miR-26b过表达对不同时间点人脂肪细胞分泌脂因子的影响

目的探讨miR-26b过表达在人脂肪细胞分化过程中对各种脂因子分泌的影响。方法以miR-26b过表达病毒感染人脂肪前体细胞并诱导分化;收集不同时间点的细胞培养基上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各个时间点的脂因子(白介素-6、瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子-α)分泌量。结果与对照组比较,在miR-26b过表达病毒感染的人脂肪前体细胞分化过程中,白介素-6、瘦素分泌量降低,而抵抗素分泌量升高;两组均未检测到肿瘤坏死因子-α。结论 miR-26b在一定程度上可以改善人脂肪细胞炎症状态及改善胰岛素抵抗,为肥胖治疗提供潜在靶点。

肌因子、脂-肌因子和脂因子:运动骨骼肌和脂肪组织功能的再认识

背景:传统观点认为骨骼肌是动力器官,脂肪组织是能量贮存组织。目的:采用文献资料法对骨骼肌和脂肪组织分泌的肌因子、脂-肌因子和脂因子进行梳理总结。方法:以"肌因子,脂-肌因子,脂因子,骨骼肌,脂肪组织"为中文检索词;"myokine,adipo-myokine,adipokine,skeletal muscle,adipose tissue"为英文检索词,检索Web of Science、PubMed和中国知网(CNKI)等数据库1987年1月至2018年6月相关文献;排除与研究目的不符或重复性文章,最后选择59篇文献进行归纳分析。结果与结论:近30年骨骼肌和脂肪组织的分泌功能被发现,其分泌物可能是"运动因子",在运动与健康之间起到桥梁作用。肌因子和脂因子分别是肌肉细胞和脂肪组织释放的细胞因子或肽类物质,具有自分泌、旁分泌和内分泌功能;肌因子可以平衡由脂肪组织所产生的部分脂因子的有害影响,并发挥抗炎作用。

2型糖尿病并发骨质疏松患者血清成骨因子和成脂因子的变化

目的:探讨血清成骨因子和成脂因子在2型糖尿病并发骨质疏松患者中的变化规律。方法:选择2016年4月—2017年10月盐城市第一人民医院进行双能X线骨密度(dual energy X-ray absorptiometry, DXA)检查的120例2型糖尿病患者为观察组(A组:骨密度正常的患者30例,B组:合并骨量减少的患者28例,C组:合并骨质疏松的患者33例,D组:合并骨质疏松并行强化血糖控制的患者29例),30例非糖尿病且骨密度正常的健康者为对照组,应用酶联免疫吸附法测定研究对象的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ, PPARγ)、CCAAT-增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα, C/EBPα)水平。结果:观察组各亚组糖化血红蛋白均高于对照组(P<0.05),DXA骨密度测定T值均低于对照组(P<0.05);观察组中D组糖化血红蛋白低于C组(P<0.05),DXA骨密度测定T值高于C组(P<0.05);观察组各亚组的ALP、Runx2水平均明显低于对照组(P<0.05),PPARγ、C/EBPα水平均高于对照组(P<0.05);观察组中D组患者ALP、Runx2水平高于C组(P<0.05),PPARγ、C/EBPα水平低于C组(P<0.05)。ALP、Runx2与骨密度水平呈正相关,PPARγ、C/EBPα水平与骨密度水平呈负相关。结论:血清成骨因子和成脂因子在2型糖尿病并发骨质疏松形成及发展过程中具有重要意义,骨密度水平与成骨因子呈正相关,与成脂因子呈负相关,可为骨质疏松诊断及治疗效果评估提供参考,以提高诊断准确性。

乳脂球表皮生长因子8对缺血性脑卒中后认知功能障碍的预测价值

目的 探讨乳脂球表皮生长因子8(milk fat globule-epidermal growth factor 8,MFG-E8)对缺血性脑卒中(ischemic stroke, IS)后认知功能障碍的预测价值。方法 采用前瞻性巢式病例对照研究,选取2021年1月至2023年1月上海市宝山区吴淞中心医院收治的IS患者(病例组)135例,同期选取于本院进行体检的健康者(对照组)135例。病例组均采用保守治疗,采用蒙特利尔认知评估量表评估其出院后6个月的认知功能,并分为认知正常组(n=78)和认知障碍组(n=52);认知障碍患者进一步分为轻度组(n=34)和中重度组(n=18)。收集病例组临床资料,测定患者临床治疗前、入院7 d时、出院时的血清MFG-E8水平情况,分析血清MFG-E8水平预测IS后认知功能障碍的效能。结果 病例组剔除5例,最终130例进入研究。病例组治疗前血清MFG-E8水平低于对照组(P<0.01)。病例组发生认知功能障碍52例,占40.0%,其中轻度认知障碍34例,中度16例,重度2例。认知障碍组各时点的血清MFG-E8水平及临床治疗前至入院7 d血清MFG-E8的变化值(△_(1)MFG-E8)、临床治疗前至出院时血清MFG-E8的变化值(△_(2)MFG-E8)均低于认知正常组(P<0.05);中重度组治疗前、入院7 d、出院时血清MFG-E8水平均低于轻度组(P<0.05)。经logistic回归分析显示,治疗前、入院7 d、出院时血清MFG-E8水平及△_(1)MFG-E8、△_(2)MFG-E8值、中面积梗死均与IS后认知功能障碍发生有关(P<0.05);绘制受试者工作曲线显示,△_(2)MFG-E8值预测IS后认知功能障碍的效能较好,曲线下面积为0.895(95%CI:0.843~0.947),敏感度、特异度分别为74.4%、88.5%。结论 血清MFG-E8水平对IS患者发生认知功能障碍具有较高的预测价值,出院时血清MFG-E8变化值预测IS后认知功能障碍发生效能较好。

乳脂球表皮生长因子8与阿尔茨海默病的关联

目的探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)与阿尔茨海默病(AD)的关联。方法使用阿尔茨海默病神经影像计划数据库,多元线性回归用来研究MFG-E8与AD病理标志物以及脑结构的关联并进行亚组分析。使用混合效应模型研究MFG-E8与AD病理标志物和脑结构的纵向变化。中介分析用来研究MFG-E8与AD病理和脑结构之间的潜在关联。结果一共377例纳入研究,MFG-E8水平与脑脊液中β淀粉样蛋白42(Aβ_(42)),tau蛋白以及磷酸化tau蛋白(P-tau)浓度呈正相关,亚组分析结果显示,在男性、老年人以及携带APOE4基因的人群中,MFGE8水平与AD病理标志物的浓度及侧脑室体积的大小关联与总体人群一致。纵向结果表明,在随访时间内,MFGE8水平的升高与侧脑室体积扩大显著相关。此外,MFG-E8可通过影响Aβ_(42)水平改变侧脑室体积。结论MFG-E8与AD存在关联,可能通过AD病理标志物影响侧脑室体积变化。

脂代谢异常调控肾结石发生机制研究进展

近年来,代谢综合征、糖脂代谢异常对肾结石形成的影响已成为泌尿结石研究的热点。已有大量证据证实了糖代谢异常与肾结石的相关性,但对于脂代谢异常的作用却关注较少。脂代谢异常指血清中脂蛋白、胆固醇和三酰甘油等脂质物质的代谢紊乱;有研究表明脂代谢异常也参与了肾结石形成的过程;但总体而言,目前对脂代谢通路、脂调节因子以及相关细胞器应激在肾结晶发生过程中作用机制的认知仍然较为有限。本综述旨在总结近年来部分相关研究成果,通过明确脂代谢在肾脏的作用途径,了解脂代谢异常与肾结石发生的相关性,深入探讨脂调节因子及细胞器异常损伤后诱发结石发生的证据及精细机制,进而加深对脂代谢异常促进肾结石发病机制的了解,并为脂代谢调控肾结石发生的后续研究提供思路和参考。

内皮高表达脂多糖相关因子1通过影响NF-κB信号通路促进糖尿病小鼠皮肤创面愈合的研究

目的:探讨内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA1)对2型糖尿病小鼠皮肤创面促愈合效果及机制。方法:选取SPF级6周龄db/db糖尿病小鼠,构建全层皮肤创面模型,在创口周边注射EOLA1高表达慢病毒。小鼠分为正常对照组、空载体慢病毒组、EOLA1慢病毒组。除正常对照组外,拍照记录不同时期小鼠创口愈合情况,造模第15天取创口及周边皮肤,HE染色观察创面肉芽组织及炎性浸润,Masson染色观察创面胶原纤维沉积,免疫荧光检测ARG1、iNOS观察巨噬细胞分型,Western blot及Real-time PCR检测NF-κB信号通路IκB-α、p-IκB-α、p65蛋白表达和EOLA1、TLR4、TNF-α、IL-1β基因表达水平。结果:与空载慢病毒组相比,EOLA1慢病毒组小鼠皮肤伤口愈合速度加快,肉芽组织及胶原纤维形成增多。EOLA1慢病毒组M2型巨噬细胞标志物ARG1表达升高,M1型巨噬细胞标志物iNOS表达降低。EOLA1慢病毒组IκB-α蛋白表达升高,p-IκB-α蛋白表达降低,TNF-α、IL-1β基因表达水平下调。结论:EOLA1可抑制糖尿病小鼠皮肤创面局部炎症,加速创面愈合,其机制可能为通过上调巨噬细胞内IκB-α表达,封闭p65活性,从而抑制炎症因子TNF-α、IL-1β的释放,巨噬细胞的表型也表现为从促炎症的M1型向促愈合的M2型转变。提示EOLA1在糖尿病创面具有抗炎促愈的潜力。

HPLC检测人重组组织因子脂化物磷脂含量

利用脂质体技术制备凝血酶原时间测定试剂人重组组织因子脂化物,建立高效液相色谱(HPLC)方法用于同时分析人重组组织因子脂化物中的主要成分磷脂酰丝氨酸(DOPS),磷脂酰胆碱(DOPC),以及人重组组织因子(TF)的半定量测定。分析测定条件:色谱柱:Waters Symmetry300 C4色谱柱(150×4.6 mm,5μm,300),流动相甲醇水,梯度洗脱,流速1 mL·min^(-1),柱温:30℃,检测波长210 nm,DOPS保留时间12.275 min,TF保留时间15.4 min,DOPC保留时间18.917 min。研究发现,采用建立的分析方法,DOPS在1.875~15 mg·mL^(-1)的浓度范围内呈良好的线性关系(R 2=0.9974),检出限为1.875 mg·mL^(-1)(S/N=3);DOPC在4.375~35 mg·mL^(-1)浓度范围内线性关系(R 2=0.9993)良好,检出限为4.375 mg·mL^(-1)(S/N=3)。在结合多次制备的人重组组织因子脂化物的产品测试中,该方法也表现出了良好的稳定性和精密度。总之,该方法可同时测定脂化物成分组成,并具有良好的检测效果,可为化妆品、制药和食品补充剂行业提供理想的参考价值。

悬浮法与贴壁法提取脂肪组织分泌促成脂因子比较

目的 优化体外获取脂肪组织浸提液的提取方法,比较不同方法提取浸提液的成脂作用。方法 通过贴壁法和悬浮法培养脂肪组织获得浸提液,过滤、冷冻超离心浓缩浸提液,通过BCA试剂盒检测两种方式得到的浸提液分泌因子（secretory factors from adipose tissue explants,SFAE）蛋白总量及蛋白因子得率。等量蛋白成脂诱导第3代（P3）脂肪干细胞,诱导第7~13d,显微镜下观察及进行油红染色,鉴定成脂情况。结果 贴壁法和悬浮法4次提取浸提液中蛋白含量的差异无统计学意义。但悬浮培养法4次重复实验蛋白因子得率更为稳定,贴壁法每次蛋白因子得率数据相差很大,每克脂肪组织获得分泌蛋白的量最小时为7.3mg,最大可得到12.4mg,而悬浮得到的蛋白因子几乎都趋近于8.7mg。并且贴壁培养法与悬浮培养法相比,获取等量的SFAE需要T75培养瓶更多（10个）,且需手工铺匀,贴壁后才能加入培养基,而悬浮培养法仅需悬浮培养瓶1个,加入脂肪组织后即可进行培养。两种方法得到的浸提液都具有促成脂效果,在等量蛋白诱导下的成脂效果差异无统计学意义。结论悬浮和贴壁培养法得到的浸提液具有相同的促成脂能力,但是悬浮培养获得的浸提液更加省时省力且蛋白因子得率稳定,为后续研究和鉴定在SFAE中准确找到成脂因子奠定基础。

乙醇对人骨髓间充质干细胞成脂转录因子γ和骨钙素mRNA表达的影响

目的观察乙醇对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)内成脂转录因子(PPAR)γ和骨钙素(Osteocalcin)mR-NA表达的影响。方法取健康自愿者骨髓,通过梯度离心、贴壁分离培养,获得hBMSCs,传至第2代hBMSCs8d,随机分为2组,实验组以0.09mol/L乙醇作为诱导剂每d处理细胞,对照组不给予乙醇,继续培养细胞6d。应用RT-PCR技术检测2组细胞中PPARγmRNA和OsteocalcinmRNA的表达。结果与对照组比较,实验组hBMSCs内PPARγmRNA表达增高(1.38±0.27vs1.73±0.34,P<0.05)。与对照组比较,实验组hBMSCs内OsteocalcinmR-NA表达降低(1.08±0.22vs0.48±0.11,P<0.05)。结论乙醇能够诱导hBMSCsPPARγ表达增强,Osteocalcin表达减少,这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。

大肠杆菌表达抗脂多糖因子的发酵条件优化

抗脂多糖因子(anti-lipopolysaccharide factor,ALF)作为一种重要的抗菌肽,具有抗菌性强,抗菌谱广的特点。将中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)抗脂多糖因子基因ALF克隆至pET32a载体获得原核表达载体。为了提高ALF融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,保持抑菌活性,对已构建的重组大肠杆菌的发酵条件进行了优化,通过单因素分析的方法,考察了五种不同的培养基对表达量的影响,并在LB+M9培养基的基础上对培养基各组分进行了选择和优化,确定最佳培养基组分为:2.5 g/L蔗糖,10 g/L酵母膏,2.4 g/L(NH4)2SO4,12.8 g/L Na2HPO4,3 g/L KH2PO4,10.5 g/L NaCl,2 mmol/L MgSO4,0.1 mmol/L CaCl2溶液。分析了多种因素对表达量的影响,结果表明,培养基pH调至6.5,在菌体OD600达到0.8时加入诱导剂IPTG至终浓度为0.5 mmol/L,33℃继续诱导5 h,蛋白表达量最高。表达的融合蛋白可以抑制藤黄微球菌(Micrococ-cus luteus)在平板上的生长。

川崎病患儿治疗前后血清脂源性细胞因子的变化及意义

目的检测急性期川崎病患儿静脉注射丙种球蛋白(IVIG)治疗前后血清中脂源性细胞因子Omentin-1和Chemerin浓度变化及意义。方法选取2015年1月至2019年4月确诊为川崎病患儿60例为研究对象,同时选取40例健康儿童和40例急性感染性疾病患儿分别作为健康对照组和感染对照组。根据是否对IVIG治疗敏感将川崎病患儿分为IVIG敏感组(n=51)和IVIG不敏感组(n=9);根据是否合并冠状动脉损害(CAL)将川崎病患儿分为合并CAL组(n=13)和不合并CAL组(n=47)。ELISA法检测川崎病患儿IVIG治疗前后及两对照组儿童血清Omentin-1和Chemerin水平。结果川崎病患儿血清Omentin-1和Chemerin水平均明显高于健康对照组和感染对照组(P<0.05)。经过48 h治疗后,IVIG敏感组患儿血清Chemerin水平较治疗前明显降低(P<0.05),血清Omentin-1水平在IVIG敏感组患儿治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,IVIG不敏感组患儿血清Chemerin水平明显高于IVIG敏感组(P<0.05);合并CAL组血清Chemerin水平明显高于不合并CAL组;而血清Omentin-1水平在IVIG敏感与不敏感组间及合并CAL与不合并CAL组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论川崎病患儿血清中高表达的Chemerin和Omentin-1可能参与川崎病的发生和发展;Chemerin可能参与川崎病所致CAL过程,且血清Chemerin水平可能成为临床预测IVIG敏感性的新监测指标。

中医辨证方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠脂质代谢因子影响的研究

目的:观察中医辨证方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠脂质代谢因子的调控作用,探讨其防治NASH的作用机制。方法:高脂饲料喂养制备NASH大鼠模型,每日灌胃3种中医辨证方(健脾补肾方、活血降浊方、综合方)及易善复进行治疗,10周后检测各组大鼠肝功能、血脂指标,SYBR Green荧光定量PCR法测定肝组织脂质代谢因子指标,并进行统计。结果:3种中医辨证方组大鼠肝功能、血脂指标及SREBP-1c、SCAP含量明显低于模型组(P<0.01)且PPARα、PGC-1α含量高于模型组(P<0.01)。结论:3种中医辨证方对NASH大鼠具有良好的治疗效果,可以改善大鼠肝功能及血脂,干预脂质代谢相关因子从而调节脂质代谢。

中国明对虾抗脂多糖因子基因克隆与表达研究

从中国明对虾中成功克隆到抗脂多糖因子(ALF)的cDNA。该cDNA全长594bp,编码由123个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白分子量为13694.02Da,等电点pI为10.24,有25个氨基酸的信号肽。RT-PCR研究表明,ALF基因在中国明对虾血细胞和鳃中有高水平的组成型表达,在细菌刺激后,ALF基因在各组织中的表达均增加,尤其在心脏和胃中表达上调明显。从表达模式可以推测,中国明对虾的抗脂多糖因子,作为一种抗菌肽类效应分子,在清除病原的防御反应中可能起着重要的作用。

益肾调肝方对NASH大鼠脂质代谢相关因子的调控作用研究

目的:研究益肾调肝方在非酒精性脂肪性肝炎大鼠的预防过程中对脂质代谢相关因子PPARα、PGC-1α及SREBP-1c、SCAP的调控作用。方法:用高脂饲料对SD大鼠造模10周,同时用益肾调肝方及易善复进行预防10周,然后检测各组大鼠脂质代谢相关因子PPARα、PGC-1α及SREBP-1c、SCAP,以及肝指数和肝炎分级。结果:益肾调肝方可以使PPARα、PGC-1α下降幅度减小(17.66±1.53、17.44±1.57vs模型组7.79±1.06、7.70±0.44,均P<0.01),使SREBP-1c、SCAP上升幅度降低(12.38±0.78、14.41±1.16 vs模型组18.32±1.12、25.55±1.29,均P<0.01),肝脏重量较模型组明显减轻(13.44±1.18vs16.56±2.48,P<0.01),肝指数也明显低于模型组(2.84±0.30vs3.65±0.50,P<0.01),还明显降低了肝脏病理炎症等级。结论:益肾调肝方预防非酒精性脂肪性肝炎的过程中,对脂质代谢相关因子有明显影响,对PPARα、PGC-1α及SREBP-1c、SCAP的调控是益肾调肝方预防非酒精性脂肪性肝炎的作用靶点之一。

静电层层自组装技术及其在脂溶性功能因子中的应用研究进展

脂溶性功能因子的包埋、释放及稳定性研究一直受到广泛的关注,利用层层自组装技术将聚合物电解质沉积在带电油滴表面形成多层乳液可提高其贮藏稳定性和消化吸收率。本文综述了层层自组装技术及制备多层乳液所需电解质种类,介绍了多层乳液在脂溶性功能因子中的应用及其结构表征,并提出了目前需重视的问题及未来发展趋势。

虾夷扇贝脂多糖诱导的肿瘤坏死因子LITAF基因的克隆及表达分析

脂多糖诱导的肿瘤坏死因子(Lipopolysaccharide-induced TNF-alpha factor,LITAF)是一类重要的炎症细胞因子,在先天性免疫系统中发挥重要的介质作用。文章根据虾夷扇贝LITAF基因EST序列,应用RACE技术克隆了虾夷扇贝LITAF全长cDNA,对序列及编码的氨基酸进行生物信息学分析。结果显示,该基因cDNA全长1 551 bp,其5′非编码区包含76 bp,3′非编码区包含1 001 bp;开放阅读框(ORF)为474 bp,编码157个氨基酸,氨基酸序列中存在一个保守的LITAF结构域;理论分子量16.99 kDa,等电点为6.24。LITAF基因序列为3 698 bp,由3个外显子和两个内含子组成。利用实时荧光定量PCR技术分析LITAF在虾夷扇贝不同组织、不同胚胎发育阶段以及鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激后各时间段的表达情况。结果表明:LITAF基因在所检测的6个成体组织中均有表达,其中肾脏的表达量最高;胚胎发育的7个时期中,担轮幼体时期表达量最高;菌刺激36 h实验组与对照组的表达量差异大。LITAF基因是LITAF家族的一员,推测LITAF基因参与虾夷扇贝的先天性免疫反应。

脂源性细胞因子Omentin-1、Chemerin对川崎病患儿冠状动脉损伤的预测价值

目的分析脂源性细胞因子血浆网膜素-1(Omentin-1)、趋化素(Chemerin)对川崎病患儿冠状动脉损伤的预测价值。方法选择2014年1月至2019年12月上海交通大学医学院附属第九人民医院收治的109例川崎病患儿为研究对象,根据是否合并冠状动脉损伤分为冠状动脉损伤组(25例)和非冠状动脉损伤组(84例),选择同期行健康体检的20名儿童作为健康对照组。比较各组的一般资料,采用多因素Logistic回归分析冠状动脉损伤的独立危险因素,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析脂源性细胞因子Omentin-1、Chemerin在冠状动脉损伤中的预测价值。结果冠状动脉损伤组、非冠状动脉损伤组患儿白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞百分比及Omentin-1、Chemerin水平均明显高于健康对照组[(16.24±2.31)×10^9/L、(15.76±2.40)×10^9/L比(8.57±1.26)×10^9/L,(384.5±87.3)×10^9/L、(369.8±91.4)×10^9/L比(287.2±48.8)×10^9/L,(0.87±0.11)、(0.84±0.10)比(0.55±0.08),(35.72±5.47)μg/L、(34.54±5.21)μg/L比(24.63±3.13)μg/L,(367.1±54.8)μg/L、(274.6±48.9)μg/L比(204.6±34.5)μg/L],且冠状动脉损伤组患儿Chemerin水平明显高于非冠状动脉损伤组[(367.1±54.8)μg/L比(274.6±48.9)μg/L](P <0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,脂源性细胞因子Chemerin是川崎病患儿冠状动脉损伤的独立危险因素(P <0.05)。脂源性细胞因子Omentin-1预测冠状动脉损伤的ROC曲线下面积(AUC)为0.624(95%CI 0.494~0.755),当临界值为28.4μg/L时,灵敏度为63.3%,特异度为58.5%;脂源性细胞因子Chemerin预测冠状动脉损伤的AUC为0.839(95%CI 0.748~0.930),当临界值为264.9μg/L时,灵敏度为91.8%,特异度为83.7%。结论脂源性细胞因子Chemerin可作为川崎病及其冠状动脉损伤的预测因子,对早期鉴别诊断以及冠状动脉损伤的治疗具有重要意义;而脂源性细胞因子Omentin-1在合并冠状动脉损伤的川崎病患儿中表达水平与非冠状动脉损伤患儿无明显差异。

鲎抗脂多糖因子的基因克隆及其在COS-7细胞中的表达

目的构建中国鲎的鲎抗脂多糖因子(LALF)基因序列的真核表达载体并尝试其在真核细胞COS-7中的表达。方法从鲎血细胞中提取mRNA,经RT-PCR扩增出LALF的基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)中进行酶切鉴定和序列测定,重组载体通过脂质体转染COS-7细胞进行表达,SDS-PAGE分析表达产物。结果酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有LALF的基因片段。经RT-PCR证实转染的COS-7细胞含有LALF的基因序列,经SDS-PAGE分析表明转染重组质粒的COS-7细胞表达融合蛋白。结论LALF真核表达载体构建成功并实现其在真核细胞COS-7中的表达,为进一步探讨rLALF的生物活性奠定了基础。

鲎抗脂多糖因子对晚期炎症因子高迁移率族蛋白-1体外效应的拮抗作用

目的观察鲎抗脂多糖因子(LALF)对小鼠巨噬细胞晚期炎症因子高迁移率族蛋白-1(HMGB1)功能的拮抗效应,探讨LALF对晚期内毒素血症动物的保护机制。方法用HMGB1刺激小鼠腹腔巨噬细胞,加入或不加LALF,迁移实验检测巨噬细胞趋化作用,ELISA检测培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。结果巨噬细胞迁移指数的增加呈HMGB1剂量依赖性,HMGB1刺激后巨噬细胞培养上清液TNF-α浓度显著增高。LALF与HMGB1预混合显著降低巨噬细胞的迁移指数和培养上清液TNF-α浓度。结论LALF可能通过抑制HMGB1而发挥其对晚期脓毒症动物的保护作用。