胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /更昔洛韦 (GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法 通过脂质体将胸苷激酶 (TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl 2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase 3)表达变化及caspase 3活性变化。结果 药物作用 72h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为 72 50%,高于GCV作用后的 35 00%和大蒜素作用后的 37 00%,二者可发挥协同抑瘤作用; (F=6 46,P<0 05)。GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和G2 期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl 2表达并可促进caspase 3表达及活化。结论 HSV TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长。细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用。

胸苷激酶基因系统杀伤前列腺癌细胞的流式细胞术分析

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导人-前列腺癌细胞死亡的机制。方法利用脂质体介导的基因转染技术将携带HSV-TK基因的EB病毒表达载体导入激素非依赖性人前列腺癌(HRPC)细胞系PC-3m并给予GCV,采用流式细胞术(FCM)观察PC-3m细胞周期变化以及细胞坏死和凋亡情况。结果HSV-TK/GCV系统可使PC-3m细胞周期S期比例升高,高浓度GCV组尤其明显,S期细胞比例由16.73％升至33.60％;10和100μmol/L GCV作用72 h后,PC-3m细胞可出现较为明显的细胞坏死和凋亡,比例分别为13.54％、12.45％、34.70％和10.11％。结论细胞坏死和凋亡均参与了HSV-TK/GCV系统诱导的PCa细胞死亡,以细胞坏死比例稍高;TK自杀基因系统杀伤前列腺癌细胞时可能不依赖于其p53表达背景,因而具有更广阔的应用前景。

HSV-TK/GCV系统在体外对胃癌MNK-45细胞株的增殖抑制作用研究

目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞在24,48,72和96h的增殖、侵袭和迁移的改变;对MNK-45细胞凋亡相关蛋白mRNA水平的变化。结果HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞的增殖效应,并能够减弱胃癌MNK-45细胞的侵袭和迁移能力,诱导MNK-45细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax蛋白水平和mRNA的表达增加,抑制Bcl-2蛋白表达水平的降低,促进凋亡的发生。结论HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移,诱导MNK-45细胞凋亡的发生。