乳糖诱导胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中的表达

目的研究用乳糖替代异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂诱导胸腺融合肽Tα1-TP5表达,并优化诱导表达条件。方法在摇瓶发酵条件下,以乳糖作为诱导剂,SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统研究培养基组成、诱导剂浓度、诱导时机、诱导时间、诱导温度和诱导方式等条件对目的肽Tα1-TP5表达量的影响,并与IPTG诱导结果相比较。结果选用TB培养基,在菌体对数生长的中后期加入终浓度为1 g/L的乳糖,37℃诱导6 h,GST-Tα1-TP5融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,且主要以可溶形式表达,与IPTG的诱导结果相同。分批流加乳糖4次和一次性加入乳糖诱导,融合蛋白表达量无明显差异。结论乳糖可以替代IPTG诱导胸腺融合肽Tα1-TP5的表达。

pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体的构建及表达

旨在构建胸腺融合肽Tα1-TP5原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。化学合成Tα1-TP5基因,与原核表达载体pGEX-4T-1融合并转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳和A lphaEase凝胶电泳图像分析系统对工程菌表达的蛋白进行分析鉴定。表达的GST融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和层析和重组肠激酶切割后,电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定胸腺融合肽Tα1-TP5。结果显示,成功构建pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体,工程菌表达的GST融合蛋白占全菌总蛋白的27.8%,且主要以可溶形式表达。经ESI-MS鉴定,胸腺融合肽Tα1-TP5的分子量与理论值相符。胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中得到了高效表达。

胸腺肽类药物对体外诱导ES细胞分化为T细胞的作用

【目的】研究目前临床常用的增强细胞免疫功能的胸腺肽,胸腺5肽和胸腺素α-1在小鼠胚胎干细胞向T淋巴细胞分化过程中的作用。【方法】借助小鼠胚胎干细胞(ESC)体外自然分化形成的类胚体(EB)中含有三胚层细胞的独特细胞环境,加入多种细胞因子和胸腺多肽,体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化。利用流式细胞仪检测在三种不同胸腺多肽的诱导下,不同时间点的小鼠ESC来源的细胞表面CD3分子的表达水平。并在相应时间点通过RT-PCR检测与T淋巴细胞发育密切相关的Notch信号分子的转录水平。【结果】在加入胸腺肽和胸腺素α1诱导的实验组,均有细胞表达CD3分子,CD3+细胞的百分比随诱导时间的增加而增多;而加入胸腺五肽的实验组无CD3+细胞出现。加入胸腺素α1和胸腺肽的实验组,有Notch1及其配体delta-like-1和delta-like-4的转录;而加入胸腺五肽的实验组的细胞无Notch1及其配体转录。【结论】胸腺素α1或胸腺肽可能通过影响Notch1信号途径支持ES细胞向T细胞分化,而胸腺五肽无此作用。