人白血病细胞系在胸腺缺陷裸鼠体内致瘤机制研究

目的 探索高致瘤性HL60 n细胞系在胸腺缺陷裸鼠体内致瘤的机制。方法 通过极限稀释法建立HL60 n细胞系致瘤率不同的克隆株 ,并以HL 60为对照 ,对各克隆株进行裸鼠体内、外生物学特性的比较研究。结果 高致瘤性的HL60 n/A、HL60 n/B(6只小鼠全部致瘤 ) ,其软琼脂培养集落形成率 ,特别是大集落形成率 ,较对照HL 60细胞比较差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ,而低致瘤性的HL60 n/E、HL60 F克隆株 (6只小鼠中少于或等于 3只致瘤 ) ,其集落形成率与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5) ;超微结构观察提示高致瘤性克隆株 ,常染色质成分增多 ,异染色质少见 ,胞浆内微丝增多且排列紊乱 ;流式细胞仪细胞周期分布分析显示高致瘤性的克隆株S期细胞比例增加。裸鼠NK细胞对高致瘤性克隆株的杀伤活性显著高于对照的HL 60细胞 (P <0 .0 1 ) ,而低致瘤性克隆株与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5) ;组织病理观察显示低致瘤性的克隆株及对照HL 60细胞 ,所成裸鼠肿瘤组织内有大量的炎性细胞浸润 ,大量肿瘤细胞被杀伤 ,血供丰富区尤甚 ,而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞浸润少见 ,肿瘤组织增殖旺盛。结论 HL60 n细胞系的裸鼠高致瘤机制与下列因素有关 :①软琼脂集落形成率增高 ;②细胞增殖和DNA合成活跃 ;③?

Wnt3a转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞及对β-连环素蛋白亚细胞分布的影响

背景:Wnt信号通路是动物胚胎发育过程中重要的调控通路,建立Wnt信号通路细胞模型对于研究该通路有重要意义。目的:以Wnt3a真核表达质粒转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞,构建能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,观察经典Wnt信号通路对β-连环素蛋白亚细胞分布的影响。方法:将扩增真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0进行酶切鉴定。应用脂质体转染技术将真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0和对照质粒pgk-neo-pcDNA3.0转染入胸腺激酶缺陷细胞,经过G418筛选后挑出细胞克隆,扩大培养。应用RT-PCR技术检测表达产物,应用间接免疫荧光技术检测Wnt3a对鼠胸腺激酶缺陷细胞β-catenin亚细胞分布的影响。结果与结论:Wnt3a质粒经过酶切鉴定证明所扩增的质粒为目的质粒。经过G418筛选3周后,挑选10个稳定转染的细胞克隆,进行RT-PCR检测,可见在L-Wnt3a细胞的cDNA产生1条长度为320bp亮带,表明扩增产物为所需要的目的片段,Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后有Wnt3a在mRNA转录水平表达。转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞cDNA未扩增出目的条带。免疫荧光检测可见Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后细胞浆中有Wnt3a蛋白表达,转染对照质粒组无表达。Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞核中可见明亮的红色荧光,提示β-连环素蛋白在胸腺激酶缺陷细胞-Wnt3a细胞聚集并进入细胞核中。转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞浆未见有明显β-连环素蛋白着色,细胞核中无β-连环素蛋白的聚集。构建了能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,真核表达Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞能够获得稳定表达,促进胸腺激酶缺陷细胞浆中β-连环素蛋白向细胞核转移。

婴儿先天性胸腺缺陷与HIV感染病程

性胸腺缺陷(狄格氏综合征)的婴儿有免疫缺陷和典型的CD4+和CD8+T淋巴细胞计数下降,以及CD5+B淋巴细胞计数亦降低。因为胸腺是CD4+细胞产生所必不可少的,所以研究人员在围产期感染人免疫缺陷病毒(HIV)的婴儿中寻找胸腺缺陷的证据。 作者对59名通过母亲感染HIV的婴儿。