脂噬抑制细胞泡沫化在动脉粥样硬化中作用的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是多数心脑血管疾病致死的重要原因之一。全球疾病研究表明,AS性心脏病在全球流行,发病数已由1990年的约1亿例增长为2019年的1.8亿例[1];在2020年流行病调查中发现30岁以上颈动脉内膜增厚的比率为27.6%[2]。同时,国家心血管病中心发布的《中国心血管健康与疾病报告2021》中指出我国心血管病人数达3.3亿,每5例死亡中就有2例死于心血管病。AS是一种以动脉血管壁脂质异常蓄积为主要特征的慢性血管炎症性病变,形成富含脂质的泡沫细胞(foam cells)是AS病变的起始与早期重要病理特征之一(图1)。

脂噬对奶牛乳腺上皮细胞脂滴大小的调控研究

脂噬是一种新的自噬形式,可以选择性识别脂滴并将其降解,在维持细胞内脂质稳态等过程中发挥着重要的作用。本研究旨在探讨奶牛乳腺上皮细胞经饥饿诱导脂噬后对细胞脂滴大小的调控作用。试验用100μmol·L^(-1)的亚油酸处理细胞24 h,刺激细胞脂滴蓄积,然后分别饥饿诱导细胞0、6、12、24、48 h,油红O染色观察细胞内脂滴的尺寸和数量随饥饿时间的变化情况,随后饥饿诱导24 h通过免疫荧光观察脂滴和自噬蛋白LC3的共定位,蛋白免疫印迹检测细胞内自噬蛋白LC3和P62的表达,透射电镜观察脂滴自噬情况。结果发现:随着饥饿处理时间的延长,脂滴直径从1.57μm显著增加到2.12μm,每个细胞的脂滴数量显著减少,从39个·cell^(-1)减少到24个·cell^(-1),大脂滴比例显著增加,小脂滴比例显著减少(P<0.05),免疫荧光发现LC3与脂滴发生共定位,透射电镜观察发现自噬溶酶体包裹着脂滴,饥饿处理24 h后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白的比值显著增加1倍,P62蛋白表达显著下降(P<0.05)。以上结果表明,脂噬对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的大小发挥调控作用。

胞外酸化经ASIC1/RIP1途径抑制TFEB介导的巨噬细胞脂噬

目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞,以pH 6.5培养液与25 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预胞外酸化诱导的RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色检测细胞内脂质蓄积;蛋白质印迹(Western blot)检测总ASIC1、膜ASIC1、p-RIP1 Ser166、p-TFEB Ser142、LC3和p62蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察脂滴(Bodipy示踪)与自噬标志物LC3II和LAMP1共定位;透射电镜观察细胞内脂滴和脂噬泡的数量变化;胆固醇荧光试剂盒检测ABCA1介导的胆固醇流出。结果 与pH 7.4组相比较,pH 6.5胞外酸化组胞内的脂质蓄积和细胞质膜上的ASIC1蛋白表达显著增加,p-RIP1Ser166、p-TFEB Ser142水平升高,LC3II蛋白减少和p62蛋白增加,脂滴与LC3II和LAMP1的共定位都分别减少,细胞内的脂滴数量显著增加,自噬体和脂噬泡的数量则明显减少,ABCA1介导的巨噬细胞内胆固醇流出显著减少。然而,胞外酸化对RAW264.7巨噬细胞的上述效应能被ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1所取消。结论 胞外酸化经激活ASIC1/RIP1途径促进TFEB磷酸化抑制巨噬细胞脂噬,ASIC1可能是防治动脉粥样硬化等脂质蓄积疾病的新靶点。

MEHP抑制小鼠睾丸间质细胞脂噬对睾酮合成的影响

目的探讨邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对小鼠睾丸间质细胞(TM-3)脂噬水平以及对睾酮合成的影响。方法将对数生长期的TM-3细胞分别暴露于0、200、400、800μmol·L^(-1)的MEHP中,分别为对照组、MEHP低剂量组、MEHP中剂量组、MEHP高剂量组。油红O染色及流式细胞术检测细胞脂滴水平,免疫荧光共定位检测细胞脂噬水平,游离胆固醇检测试剂盒检测细胞中游离胆固醇含量,ELISA检测上清液中的睾酮水平,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62、SIRT1、FOXO1、Rab7的蛋白表达水平。结果与对照组相比,MEHP低剂量组脂滴含量、睾酮含量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及P62蛋白表达水平均无明显变化(P均>0.05);MEHP中、高剂量组脂滴含量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及P62均升高(P均<0.05),游离胆固醇含量和睾酮的含量均降低(P均<0.01)。与对照组相比,MEHP低、中、高剂量组TM-3细胞SIRT1、FOXO1、Rab7蛋白表达水平均下降(P均<0.05)。结论MEHP可能通过SIRT1/FOXO1/Rab7信号通路抑制小鼠睾丸间质细胞脂噬,从而减少睾酮含量。

PLIN2在氧化型低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞脂噬中的作用

目的 探讨围脂滴蛋白2(PLIN2)在泡沫细胞脂噬中的作用,为动脉粥样硬化相关疾病的防治提供更多思路。方法 构建氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞模型,沉默细胞内PLIN2基因表达,将细胞分为5组:对照组、空质粒组、ox-LDL处理组、siPLIN2组、ox-LDL+siPLIN2组。应用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况,采用Western blot观察细胞内PLIN2和脂噬相关蛋白LC3和p62表达情况。结果 在ox-LDL诱导的泡沫细胞形成过程中LC3蛋白表达量随着脂质的增加而增加,p62则先减少后增加;在PLIN2沉默的RAW264.7巨噬细胞中LC3表达下调;在PLIN2沉默的泡沫细胞中,p62蛋白表达量明显增加,脂噬减弱。结论 在ox-LDL诱导的泡沫细胞中,敲减PLIN2可下调p62的表达,减弱细胞内脂噬。

从脂噬角度探讨补肾中药复方防治动脉粥样硬化的新策略

动脉粥样硬化(AS)是与增龄密切相关的多因性疾病,脂质蓄积为其中关键的病理因素。脂噬作为自噬重要的亚进程,可通过溶酶体介导选择性降解细胞内脂滴,减少脂质沉积,从而成为AS研究的新靶点。秉承AS本虚标实的基本病机及病证结合的基本思路,基于自噬与脂质代谢在AS进程中的交互作用,结合补肾中药复方可有效延缓衰老、调节脂质代谢以干预治疗AS的前期研究结果,本文拟从脂噬角度进一步探讨补肾中药复方防治AS的研究策略。

运动经FoxO1-脂噬通路缓解ApoE^(-/-)小鼠高脂血症的研究

目的脂噬是一种针对脂肪的选择性自噬,受FoxO1调控。运动作为调节脂代谢紊乱疾病的有效手段,其在高脂血症的作用是否与FoxO1-脂噬过程有关,目前尚无报道。本研究通过两种运动方式干预高脂血症模型小鼠,检测脂肪组织中脂噬相关指标的变化,以探究运动缓解高脂血症的可能作用机制。方法选取C57BL/6J小鼠作为野生对照组(WT组);载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠构建高脂血症模型,分为安静对照组(CON组)、中强度持续运动组(MICT组)和高强度间歇运动组(HIIT组),干预6周,检测各组小鼠血脂水平,HE染色观察脂肪细胞形态,RT-qPCR和Western Blot测试脂肪组织中PI3K、Akt/p-Akt、FoxO1/p-FoxO1和自噬相关指标(Beclin1、Atg7、LC3、p62、Rab7)的变化。结果(1)CON组血浆TG、TC和LDL-C水平较WT组显著增加,运动各组较CON组TG、TC水平显著降低(P<0.01)。(2)HE染色发现CON组较WT组同一视野下脂肪细胞数量增加(P<0.01)。(3)CON组较WT组FoxO1、Beclin1、Atg7、LC3和Rab7 mRNA表达增加,PI3K、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1和P62表达量减少(P<0.01),Beclin1、Atg7、LC3、Rab7蛋白含量增加(P<0.01);MICT组和HIIT组较CON组FoxO1、Beclin1、LC3、Atg7和Rab7 mRNA表达降低,PI3K、p-Akt/Akt、p-FoxO1/FoxO1和p62蛋白含量增加(P<0.05)或(P<0.01),Beclin1、Atg7、LC3、Rab7蛋白含量降低(P<0.05)或(P<0.01)。结论上述结果表明MICT和HIIT均可通过抑制脂肪细胞FoxO1-脂噬通路调节血脂水平、改善高脂血症。

脂噬介导的非酒精性脂肪性肝病及其运动调控研究进展

作为高度动态的细胞器,脂滴存在生物发生和凋亡两种机制。作为脂滴的凋亡机制之一,脂噬在生理状态下会被脂滴生成过程中的多种关键分子(DGAT1、Seipin和Plin2等)调控。高脂高糖膳食会引起脂肪组织和肝脏中脂肪酸过度堆积、胰岛素抵抗以及脂肪变性,从而诱发非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。肝脏中脂噬信号通路和脂滴代谢中的关键分子能够调控NAFLD的发生。运动是治疗NAFLD的有效手段。本文总结脂噬介导的非酒精性脂肪性肝病及其运动调控的相关研究文献,结果表明,在NAFLD中,运动对高脂膳食诱导的脂质代谢紊乱具有改善作用,运动通过围脂蛋白2(Plin2)、能量信号分子AMP活化蛋白激酶(AMPK)和雷帕霉素复合物(m TOR)等调控脂噬的信号通路,运动通过脂噬影响脂滴的代谢机制进而改善NAFLD。运动会影响骨骼肌代谢因子与肝脏脂噬之间的交互作用。运动可以促进骨骼肌中代谢因子的分泌进入循环系统,影响肝脏的脂噬进而改善肝脏中脂滴堆积和脂肪变性。

脂噬在病原微生物感染中的作用研究进展

自噬是一种维持细胞代谢稳态的机制,与细胞多种内含物降解有着紧密的关系。脂噬作为一种选择性自噬进程,能够有效地识别并分解脂质。一方面脂噬能够调控脂滴代谢,防止脂质沉积;而另一方面某些病原微生物也能够利用脂噬为自身增殖提供必要条件。本文从自噬与脂质相互作用出发,探讨了脂噬对细胞脂质代谢的影响以及脂噬之于某些病原微生物感染的作用机制和意义。

脂噬在动脉粥样硬化中的作用及中医药干预研究进展

动脉粥样硬化(As)是一种多因素共同作用的慢性炎症性血管病变。脂质蓄积是As发生的关键病理因素之一,其通过触发血管内炎症细胞浸润、内皮细胞损伤、泡沫细胞形成、血管平滑肌细胞增殖及迁移等多个病理环节,最终导致As斑块形成。脂噬作为一种选择性的自噬进程,通过溶酶体介导选择性降解细胞内储存中性脂质的细胞器脂滴,减少脂质沉积,从而维持细胞稳态,成为As研究的新靶点。本文对细胞脂噬功能在As中的作用的研究进展及相关中医药治疗进行讨论,旨在从脂噬角度为中医药防治As提供可行性思路。

二氢杨梅素的体外护肝作用:基于脂噬介导的LO2细胞脂质蓄积及HepG2细胞增殖

目的基于脂噬途径研究二氢杨梅素(DMY)对LO2细胞脂质蓄积的防治效果及其机制,并探索其对HepG2细胞的增殖抑制。方法FBS诱导LO2细胞建立脂肪变性模型,研究分别设置对照组:10%FBS-DMEM正常培养;模型组:50%FBS-DMEM;阳性对照组:100μg/mL DMY+10%FBS-DMEM;处理组(L-DMY组:50μg/mL DMY+50%FBS-DMEM;M-DMY组:100μg/mL DMY+50%FBS-DMEM;H-DMY组:200μg/mL DMY+50%FBS-DMEM)及恢复对照组:先50%FBS-DMEM培养,后10%FBS-DMEM培养。油红O染色测定脂滴累积。试剂盒测定TC、TG、LDL水平和AST、ALT和LDH酶活性。AO染色观察自噬溶酶体数量,透射电镜观察自噬体数量。Western blot检测自噬蛋白LC3表达量。MDC染色观察自噬体形成情况,q-PCR测定LC3、ATG7、AMPK、mTOR、p62和Beclin1的mRNA表达水平。细胞周期阻滞实验分析HepG2细胞周期比例,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,细胞DNA断裂实验检测HepG2细胞DNA的完整情况。结果DMY干预和预处理可抑制LO2细胞的脂质蓄积,并且降低TC、TG、LDL水平和AST、ALT和LDH酶活性,差异具有统计学意义(P<0.05);DMY可促进LO2细胞的自噬体和自噬溶酶体的形成,并促进自噬蛋白LC3的表达;DMY可减轻高FBS诱导的LO2细胞自噬体形成抑制,并上调LC3(P<0.01)、ATG7(P<0.01)、Beclin1(P<0.05)和AMPK(P<0.001)的mRNA水平,下调p62(P<0.001)和mTOR(P<0.001)的mRNA水平。DMY可阻滞HepG2细胞的有丝分裂和细胞增殖(53.90%vs 14.62%;32.31%vs 70.17%),诱导HepG2细胞的晚期凋亡(4.74%vs 57.86%)和DNA断裂。结论DMY通过调节AMPK/mTOR介导的脂噬途径减少LO2细胞的脂质累积,通过阻滞细胞周期和促进凋亡抑制HepG2增殖,发挥体外护肝作用。

不同低氧训练模式通过激活小鼠脂肪组织脂噬作用调节脂代谢

目的:探讨不同低氧训练模式能否通过激活小鼠腹股沟皮下脂肪组织的脂噬作用调控脂代谢。方法:将40只健康C57BL/6小鼠分为对照组(C组),运动组(E组),低氧组(H组),低住高练组(LoHi组),高住低练(HiLo组)五组,每组8只。E组进行跑台运动,运动方案为:25 m/min,1 h/d,5 d/周;H组每天8到18点在13.6%低氧浓度下进行低氧暴露;LoHi组在常氧(21%)氧浓度下生活,在13.6%低氧浓度下进行运动;HiLo组每天8点~16点在氧气浓度为13.6%的低氧帐篷下进行低氧暴露,每次低氧暴露结束后进行常氧环境下的运动,LoHi组与HiLo组的运动方案与E组一致。6周后采用Elisa法测血清甘油三酯水平,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠脂肪细胞,免疫荧光共定位观察自噬关键因子的共定位情况,Western blot等方法检测微管相关蛋白1轻链3的比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、溶酶体相关2型蛋白(LAMP-2)、选择性自噬接头蛋白(p62)、BECN1基因编码蛋白(Beclin1)等自噬相关蛋白表达水平。结果:(1)与C组相比,LoHi组的体重增长显著减少(P<0.05)。(2)与C组相比,E组、H组、LoHi组、HiLo组的小鼠血清中甘油三酯水平显著降低(P<0.01)。(3)HE染色观察到与C组相比,E组、H组、LoHi组、HiLo组的脂肪细胞直径缩小,数量增多。(4)与C组相比,E组、H组、LoHi组、HiLo组的脂肪细胞中的橙黄色斑点增多,且四组的共定位系数也显著提高(P<0.01);此外,E组的共定位系数显著高于H组(P<0.01);LoHi组的共定位系数也显著高于E组和H组(P<0.01)。(5)与C组相比,E组、H组、LoHi组、HiLo组LC3Ⅱ/Ⅰ、LAMP-2蛋白表达显著升高(P<0.01、P<0.05)。此外,LoHi组LC3Ⅱ/Ⅰ的比值显著大于H组(P<0.01),LoHi组LAMP-2的蛋白表达显著高于E组(P<0.05)。与C组相比,LoHi组、HiLo组Beclin1蛋白表达水平显著提高(P<0.01);E组、H组、LoHi组、HiLo组四组之间Beclin1蛋白表达水平未见显著差异(P>0.05)。与C组相比,E组、LoHi组、HiLo组p62的蛋白表达显著降低(P<0.01);同时,LoHi组的p62蛋白表达显著低于H组(P<0.05);但不同低氧训练组之间p62蛋白表达未见显著性差异(P>0.05)。结论:6周低氧训练能够通过激活小鼠腹股沟皮下脂肪组织的脂噬作用促进脂质分解代谢,且低住高练和高住低练的干预效果没有明显区别。

脂噬在脂代谢疾病中的调控作用

脂噬是细胞通过活化自噬相关分子,选择性识别和降解脂滴胆固醇酯和甘油三酯形成游离胆固醇、脂肪酸和甘油的过程,其主要作用是降解脂质、防止细胞内脂质过度蓄积,但在不同疾病中脂噬的作用有一定区别。本文就脂噬在多种脂代谢疾病中的调控作用做一综述。

脂噬在肾脏疾病中的作用研究进展

脂噬作为一种选择性自噬,对脂滴(LDs)降解的调节作用已得到充分证明,在营养缺乏或者细胞脂质积聚过多时,脂噬可以被激活,从而降解LDs并为细胞提供能量来源。在不同类型的细胞中,脂噬对脂质稳态起了重要的调节作用,并且与许多疾病的病理、生理有关。脂质的异常累积参与了许多肾脏疾病的病理过程。本文就脂噬在肾脏疾病中的作用研究进展,包括脂噬维持肾脏生理功能、降低糖尿病肾病和肾透明细胞癌中脂质累积的作用作一综述,旨在为进一步研究脂噬在肾脏生理病理中的调控作用提供理论基础,并为与脂质累积有关的肾脏疾病的治疗指引新的方向。

基于脂噬角度探讨“态靶辨治”理念下高血压病“病-期-态”的生物学内涵

高血压病是一种常见的以动脉压升高为主要临床表现的慢性疾病,能够使心、脑、肾等重要器官发生病变,近几年,高血压病渐渐成为常见的流行病之一,其发病率也呈逐年增长的趋势。仝小林院士将中医理论及个人临床经验相结合,依据态靶理论,提出了高血压病“病-期-态”具体病机。脂噬可通过干预脂质代谢、动脉粥样硬化、动脉斑块形成、血管重塑、血管内皮损伤等高血压发病环节,在高血压病的发病机制中发挥重要作用。通过现代医学和生物学研究,一方面认为脂噬动态病理变化与高血压态靶辨治“期”的密切相关,其动态病理变化与高血压病3个阶段疾病发生发展的时间点互相对应,另一方面认为脂噬是高血压态靶辨治“态”的重要微观体现。基于脂噬探讨高血压病的态靶辨治“病-期-态”模式的生物学内涵,借鉴现代医学疾病认知来认识疾病发展规律,可使中医宏观辨治思路与现代医学微观理化指标精准对接,实现中医精准治疗,以期为高血压病及其并发症的早期防治拓展新思路。

基于脂噬介导的mTOR/TFEB信号通路探讨当归红芪超滤物干预糖尿病肾病作用机制

目的以当归红芪超滤物干预糖尿病肾病模型大鼠,探讨其对糖尿病肾病脂噬的效应机制。方法50只SPF级雄性Wistar大鼠随机选取7只为空白组,其余43只采用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素联合高脂高糖饲料喂养制备糖尿病肾病模型。将成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(17.9 mg/kg)和中药低、中、高剂量组(1.5、3、6g/kg),分别灌胃相应溶液,连续12周。检测大鼠随机血糖、体质量及24h尿蛋白含量,生化检测糖化血清蛋白(GSP)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)含量,HE染色观察肾组织形态变化,Masson染色观察肾组织纤维化情况,透射电镜观察肾组织超微结构,RT-qPCR检测肾组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3(LC3B)mRNA表达,Westernblot检测肾组织mTOR、转录因子EB(TFEB)、p-TFEB、LC3B蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠随机血糖显著升高(P<0.01),体质量显著减少(P<0.01),24h尿蛋白含量显著升高(P<0.01),GSP、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C、FFA含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);肾小管上皮细胞空泡变性、胞质空泡化、有大量炎性细胞浸润,胶原纤维增多且分布杂乱,脂滴数量增加,自噬体数量减少;肾组织mTORmRNA表达显著升高(P<0.01),LC3BmRNA表达显著降低(P<0.01),mTOR、p-TFEB蛋白表达显著升高(P<0.01),TFEB、LC3BⅡ蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠给药12周随机血糖、24h尿蛋白含量降低,体质量增加,GSP、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C、FFA含量降低,HDL-C含量升高;肾组织炎性细胞浸润、纤维化、脂滴沉积有不同程度缓解,肾组织mTORmRNA表达降低,LC3BmRNA表达升高,mTOR、p-TFEB蛋白表达降低,TFEB、LC3BⅡ蛋白表达升高,其中厄贝沙坦组和中药高剂量组差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论当归红芪超滤物能改善糖尿病肾病模型大鼠糖脂代谢紊乱、拮抗肾脏异位脂质沉积、促进脂噬、延缓糖尿病肾病进程,其机制可能与mTOR/TFEB信号通路有关。

Notch1抑制干扰素刺激基因信号调控非酒精性脂肪性肝炎中肝细胞脂噬作用的机制

目的:研究髓系Notch1特异性敲除抑制干扰素刺激基因(STING)信号调控肝细胞脂噬作用机制。方法:通过高脂饮食(HFD)构建小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,分离小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)和原代肝细胞以构建共培养体系。12只Notch1^(FL/FL)小鼠随机分成2组:Notch1^(FL/FL)+正常饮食(NCD)组、Notch1^(FL/FL)+HFD组;12只Notch1^(M-KO)小鼠随机分成2组:Notch1^(M-KO)+NCD组、Notch1^(M-KO)+HFD组。分别留取小鼠血清标本进行血清丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)检查,取肝组织样本进行HE染色、免疫荧光(IF)、免疫印迹、qRT-PCR检测,酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液肿瘤坏死因子(TNF)α水平。组间数据比较采用t检验。结果:成功构建小鼠NASH模型,及小鼠BMMs和原代肝细胞共培养体系。与Notch1^(FL/FL)+HFD组相比,Notch1^(M-KO)+HFD组血清ALT[(250.02±58.21)U/L与(370.70±54.57)U/L,t=3.705,P=0.004]、TG[(29.90±3.54)mg/g与(43.83±8.56)mg/g,t=3.685,P=0.004]和TC[(33.70±8.43)mg/g与(90.53±12.53)mg/g,t=9.917,P<0.001],明显升高;肝组织HE染色显示肝细胞气球样变明显,IF染色显示巨噬细胞浸润增加(t=7.346,P<0.001)。与Notch1^(FL/FL) BMMs共培养的肝细胞组相比,BODIPY探针显示,Notch1^(M-KO)组中肝细胞内脂滴(LDs)沉积明显增多(t=3.835,P<0.001);溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和LDs共定位减少(t=7.103,P<0.001),微管相关蛋白轻链3(LC3)-II/LC3-I:(t=5.0,P=0.007)、自噬相关基因12(Atg12)(t=28.36,P<0.001)表达下降,p-62表达上升(t=3.253,P=0.03);且LC3和LDs共定位减少(t=5.24,P=0.0003)。与Notch1^(FL/FL)组相比,Notch1^(M-KO)组小鼠BMMs中p-STING(t=5.318,P=0.006)、p-TANK1结合激酶1(TKB1)(t=6.467,P=0.002)、p-干扰素调节因子3(IRF3)(t=14.61,P<0.001)、p-P65(t=12.7,P=0.002)蛋白表达上升,同时伴有干扰素(IFN)-β(t=7.978,P<0.001)、TNFα(t=8.496,P<0.001)、白细胞介素1β(IL-1β)(t=4.7,P<0.001)、趋化因子配体-10(t=4.428,P=0.001)炎性介质的mRNA表达明显上升。使用CRISPR/Cas9敲除Notch1^(M-KO)小鼠BMMs中STING基因,与CRISPR-Control组相比,STING-KO组BMMs中p-TKB1(t=2.909,P=0.044)、p-IRF3(t=10.96,P<0.001)、p-P65(t=7.091,P=0.002)蛋白表达下降,上清液中TNFα[(732.3±129.35)pg/ml与(398.17±47.15)pg/ml,t=4.204,P=0.014]释放减少。而与STING-KO BMMs共培养的肝细胞中LC3-II/LC3-I(t=7.546,P=0.001)上升,p-62(t=10.96,P<0.001)表达下降,且LC3和LDs共定位增多。结论:髓系Notch1特异性敲除通过激活巨噬细胞STING信号,增加炎性介质基因表达,抑制肝细胞自噬流及脂噬的发生,加重LDs沉积和促进NASH的进展。

脂肪组织中自噬影响肥胖发病机制的研究进展

肥胖是由于脂肪细胞体积增大和数量增生而引起的脂肪组织异常或过度堆积导致的一种慢性代谢性疾病,由环境因素和遗传因素共同决定。近年来,自噬在调控脂肪细胞数量、脂肪生成和白色脂肪棕色化等过程中的作用引起了广泛关注。文章就脂肪组织中3种不同类型的自噬对脂肪生成、白色脂肪棕色化和脂肪代谢等过程的影响进行系统性总结回顾,旨在阐明自噬对脂肪组织功能及肥胖的影响,进而为肥胖的预防和治疗提供潜在靶点。

泽泻汤调控Akt/TFEB促进肝细胞脂噬机制研究

以特异性吞噬脂滴并降解的脂噬为切入点,基于Akt/TFEB通路探讨泽泻汤(Zexie Decoction, ZXD)改善棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导的高脂细胞模型及高脂饮食(high-fat diet, HFD)诱导的高脂动物模型肝细胞脂代谢的机制。体外转染GFP标记的微管轻链蛋白3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)质粒与脂滴共定位和小鼠肝脏LC3与脂滴包被蛋白(perilipin2,PLIN2)免疫荧光共定位,结果显示,与DMSO及NCD组相比,棕榈酸(PA)及高脂饮食(HFD)诱导肝细胞内蓄积大量脂质,LC3表达水平降低,脂滴与LC3共定位显著减少(P<0.001),脂噬受损,泽泻汤干预促进LC3的表达,降低肝细胞脂质蓄积,并增加LC3与脂滴的共定位,提示脂噬被激活;Western blot结果同步证实了泽泻汤体内外诱导自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化比及溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)的增加,促进泛素结合蛋白1(sequestosome-1,SQSTM1/p62)的降解(P<0.05),共同说明泽泻汤调控脂噬途径。荧光素酶报告基因结果显示泽泻汤激活肝细胞中TFEB的表达(P<0.05);泽泻汤体内外逆转PA及HFD诱导的肝细胞转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)核定位的减少(P<0.05),同时激活肝脏TFEB上调其靶基因Lamp2、Lc3B、Bcl2、Atg5的表达(P<0.05);此外,泽泻汤体内外下调TFEB上游调控蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)的磷酸化水平(P<0.05)。综上所述,泽泻汤促进脂噬,其机制可能与调节Akt/TFEB途径有关。

脂噬在非酒精性脂肪性肝病中的调控作用

通过溶酶体自噬途径选择性降解脂滴的过程被称为脂噬。脂噬过程会受到基因、转录因子、酶等多种因素的直接或间接调节作用。肝脏是人体脂肪酸的主要加工场所。因此,肝脏出现功能障碍会导致脂肪的代谢异常,非酒精性脂肪性肝病就是其中的典型事例。非酒精性脂肪肝病包括单纯性非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎,后者还涵盖了肝纤维化,可进一步发展为肝硬化和肝细胞癌。越来越多的研究表明,脂噬在非酒精性脂肪肝病中发挥了重要调节作用。本文主要综述了脂噬在非酒精性脂肪性肝病进展中的调节机制,为非酒精性脂肪性肝病的防治提供新的思路。