25组）、0.50 mg/L LPS组（LPS0.50组）、1.00 mg/L LPS组（LPS1.00组），随后以不同浓度LPS（0.25、0.50、1.00 mg/L）刺激，于刺激后6 h通过Western blot检测不同浓度LPS刺激小鼠肺成纤维细胞后Thy-1和整合素β3蛋白的表达情况。于刺激后30 h比较肺成纤维细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达情况，同时通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体形成情况。 结果 随着LPS刺激浓度的增加，小鼠肺成纤维细胞的Thy-1蛋白表达量下降，其中LPS1.00组较Con组有明显下降（P〈0.05）；整合素β3蛋白表达量升高，其中LPS1.00组较Con组有明显升高（P〈0.05）。LPS1.00组刺激小鼠肺成纤维细胞30 h后明显抑制其自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达（P〈0.05），并抑制自噬小体形成（P〈0.05）。 结论 LPS可下调Thy？蛳1蛋白表达、上调整合素β3蛋白表达，同时抑制自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达及自噬小体的生成，该过程可能与LPS诱导肺成纤维细胞自噬抑制以及肺纤维化进展有关。

肿瘤相关成纤维细胞激活Thy-1调控胃癌细胞发生间质转化及迁移能力的研究

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)在调控胃癌细胞发生上皮间质转化(EMT)及迁移能力中的作用。方法:培养胃癌细胞系(SNU-1和MKN45)和原代成纤维细胞,分离和鉴定原代成纤维细胞;Western blot和实时定量PCR技术检测细胞内胸腺细胞分化抗原(Thy-1)的表达情况;并且建立胃癌细胞和CAFs共培养体系,将细胞分为胃癌细胞组、共培养体系组(空白对照组)、共培养体系+同型Ig G抗体组(阴性对照组)、共培养体系+抗Thy-1抗体组。Transwell实验检测Thy-1对共培养体系中胃癌细胞的迁移能力的影响;Western blot技术检测Thy-1对共培养体系胃癌细胞株的上皮(E-cad)及间质(N-cad和ZEB2)表型标记蛋白表达的影响。结果:成功分离CAFs,与正常成纤维细胞的形态并无明显差异,均出现纺锤形态,发现CAFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达比配对NFs细胞的表达量显著增加,提示分离出的CAFs可以作为后续相关实验研究;Western blot和实时定量PCR技术检测提示,CAFs中Thy-1的mRNA和蛋白质高表达,这与配对的NFs相比具有明显的统计学意义,且Thy-1在胃癌细胞系中低表达;CAFs与胃癌细胞共培养后,与胃癌细胞组相比,胃癌细胞系的迁移能力明显增强,且E-cad的表达显著降低,N-cad和ZEB2的表达明显升高,但共培养体系中CAFs预先孵育Thy-1抗体后,发现与阴性对照组相比,胃癌细胞系的迁移能力和EMT效应明显减弱。结论:CAFs细胞内过表达的Thy-1增强体外共培养体系中胃癌细胞的迁移能力和EMT效应。

煤尘致人胚肺成纤维细胞纤维化中胸腺分化抗原-1 DNA甲基化的变化

[目的]观察煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化改变过程中,胸腺分化抗原-1(Thy-1)表达及其DNA甲基化变化。[方法]用含500 nmol/L佛波酯的1640培养液培养人单核细胞,24 h诱导分化后成巨噬细胞;收集100μg/m L煤尘刺激巨噬细胞24 h的培养上清,再刺激MRC-5 24、48、72 h,对照组分别为正常巨噬细胞和正常人胚肺成纤维细胞。酶联免疫分析法测定巨噬细胞上清液中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平和MRC-5中TGF-β1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测胶原蛋白-I、胶原蛋白-III、α-SMA、Thy-1、DNA甲基化转移酶(DNMTs)1、3a、3b m RNA的表达,巢式降落式特异性PCR检测Thy-1DNA甲基化。[结果]煤尘组巨噬细胞上清中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平与对照组比较明显增加[(5.542±0.953)ng/m Lvs(2.498±0.456)ng/m L,(462.435±56.620)ng/L vs(329.971±17.911)ng/L](P<0.05);巨噬细胞染尘后上清刺激MRC-5 24、48、72 h,TGF-β1蛋白表达[(223.813±5.723),(263.757±17.254),(326.720±11.263)ng/L]和胶原蛋白I m RNA表达(3.38±0.37,3.87±0.28,4.40±0.10)、胶原蛋白III m RNA表达(1.65±0.12,2.37±0.19,2.66±0.28)、α-SMA m RNA表达(2.41±0.47,4.76±0.10,4.23±0.63)均升高;且均存在时间效应关系,r值分别为0.965,0.876,0.899,0.667(P<0.05);煤尘组MRC-5中Thy-1m RNA表达均低于对照组,随着巨噬上清液作用时间的增加,其表达逐渐降低(0.634±0.014,0.448±0.055,0.352±0.044),呈负相关(r=-0.945,P<0.05);煤尘组MRC-5中DNMTs m RNA表达均较对照组升高(DNMT1:1.57±0.12,2.51±0.33,7.00±0.71;DNMT3a:0.74±0.09,2.89±0.52,3.31±0.53;DNMT3b:1.46±0.18,2.25±0.44,5.33±0.16),且均存在时间效应关系,r值分别为0.924,0.890,0.937(P<0.05);煤尘组Thy-1 DNA甲基化水平较对照组升高(0.506±0.014,0.536±0.017,0.570±0.032),存在时间效应关系(r=0.682,P<0.05)。[结论]煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞纤维化发生,在此过程中Thy-1 DNA发生甲基化,Thy-1m RNA表达降低,可能是煤尘致肺纤维化发生的重要表观遗传机制之一。

火把花根对大鼠抗Thy-1肾炎肾脏转化生长因子-β1表达的影响

目的观察中药火把花根对抗-Thy-1肾炎大鼠的治疗作用，并通过观察其肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达变化，探讨火把花根的作用机制。方法应用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS)复制大鼠抗Thy-1肾炎模型，将大鼠分为对照组(A组)、模型组(B组)、火把花根治疗组(C组)，分别于治疗第1、2、4周末各组动物留尿并取肾皮质进行尿蛋白测定及常规病理检查。采用免疫组织化学及RT-PCR方法测定系膜区TGF-β1蛋白及肾皮质mRNA表达变化。结果模型组尿蛋白显著增加，PAS染色阳性系膜区面积与肾小球毛细血管丛面积的比值(ECM／GA)显著高于对照组，系膜区TGF-β1蛋白表达及肾皮质TGF-β1mRNA表达增高。火把花根治疗组尿蛋白定量、ECM／GA比值，系膜区TGF-β1蛋白表达及肾皮质TGF-β1mRNA表达均较模型组显著降低(P<0．01)。结论火把花根可减少抗Thy-1肾炎大鼠的蛋白尿，减轻肾小球系膜及基质增生，其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的基因表达。

胸外科术后感染血清sTREM-1、IL-1β、sCD14表达预测感染价值及对预后影响

目的探讨胸外科术后感染患者血清可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、白介素-1β(IL-1β)、可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)表达预测感染价值及对预后影响。方法选取2017年3月-2019年12月江苏省南通大学附属医院胸外科术后感染患者113例设为研究组,并选取同期临床资料相似的胸外科术后无感染患者113例设为对照组。比较两组、研究组不同预后患者血清sTREM-1、IL-1β、sCD14水平,采用Logistic多元回归分析胸外科术后感染的相关影响因素,采用接收者操作特征(ROC)曲线及其曲线下面积(AUC)分析各指标预测胸外科术后感染的价值,采用Cox回归方程分析感染患者预后的相关影响因素。结果研究组sTREM-1、IL-1β、sCD14血清水平高于对照组(P<0.05);sTREM-1、IL-1β、sCD14预测胸外科术后感染的AUC分别为0.722、0.806、0.814,三个指标联合预测胸外科术后感染的AUC为0.898;研究组病死者sTREM-1、IL-1β、sCD14血清水平高于生存者(P<0.05);APACHEⅡ评分、SOFA评分、sTREM-1、IL-1β、sCD14血清水平均为胸外科术后感染病死的影响因素(P<0.05)。结论胸外科术后感染患者血清sTREM-1、IL-1β、sCD14呈高表达,具有较高的感染预测效能和预后评估价值。

THY1蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨胸腺细胞分化抗原1(THY1)蛋白在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。方法选取陕西省第二人民医院2014年3月-2018年3月病理科存档临床病例资料完整的石蜡病理组织,并通过病理分型将其分为3组:上皮性卵巢癌组、卵巢良性肿瘤组及正常卵巢组。应用免疫组化SP染色法,检测上皮性卵巢癌、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织石蜡切片中THY1蛋白的表达情况。结果对比卵巢良性肿瘤组、对照组以及上皮性卵巢癌组的THY1蛋白表达水平,后者表现出最高水平,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);THY1蛋白的表达与上皮性卵巢癌的临床分期及病理分级有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论THY1蛋白参与上皮性卵巢癌的发生发展过程。