Ghrelin基因敲除对小鼠黑质区多巴胺能神经元突触后电位的影响

目的探讨胃饥饿素(ghrelin)基因敲除对小鼠黑质多巴胺能神经元突触后电位的影响。方法分别选取10周龄雄性ghrelin基因敲除小鼠(ghrelin^(-/-)组)及其同窝雄性野生型(WT)小鼠(WT组)的黑质组织,采用转录组学测序(RNA-seq)技术筛选差异表达基因(DEGs),通过KEGG通路富集分析DEGs可能参与的神经元突触活动相关信号通路,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法对筛选出的DEGs进行验证,并应用蛋白免疫印迹(Western blotting)方法检测神经元突触活动相关基因的蛋白表达情况。结果与WT组相比,ghrelin^(-/-)组小鼠多巴胺能神经元突触传递信号通路上的23个基因水平发生了显著性变化,其中谷氨酸促离子型受体α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸型亚基3(GluA3)和糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)分别调控神经元突触后膜上的α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸受体和N-甲基-D-天冬氨酸受体;在ghrelin^(-/-)组小鼠黑质组织中,GluA 3和GSK-3β基因表达出现明显的下调。RT-qPCR方法检测结果显示,与WT组相比,ghrelin^(-/-)组小鼠黑质组织当中GluA 3和GSK-3βmRNA水平明显下调(t=2.408、2.740,P<0.05)。Western blotting方法检测结果显示,与WT组相比,ghrelin^(-/-)组小鼠黑质组织中GluA3蛋白的表达水平明显上调(t=2.530,P<0.05),GSK-3β蛋白的表达明显下调(t=3.469,P<0.05)。结论Ghrelin基因敲除可能通过使小鼠黑质多巴胺能神经元突触后电位长时程增强,从而增强兴奋性突触传递活动,参与运动调控。

天智颗粒对帕金森病小鼠模型黑质和脊髓多巴胺能神经元的影响

目的 探讨天智颗粒对帕金森病(PD)小鼠模型脑黑质和脊髓多巴胺(DA)能神经元的影响。方法 2022年9月采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶25 mg/(kg·d)腹腔注射5 d的方法构建PD小鼠模型,采用随机数字表法分为模型组和天智颗粒5、2、1 g/kg组,每组10只,另取10只小鼠作为正常对照组。灌胃给药2周后比较各组小鼠行为学变化、中脑黑质和脊髓DA能神经元存活数量及形态变化、神经元内酪氨酸羟化酶阳性表达情况等。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠悬挂能力下降、游泳时间缩短,经天智颗粒干预后可有效提高小鼠悬挂能力,延长游泳时间,黑质和脊髓灰质前角DA能神经元数量和神经元内酪氨酸羟化酶阳性表达均明显减少,经天智颗粒5、2 g/kg干预后小鼠黑质和脊髓DA能神经元检测指标明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 天智颗粒可改善PD小鼠行为学,提高中脑黑质和脊髓部位DA能神经元及突起的存活数目,增加中枢神经系统内DA的含量,表明天智颗粒对黑质和脊髓灰质前角多巴能神经元具有保护作用。

运动及复杂环境抑制细菌脂多糖诱导的中脑黑质多巴胺能神经元损伤

目的探讨运动和复杂环境对细菌脂多糖(LPS)诱导的中脑黑质多巴胺能神经元死亡的影响。方法将C57BL/6小鼠分为对照组、LPS组、LPS+游泳组和LPS+复杂环境组,每组各7只。LPS组小鼠通过脑立体定位注射建立帕金森病炎症模型,置于鼠笼中生活2周。LPS+游泳组小鼠模型制作后每日强迫进行游泳运动15 min,运动2周。LPS+复杂环境组小鼠模型制作后置于复杂环境生活2周。对照组小鼠不做处理。模型制作14 d后,对各组小鼠进行足迹、旷场和滚轴等行为学实验,检测小鼠的自主运动能力、运动平衡能力和抑郁水平;免疫组织化学染色和Western blotting检测中脑黑质中酪氨酸羟化酶(TH)的表达;Western blotting检测中脑黑质中脑源性神经生长因子(BDNF)、Caspase-3、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;RT-PCR检测中脑黑质中IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平。结果与对照组相比,LPS组、LPS+游泳组、LPS+复杂环境组小鼠的运动能力和平衡能力均有所下降,抑郁水平有所上升(P<0.001),TH阳性神经元存活数量和BDNF蛋白量均显著减少(P<0.001),Caspase-3及IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著增高(P<0.001)。与LPS组相比,LPS+游泳组和LPS+复杂环境组小鼠的运动能力和平衡能力均有所恢复,抑郁水平显著下降(P<0.01),TH阳性神经元存活数量及BDNF含量均显著增多(P<0.01),Caspase-3及IL-1β、IL-6和TNF-α均显著减少(P<0.01),且LPS+复杂环境组现象更为显著。结论运动和复杂环境能抑制LPS诱导的小鼠中枢神经系统炎症,从而减轻对中脑黑质神经元的损伤,且LPS+复杂环境组的抑制效果更为显著。

C2神经酰胺对帕金森病模型鼠多巴胺能神经元的保护作用

背景:C2神经酰胺可减少Alpha突触核蛋白(Alpha-Synuclein,α-Syn)寡聚体的形成,其作为蛋白磷酸酶2A激动剂在中枢神经系统对细胞老化具有重要调节作用。目的:探究C2神经酰胺对多巴胺能神经元的保护作用机制。方法:将25只C57BL/6系小鼠随机分为对照组、模型组及C2神经酰胺低、中、高剂量组,每组5只。除对照组之外,其他各组均通过左侧纹状体注射突变型A53Tα-Syn寡聚体建立帕金森病小鼠模型,在纹状体注射第30天后,3个C2神经酰胺各剂量组小鼠一次性经胃灌注溶于生理盐水中的各剂量C2神经酰胺(1,5,10μg/g),对照组及模型组同法灌注等量生理盐水,于造模后第30-90天,连续每天给药,共60 d,期间观察各组小鼠行为学变化。在纹状体注射第90天后,在适度麻醉条件下对各组小鼠灌注取脑,以免疫组织化学染色分析小鼠中脑黑质多巴胺能神经元的变化,以ELISA法检测小鼠中脑α-Syn寡聚化和磷酸化水平,并分析影响α-Syn磷酸化的相关酶活性变化。结果与结论:①C2神经酰胺对经纹状体注射的突变型A53Tα-Syn寡聚体所导致的小鼠帕金森病样运动障碍具有改善作用,且C2神经酰胺高剂量组对帕金森病模型鼠运动障碍的改善作用更为明显(P<0.01);②突变型A53Tα-Syn寡聚体致使小鼠中脑黑质多巴胺能神经元数目明显减少(P<0.01),而C2神经酰胺高剂量组黑质多巴胺能神经元数目则明显增多(P<0.01);③与模型组相比,C2神经酰胺高剂量组小鼠中脑内α-Syn寡聚体和磷酸化α-Syn水平明显降低(P<0.01),而神经酰胺的水平增高(P<0.05),蛋白磷酸酶2A活力明显上调(P<0.01);④上述数据说明,C2神经酰胺可通过改善小鼠中脑组织α-Syn的磷酸化修饰环境,缓解了由寡聚的α-Syn所诱导的神经毒性作用,保护了小鼠中脑黑质多巴胺能神经元数量的减少,从而减轻帕金森病的运动障碍程度。

多巴胺能神经元模型的分岔分析与同步研究

为了研究多巴胺能神经元模型的动力学性质,增进对模型由小电导钙激活钾通道阻断介导的反常簇行为的了解,利用变量相关性进行模型降维并构建四维简化多巴胺能神经元模型以及两神经元电突触与化学突触耦合模型,通过分岔理论与数值计算方法研究简化模型的动力学性质以及耦合模型的放电特性和同步转迁规律。结果表明:在不同参数组合下,简化模型存在由加周期分岔转迁至混沌状态的动力学现象;电突触耦合模型存在逆加周期分岔现象,在一定刺激电流下,改变耦合强度可诱导电突触耦合模型达到簇同步或静息同步状态;化学突触耦合模型存在复杂的混合振荡现象,在一定耦合强度下,较强的刺激电流或较大的突触逆转电位可诱导化学突触耦合模型达到完全同步状态。多巴胺能神经元耦合模型的同步状态不仅受耦合强度的影响,还受到外界刺激电流以及模型参数的影响。

白藜芦醇对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用:基于抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路

目的探讨白藜芦醇(RES)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠肠道屏障的保护作用及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的分子机制。方法将52只小鼠随机分为对照组(n=12),MPTP组(n=14),RES低剂量(MPTP+RES30)组(n=13)及高剂量(MPTP+RES90)组(n=13)。利用30 mg/kg MPTP腹腔注射7 d诱导帕金森病小鼠模型,对照组腹腔注射等剂量PBS,治疗组分别利用30 mg/kg和90 mg/kg RES干预3周。小鼠行为学测试分析RES对帕金森模型小鼠运动功能的影响。Western blotting检测RES在TLR4/MyD88/Nf-κB信号通路中发挥的作用。免疫组织化学、免疫荧光、酶联免疫吸附试验和透射电镜检测验证RES抑制炎症和保护肠屏障的作用。结果与对照组相比,MPTP组小鼠在运动功能、多巴胺能神经元数量、神经炎症、LPS和LBP水平以及肠屏障紧密连接蛋白表达水平等方面的差异具有统计学意义(P<0.05);RES治疗组与MPTP组相比,运动功能改善(P<0.01),神经元数量恢复,TH蛋白表达上调(P<0.05),GFAP、Iba-1和TLR4的表达下调,粪便、血浆中LPS、LBP水平下降(P<0.05),ZO-1、Claudin-1的表达恢复(P<0.01),结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB表达下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。电镜检测结果显示,与MPTP组比较,MPTP+RES30组紧密连接复合体形态正常,肠绒毛排列整齐且紧密。结论RES通过抑制肠屏障TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应修复肠屏障,从而改善MPTP诱导的帕金森病小鼠模型的运动功能障碍和神经病变,对多巴胺能神经元发挥保护作用。

南极磷虾油对帕金森小鼠多巴胺能神经元及肠道菌群的影响

为探究南极磷虾油(KO)对帕金森病(PD)小鼠脑黑质多巴胺能神经元及肠道菌群的影响,采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)的方法构建PD亚急性模型,将小鼠分为对照组(Control)、PD模型组(PD)、KO干预组(KO_PD)和KO对照组(KO),采用TH免疫组化技术评估KO对PD小鼠脑黑质多巴胺能神经元及其神经纤维的保护作用,并结合小鼠结肠HE染色及小鼠粪便16S rDNA高通量测序技术,研究KO对PD小鼠肠道结构及肠道微生态的影响。结果显示:与PD组相比,KO_PD组小鼠脑黑质TH阳性细胞个数显著增加约5倍,上皮杯状细胞数量增加约2倍,结肠肠腺稀疏等现象均有所改善。PD组小鼠肠道菌群紊乱,而KO干预显著增加了拟杆菌门和杜氏杆菌属、Muribaculaceae_unclassified、链球菌属等的相对丰度,下调厚壁菌门和另枝菌属、梭菌目未知菌属、螺杆菌属等的相对丰度。结论:KO可有效改善MPTP诱导的小鼠黑质区多巴胺能神经元丢失和结肠组织结构的改变,并有助于在各分类水平上维持小鼠肠道菌群稳态,且该作用可能与影响肠道菌群执行糖代谢、氨基酸代谢、脂质代谢等生命功能相关。

内质网应激IRE1α/XBP-1通路在多巴胺能神经元变性死亡中的作用

目的探讨内质网应激1型跨膜蛋白激酶α(IRE1α)/X盒结合蛋白1(XBP-1)通路在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法利用内质网应激诱导剂Thapsigargin观察小鼠原代成纤维细胞中IRE1α/XBP-1通路活性。利用IRE1α抑制剂KIRA8探究IRE1α/XBP-1通路在原代中脑多巴胺能神经元变性死亡中作用。结果相比于未处理组细胞,Thapsigargin处理后原代成纤维细胞中内质网应激IRE1α/XBP-1通路明显上调。Thapsigargin处理可显著降低原代中脑多巴胺能神经元的存活率,而KIRA8处理可显著改善Thapsigargin导致的多巴胺能神经元存活率降低。结论内质网应激通过IRE1α/XBP-1通路介导多巴胺能神经元的变性死亡。

PERK通路在内质网应激诱导的中脑多巴胺能神经元死亡中作用

目的 探讨PERK通路在内质网应激诱导的中脑多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法 利用小鼠原代培养成纤维细胞,应用Western blot和免疫荧光染色法,观察内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin)对PERK通路的激活,利用小鼠原代培养中脑多巴胺能神经元,应用TH免疫荧光染色法对存活的中脑多巴胺能神经元进行计数,以观察PERK抑制剂GSK2606414对长时程Thapsigargin处理诱导的中脑多巴胺能神经元死亡的影响。结果 在Thapsigargin处理后的原代成纤维细胞中p-PERK、p-eIF2α、ATF4水平均显著升高,Thapsigargin诱导中脑多巴胺能神经元死亡,PERK抑制剂GSK2606414可显著减少长时程Thapsigargin处理诱导的中脑多巴胺能神经元死亡。结论 内质网应激激活PERK通路;长时程内质网应激导致中脑多巴胺能神经元死亡,抑制PERK通路的激活可以缓解长时程内质网应激导致的中脑多巴胺能神经元死亡,PERK通路参与了长时程内质网应激导致的中脑多巴胺能神经元变性死亡。

D-AP5对PD小鼠黑质多巴胺能神经元簇状放电影响

目的探究侧脑室注射D(-)-2-氨基-5-磷戊酸(D-AP5)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病(PD)模型小鼠黑质区多巴胺能神经元簇状放电的影响。方法将小鼠随机分为对照组、D-AP5组、MPTP组和D-AP5+MPTP组。采用电生理实验记录小鼠黑质区多巴胺能神经元的簇状放电百分比。结果析因设计方差分析显示,D-AP5和MPTP两者存在交互作用(FMPTP=4.601,P<0.05;FD-AP5=2.399,P>0.05;FMPTP×D-AP5=12.020,P<0.01)。单独效应分析显示,在未注射MPTP的两组小鼠中,D-AP5组小鼠黑质区多巴胺能神经元簇状放电百分比与对照组小鼠相比差异无显著性(F=1.916,P>0.05);在注射MPTP的两组小鼠中,D-AP5+MPTP组小鼠黑质区多巴胺能神经元簇状放电百分比较MPTP组明显降低(F=12.094,P<0.01)。结论侧脑室注射D-AP5可降低MPTP模型小鼠黑质区多巴胺能神经元簇状放电百分比。

罗汉果苷Ⅴ对多巴胺能神经元炎症损伤的保护作用

研究罗汉果苷Ⅴ(mogrosideⅤ,MogⅤ)对小胶质细胞激活所致多巴胺能神经元炎症损伤的保护作用及相关机制。多巴胺能神经元MN9D细胞与小胶质细胞BV-2在Transwell共培养,添加脂多糖激活小胶质细胞建立体外炎症损伤模型。将MN9D细胞分为对照组、模型组、MogⅤ组,其中MogⅤ组细胞在模型组基础上,添加50μmol/L MogⅤ作用48 h。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,JC-1法检测线粒体膜电位变化,酯化钙黄绿素与氯化钴共孵育法分析线粒体膜通透性转运孔的开放情况,利用荧光探针DCFH-DA分析细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测蛋白表达情况。结果显示,与对照组比较,炎症损伤使模型组多巴胺能神经元MN9D细胞的凋亡率明显升高,S期细胞比例明显降低,线粒体膜电位明显下降,线粒体膜通透性转运孔开放和ROS生成增多,SIRT3、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)及Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax、Caspase-3蛋白表达显著增加,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,MogⅤ处理则使MogⅤ组多巴胺能神经元的凋亡率降低,S期细胞比例增加,线粒体膜电位上升,线粒体膜通透性转运孔开放和ROS生成减少,SIRT3、SOD2及Bcl-2蛋白表达显著增多,Bax、Caspase-3蛋白表达明显减少,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。以上结果表明,MogⅤ能够抑制小胶质细胞激活所致多巴胺能神经元的细胞凋亡和周期阻滞,对炎症损伤具有一定的缓解作用,机制可能与其促进SIRT3表达改善线粒体功能有关。

Rho激酶抑制剂Y27632促进人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞向多巴胺能神经前体细胞的转化

目的提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞(hiPSCs-NECs)定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的效率。方法将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子(SHH 200 ng/mL)、成纤维细胞生长因8(FGF8100 ng/mL)、嘌吗啡胺(2μmol/L)、CHIR99021(3μmol/L)、N2(1%)]的mTeSRTM培养基中诱导至12 d,细胞分化为原始神经上皮细胞(NECs)。特异性诱导DAPs,将诱导的hiPSCs-NECs用胶原酶IV消化后,在神经分化培养基[添加1%N2、2%B27-A、BDNF(10 ng/mL)、GDNF(10 ng/mL)、AA、TGF-β、cAMP、1%GlutaMax]中加入不同浓度的Rho激酶抑制剂Y27632重新接种,并于次日更换培养基去除Y27632,持续诱导至第28天获得DAPs。结果人iPSCs可在基质胶上稳定传代,表达多潜能性标记物OCT4、SOX2、Nanog和SSEA1,且碱性磷酸酶染色呈阳性。诱导分化至第13天获得hiPSCs-NECs,形成玫瑰花结样结构,能够表达特征性标记物(SOX2、Nestin和PAX6)。将hiPSCs-NECs消化后,添加5μmol/LY27632的hiPSCs-NECs相比较未加Y27632的对照组,细胞解离后贴壁存活率明显增加,处于S期的细胞(P<0.01)与细胞活力显著提高(P<0.01),且凋亡率显著降低(P<0.05),持续诱导至第28天,细胞高表达DAPs特异性的标记物(TH、FOXA2、NURR1和Tuj1)。结论添加Y27632(5μmol/L)24 h可显著提高人iPSCs-NECs细胞向iPSCs-DA神经前体转化时的细胞存活率,并且Y27632去除后,不会影响后续向DA神经前体细胞分化,间接的提高了细胞的分化效率.

芍药甘草汤对帕金森病模型大鼠脑黑质多巴胺能神经元保护机制的研究

目的 研究芍药甘草汤对帕金森病(PD)模型大鼠脑黑质多巴胺能神经元凋亡的影响及调控机制。方法 大鼠分为正常组、假手术组、PD模型组、PD+芍药甘草汤组和PD+美多芭组。采用6-OHDA诱导构建PD大鼠模型,造模成功后,PD+芍药甘草汤组大鼠灌胃芍药甘草汤(12 g/kg)、PD+美多芭组大鼠灌胃美多芭(20 mg/kg),连续治疗28 d。采用APO诱发的旋转行为实验和平衡杆实验分析芍药甘草汤对大鼠行为的影响;采用HE染色分析对脑黑质区组织形态的影响;采用免疫组化检测Th、Bcl-2和Bax的表达;采用荧光定量PCR和Western blot检测IL-1β、TNF-α、NFκB p65的表达变化。结果 与正常组比较,PD模型组大鼠的旋转次数、潜伏时间和通过平衡杆的时间显著增加(P<0.05),脑黑质形态异常,多巴胺能神经元的标志物Th的表达显著降低(P<0.05),炎症因子IL-1β、TNF-α的表达显著提高(P<0.05),转录因子NFκB的核转移显著增多(P<0.05),脑黑质中Bax的表达显著提高(P<0.05),脑黑质中Bcl-2的表达显著降低(P<0.05)。与PD模型组比较,PD+芍药甘草汤组干预治疗可显著减少大鼠的旋转次数,缩短潜伏时间并减少通过平衡杆的时间(P<0.05),改善PD诱发的脑黑质形态异常,增加多巴胺能神经元的标志物Th的表达(P<0.05),抑制炎症因子IL-1β、TNF-α的表达,减少转录因子NFκB的核转移(P<0.05),减弱脑黑质中Bax的表达(P<0.05),增强脑黑质中Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 芍药甘草汤对PD大鼠脑黑质多巴胺能神经元具有保护作用,其机制可能是通过抑制黑质区炎症反应,减少多巴胺能神经元的凋亡。

SIRT3抑制PARP-1活性缓解多巴胺能神经元炎症损伤

目的研究多巴胺能神经元SIRT3表达对小胶质细胞活化所致其炎症损伤的抵抗作用及相关机制。方法建立多巴胺能神经元MN9D细胞与小胶质细胞BV-2共培养体外炎症损伤模型。将MN9D细胞分为对照组、模型组、SIRT3组、SIRT3+PJ34(PARP-1抑制剂)组。实时定量聚合酶链式反应分析mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1法检测线粒体膜电位变化,酯化钙黄绿素与氯化钴共孵育法分析线粒体通透性转运孔(mPTP)开放情况,Western blot检测蛋白表达情况。结果与模型组比较,SIRT3过表达则使SIRT3组MN9D细胞的凋亡率明显降低,SIRT3和SOD_(2)基因表达明显增多,PARP-1、TNF-α及IL-1β蛋白表达明显减少,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值明显变小,线粒体膜电位上升,mPTP开放和ROS生成减少,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);SIRT3+PJ34组MN9D细胞PARP-1活性抑制后,除SIRT3和IL-1β蛋白表达变化不明显外,其它考察指标的变化趋势在SIRT3组基础上进一步增大,两组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论SIRT3表达能够缓解小胶质细胞激活所致多巴胺能神经元的炎症损伤,机制可能与其改善线粒体功能,减少ROS生成抑制PARP-1活性及NF-κB信号通路有关。

Wnt1-Ngn2-En1/2在西玛津损伤小鼠生命早期多巴胺能神经元功能中的作用

目的:观察除草剂西玛津对小鼠子代胚胎期及出生后第21天(PND21)多巴胺能神经元发育的影响,并探讨Wnt1-Ngn2-En1/2信号通路在神经元损伤中的作用。方法:健康SPF级昆明小鼠雌性30只,雄性15只,按照2∶1进行合笼。将孕鼠随机分为对照组(0.3%甲基纤维素溶液)和西玛津低剂量(50μg/kg)、高剂量组(200μg/kg)进行灌胃染毒,收集胚胎第8.5天(E8.5)、第12.5天(E12.5)和PND21仔鼠的中脑组织,采用免疫荧光杂交技术(FISH)、实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot分别检测Wnt1-Ngn2-En1/2信号通路相关基因(Wnt1、Ngn2、En1、En2、Nr4a2与Th)mRNA和蛋白的表达;通过旷场实验检测孕鼠染毒西玛津后对PND21雌、雄仔鼠自主行为能力的影响。结果:qPCR与Western blot检测结果显示,与对照组相比,在E8.5胚胎组织中,西玛津低剂量染毒组Wnt1和Ngn2以及高剂量组Wnt1、Ngn2、En1和En2的m RNA与蛋白表达均明显下降(P<0.05);在E12.5胚胎组织中,低剂量染毒组Nr4a2和Th以及高剂量组Nr4a2、Th、Wnt1、Ngn2、En1、En2的mRNA和蛋白表达均显著下降(P<0.05)。FISH检测结果显示,与对照组相比,西玛津低、高剂量染毒组E8.5与E12.5胚胎组织中Wnt1的mRNA表达均明显下降(P<0.05);西玛津高剂量组PND21雄性仔鼠的自主探索能力与运动能力显著减弱(P<0.05),且PND21仔鼠组织中Wnt1与Th的蛋白表达也明显下调(P<0.05)。结论:西玛津能够通过Wnt1-Ngn2-En1/2信号通路影响子代小鼠多巴胺能神经元发育,并损伤雄性仔鼠的自主行为能力。

外侧下丘脑与黑质致密部多巴胺能神经元的纤维投射

目的 研究黑质致密部(SNpc)多巴胺能神经元是否接受外侧下丘脑(LH)的纤维投射。方法 使用逆行示踪剂、转基因小鼠和顺向病毒示踪技术探究LH与SNpc的投射关系。在C57BL/6雄性小鼠(8周龄)的SNpc区注射逆行示踪剂霍乱毒素亚基-B结合荧光素488(CTB-488),1周后制备冷冻脑切片,应用Olympus VS120荧光显微镜观察LH脑区CTB-488阳性神经元。在TH-Cre转基因雄性小鼠(8周龄)的LH注射顺向跨突触病毒AAV-hSyn-Flp-WPRE-hGH,在SNpc注射AAV-hSyn-Con/Fon-EYFP-WPRE-hGH,3周后灌注取脑并切片,观察SNpc和纹状体(Str)区EYFP阳性细胞及纤维。结果 逆行示踪实验表明,CTB-488注射后可在LH区观察到CTB-488阳性神经元,提示LH可能是SNpc的上游脑区。顺向病毒追踪实验结果显示,在小鼠SNpc观察到明显的EYFP阳性神经元且在Str可观察到EYFP阳性纤维,提示LH支配SNpc的多巴胺能神经元。结论 LH是SNpc的上游脑区,并支配SNpc的多巴胺能神经元。

枸橼酸铁铵对小鼠黑质多巴胺能神经元电活动影响

目的 探讨枸橼酸铁铵(FAC)对小鼠黑质多巴胺能神经元电活动影响。方法 取出生15~20 d的C57BL/6小鼠制备脑片,应用全细胞膜片钳技术观察FAC对黑质多巴胺能神经元自发放电活动及膜电位的影响。结果 小鼠黑质脑片置于FAC溶液(100μmol/L)中5 min后,多巴胺能神经元自发放电频率明显降低(t=5.533,P<0.01)。10 min后,多巴胺能神经元自发放电频率则显著减慢(t=7.297,P<0.001)。神经元膜电位明显向超级化方向移动(t=4.227,P<0.01)。结论 FAC能够抑制正常小鼠黑质多巴胺能神经元的电活动。

可卡因对多巴胺能神经元的作用及机制

可卡因主要作用于单胺类转运体,包括多巴胺转运体(DAT)、5-HT转运体(SERT)和去甲肾上腺素转运体(NET),阻止这些转运体将突触前释放的神经递质转运回突触前膜神经末梢,从而增强单胺能神经递质的作用而产生精神兴奋效应,其中DAT是可卡因作用的主要环节。可卡因也能够增加突触前末梢神经递质的释放,对突触后神经元的基因和蛋白水平的调节在可卡因成瘾中的作用也是不可忽视的。本文就可卡因成瘾分子机制的最新研究进展作一综述。

缰核的纤维联系及其对5-羟色胺能和多巴胺能系统的调节作用

缰核（hacenular nucleus,Hb）是存在于间脑背侧、第三脑室两侧的一对核团,在进化上高度保守,主要分为外侧缰核（lateral habenular nucleus,LHb）和内侧缰核（medial hacenular nucleus,MHb）。缰核是联系边缘前脑和脑干背侧通路的重要枢纽,参与多种生理活动的调节,包括疼痛、睡眠、节律、情绪、认知等,也与多种疾病的发生发展联系密切,如精神分裂症、抑郁症、帕金森病等。缰核的作用十分重要,对它的深入研究有助于探索某些疾病的发病机制及治疗方法,有文献报道深部刺激外侧缰核可用于治疗难治性抑郁症。