耐药猪链球菌膜蛋白图谱分析及能量抑制剂对其敏感性的影响

为证实国内临床分离的动物源链球菌菌株中是否存在与红霉素耐药性相关的主动外排机制,选取含有mefA基因和ermB基因和不含mefA/ermB基因的链球菌耐药菌株和青霉素、红霉素均敏感菌株,在能量抑制剂氰氯苯腙(CCCP)存在时,采用棋盘法分析红霉素、阿齐霉素、替米考星、青霉素对分离菌MIC的影响,并采用SDS-PAGE电泳分析分离株的膜蛋白图谱。结果显示:CCCP可对含有mefA基因的耐药菌株产生影响,可增强其对红霉素、阿齐霉素的敏感性,但不影响其对替米考星和青霉素的敏感性。含有ermB基因、不含mefA/ermB基因的耐药菌,对红霉素、阿齐霉素、替米考星和青霉素的敏感性不受CCCP的影响。菌株膜蛋白的SDS-PAGE电泳图谱显示,含有mefA基因的耐药菌株与其他菌株的膜蛋白图谱差异较大,其膜蛋白条带多而深浓,在45 000处有明显的条带,其他菌株无该条带,推测该蛋白可能是膜主动外排的相关蛋白。本试验结果佐证了在链球菌内存在与红霉素耐药相关的主动外排机制。

能量抑制剂对离体大鼠肝细胞线粒体功能及胞浆膜完整性的影响

使用能量抑制剂制备离体大鼠肝细胞损伤模型并比较了ＦＣＣＰ、抗霉素、鱼藤酮、缬霉素和氰化钾等对肝细胞氧消耗量、ＡＴＰ水平和ＬＤＨ逸出率的影响结果。发现氧化磷酸化解偶联剂ＦＣＣＰ和呼吸链抑制剂氰化钾用于制备损伤模型效果最好，两者均可在４０分钟内使ＡＴＰ耗竭和ＬＤＨ逸出率达７０％以上。另外，如果评价大鼠肝细胞氧消耗量则只能用ＦＣＣＰ，因氰化钾具有挥发性可导致错误结果而不宜使用。

靛玉红肠吸收转运机制的研究

目的:探讨靛玉红肠吸收转运机制。方法:采用缚管翻转肠囊模型,以维拉帕米为P-糖蛋白抑制剂,丙磺舒为多药耐药相关蛋白(MRP)抑制剂,2,4-二硝基苯酚(DNP)为能量抑制剂,考察加入抑制剂前后药物在空肠和回肠部位的转运量的变化。结果:靛玉红在空肠和回肠部位的转运量无显著性差异(P>0.05);加入抑制剂前后在空肠和回肠部位的转运量亦无显著性差异(P>0.05);通过吸收动力学的研究,发现靛玉红的吸收符合一级吸收模型,Ka为0.015 min-1,且单位时间吸收药量与浓度成正比,符合Fick′s扩散原理。结论:靛玉红的小肠吸收为典型的被动扩散吸收机制。

主动外排系统介导的大肠杆菌多重耐药性的确证

为检测和证实主动外排系统 (外输泵 )在细菌多重耐药机制中的作用 ,用四环素和水杨酸钠对大肠杆菌质控株进行了体外人工诱导 ,筛选出多重耐药株 ,再用能量抑制剂 CCCP(Carbongl cyanide m- chloropheyhydrazone)对耐药株和质控株进行了环丙沙星摄取抑制试验。结果 :在耐药株 ,其菌体内环丙沙星稳态浓度明显低于质控株 ;多重耐药株在有 CCCP存在时 ,菌体内环丙沙星的浓度随时间的延长而递增 ,而无 CCCP的抑制时 ,菌体内环丙沙星的浓度递增缓慢 ;在质控株 ,不论有无 CCCP存在 ,菌体内环丙沙星的浓度都随时间的延长而呈递增趋势 ,且保持较耐药株明显高的水平。结论 :体外诱导多重耐药大肠杆菌多重耐药性的产生 。

超富集植物李氏禾根系对Cr(Ⅵ)吸收机制的研究

通过盆栽试验,研究了超富集植物李氏禾根系对C(rⅥ)的吸收特征。结果表明,解偶联剂2,4-二硝基苯酚(DNP),ATP酶抑制剂(Na3VO4)和低温(2℃)处理均显著地抑制了李氏禾根对C(rⅥ)的吸收(P<0.05)。其中,低温处理的抑制作用最明显,李氏禾根中铬的浓度较对照降低69.8%,说明李氏禾根对C(rⅥ)的吸收是需要能量的主动过程。此外,李氏禾根系对C(rⅥ)的吸收符合Michaelis-Menten方程,其米氏常数(Km)为91.08μmol·L-1。在5 mmol·L-1SO2-4处理下,该米氏常数是对照的1.27倍;而在SO2-4缺失的条件下,李氏禾根对C(rⅥ)吸收的米氏常数较对照减少了24.3%。这种拮抗关系表明李氏禾根对C(rⅥ)的吸收可能与硫酸根吸收体系有关。

春雷霉素在番茄幼苗中的吸收与转运机制

为明确春雷霉素在植物体内的吸收传导特性,向番茄幼苗根部或叶部施药,采用高效液相色谱串联质谱法分别测定了春雷霉素在根、茎、叶中的积累量;其次探究了能量抑制剂二硝基苯酚(DNP)、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)、单糖转运蛋白竞争性底物(根皮苷、D-葡萄糖)和在不同pH及温度处理下番茄幼苗对春雷霉素的吸收影响。结果表明,150 mg/L春雷霉素处理番茄幼苗根部3 h后,在根部和茎部检测到的春雷霉素含量分别为172.57、12.71μg/L,6 h后药剂可到达植株叶部;500 mg/L春雷霉素浸施幼苗中部叶片24 h后,在根、茎上部叶均能检测到目标药剂;不同浓度的能量抑制剂和单糖转运蛋白竞争底物对春雷霉素的吸收有显著的抑制作用,且吸收对温度和pH较敏感。综上所述,在番茄体内,单糖转运蛋白协助主动运输春雷霉素,且具有双向传导特性。该研究为后期双向输导型农药的开发和田间科学合理施药提供依据。

耐镉马克思克鲁维酵母重金属镉吸附特性的研究

菌株YS-K1是从镉污染土壤中筛选获得的一株耐镉马克思克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus YS-K1,对其镉吸附特性研究结果表明,该菌对镉具有良好的耐受性和吸附性,即使在镉浓度高达140mg/L的培养基中也能生长,当镉浓度在30mg/L以下时,24h后能吸附溶液中90%以上的镉,且最佳吸附条件为pH6.0,温度30℃。该菌所吸附的镉大部分集中在细胞壁上,占总吸附镉的76%,细胞膜上的占9%,细胞质中的占15%;能量抑制剂2,4-二硝基苯酚(DNP)和二环己基碳二亚胺(DCC),分别能降低菌株15%和22%的镉吸附量。在Kluyveromyces marxianus YS-K1细胞中,锌离子与镉离子有共用的结合位点,锌离子不仅会与镉离子竞争细胞表面的结合位点,减少其对镉的吸附量,而且也会与镉离子竞争进入细胞的通道位点,减少其对镉的积累量,同时能部分恢复镉离子对菌株生长的抑制作用。