胸膜肺炎放线杆菌毒素ⅠBD基因特异性片段的克隆及表达

以胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型标准菌株基因组为模板,用PCR扩增ApxⅠBD基因的特异性片段;对PCR产物纯化回收后与载体pMD 18-T进行连接、转化,经酶切和序列分析鉴定后亚克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pETⅠBD;转入大肠埃希氏菌BL21中,以IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳。结果,从APP中克隆的ApxⅠBD DNA序列与已发表序列的同源性为100%,长1 447 bp,编码482个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约54ku,与预期的大小相符。结果表明,含有ApxⅠBD基因特异性片段的重组表达载体pETⅠBD已成功构建。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ抗原模拟表位的筛选与鉴定

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ(APP ApxⅠ)抗血清用饱和硫酸铵分级粗提后,再经DEAE-sepha-dex-A50低压层析系统纯化得到IgG,用此IgG作为配基对噬菌体随机十二肽库进行4轮不同条件的富集筛选。通过改变筛选条件,噬菌体的回收率从1.44×10-6增加到了8.9×10-5,P/N值逐步提高,阳性噬菌体得到了富集。ELISA结果表明,随机挑取的10个噬菌体克隆中,有5个与纯化的IgG有较强的特异性结合能力。对筛选到的5个阳性克隆提取ssDNA进行测序,并对其递呈的氨基酸序列进行分析。结果有3个克隆的4个连续的氨基酸序列(RVDV)相同,并与APP ApxⅠ蛋白的原始序列具有较高的同源性。

胸膜肺炎放线杆菌ApxⅠ蛋白单克隆抗体制备和抗原表位初步鉴定

为了制备胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)Ⅰ型ApxⅠ毒素(ApxⅠ)AI2蛋白特异性单克隆抗体,进而建立用于评估亚单位疫苗免疫效果的阻断ELISA方法,以实验室前期筛选得到的ApxⅠ抗原优势决定簇AI2重组蛋白为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌鼠。利用常规细胞融合和间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,获得4株单克隆抗体,命名为2C2、4E4、5E7和6F2,上清液效价分别为1∶6400、1∶6400、1∶12800和1∶6400。ELISA与Western blot结果表明,制备的4株单克隆抗体均与重组AI2蛋白有良好的反应性。其中5E7可与APP天然ApxⅠ毒素蛋白特异性结合,同时4株单克隆抗体均不与多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏菌、猪丹毒丝菌、副猪格拉菌和猪链球菌2型反应。亚类分型结果表明,2C2、4E4、5E7属于IgG1亚类,6F2属IgG2a亚类,4株单抗轻链均为κ链。通过构建AI2重组蛋白截短体,初步确定线性表位在74~93 aa之间。本研究成功制备了4株针对AI2蛋白单克隆抗体,为APP亚单位疫苗免疫效果评估方法的建立奠定了基础。

柚皮苷可通过多种途径修复猪胸膜肺炎放线杆菌诱导的小鼠肺上皮屏障损伤

旨在研究柚皮苷(naringin,NAR)对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起小鼠肺上皮屏障损伤的防治效果。将40只6~8周龄的雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、NAR低剂量组、NAR中剂量组以及NAR高剂量组。连续灌胃给药8 d,空白组和模型组给予生理盐水。在第7天,小鼠以气管插管灌注的方式感染APP(1×10^(8)CFU·mL^(-1),100μL·只^(-1)),空白组灌注等体积无菌生理盐水,各组小鼠于造模后48 h处死,采样并评估NAR的防治作用。通过X射线图像表明,NAR可降低小鼠肺泡灌洗液中APP载菌量,并且能够缓解肺部病理损伤;此外,NAR干预后,可逆转由于APP诱导的小鼠肺组织中ZO-1、Occludin-1和Claudin-1紧密连接蛋白的表达降低,从而促进肺上皮屏障修复。为进一步探讨NAR促进肺上皮屏障修复的机制,研究发现NAR不仅减少小鼠肺组织中促炎因子IL-6和TNF-α的分泌,还增加了抑炎因子IL^(-1)0表达,同时能够增加抗氧化酶SOD2和Hmox1表达,表明NAR能够增强机体抗炎及抗氧化能力;此外,NAR可抑制TGF-β1/Smad2/3通路,减少由APP诱导的肺纤维组织增生;通过分析凋亡相关关键蛋白和Tunel荧光标记发现,NAR可呈剂量依赖性的减少细胞凋亡。综上所述,NAR可通过抗炎、抗氧化、抗纤维化和抗凋亡等途径,修复小鼠肺上皮屏障损伤,从而有效逆转APP诱导的肺部炎症损伤、发挥防治APP的功效。

胸膜肺炎放线杆菌利用肠菌素摄取铁促生长的研究

肠菌素(Ent)介导的铁摄取系统在病原细菌生长和定植过程中发挥关键作用。胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎的病原,为鉴定该菌不同血清型菌株能否利用肠菌素摄取铁发挥促生长作用,试验选用胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株,首先在限铁条件下通过肠菌素促生长试验鉴定不同血清型菌株能否利用肠菌素;进而通过添加不同浓度的铁螯合剂DFO、细菌接种量、肠菌素等因子,筛选胸膜肺炎放线杆菌利用肠菌素促生长的最适培养条件;最后分别在限铁和富铁培养条件下通过生长曲线鉴定肠菌素对胸膜肺炎放线杆菌12个血清型菌株的促生长作用。结果显示,在测定的胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株中,除血清2型和10型外,其他型菌株在限铁条件下均可利用肠菌素促生长。不同因子筛选结果显示,最适细菌接种浓度为1×10^(4)CFU/mL,添加DFO浓度为20μmol/L,而添加0.4、2.0、10.0μg/mL等不同浓度的肠菌素对胸膜肺炎放线杆菌均有显著促生长作用,且随肠菌素浓度升高而促生长能力显著增强。试验证实胸膜肺炎放线杆菌可利用肠菌素促进其生长,同时证实不同血清型利用肠菌素方面存在显著差异,为解析肠菌素介导的铁摄取系统在胸膜肺炎放线杆菌中的作用机制奠定了基础。

仔猪附红细胞体与传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊治

猪附红细胞体病是由猪附红细胞体附着在猪红细胞上或游离在猪血浆中,从而导致病猪发生贫血、黄疸、电解质失衡等临床症状,属于人畜共患病。猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的肺部炎症,属于革兰氏阴性杆菌,主要以体温升高,口鼻流带血泡沫,胸痛,咳嗽为典型症状。

育肥猪伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒和胸膜肺炎放线杆菌混合感染案例分析

【目的】为猪场防治猪伪狂犬病提供经验借鉴,提升猪场疫病防控水平,提高养殖经济效益。【方法】介绍一起猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株引起17~18周龄生长育肥猪陆续出现严重呼吸道疾病(死亡率高达10%)的案例,通过病猪解剖、胸膜肺炎放线杆菌(APP)分离和常规抗生素药敏试验,以及蓝耳病病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病病毒的病原荧光定量PCR(qPCR)检测,对疫情进行综合诊断。【结果】病料中分离到猪胸膜肺炎放线杆菌,荧光定量PCR检测PRRSV和PRV病原均为阳性,确诊为感染猪伪狂犬病病毒后,继发蓝耳病病毒、胸膜肺炎放线杆菌感染。采取伪狂犬病疫苗免疫+药物保健等措施后,疫情得到控制。【结论】猪场一定要对猪伪狂犬病引起足够的重视,日常生产中需要做好猪伪狂犬病的防控,尤其要执行科学的免疫程序。面对伪狂犬病病毒和其他病原的混合感染,要分清楚哪个是原发病原,哪些是继发感染,从而采取针对性的治疗措施,从根源上控制疫情。

胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素抗原优势决定簇的筛选和融合表达

为了制备胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)亚单位疫苗和建立配套的诊断方法,本研究在对APP的RTX毒素(ApxⅠ~Ⅲ)生物学信息分析的基础上,以APP血清5型和8型的DNA为模板对ApxⅠ~Ⅲ分段扩增后进行截短表达,获得12个截短表达蛋白。利用Western blot对12个表达蛋白进行抗原性分析,确定ApxⅠ~Ⅲ的优势抗原决定簇分别为蛋白AⅠ2、AⅡ3和AⅢ2。以蛋白AⅡ3、AⅢ2、AⅠ2的顺序排列并在蛋白间加入GPGPG氨基酸序列,无缝克隆3个蛋白片段基因,通过原核表达获得融合蛋白A231。该蛋白可与临床APP阳性猪血清特异性结合,具有良好的免疫反应性。该研究的成功开展可为研制具有交叉保护力的亚单位疫苗及建立配套ELISA检测方法奠定基础。

胸膜肺炎放线杆菌分离株血清型的PCR鉴定和Apx毒素基因检测

旨在调查胸膜肺炎放线杆菌流行株的血清型及Apx毒素基因携带情况,采用PCR方法对APP分离株进行血清型鉴定和Apx毒素基因检测。结果表明,64个分离株分别被鉴定为2、5、7、8、12、15、19共7个血清型。7个血清型中发现12种不同的Apx毒力因子模式。毒力因子分析结果显示,同一血清型的不同菌株携带的Apx毒素基因存在差异,不同血清型的菌株也可能会携带相同模式的Apx毒素基因。本研究表明,血清8型胸膜肺炎放线杆菌是浙江省的优势血清型,血清19型菌株在国内首次被检测到。血清型与所携带的Apx毒素基因之间不存在必然联系。

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素ApxⅠ对小鼠的致病性及免疫原性研究

将血清10型胸膜肺炎放线杆菌接种于含0.02%NAD、5%犊牛血清、1mMCaCl2的LB液体培养基中培养12h,离心后的上清液经硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶分子筛层析,分离纯化ApxⅠ。将纯化的ApxⅠ进行半数致死量测定,并对小鼠剖检后进行内脏器官病理变化观察。将纯化的ApxⅠ与弗氏佐剂按1：1的比例混合制备亚单位疫苗,免疫小鼠,初免2周后加强免疫1次,二免2周后用血清10型胸膜肺炎放线杆菌攻毒,测定最佳免疫剂量。根据最佳免疫剂量于30日龄和45日龄免疫小鼠,60日龄时分别用血清1、3、5、7型胸膜肺炎放线杆菌攻毒。结果该毒素对小鼠的LD50为80.9mg/kg,LD50的95%平均可信限为63.2～103.5mg/kg;ApxⅠ亚单位疫苗的最佳免疫剂量为40μg,对血清1、3、5、7型胸膜肺炎放线杆菌的攻击具有一定的免疫保护效果。

胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ蛋白重组腺病毒载体构建及免疫原性研究

研究旨在构建胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ蛋白的复制缺陷型5型腺病毒载体的重组腺病毒。构建包含胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ基因的穿梭质粒pDC316-APXⅡ,并与腺病毒骨架质粒pBHGlox(delta)E13Cre共转染Hek293细胞,获得了重组腺病毒rAd-APXⅡ,将纯化后的重组腺病毒rAd-APXⅡ肌肉注射小鼠进行免疫原性分析。结果显示,试验成功构建了pDC316-APXⅡ质粒以及包装了rAd-APXⅡ病毒。rAd5-Null组未产生特异的APXⅡIgG抗体;低和高浓度rAd-APXⅡ组均可产生较高的APXⅡIgG抗体,其中高浓度组产生的抗体水平显著高于低浓度组(P<0.05);某疫苗组产生的抗体水平显著高于rAd-APXⅡ低浓度组(P<0.05),但低于rAd-APXⅡ高浓度组(P<0.05)。低、高浓度rAd-APXⅡ组和疫苗组的IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3抗体显著高于rAd-Null组(P<0.05);高浓度rAd-APXⅡ组和疫苗组抗体显著高于低浓度rAd-APXⅡ组(P<0.05)。研究表明,rAd-APXⅡ重组腺病毒免疫小鼠能够产生特异性抗体并显示良好的免疫原性。

胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究

为了探究t RNA修饰酶Mnm E对胸膜肺炎放线杆菌(APP)生长特性及致病性的影响,本研究以血清7型APP S8株DNA为模板经PCR分别扩增其Mnm E基因的保守结构域及全长基因,分别构建重组质粒pmnm E及pls88-Mnm E,并经PCR鉴定正确后将重组质粒pmnm E通过接合转移方式导入受体菌S8中,利用氯霉素抗性筛选Mnm E基因缺失株(S8△Mnm E),并经PCR和测序鉴定;将重组质粒pls88-Mnm E电转化至S8△Mnm E感受态细胞中,经卡那抗性筛选Mnm E全长基因回补株(cS8△Mnm E),并经PCR和测序鉴定。将上述两株菌分别在无抗性培养基中传10代每代均经相应PCR鉴定其遗传稳定性。采用q RT-PCR检测Mnm E基因突变对其上下游基因转录水平的影响。结果显示,突变株S8△Mnm E和回补株cS8△Mnm E均正确构建,且遗传稳定性均较好;q RT-PCR结果显示,S8△Mnm E株Mnm E上下游基因的转录水平均与亲本株无明显差异。通过检测不同时间点的OD_(600nm)值并绘制生长曲线分析上述两种菌与亲本株分别在20种不同氨基酸单独缺失培养基中的生长特性;通过微量结晶紫染色法,测定3株菌在不同培养时间生物被膜(BF)的形成能力;通过测定3株菌在不同浓度H_(2)O_(2)中的增殖能力,分析3株菌的体外抗氧化应激能力。结果显示,S8、S8△Mnm E及c S8△Mnm E株在含全部20种氨基酸的化学合成培养基中的增殖速度基本一致,但在谷氨酰胺(Gln)、色氨酸(Trp)、谷氨酸(Glu)缺失时,S8△Mnm E株的增殖水平明显低于亲本株,而在甲硫氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)缺失时S8△Mnm E株的生长速度快于亲本株。培养36 h、48 h时各菌株BF的形成能力基本无差异,但在培养72 h时,S8△Mnm E株BF的形成能力约为亲本株的1.5倍(P<0.001);与S8株相比,S8△Mnm E株经不同浓度H_(2)O_(2)处理后的活菌数均明显降低,且降低水平与H_(2)O_(2)的浓度成正比。而回补株则基本恢复了亲本株的生长特性。通过对大蜡螟的致病性试验测定S8与S8△Mnm E的半数致死量(LD_(50)),结果显示S8的LD_(50)为3.16×10^(8)cfu/mL,S8△Mnm E株的LD_(50)为1.58×10^(9)cfu/mL,前者比后者升高约5倍。本研究结果首次表明Mnm E可参与APP BF的形成,并影响其体外抗氧化应激能力及调控APP生长,降低APP的致病性。为进一步阐明APP的致病机制提供参考依据。

抗菌肽BNBD5调节肺脏先天免疫抵御胸膜肺炎放线杆菌感染的研究

【目的】探究抗菌肽牛中性粒细胞β防御素5(bovine neutrophilβ-defensins 5,BNBD5)调节肺脏先天免疫抵御胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染的作用,为防控猪胸膜肺炎提供试验基础和理论支持。【方法】将30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,即正常对照组(Con)、APP感染对照组(APP)、抗菌肽BNBD5预处理后感染APP组(B5),每组10只,Con组小鼠鼻内给予2次PBS(20μL/只),每次间隔2 d;APP组鼻内给予2次PBS(20μL/只),间隔2 d,3 d后感染APP(107 CFU/只);B5组小鼠鼻内给予2次抗菌肽BNBD5(20μg/只),间隔2 d,3 d后鼻内感染APP(107 CFU/只),感染6 h后剖杀所有小鼠,观察肺脏和脾脏的病变,测定脏器系数和肺脏中的细菌载量;HE染色观察肺脏组织病理变化;ELISA检测肺脏组织匀浆液中的细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-23、IL-17和IL-22水平;流式细胞术检测肺脏中的中性粒细胞数量。【结果】与Con组相比,APP组小鼠被毛粗乱、精神萎靡,肺脏肿大,可见明显斑块状或点状出血,镜下可见肺脏组织有明显出血和大量炎性细胞浸润,肺脏中TNF-α、IL-1β、IL-17、IL-22和IL-23细胞因子水平变化不显著(P>0.05),但均呈不同程度下降,中性粒细胞数量减少;与APP组相比,B5组小鼠精神状态较好,肺脏肿胀程度减轻,肺脏指数显著降低(P<0.05),未见明显斑块状出血,肺脏中的细菌载量极显著减少(P<0.01),肺脏中炎性细胞明显减少,肺脏组织中TNF-α、IL-1β、IL-17和IL-22水平显著升高(P<0.05),肺脏组织中中性粒细胞数量极显著增多(P<0.01)。【结论】抗菌肽BNBD5能在感染早期改善APP引起的肺脏免疫抑制,增强肺脏先天免疫杀伤胸膜肺炎放线杆菌。

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立

根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析表明 ,该基因在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中获得了表达 ,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板 ,建立了检测毒素I血清抗体的ELISA方法。临床应用表明 。

猪胸膜肺炎放线杆菌山东分离株的血清型与Apx毒素型研究

从山东省不同地区采集的85份具有严重呼吸道症状病死猪的肺脏、气管和扁桃体进行胸膜肺炎放线杆菌(APP)的分离鉴定,采用凝集试验和PCR方法对分离菌株进行血清型和APX毒素型的检测.结果从山东省不同地区分离到20株分属5个血清型的APP,其中,血清7型6株、血清5型5株、血清3型4株、血清4型3株、血清8型2株,血清7型、5型为优势血清型.不同地区分离的APP血清型不同,同一地区也存在不同的血清型.PCR检测结果表明,不同血清型的APP共含有4种溶血毒素(Apx),其中,血清3、4、8型APP含ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ,血清5型含Apx Ⅰ、ApxⅡ和ApxⅣ,血清7型含ApxⅡ和ApxⅣ,20株APP分离株均含有ApxⅡ和ApxⅣ两种毒素,表明野毒株的血清型与毒素基因的种类有一定的相关性.毒素序列分析结果表明,相同毒素型APP,其毒素基因序列的同源性在99.5%～100%之间,与血清型无关.致病性试验结果表明,所含毒素类型不同的APP对小白鼠的致病性不同,其中含Apx Ⅰ和ApxⅡ的血清5型APP毒力最强.该研究为猪传染性胸膜肺炎的免疫预防、亚单位疫苗的研制及基于ApxⅣ的PCR检测奠定了基础.

胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIVA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立

参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2 4 4 5bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET_2 8b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,再转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG的诱导下表达大小约 90kD的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在 ,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法 (ApxIVA_ELISA) ,特异性良好。用ApxIVA_ELISA检测猪胸膜肺炎三价 (1、2和 7型 )灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性 ,而 1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明 ,ApxIVA_ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体 ,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素ⅢA基因的克隆、序列分析及原核表达

因胸膜肺炎放线杆菌的致病性主要是由毒素决定的 ,故参照猪胸膜肺炎放线杆血清2型菌株的序列 (GenBankL1 2 1 4 5)设计了一对特异性引物 ,用PCR的方法扩增apxⅢA基因并得到了长 3 466bp的片段 ,然后将其克隆到pMD 1 8T中 ,经酶切鉴定和序列分析表明克隆是成功的 ;再将apxⅢA插入到原核表达载体pET 2 8b后 ,转化BL2 1 (DE3) ,在IPTG诱导下获得高效表达 ,经Westernblotting检测证实表达产物有活性。以表达产物包被ELISA板 ,建立了特异、敏感的ELISA诊断方法。

猪胸膜肺炎放线杆菌溶血毒素的克隆表达及其对小鼠免疫保护作用

将猪胸膜肺炎放线杆菌血清3型分离株的ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA基因和血清5型分离株的ApxⅠA基因分别克隆到原核表达载体pGEX-5X-3,并在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果表明重组菌表达的最佳条件为诱导时间2小时和IPTG终浓度1mmol/L。通过硫酸铵盐析和SephadexG-200凝胶过滤层析纯化表达产物。Westernblot检测结果显示表达产物具有免疫活性。按照不同组合将表达产物与弗氏佐剂等比例混合,制备3种亚单位疫苗。并在30日龄和45日龄免疫小白鼠,在60日龄分别用血清1、3、5、7和10型胸膜肺炎放线杆菌攻毒。血清1、5和7型胸膜肺炎放线杆菌攻毒后,3种亚单位疫苗分别提供58.4%、66.6%和91.7%的保护率。试验结果表明重组蛋白具有免疫保护作用,且含有四种融合蛋白的亚单位疫苗免疫保护效果最佳。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素基因的克隆与表达

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%。随后将该片段亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,经鉴定后得到重组质粒pET-ApxⅣ,将此重组质粒转化到受体菌BL21-DL3中,并用诱导剂乳糖进行诱导表达,5 h后表达达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白约为61 000。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。

胸膜肺炎放线杆菌ApxII毒素结构基因的原核表达以及重组蛋白的免疫原性分析

猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA进行了全基因克隆和测序,并利用原核表达载体pGEX-6P-1在E.coli中进行了原核表达。表达产物以包涵体形式存在,包涵体蛋白经过洗涤后作为抗原用于Western-blotting免疫印迹实验,结果表明重组的ApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性。