内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响

目的研究内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响。方法培养HPLFs细胞,将细胞分为LPS刺激0 mg/L(对照组)、1 mg/L(实验Ⅰ组)、10 mg/L(实验Ⅱ组),应用ELISA法检测IL-6、TNF-α因子的表达情况。结果 LPS刺激6 h时,HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示:Ⅰ、Ⅱ组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS刺激12 h时,HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示:Ⅰ、Ⅱ组也显著高于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。HPLFs细胞中TNF-α、IL-6的表达随LPS刺激浓度呈剂量依赖性;且对照组、及Ⅰ组、Ⅱ组经LPS刺激12 h的TNF-α、IL-6表达均显著高于刺激6 h,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论内毒素脂多糖(LPS)能够刺激人牙周膜成纤维细胞分泌TNF-α、IL-6炎症因子。

虾青素对脂多糖(LPS)诱导奶牛子宫内膜细胞凋亡的影响

子宫内膜炎是奶牛养殖业常见的一种繁殖疾病,目前主要利用抗生素进行治疗。本试验利用已成功构建的子宫内膜细胞炎症模型,研究添加1μmol/L虾青素对脂多糖(LPS)诱导奶牛子宫内膜细胞调亡的影响,处理24h后利用流式细胞仪检测细胞的凋亡比例,利用荧光定量RT-PCR和WesternBlot分别检测Bax、Bcl-2、Fas、Caspase8、Caspase3基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用酶标仪检测培养液中FasL含量。结果表明,脂多糖(LPS)作用子宫内膜细胞6h后,细胞凋亡比例显著增加(P<0.05);线粒体介导的促凋亡关键基因Bax表达升高(P<0.05),抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P<0.05);Fas/FasL信号通路的关键基因Fas、Caspase8表达升高(P<0.05),FasL蛋白水平也显著升高(P<0.05);凋亡执行效应酶Caspase3基因表达显著升高(P<0.05)。说明LPS从线粒体和Fas/FasL两条通路诱导子宫内膜细胞发生凋亡。加入1μmol/L虾青素培养细胞24h后,细胞凋亡比例显著下降(P<0.05);Bax、Fas、Caspase8和Caspase3表达水平均显著降低(P<0.05),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05),说明虾青素通过线粒体和Fas/FasL两条信号通路抑制LPS诱导的子宫内膜细胞凋亡。本试验可为奶牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论参考。

异丙酚预处理对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMVCs)血管紧张素转化酶(ACE)的表达与活性的影响

目的在脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）诱导的人肺微血管内皮细胞（human pulmonary microvascular endothelial cells，，HPMVCs）损伤模型中，观察异丙酚预处理对血管紧张素转化酶（ angiotensin-converting enzyme，ACE）的影响，探讨异丙酚肺保护作用的可能机制。方法以体外培养的HPMVCs 3～5代作为实验对象，将细胞随机分为4组（n=8）：对照组（C组）、异丙酚组（P组）、LPS组（L组）和异丙酚预处理组（P＋L组）。药物终浓度：LPS5μg／mL，异丙酚50μmol／L。按上述分组，加入LPS前1h加入异丙酚。于37℃、5％CO2培养箱中进行培养。分别培养12、24、48、72h后采用CCK-8（Cell Counting Kiv-8）法测细胞活力。细胞孵育12h后，采用改良分光光度法检测各组培养液和细胞中的ACE活性，real-timePCR检测ACE、TNF-α、IL-1β和MCP-1mRNA表达水平，同时ELISA测定细胞培养液中TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量。结果（1）各组细胞在72h内的细胞活力无显著差异（P〉0．05）；（2）与C组相比，P组各检测指标均无显著差异（P〉0．05）；（3）与c组相比，L组TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量及其基因表达水平均显著升高，分泌型ACE活性增加，细胞ACE活性降低，ACEmRNA表达下调（P〈0．05）；（4）与L组相比，P＋L组分泌的TNF-α、IL-1β和MCP-1及其mRNA表达显著降低，细胞ACE活性增加，ACEmRNA表达上调（P〈0．05），分泌型ACE活性不变（P〉0．05）。结论异丙酚在转录水平调节HPMVCs中ACE的表达，可能是异丙酚保护HPMVCs的作用机制之一。

脂多糖(LPS)对小鼠Raw 264.7细胞Irak1bp1表达的影响

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠Raw264.7细胞IL-1受体相关激酶1结合蛋白1(IL-1 receptor associated kinase 1 binding protein1,Irak1bp1)的表达情况。方法体外培养的小鼠Raw264.7细胞随机分为2组:A组为正常对照组,B组为LPS刺激组。LPS刺激小鼠Raw264.7细胞6h后收集细胞及上清液。采用实时荧光定量PCR法检测IL-6及Irak1bp1mRNA水平;采用ELISA分析培养上清液中IL-6含量;采用Western blot方法检测Irak1bp1蛋白质水平。结果LPS刺激组炎症因子IL-6mRNA及蛋白质水平较对照组明显增高(P<0.01),Irak1bp1mRNA及总蛋白质水平高于对照组(P<0.05);胞质内Irak1bp1蛋白质水平与对照组相比无明显变化,而胞核内Irak1bp1蛋白质水平较正常对照组增加(P<0.01)。结论LPS能够诱导Raw264.7细胞核内Irak1bp1表达,且该分子的表达上调可能与细胞的炎性因子释放相关。

饲粮添加L-谷氨酰胺对脂多糖刺激肉鸡血浆生化指标、免疫性能、肠道炎症因子表达及黏膜免疫的影响

本试验旨在研究饲粮添加L-谷氨酰胺(L-Gln)对脂多糖(LPS)刺激肉鸡血浆生化指标、免疫性能、肠道炎症因子表达及黏膜免疫的影响。选择健康状况良好、体重相近的1日龄爱拔益加(AA)肉鸡120只,按2×2试验设计,随机分为4个组(A、B、C及D组),每组5个重复,每个重复6只鸡。A、C组饲喂对照饲粮(基础饲粮中添加1.22%L-丙氨酸),B、D组饲喂L-Gln饲粮(基础饲粮中添加1%L-Gln)。第16天及第21天,B、 D组肉鸡分别腹腔注射LPS(500μg/kg BW),A、C组肉鸡腹腔注射等量的生理盐水,注射前12 h停料不停水。试验期21 d。结果表明:1)LPS刺激显著增加了肉鸡血浆中总蛋白(TP)、尿酸(UA)含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性(P<0.05),显著降低了胸腺指数、脾脏指数及法氏囊指数(P<0.05),显著降低了十二指肠相对长度、十二指肠相对重量,空肠相对长度、空肠相对重量、回肠相对长度及回肠相对重量(P<0.05),显著增加了十二指肠、空肠及回肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达水平(P<0.05),显著增加了空肠黏膜分泌型免疫球蛋白A含量(P<0.05),显著增加了空肠黏膜黏蛋白1(MUC1)及黏蛋白2(MUC2)mRNA表达水平(P<0.05)。2)饲粮添加L-Gln显著降低了肉鸡TP、UA含量及ALT、AST活性(P<0.05),显著增加了胸腺指数、脾脏指数及法氏囊指数(P<0.05),显著增加了十二指肠相对长度、十二指肠相对重量,空肠相对长度、空肠相对重量、回肠相对长度及回肠相对重量(P<0.05),显著降低了十二指肠TNF-α及IL-6 mRNA表达水平(P<0.05),显著降低了空肠及回肠TNF-α、IL-1βmRNA表达水平(P <0. 05),显著增加了空肠黏膜sIgA含量(P<0.05),显著降低了空肠黏膜MUC1及MUC2 mRNA表达水平(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加1%L-Gln能够提高肉鸡免疫性能,增加肠道黏膜免疫机能,从而在一定程度上有效缓解LPS刺激引起的肉鸡肠道炎症反应。

脂多糖慢性炎症刺激对大鼠动脉粥样硬化模型的影响

目的：探讨脂多糖反复肌肉注射诱导慢性炎症刺激对大鼠AS模型形成的影响及其可能的机制。方法：根据处理因素将32只SPF级体质量180～220g雄性大鼠不同分为4个组：空白对照组（普通饮食）、模型组（高脂饮食＋腹腔注射维生素D3）、低剂量干预组（模型组造模基础上＋低剂量脂多糖注射）、高剂量干预组（模型组造模基础上＋高剂量脂多糖注射）。在第10周实验结束后检测血清炎症因子TNF-α、IL-6水平；血脂CHOL、TG、HDL—C、LDL—C水平；胸主动脉标本组织行HE染色并在光镜下进行病理形态学观察及积分评价。结果：干预组以及模型组较空白对照组血清CHOL、TG、LDL—C水平明显升高（P〈0．05），高剂量组与模型组相比，血清cHOL、LDL—C、TG水平明显升高（P〈0．05）；干预组以及模型组较空白对照血清TNF-α、IL-6水平明显升高（P〈0．05），以高剂量组TNF-α、IL-6水平最高（P〈0．05）；主动脉HE染色及积分，模型组以及干预组主动脉组织均可见明显动脉粥样硬化病理学改变，高剂量组干预组在积分及形态学改变均优于模型组（P〈0．05）。结论：脂多糖可通过诱导慢性炎症反应及血脂代谢紊乱从而促进AS进程。

外源核苷酸对脂多糖刺激小鼠的保护作用及其机制研究

目的:研究外源核苷酸对脂多糖(LPS)刺激小鼠的保护作用,并探讨其可能机制。方法:采用刚断奶的昆明种仔鼠40只,按体重随机分成五组:对照组、核苷酸(NT)组(4h、18h)、无核苷酸(NF)组(4h、18h),对照组和NF组饲喂无核苷酸半纯合基础日粮;NT组饲喂含0.25%核苷酸混合物的日粮,在实验的D15,NT组和NF组灌胃LPS,对照组灌胃同等剂量的无菌生理盐水,在灌胃后的4h、18h,收集血清,无菌取肝、小肠、腹腔巨噬细胞待测。结果:日粮中添加核苷酸能显著升高LPS刺激小鼠肝Na+K+-ATP酶、小肠超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清总抗氧化能力(T-AOC)和腹腔巨噬细胞分泌的抗炎性细胞因子白介素10(IL-10)的水平,降低小肠丙二醛(MDA)含量、血清谷丙转氨酶(AIL)、小肠髓过氧化物酶(MPO)活性和腹腔巨噬细胞分泌的炎性细胞因子白介素1(IL-1)的水平。结论:小鼠在受到LPS刺激时,在无核苷酸日粮中添加核苷酸有助于维持机体氧化/抗氧化、炎症/抗炎症平衡,保护机体免受损伤。

成团泛菌低分子脂多糖的急性毒性、刺激性、致敏性及遗传毒性评估

本研究对成团泛菌低分子脂多糖(Pantoea agglomerans lipopolysaccharide,LPSp)的安全性进行初步评估。本研究采用一次限量法,用昆明种小鼠进行LPSp急性经口毒性试验,了解LPSp的急性毒性;采用新西兰兔分别进行LPSp急性和多次皮肤刺激性试验以及急性眼刺激性试验,了解LPSp的皮肤和粘膜刺激性;采用豚鼠进行LPSp皮肤变态反应试验,了解LPSp的致敏性;应用平板掺入法进行鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验和小鼠骨髓细胞微核试验考察LPSp的遗传危害。急性毒性试验结果显示,LPSp对小鼠经口一次灌胃的LD50大于5000mg/kg体重,属实际无毒级别;LPSp急性和多次皮肤刺激性试验以及急性眼刺激性试验结果显示,皮肤刺激和眼刺激积分均为0分,LPSp对皮肤无刺激性、对眼睛无急性刺激性;在皮肤变态反应试验中,LPSp在各观察时间点的皮肤变态反应积分均为0分,其致敏率均为0%,说明LPSp对豚鼠无致敏性;LPSp的鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验结果呈阴性(P>0.05);LPSp的小鼠骨髓细胞微核试验结果亦呈阴性,LPSp各剂量组的微核发生率与阴性对照组未见统计学差异(P>0.05),而与阳性对照组有明显差异(P<0.01)。本研究结果表明,在本实验剂量范围内,LPSp对小鼠经口毒性极低,属实际无毒级别,对家兔皮肤和眼睛无明显刺激性,对豚鼠无致敏性,对所试菌株和小鼠体细胞无诱变性和致突变性。

人脐静脉内皮细胞脂多糖刺激后上调基因表达谱的分析

目的 对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)受脂多糖 (LPS)刺激后上调基因表达谱进行筛选及分析。方法 以受LPS刺激HUVCE为实验方 ,未刺激HUVEC为驱使方 ,进行抑制消减杂交 (SSH)建立消减cDNA文库 ,经菌落原位斑点杂交筛选文库后将阳性克隆测序和同源性分析 ,并用RT PCR验证新的cDNA序列。结果 共获得 2 5条上调表达的基因 ,分别与炎症反应、细胞骨架重构、细胞生长和凋亡、胞内信号转导相关 ,并克隆到 3条新基因表达序列标签 (EST) ,RT PCR验证了这些新EST序列只在LPS刺激的内皮细胞中表达。结论 抑制消减杂交有效地克隆了人脐静脉内皮细胞LPS刺激后上调表达基因 。

PaCLR介导PaLECT2激活脂多糖刺激的香鱼(Plecoglossus altivelis)单核巨噬细胞功能

香鱼(Plecoglossus altivelis)白细胞衍生趋化因子2(leukocyte cell-derived chemotaxin 2,PaLECT2)可以激活香鱼头肾来源的单核巨噬细胞(monocytes/macrophages,MO/MΦ),提高细菌感染后香鱼存活率。进一步研究显示,PaLECT2与香鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,PaCLR)相互作用可激活静息状态下香鱼MO/MΦ,增强其免疫活性。在前期基础上,本研究通过抗体封闭实验检测PaCLR是否介导PaLECT2激活LPS刺激的MO/MΦ功能。结果显示,重组PaLECT2成熟肽(rPaLECT2m)显著提高了LPS刺激的香鱼MO/MΦ细胞因子的表达,并增强了其吞噬能力和杀菌活性。封闭PaCLR显著抑制了rPaLECT2m激活LPS刺激的香鱼MO/MΦ细胞因子表达、吞噬和杀菌功能。因此,PaCLR介导PaLECT2可以激活病理状态香鱼MO/MΦ。这一认识进一步揭示了LECT2在病理状态的鱼类巨噬细胞调控和炎症反应中的作用及机制。

大鼠内毒素脂多糖刺激性牙髓炎中免疫反应细胞的动态变化

目的 研究牙髓在内毒素脂多糖刺激过程中的防御反应机制。方法 通过已建立的大鼠内毒素脂 多糖刺激性牙髓炎模型,利用3种单克隆抗体(ED1、ED2、OX6)和免疫组化手段,观察内毒素脂多糖感染性牙髓中 巨噬细胞、Ia抗原表达细胞的动态变化。结果 牙髓中组织细胞(ED2+细胞)在早期感受内毒素脂多糖(LPS)入 侵的同时,与Ia抗原表达细胞(OX6+细胞)和来自于血中的巨噬细胞一起参与了抵抗外来抗原刺激的防御反应。 Ia抗原表达细胞在LPS刺激后3d增加至最多,以后逐渐下降。以来源于血中的巨噬细胞为主的ED1+细胞,在整 个炎症过程中均可见大量浸润,细胞体积由小变大,形态由纺锤形,树枝状等变成圆形或椭圆形。结论 内毒素脂 多糖入侵牙髓后,牙髓中的组织细胞动员Ia抗原表达细胞和巨噬细胞,开展以非特异性免疫为基础的抗原特异性 免疫反应。

pGRF基因质粒对受脂多糖刺激的断奶仔猪生长性能的影响

研究pGRF基因质粒对受脂多糖刺激的断奶仔猪生长性能的影响。结果表明:(1)pGRF+LPS组生长性能显著优于LPS组(P<0.05);但劣于pGRF组(P<0.01)。全期料重比,pGRF+LPS组与LPS组相比差异不显著(P>0.05),有下降趋势;但均显著高于pGRF组(P<0.05)。(2)pGRF+LPS组仔猪的腹泻率较LPS组下降了10.32%(P<0.05),而显著高于pGRF组(P<0.05)。

仿刺参甘露聚糖结合凝集素基因对脂多糖刺激的免疫应答

甘露聚糖结合凝集素是天然免疫系统中重要的模式识别分子。分析了仿刺参甘露聚糖结合凝集素在仿刺参不同组织及脂多糖刺激前后的表达规律,结果显示仿刺参甘露聚糖结合凝集素mRNA在仿刺参的肠道、呼吸树、体腔细胞和体壁均有组成型表达,且体壁的表达量最高;细菌脂多糖刺激后,4个组织的仿刺参甘露聚糖结合凝集素表达量均得到上调,且以肠道和体腔细胞表达量的变化最为显著;另外,肠道、体腔细胞、体壁中仿刺参甘露聚糖结合凝集素表达量峰值的出现具有明显的时序性,而呼吸树自刺激后6h直至取样结束,其表达量呈稳步上升趋势。

血浆脂多糖结合蛋白联合粒细胞集落刺激因子检测对胎膜早破孕妇的诊断价值

目的探讨血浆脂多糖结合蛋白(LBP)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)检测对胎膜早破孕妇的诊断价值。方法回顾性分析2018年5月—2019年5月该院收治的42例胎膜早破孕妇临床资料作为观察组,另选择同期正常足月妊娠并成功分娩的孕产妇38名作为对照组。检测并比较两组孕产妇的血浆脂多糖结合蛋白与粒细胞集落刺激因子表达,并通过ROC曲线图确定LBP及G-CSF对胎盘早破的预测价值。结果观察组孕妇的血清LBP (115.16±22.93)ng/mL及G-CSF (104.31±34.13)pg/mL水平均高于对照组(66.48±12.08)ng/mL、(80.42±22.07)pg/mL,差异有统计学意义(t=13.427、4.188,P<0.05);通过绘制ROC曲线图发现,LBP及G-CSF在预测胎盘早破的曲线下面积(AUC)为:LBP=0.854[95%CI(0.753~0.955)],GCSF=0.894[95%CI(0.816~0.972)]。结论血浆脂多糖结合蛋白联合粒细胞集落刺激因子可作为胎膜早破孕妇的预测指标,对胎盘早破孕妇的早期诊断及预后判断均具有较高的价值。

脂多糖体外刺激对小鼠B10细胞的影响

目的:探索脂多糖(LPS)体外刺激对小鼠B10细胞的影响。方法:在LPS刺激下,体外培养小鼠脾脏和腹腔细胞5h或48h,流式细胞仪分析CD19+IL-10+B细胞比例。结果:PIM刺激5h,小鼠脾脏和腹腔CD19+IL-10+B细胞比例分别升高至1.22%和14.82%(P<0.01),在PIM刺激的基础上加入LPS,小鼠脾脏和腹腔中CD19+IL-10+B细胞比例分别升高至平均2.35%和26.58%(P<0.01)。LPS刺激48h可进一步升高CD19+IL-10+B细胞比例,脾脏和腹腔分别为6.42%和38.38%,明显高于PIM48h刺激组(P<0.01)和L+PIM5h刺激组(P<0.05),但LPS刺激48h不改变CD5、CD1d的表达水平。结论:体外刺激5h时,L+PIM刺激可促进小鼠B10细胞活化;刺激48h时,LPS可进一步促进B10细胞IL-10的表达,这一作用可能是通过诱导B10前体细胞成熟实现的。

枸杞多糖通过抑制TLR4/NF-κB信号通路促进LPS诱导的BV2小胶质细胞M2型极化

目的探讨枸杞多糖(LBP)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞由M1型向M2型极化的作用及其机制。方法实验分为对照组、LPS组、(0.6、0.9、1.2)g/L LBP处理组。噻唑蓝(MTT)法检测LBP对BV2细胞活性的影响,Griess法检测细胞一氧化氮(NO)释放量,ELISA检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的分泌,免疫荧光细胞化学染色法检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)的表达,Western blot法检测钙离子结合接头蛋白分子1(Iba-1)、TLR4、NF-κB、iNOS和Arg1的蛋白水平。结果不同剂量LBP处理后,细胞存活率无明显变化。与正常组相比,LPS组小胶质细胞活化明显,呈阿米巴样,NO释放量增加;Iba-1、TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量增加,Arg1和IL-10含量降低。LBP组Iba-1、TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量降低,与剂量呈负相关,Arg1和IL-10含量增加,与剂量呈正相关。结论LBP可能通过阻断TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞活化并促进激活的BV2细胞由M1型向M2型极化。