12-脂加氧酶抑制剂黄芩素对病毒性心肌炎小鼠动物模型的干预作用研究

目的 探讨12-脂加氧酶（12-LO）抑制剂黄芩素对病毒性心肌炎小鼠动物模型的干预作用.方法 将250只4周龄BALB/C雄性小鼠采用计算机随机分组的程序随机分为5组,正常小鼠空白对照组（A 组）、模型组（B组）、高剂量治疗组（C组,0.4 g/L黄芩素溶液）、中剂量治疗组（D组,0.2 g/L黄芩素溶液）和低剂量治疗组（E组,0.1 g/L黄芩素溶液）,每组50只;分别于病毒接种后第4、7、14、21天随机取部分小鼠观测心肌组织病理学改变（HE染色法）、心肌组织中12-LO mRNA表达（RT-PCR法）及血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平（化学发光免疫法）.采用SPSS 13.0统计软件对5组小鼠的心肌组织病理损害情况、12-LO mRNA表达量及血清CK-MB水平进行统计学分析.结果 5组小鼠各时间段的心肌组织病理积分比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,其中B组小鼠于病毒接种后第4、7、14、21天心肌组织病理积分均高于A组 （P＜0.01）,C、D、E组小鼠各时间段心肌组织病理积分均低于B组（P＜0.05）.B组小鼠柯萨奇B3病毒（CVB3）接种后第4天CK-MB水平即有改变,第7～14天达到高峰,第21天降低,与A组相比,其中第4、7、14天差异有统计学意义（P＜0.05）.C、D、E组小鼠第4、7、14天的CK-MB水平均低于B组相应时间段的水平（P＜0.05）,但仍未降到正常水平.不同时间段各组小鼠心肌组织12-LO mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,其中B组小鼠于CVB3接种后第4、7、14、21天心肌组织12-LO mRNA相对表达量均高于A 组（P＜0.01）;C、D、E组小鼠心肌组织12-LO mRNA相对表达量除第4天外,其他各时间点的表达量均低于B组（P＜0.05）.各治疗组12-LO mRNA的表达量与心肌组织病理积分及血清CK-MB水平均呈正相关（P＜0.05）.结论 12-LO抑制剂黄芩素可能通过降低CVB3感染后小鼠心肌组织12-LO的表达,减轻病毒性心肌炎病情,为开发治疗病毒性心肌炎的新药提供了实验依据.

12-LOX和SEPT7及RhoA蛋白与神经胶质瘤患者临床分期与预后的相关性研究

目的对12-脂氧化酶脂加氧酶(12-LOX)和胞裂蛋白7(SEPT7)及Ras同源蛋白A(Rho A)蛋白与神经胶质瘤患者临床分期与预后的相关性进行分析,为临床诊断和治疗提供参考。方法对2010年5月至2015年11月期间诊治的神经胶质瘤患者进行研究,检测不同临床分期患者血清中12-LOX和SEPT7及Rho A的表达,并分析不同表达强度患者的预后。以同期健康体检者120例为对照组。结果与对照组相比,神经胶质瘤组患者12-LOX及p12-LOX、SETT7、S100A4、Rho A和ROCK1/2蛋白表达水平均明升高,且与其临床分期具有明显的相关性,Ⅲ期和Ⅳ患者的表达水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05);12-LOX、SEPT7和Rho A蛋白表达水平与神经胶质瘤患者预后密切相关,且上述蛋白的表达越高,神经胶质瘤患者的预后越差。结论 12-LOX、SEPT7和Rho A及其蛋白是神经胶质瘤临床分期诊断的标志物,且与患者的预后密切相关。

12-脂加氧酶在病毒性心肌炎小鼠心肌内的表达

目的探讨12-脂加氧酶(12-LO)在病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌内的表达。方法将4周龄Balb/c小鼠随机分成实验组和正常对照组;采用柯萨奇病毒亲心株B3(CVB3)感染Balb/c小鼠建立VMC小鼠模型;通过RT-PCR法测定外周血12-脂加氧酶mRNA(12-LOmRNA),比色法测NO的变化,化学发光免疫法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI),HE染色观察心肌损害程度。结果 (1)实验组12-LOmRNA表达于CVB3感染第3天(0.623±0.321)、第7天(1.311±0.208)、第14天(1.018±0.302)升高,与对照组(0.401±0.014)比较差异有统计学意义(P<0.01),第28天(0.512±0.025)虽逐渐下降,但与对照组(0.401±0.014)比较差异仍有统计学意义(P<0.05);(2)实验组NO水平于CVB3感染第3天[(42.38±8.84)μmol/L]、第7天[(70.25±11.62)μmol/L]、第14天[(68.11±9.78)μmol/L]升高,第28天[(45.35±11.12)μmol/L]逐渐下降,但与对照组[(25.09±5.54)μmol/L]比较均差异有统计学意义(P<0.01);(3)实验组小鼠的血清cTnI于CVB3感染第3天[(7.88±1.23)μg/L]、第7天[(1.98±0.39)μg/L]、第14天[(0.98±0.22)μg/L]与对照组[(0.05±0.03)μg/L]比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)实验组12-LOmRNA表达水平与心肌病理积分呈显著正相关(r=0.317,P<0.05);(5)实验组NO水平与心肌病理积分呈显著正相关(r=0.436,P<0.05);(6)实验组12-LOmRNA表达水平及NO水平与血清cTnI呈显著正相关(r=0.429;0.421,P均<0.05);(7)实验组12-LOmRNA表达水平与NO呈显著正相关(r=0.531,P<0.05)。结论 VMC小鼠的心肌内表达了12-LO,且12-LO与NO具有正相关性。

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Alox12表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Alox12基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发生与Alox12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点。方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型。运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法,观察Alox12基因表达的变化。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶(Alox12),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论:在糖尿病肾损伤状态下,Alox12表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Alox12表达下调,可见肾消康对Alox12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。

免疫性心肌炎小鼠心肌12-脂加氧酶的表达与细胞凋亡

目的 检测免疫性心肌炎（AM）小鼠心肌内12-脂加氧酶（12-LO）的表达水平,及与细胞凋亡之间的关系,探讨12-LO在AM的发生、发展中的作用。方法 4~5周龄雄性BALB/C小鼠随机分成对照组（C组）和AM组（A组）各24只。A组在第1、7天腹股沟皮下注射0.2 ml混合液（含猪心肌球蛋白100μg）,C组于相同时间、部位注射0.2 ml不含猪心肌球蛋白的混合液。第14、21、30天随机抽取各组小鼠8只取血后处死留取心脏标本。RT-PCR法测定外周血12-LO mRNA,光镜下计算心肌炎症积分;TUNEL法检测细胞凋亡指数（AI）。均数比较用单因素方差分析和t检验,两变量相关分析用Pearson等级相关。P〈0.05为差异有统计学意义。结果 A组12-LO mRNA、炎症积分及AI均在第21天（分别为1.523±0.10;2.72±0.15;24.96±0.54）明显高于第14天（分别为0.677±0.10;1.18±0.29;13.17±0.89）和第30天（分别为1.046±0.15;2.12±0.16;14.94±0.76）（均P〈0.05）;与C组相比,各时间点上述指标均明显升高（均P〈0.05）;A组12-LO mRNA与炎症积分和AI呈显著正相关（r=0.741,0.799;P〈0.05）。结论 AM小鼠心肌12-LO与细胞凋亡密切相关,细胞凋亡可能是12-LO导致AM心肌损伤的途径之一。

12-脂加氧酶对实验性自身免疫性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨实验性自身免疫性心肌炎（EAM）小鼠心肌内12-脂加氧酶（12-LO）的表达，外周血NO水平及其与细胞凋亡的关系。方法4～5周龄雄性BALB／C小鼠随机分成免疫性心肌炎组（AM组）和正常对照组（C组）各24只。AM组在实验的第1、7天在腹股沟皮下注射含猪心肌球蛋白100μg的混合液0．2ml，C组于同时间同部位注射等量混合液（不含猪心肌球蛋白）。实验的第14、21、30天随机抽取各组小鼠8只取血后处死，留取心脏标本。RT-PCR法测定小鼠心肌细胞12．LOmRNA、iNOSmRNA，硝酸还原酶法检测小鼠血清NO水平，TUNEL法检测细胞凋亡指数（AI）。结果AM组12-LOmRNA、iNOSmRNA、NO及AI均在第21天（分别为1．53±0．27；92．74±3．99；76．44±3．01；24．97±1．54）明显高于第14天（分别为0．68±0．28；82．99±2．64；57．51±2．17；13．20±2．54）和第30天（分别为1．05±0．10；87．40±3．32；64．77±3．92；14．95±2．15），P均〈0．05；与C组相比，各时间点上述指标均明显升高（均P〈0．05）；AM组12-LOmRNA与NO、AI呈显著正相关（r=0．882；0．877；P〈0．05）。结论自身免疫性心肌炎小鼠心肌细胞12-L0表达增加，促进心肌细胞凋亡及病情进展；12-LO可能通过氧化应激影响NO来参与AM的发病过程。

磷脂酶参与的花生四烯酸12-LOX代谢通路在喉鳞状细胞癌中的作用及临床意义

目的:研究磷脂酶(PL)Cγ-2、花生四烯酸(AA)以及脂加氧酶-12(12-LOX)在喉鳞状细胞癌中的表达情况,探讨脂质代谢与喉鳞状细胞癌的关系。方法:选取30例喉癌组织以及癌旁组织(均经病理检查为正常组织),以免疫组织化学法(SP法)检测PLCγ-2和12-LOX的表达,以气相色谱联合质谱法检测AA的含量。结果:喉癌组织中PLCγ-2和12-LOX的表达高于正常组织(P<0.05),而AA含量低于正常组织(P<0.05);PLCγ-2和12-LOX与喉癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移有密切关系(P<0.05);AA与喉癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移无关(P>0.05);PLCγ-2、AA以及12-LOX与年龄无关(P>0.05)。结论:PLCγ-2、AA和12-LOX三者与喉癌关系密切,阻断此通路,可能对喉癌的治疗有一定的意义。

12／15-脂加氧酶与糖尿病微血管并发症

最近研究发现，12／15-脂加氧酶的过表达或激活可能促进了糖尿病肾病和神经病变的进展。该酶可催化花生四烯酸产生12．羟基二十碳四烯酸和15-羟基二十碳四烯酸，从而影响细胞结构、代谢和信号转导。研究发现12／15．脂加氧酶及其代谢产物可直接诱导或问接调节细胞因子导致细胞肥大、增殖和细胞外基质堆积，参与糖尿病肾病的发生。此外，该酶的过表达和激活与外周神经系统的氧化．硝化应激相关，可能参与糖尿病神经病变的发生。因此，12／15-脂加氧酶抑制剂或包含抑制剂的联合治疗可能为糖尿病微血管并发症的治疗提供新的研究方向。

miR-223靶向ALOX12对胃癌细胞铁死亡影响的研究

目的探讨miR-223通过调控花生四烯酸12-脂加氧酶(ALOX12)的表达对胃癌细胞铁死亡的影响.方法收集2016-09-13-2018-11-25北京市朝阳区桓兴肿瘤医院胃肠内科23例胃癌患者癌和癌旁组织(距癌周≥5 cm).人胃癌细胞系MKN45、MGC803和NCI-N87,以及人正常乳腺上皮细胞系MCF10A和胃黏膜细胞系GES-1均购自上海中科院细胞库.利用定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测ALOX12的表达水平和miR-223的相对表达量.分别用miR-223-agomir、miR-223-antagomir+miR-223-agomir和miR-223-NC转染MKN45细胞,空白培养细胞做对照组.MTT法测定细胞活力.双荧光素酶实验验证ALOX12与miR-223的互作关系.20μmol/L铁死亡诱导剂Erastin给药胃癌MKN45细胞检测miR-223对细胞铁死亡的影响.结果ALOX12在胃癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,t=-8.205,P=0.014;miR-233在胃癌组织中的表达量高于癌旁正常组织,t=5.699,P=0.018.同样,ALOX12在胃癌细胞MKN45、MGC803和NCI-N87中的表达量相对于人正常乳腺上皮细胞系MCF10A和胃黏膜细胞系GES-1下调,F=41.720,P<0.001,且ALOX12的蛋白水平检测结果与转录水平一致.miR-233在MKN45、MGC803和NCI-N87中的表达量与GES-1和MCF10A相比上调,F=74.639,P<0.001.双荧光素酶实验显示,ALOX12是miR-223的靶基因,且通过对癌组织中miR-233和ALOX12的表达量进行分析,发现其具有负相关性,r=-0.613,P=0.002.在转染miR-223-agomir后MKN45细胞中的ALOX12蛋白表达下调,而miR-223-agomir与miR-223-antagomir的共转染则部分回补了ALOX12的表达;miR-223过表达可增强MKN45细胞的增殖能力,F=7.010,P=0.027;铁死亡诱导剂Erastin处理实验发现miR-223减缓MKN45细胞中p53介导的铁死亡过程.结论miR-223通过抑制ALOX12表达促进胃癌的发生与发展,而miR-223与ALOX12在铁死亡过程中的具体机制还需要进一步的研究.

宫颈上皮内瘤变组织IL-12B和E-cadherin 及ALOX12B与HPV感染的关系

目的探讨白细胞介素-12B(IL-12B)、上皮型钙黏素(E-cadherin)和12(R)-脂加氧酶(ALOX12B)在宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达及其与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法选取2019年7月-2020年7浙江省台州医院收治的238例CIN患者为研究组,同期进行宫颈组织活检的188例宫颈炎患者为对照组。研究组患者根据宫颈病变程度,分为Ⅰ级组59例、Ⅱ级组137例、Ⅲ级组42例;根据HPV感染情况,分为无感染组38例、低危HPV感染组49例、高危HPV感染组151例,根据ALOX12B mRNA水平检测情况分为高表达组187例和低表达组51例。采用免疫组化法和聚合酶链反应(PCR)测定两组宫颈组织中IL-12B、E-cadherin和ALOX12B蛋白和表达mRNA含量,分析其与CIN级别、HPV感染的关系。结果研究组ALOX12B免疫组化乘积和mRNA含量均高于对照组,IL-12B和E-cadherin免疫组化乘积和mRNA含量均低于对照组(P<0.05)。Ⅲ级组患者ALOX12B免疫组化乘积,mRNA含量高于Ⅰ级组和Ⅱ级组;Ⅲ级组患者IL-12B和E-cadherin免疫组化乘积、mRNA含量均低于Ⅰ级组(P<0.05)。高危HPV感染组患者ALOX12B免疫组化乘积、mRNA含量均高于无感染组,IL-12B和E-cadherin表达低于无感染组(P<0.05)。ALOX12高表达患者CIN宫颈组织中PI3K、ERK1、Ki67的mRNA含量高于ALOX12B低表达组(P<0.05)。结论 CIN宫颈组织中ALOX12B表达上调、IL-12B和E-cadherin表达下调或缺失,可能参与高危HPV感染导致宫颈癌的发生发展过程。