基于TCGA数据库分析胸苷酸合成酶基因在食管癌组织中的表达及临床意义

目的探讨胸苷酸合成酶(TYMS)基因在食管癌(ESCA)患者中的表达及其与临床特征和预后的关系。方法从癌症基因组图谱数据库下载ESCA患者的原始转录组测序数据、临床信息及临床病理学资料,应用t检验和χ^(2)检验评估TYMS基因在食管癌组织与正常组织间的表达差异,受试者操作特征(ROC)曲线评估TYMS基因对ESCA的诊断价值;Kaplan-Meier生存分析比较不同表达TYMS水平ESCA患者的无进展间隔(PFI)率、总生存(OS)率和疾病特异性生存(DSS)率;应用Cox回归分析和预后列线图确定TYMS基因对ESCA预后的评估价值;并使用单样本基因集合富集分析免疫浸润水平与TYMS基因表达的相关性。结果共获取173例样本的临床病理学资料,其中11例为正常样本,162例为ESCA样本。总样本中,ESCA组织中TYMS基因表达水平显著高于正常样本(t=6.344,P<0.001);在8例配对ESCA和邻近癌旁组织中,ESCA组织中TYMS基因表达水平显著高于邻近癌旁组织(t=6.866,P<0.001)。TYMS高表达组与TYMS低表达组患者的临床分期、病理分级、是否行放射治疗及是否为Barrett食管比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者的年龄、体质量及组织学分型比较差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,TYMS基因诊断ESCA的曲线下面积为0.949,95%置信区间为0.896~1.000,敏感度为0.909,特异度为0.791。TYMS基因高表达与TYMS基因低表达患者的OS率、DSS率和PFI率比较差异无统计学意义(HR=0.940、1.040、0.980,P>0.05)。在体质量>70 kg的ESCA患者中,TYMS基因高表达患者的OS率显著低于TYMS基因低表达患者(P<0.05);在非Barrett食管疾病的ESCA患者中,TYMS基因高表达患者的OS率显著低于TYMS基因低表达患者(P<0.05)。在不同T、N、M分期及病理分级、是否行放射治疗、不同年龄段、食管癌、Barrett食管疾病及体质量≤70 kg患者中,TYMS基因高表达与TYMS基因低表达患者的OS率比较差异无统计学意义(P>0.05)。从ESCA患者体质量及非Barrett食管ESCA患者2个方面,构建TYMS基因水平预测ESCA患者生存列线图显示,随总分值的增加,1、2、3 a生存率下降;预后列线图的C指数达到0.563(0.474~0.650),所建立的1、2、3 a存活曲线与理想存活曲线匹配。单因素分析显示,M、N期和初次治疗结果与ESCA患者的OS率相关(P<0.05),TYMS基因表达水平与ESCA患者的OS率无关(P>0.05)。多因素分析显示,肿瘤分期M、N期是影响ESCA患者生存期的独立危险因素(P<0.05)。TYMS基因表达水平与肥大细胞、嗜酸性粒细胞、树突状细胞和辅助性T细胞17的表达水平呈负相关(r=0.302、0.244、0.256、0.270,P<0.05)。结论TYMS基因在ESCA组织中高表达,可调节ESCA免疫微环境,不同程度促进肿瘤发展;TYMS基因表达水平并非ESCA患者的独立预后影响因素,可作为ESCA的诊断和部分类型ESCA患者预后预测的潜在生物标志物。

胸苷酸合成酶基因多态性及烟酒茶嗜好与贲门癌易感性的关系

目的 :研究胸苷酸合成酶TS3′ UTR多态性及其和烟酒茶嗜好相互作用与贲门癌易感性的关系。方法 :在上消化道癌高发区淮安市进行了一个病例对照研究 (贲门癌 89例 ,人群对照 2 2 3例 ) ,调查研究对象的生活习惯 ,采用PCR RFLP技术检测研究对象的TS 3′ UTR基因型。结果 :贲门癌组TS +6/+6bp、+6/-6bp和 -6/-6bp基因型频率分别为7 9%、43 8%和 48 3 % ,与对照组( 8 1%、5 4 3 %和 3 7 7% )相比差异无统计学意义。与携带TS +6bp等位基因且不吸烟、每周饮酒 <2次和饮茶者相比 ,在吸烟、每周饮酒≥ 2次和不饮茶者中 ,携带TS -6/-6bp基因型者发生贲门癌的危险性显著上升 ,调整后的OR分别为 3 99( 95 %CI:1 5 1～ 10 5 0 )、3 2 2 ( 95 %CI :1 2 1～8 5 5 )和 6 14 ( 95 %CI:2 3 9～ 15 77)。结论 :TS 3′ UTR基因多态性影响吸烟。

晚期肺腺癌胸苷酸合成酶和培美曲塞疗效分析

目的探讨IIIB/IV期肺腺癌胸苷酸合成酶(TS)与培美曲塞化疗疗效的关系。方法回顾性分析38例接受以培美曲塞化疗的IIIB/IV期肺腺癌,RT-PCR法检测肿瘤标本TS表达,并对化疗疗效进行分析。结果 TS高表达(+)26.32(10/38),TS表达与患者的性别、临床分期、PS评分无关。化疗客观缓解率(CR+PR)为34.21(13/38),其中TS低表达患者客观缓解率为39.29%(11/28),而TS高表达患者客观缓解率为20.00%(2/10),差异无统计学意义(P=0.087);TS低表达患者疾病控制率为89.29%(25/28),TS高表达患者疾病控制率为40.00%(4/10),差异有统计学意义(P=0.002)。结论推测TS可作为NSCLC对培美曲塞的敏感性预测指标之一。

胸苷酸合成酶基因多态性及其蛋白表达与食管鳞状细胞癌淋巴结转移的关系

背景与目的:胸苷酸合成酶(thymidylatesynthase,TS)是DNA合成的关键酶。TS基因5′非编码区(untranslatedregion,UTR)串联重复序列和G/C单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)可能导致酶表达或活性的改变,从而改变个体对肿瘤的易感性及预后。本实验的目的是探讨TS5′-UTR多态性与食管鳞状细胞癌(esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)淋巴结转移的关系,并探讨此多态性对TS蛋白表达的影响。方法:从232例ESCC患者和348例健康对照的外周血中提取白细胞DNA,分别用PCR和PCR-RFLP方法检测TS5′UTR28bp串联重复序列和G/CSNP的基因型。51例患者的术后切除组织采用免疫组织化学染色的方法(S-P法)检测肿瘤组织中的TS蛋白的表达情况。结果:5′UTR的3G/3G,3G/3C,3C/3C,2R/3G,2R/3C,2R/2R和其它基因型频率在健康对照组分别为17.5%,17.3%,29.3%,12.9%,17.8%,3.7%,1.5%和在病例组中分别为16.0%,16.0%,29.3%,13.8%,17.6%,4.3%,3.0%;3G,3C,2R和其它等位基因型频率在健康对照组中分别为32.8%,47.0%,19.5%,0.7%和在病例组中分别为31.2%,46.8%,20.5%,1.5%。与3G/3G基因型相比,2R/3G基因型显著增加淋巴结转移的危险性(年龄和性别校正OR=11.53,95%CI=2.67～49.74)。TS表达水平与患者的性别、年龄、淋巴结转移和临床病理分期无关,而与TS5'UTR基因型密切相关(P<0.05)。结论:TS5′UTR重复序列及SNP多态性与ESCC淋巴结转移有关,而TS蛋白表达水平与淋巴结转移无关。

胸苷酸合成酶抑制剂雷替曲塞的合成

以L-谷氨酸二乙酯为手性元,采用汇聚合成法分别以2-氨基-5-甲基-苯甲酸为原料经环合、溴化制得2-甲基-6-溴甲基-3-氢-喹唑啉-4-酮(4),收率为69.1%;以2-噻吩甲醛为原料经硝化、氧化、酰氯化、缩合、还原及N-甲基化制得N-[5-(N-甲氨基)-2-噻吩甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(3),收率为25.4%;2-噻吩甲醛以硝酸-乙酸酐硝化后再经过氧化氢氧化制备5-硝基噻吩-2-甲酸,收率为62.2%;N-(5-氨基-噻吩-2-甲酰基)-L-谷氨酸二乙酯(10)的N-甲烷化反应中采用胺与碘甲烷摩尔比1∶1.1,一次性加入碘甲烷,收率为79.9%。化合物3与化合物4缩合生成N-[5-[N-[(3,4-二氢-2-甲基-4-氧-6-喹唑啉基)-甲基]-N-甲氨基]-2-噻吩甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(2),继而水解即得目标化合物雷替曲塞(1),总收率为22.5%。其结构经红外光谱、核磁共振谱、高分辨质谱及元素分析确证。

胸苷酸合成酶基因多态性与不同种族乳腺癌FEC方案化疗不良反应相关性研究

目的了解胸苷酸合成酶基因(TYMS)多态性在乳腺癌患者中的分布及其基因型与化疗不良反应的关系。方法选取雌激素受体基因5'端非编码区的28 bp串联重复序列(VNTR)作为遗传标记,运用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法对50例白种人和23例亚裔乳腺癌患者进行基因分型,结合患者临床病理特征、FEC化疗不良反应和生存数据进行分析。结果 TYMS 28 bp VNTR基因型在白种人群2R/2R、2R/3R和3R/3R的基因型频率分别为12.0%、62.0%和26.0%,在亚裔人群分别为4.4%、30.4%和65.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。TYMS 28 bp VNTR位点的等位基因及基因型与患者组织学类型、组织学分级、淋巴结转移、临床分期、雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体-2表达等无关。所有患者平均随访时间43.21个月,复发5例,死亡5例;单因素及多因素分析提示TYMS基因型不是影响预后因素。亚裔人群化疗后3-4级白细胞减少症发生率显著高于白种人群(86.96%vs 60.00%,P=0.021);TYMS 28 bp VNTR3R/3R基因型中,3-4级白细胞减少症发生率高于2R/3R、2R/2R,但差异无统计学意义(75.00%vs65.79%,57.14%,P=0.578)。结论白种人与亚裔乳腺癌患者FEC化疗耐受性存在差异,可能与两者TYMS基因28 bp VNTR多态性差异有关。

胸苷酸合成酶基因3′-UTR多态性与晚期胃癌化疗敏感性关系的研究

目的:研究胸苷酸合成酶(TS)基因3′-UTR多态性与胃癌对5-FU化疗敏感性的关系。方法:收集经病理学确诊的晚期胃癌106例,所有病例化疗前抽静脉血,提取白细胞DNA,用PCR-RFLP技术检测TS3′-UTR基因型。所有患者均经5-FU为基础的化疗方案治疗。以WHO实体瘤疗效评定标准和毒性评定标准评价疗效和毒性。结果:(1)106例胃癌患者中TS+6/+6bp、+6/-6bp、-6/-6bp基因型频度分别为7·6%、44·3%和48·1%,化疗的总有效率为35·9%。(2)TS+6/+6bp、+6/-6bp、-6/-6bp基因型组化疗的有效率分别为0%(0/8)、40·4%(19/47)和37·3%(19/51)。TS-6/-6bp基因型组和+6/-6bp组化疗的有效率均显著高于+6/+6bp组(Fisher双侧精确检验,P值分别为0·0452和0·0404)。TS-6/-6bp基因型组II度以上毒副反应的发生率高于+6bp/+6bp基因型组,但其差异无统计学意义。结论:TS基因3′-UTR多态性与晚期胃癌对5-FU为基础的化疗敏感性相关。TS基因型检测有助于指导晚期胃癌的化疗。

运用mRNA体外展示技术筛选胸苷酸合成酶RNA亲和肽

以体外选择方法筛选不同功能的核酸、肽和蛋白质是近年的研究热点,mRNA体外展示是一种新兴的高效多肽选择技术,其基本原理是通过含嘌呤霉素寡核苷酸的Linker使mRNA与它编码的肽或蛋白质共价结合,形成mRNA-蛋白质融合体,这一方法已用于多种功能肽的鉴定.以mRNA体外展示技术进行了由大容量多肽库中(>1013)筛选胸苷酸合成酶(thymidylatesynthase,TS)RNA亲和肽的研究,通过精密的实验设计,建立了一套完整有效的筛选方法,并对实验条件进行了优化.已进行了8轮筛选,结果表明,以mRNA体外展示技术获得的多肽分子,可以与TSmRNA亲和.将测序结果与初始肽库进行比较,发现亲和肽中碱性氨基酸及芳香族氨基酸含量明显增加,说明其在与RNA结合中具有重要作用.mRNA展示技术作为一种大容量文库的体外筛选方法,将广泛应用于与固定化靶物质具高度亲和性及特异性的多肽和蛋白质的筛选.

胸苷酸合成酶基因多态性与ALL儿童HD-MTX毒副作用的相关性

目的:研究胸苷酸合成酶(TS)基因(TYMS)多态性与大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)时毒副作用的相关性。方法:75例ALL中有52例接受了HD-MTX治疗,对患儿用药后的一般反应、皮肤黏膜损害、骨髓抑制等临床表现和血尿常规、肝肾功能、心肌酶、心电图等进行统计分析,并采用DNA直接测序技术检测ALL儿童TYMS多态性(rs699517、rs2790和rs11280056),分析MTX毒副作用与其关系。结果:TYMS rs2790与ALL儿童性别相关,与AA基因型相比,携带等位基因G者男孩数约是女孩的3倍(OR=3.05,95%CI=1.14～8.19,P=0.024)。rs2790基因型与HD-MTX引起的中性粒细胞减少发生也相关,GG基因型使中性粒细胞减少的发生危险降低(OR=0.07,95%CI=0.01～0.64,P=0.026)。rs699517和rs11280056与ALL儿童发病年龄、性别以及HD-MTX毒副作用均无相关性(P>0.05)。结论:TYMS rs2790可能与HD-MTX毒副作用具有相关性,对ALL男性儿童影响较大。

亚甲基四氢叶酸还原酶和胸苷酸合成酶基因多态与乳腺癌化疗敏感性关系的研究

目的:观察亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T、A1298C多态和胸苷酸合成酶(TS)基因5′-UTR(28bp)、3′-UTR(6bp)多态与乳腺癌患者对化疗敏感性的关系。方法:乳腺癌患者87例,其中新辅助化疗61例,晚期姑息化疗26例。分别接受CAF、AT方案化疗。所有病例化疗前抽静脉血,提取白细胞DNA,用PCR-RFLP技术检测分析MTHFR和TS基因型。结果:87例乳腺癌患者化疗总有效率为69.0%。39例接受CAF方案化疗患者有效率为61.5%,48例接受AT方案化疗患者的有效率为75.0%。MTHFRC677TT/T基因型患者的化疗有效率(87.5%)显著高于C/C基因型患者(52.4%),χ2=6.24,P=0.01。CAF方案化疗组患者中,MTHFRC677TT/T、T/C基因型患者的化疗有效率(90.0%、68.8%)显著高于C/C基因型患者(30.8%),χ2=8.74,P=0.011。61例新辅助化疗患者,MTHFRC677TT/T基因型患者的化疗病理反应率(83.3%)显著高于C/C基因患者(35.7%),χ2=7.619,P=0.006。TS6bp-6/-6基因型患者的化疗病理反应率(80.8%)显著高于-6/+6基因患者(46.7%),χ2=6.911,P=0.009。接受AT方案化疗的患者中TS-6/-6基因型患者的化疗病理反应率(92.9%)显著高于-6/+6基因型患者(45.5%),χ2=6.866,P=0.009。结论:MTH-FRC677T和TS6bp基因多态性对指导乳腺癌临床个体化治疗具有较高的应用价值。

胸苷酸合成酶、胸苷酸磷酸化酶的表达与培美曲塞时辰化疗的疗效分析

目的构建肺腺癌A549细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,研究按昼夜不同时辰给予培美曲塞是否能提高疗效和降低不良反应,分析胸苷酸合成酶(TS)mRNA和胸苷酸磷酸化酶(TP)mRNA表达高低与培美曲塞疗效以及不良反应的关系。方法常规方法体外培养肺腺癌A549细胞。待肿瘤体积生长至0.5～1.5 cm3,随机将荷瘤鼠分为四组,每组5只,其中三组严格按照每昼夜24 h的三个时间点给药即:早晨7点(光照后0h)、中午15点(光照后8 h)、晚间23点(光照后16 h)进行腹腔给药,第四组为对照组,腹腔给予同体积的0.9%氯化钠溶液。培美曲塞按照150 mg/kg应用,每天一次,连续4天。以后每周测量瘤体积,裸鼠体重,观察裸鼠的行为状态、精神以及食欲变化。实验结束时称量剥离的裸瘤重量。应用实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)检测肿瘤组织中TS mRNA和TPmRNA的表达水平。结果 7 h给药组裸鼠体重增长较快(P=0.041),化疗不良反应较小,瘤体积生长最慢(P=0.032),抑瘤率最大(P=0.000)。7 h给药组的肿瘤组织中TS mRNA相对表达量最低,TP mRNA的相对表达量对高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论培美曲塞对肺腺癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,疗效及不良反应与时辰给药有关,7 h给药组疗效最佳,化疗不良反应最小;TS和TP可以作为培美曲塞的疗效预测因子,为培美曲塞的个体化临床用药提供参考。

胸苷酸合成酶基因多态性与氟尿嘧啶治疗晚期胃癌疗效相关性的研究

目的:研究胸苷酸合成酶(TS)基因的5’-UTR28bp核苷酸片段重复多态和3’-UTR1494修饰处存在的6bp核苷酸片段缺失或插入多态与应用以氟尿嘧啶(5-FU)为主的联合化疗方案治疗胃癌疗效的相关性。方法:收集经病理学确诊的晚期胃癌74例,所有患者使用以5-FU为主的化疗方案治疗,化疗前抽静脉血,提取白细胞DNA用PCR-DHPLC技术检测TS5’-UTR28bp及3’-UTR6bp基因型。结果:(1)74例胃癌患者的TS5’-UTR28bp3R/3R、2R/2R+2R/3R基因型分别为21.6%(16/74)和78.4%(58/74),而相应的化疗客观有效率分别为6.3%(1/16)和36.2%(21/58),3R/3R组的化疗疗效比2R/2R+2R/3R组低(χ2=4.05,P<0.05);(2)74例胃癌患者的TS3’-UTR+/+6bp、+/-6bp、-/-6bp基因型分别为5.4%(4/74)、52.7%(39/74)和41.9%(31/74),相应各组的化疗有效率分别为0(0/4)、25.6%(10/39)和41.9%(13/31),不同基因型与化疗疗效之间无相关性(P=0.076)。结论:TS5’-UTR28bp多态性与5-FU疗效之间存在相关性,其检测有助于指导晚期胃癌选择5-FU化疗,而TS3’-UTR多态性与5-FU疗效之间没有显示相关性。

结直肠癌组织胸苷酸合成酶的表达及临床意义

目的:探讨了胸苷酸合成酶(TS)在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:用免疫组化SP法检测72例结直肠癌组织中TS的表达,按TS表达水平将患者分为2组:高表达组和低表达组,用Kaplan-Meier法分析TS的表达与临床病理特征和预后的相关性。用多因素COX模型分析影响患者预后的相关因素。结果:在72例结直肠癌组织中TS表达从15%~95%不等,平均(49.79±25.05)%。TS的表达随Dukes分期的增加而增加,但无统计学意义(P=0.145)。早期(Dukes A^B)结直肠癌的预后明显优于晚期结直肠癌(Dukes C、D),P<0.0001。TS低表达者预后优于高表达患者。治疗前血清CEA、CA19-9水平正常者预后较好,CEA、CA19-9升高者预后较差。多因素分析显示Dukes分期、TS表达状况、CEA是影响预后的因素。结论:结直肠癌治疗前Dukes分期是影响预后的主要因素。TS的表达状况、CEA也是影响预后的参考指标。

含培美曲塞方案治疗非小细胞肺癌疗效与胸苷酸合成酶基因多态性的相关性研究

目的探讨含培美曲塞方案治疗晚期非鳞型非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及其与胸苷酸合成酶基因(TYMS)多态性的关系。方法 67例晚期非鳞型NSCLC患者接受培美曲塞单药或联合铂类治疗,具体用药为:培美曲塞500mg/m2静滴,第1天;顺铂75mg/m2或卡铂AUC=5静滴,第1天,21天为1周期。取患者外周静脉血白细胞提取DNA,采用PCR及PCR-RFLP法检测TYMS基因5’-非翻译区(UTR)重复序列多态性和3’-UTR缺失/插入多态性,并分析其与疗效的关系。结果 67例患者均可评价疗效,有效率为28.4%,疾病控制率为76.1%;中位无进展生存期为3.5个月。TYMS基因5’-UTR重复序列多态性基因型和3’-UTR缺失/插入多态性基因型与含培美曲塞方案治疗的有效率和疾病控制率均无关。结论 TYMS基因5’-UTR串联重复序列多态性与3’-UTR缺失/插入序列多态性基因型与含培美曲塞方案治疗晚期非鳞型NSCLC的疗效无关,TYMS基因多态性能否预测含培美曲塞方案的疗效尚需进一步研究证实。

胃癌组织中胸苷酸合成酶、胸苷磷酸化酶mRNA表达及其临床意义

背景与目的:化学治疗在胃癌治疗中扮演了重要的作用。通过肿瘤组织中某些基因表达的水平来选择化疗药物已成为今后化疗的方向。胸苷酸合成酶(TS)、胸苷磷酸化酶(TP)是氟尿嘧啶(5-FU)体内的关键代谢酶,其表达水平影响恶性肿瘤患者接受5-FU化疗后的预后。本研究探讨胃癌组织中TS、TP mRNA表达水平与预后的关系。方法:采用实时定量RT-PCR技术检测51例胃腺癌组织TS、TP mRNA表达水平。结果:胃癌组织TS、TP mRNA表达水平的中位数分别为0.94和21.20,TS高表达组和低表达组之间无瘤生存期和总生存期差异有显著性(P<0.05),TP高表达组和低表达组之间总生存期差异有显著性(P<0.05),但无瘤生存期之间差异无显著性(P>0.05)。TS、TP mRNA表达与年龄、性别、淋巴结转移、组织学分级及临床分期均无相关性(P>0.05)。结论:检测TS、TP mRNA表达水平对接受5-FU为基础治疗方案的胃癌患者的预后有很好的预测价值。

二氢嘧啶脱氢酶(DPD)与胸苷酸合成酶(TS)在结直肠癌中的表达及预后价值

目的:探讨5-FU代谢酶在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法:44例结直肠癌根治术后分别施以5-FU为主的辅助化疗,并通过免疫组化检测二氢嘧啶脱氢酶(DPD)和胸苷酸合成酶(TS)的表达。结果:DPD阳性表达的结直肠癌无病生存期显著缩短(P=0.047),而总生存期也有缩短的趋势,但差异无显著意义(P=0.136)。而TS表达与预后无关(P>0.05),但TS在晚期肿瘤中表达较高(P<0.05)。结论:在接受5-FU为主辅助化疗的结直肠癌患者中,DPD表达可作为预后的重要指标。TS表达与临床分期密切相关,可视为结直肠癌进展的生物学标志。

胸苷酸合成酶免疫组化染色在标记前列腺基底细胞中的应用

目的评估胸苷酸合成酶(thymidylate systhase,TS)作为前列腺基底细胞分子标志的敏感性和特异性及其在前列腺癌诊断中的临床价值。方法应用免疫组化En Vision法检测TS、P63、CK-H(抗体克隆号:34βE12)、P504S在108例前列腺组织样本中的表达,其中正常和前列腺增生样本27例、前列腺非典型上皮内瘤变样本18例、前列腺腺癌样本63例,并比较TS与前列腺基底细胞特异性标志物P63、CK-H之间的一致性。结果 TS能特异性地高表达于前列腺基底细胞胞核内,且其表达模式和强度与P63的表达完全一致,CK-H在基底细胞胞质中呈强阳性表达。统计学分析结果显示,TS在前列腺基底细胞中的表达与P63和CK-H具有高度一致性(Kappa≥0. 75),而且,TS作为前列腺基底细胞分子标志的特异性和敏感性均为100%。同时,TS在3例(16. 7%)前列腺上皮内瘤变样本中弱阳性表达于腺泡细胞胞质内,TS在25例(39. 7%)前列腺腺癌细胞胞质内呈不同强度阳性表达。P63和CK-H在前列腺腺泡细胞和腺癌细胞胞质中不表达。P504S在前列腺腺癌细胞质中呈强阳性表达。结论胸苷酸合成酶能特异性表达于前列腺基底细胞核内,因而,可作为一种新的前列腺基底细胞的特异性分子标志而用于前列腺良恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断。

干酪乳杆菌胸苷酸合成酶基因的分子克隆与序列测定

本研究的目的是以干酪乳杆菌 Ｌ． ｃａｓｅｉ ３４１０３染色体 ＤＮＡ为模板，利用 ＰＣＲ技术扩增出胸苷酸合成酶（Ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ， ｔｈｙＡ）基因，利用玻璃奶回收纯化试剂盒回收纯化ｔｈｙＡ基因，并将其克隆入以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒ｐＷ４２５ｅ，再转化Ｘ５１感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒，进行酶切鉴定、ＰＣＲ扩增鉴定，并对ｔｈｙＡ基因片段进行测序，与已知序列进行同源性比较，结果表明成功克隆了 ｔｈｙＡ基因，全长约 １．１ｋｂ，与国外报道的 ｔｈｙＡ基因同源性达９９％。这为构建以ｔｈｙＡ基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体奠定了基础。

胸苷酸合成酶基因多态性与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者效果的相关性

目的探讨胸苷酸合成酶(TS)rs34743033(5'端非编码区28 bp重复序列)及rs34489327(3'非编码区的1 494 bp处6 bp核苷酸片段的缺失或插入)与培美曲塞治疗海南黎族肺腺癌患者疗效与预后的相关性。方法手术后经病理诊断确认海南晚期肺腺癌患者104例,采用PCR的方法检测5'端28 bp重复序列多态性;采用焦磷酸测序的方法检测3'端6 bp核苷酸片段的缺失或插入,随访记录患者的无进展生存时间和总生存期。结果 TS基因5'端非编码区rs34743033多态性位点3R/3R、2R/3R、2R/2R基因型在肺腺癌患者所占的比例分别为67.3%(70/104)、17.3%(18/104)、15.4%(16/104)。3'端非编码区rs34489327多态性位点+6 bp/+6 bp、+6 bp/-6 bp、-6 bp/-6 bp基因型在肺腺癌患者中所占比例分别为53.8%(56/104)、34.6%(36/104)、11.5%(12/104)。2R/2R和2R/3R基因型患者分别为12.00和18.50个月,3R/3R基因型患者中位无复发生存时间和总生存时间分别为11.63和18.17个月,二者之间无显著相关;-6 bp/-6 bp和-6 bp/+6 bp基因型患者分别为12.00和18.70个月,+6 bp/+6 bp基因型患者中位无复发生存时间和总生存时间分别为11.50和19.17个月,二者之间无显著相关。结论 TS基因rs34743033及rs34489327多态性可能与培美曲赛治疗海南黎族肺腺癌的疗效和预后无关。

老年晚期结直肠癌患者肿瘤组织胸苷酸合成酶表达与氟尿嘧啶敏感性、副反应及预后的关系

目的探讨老年晚期结直肠癌患者肿瘤组织中胸苷酸合成酶(TS)阳性表达情况及其与氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性、副反应及预后的关系。方法接受5-Fu方案化疗且病理明确的结直肠癌患者采用免疫组化法检测肿瘤组织及癌旁(距病灶边缘>5 cm)的正常大肠组织中TS表达情况。同时分析TS对5-Fu化疗敏感性、毒副作用及患者预后的影响。结果结直肠癌组织中TS阳性表达率〔74.36%(58/78)〕显著高于正常癌旁组织〔10.26%(8/78)〕(P<0.05)。TS表达与结直肠癌患者淋巴结转移、阳性淋巴结数、分化程度、浸润程度有关(P<0.05)。TS阳性表达患者恶心呕吐、骨髓抑制、腹泻、口腔黏膜炎化疗毒副反应率显著高于TS阴性患者(P<0.05)。结论 TS高表达水平与结直肠癌发生及病情进展具有密切的关系。结直肠癌组织中TS表达可作为患者化疗敏感性、化疗副反应及预后的评价指标。