莲心总碱对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的缓解作用

目的:观察莲心总碱(total alkaloids from the seed embryo of Nelumbo nucifera,TAENN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,Gal N)诱导急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响。方法:将昆明小鼠40只随机分为4组(正常对照组、模型组和TAENN高、低剂量组),每组10只。TAENN高、低剂量组的给药剂量分别为100、30 mg/kg,给药途径为灌胃,每日给药1次。正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。给药结束后,模型组和TAENN高、低剂量组小鼠腹腔注射LPS/Gal N建立小鼠急性肝衰竭模型。用酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和前列腺素E2(prostaglandine E2,PGE2)水平。用Griess法检测肝组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。用实时聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA的表达水平。用免疫印迹法检测小鼠肝组织中iNOS、COX-2蛋白表达和核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)p65亚基磷酸化水平。结果:与模型组相比,TAENN组小鼠血清与肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低(P<0.01)。肝脏中炎症介质NO和PGE2水平亦有极显著下降(P<0.01)。经TAENN处理后,模型小鼠肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6、i NOS、COX-2等的m RNA表达水平明显下降(P<0.01)。此外,iNOS和COX-2的蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p65蛋白本身的表达水平不变,但其536位丝氨酸的磷酸化水平亦极显著下降(P<0.01)。结论:TAENN对LPS/Gal N诱导小鼠急性肝衰竭相关的炎症反应具有明显的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路并减少炎症因子和炎症介质相关基因的表达有关。

姜黄素对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝损伤中内质网应激的影响

目的探讨姜黄素预给药对脂多糖/D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导大鼠急性肝损伤中内质网应激(ERS)的影响。方法30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、肝损组、姜黄素组,每组10只。在造模前5 d,姜黄素组按5 ml/kg灌饲姜黄素溶液(姜黄素溶于0.5%羧甲基纤维素钠中),正常对照组、肝损组按5 ml/kg灌饲0.5%羧甲基纤维素钠溶液,1次/d,连续5 d。肝损组、姜黄素组采取腹腔注射含脂多糖(8μg/kg)+D-GalN(800 mg/kg)的0.9%氯化钠注射液800μl制作急性肝损伤动物模型,正常对照组大鼠腹腔注射800μl 0.9%氯化钠注射液;模型建立12 h后处死大鼠并收集血清及肝组织,检测并比较3组大鼠血清肝功能指标、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,HE染色观察肝组织病理学变化,TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况,Western blot法检测肝组织内ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达量。结果正常对照组大鼠肝组织未见明显病变;肝损组大鼠部分肝细胞坏死,坏死的肝细胞核碎裂、胞质深染,坏死区可见较多炎细胞浸润;姜黄素组大鼠肝组织内坏死细胞较肝损组明显减少。与正常对照组比较,肝损组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,GRP78、CHOP蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05),SOD水平明显降低(P<0.05);姜黄素组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,CHOP蛋白表达水平也明显升高(均P<0.05),SOD水平、GRP78蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。与肝损组比较,姜黄素组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,GRP78、CHOP蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05),SOD水平明显升高(P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制ERS反应对脂多糖/D-GalN诱导大鼠的急性肝损伤起保护作用。

硒化刺五加多糖对D-半乳糖诱导小鼠氧化损伤的保护作用

为了研究硒化刺五加多糖(Se-ASPS)对D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠氧化损伤的保护作用。采用D-gal腹腔注射建立小鼠氧化损伤模型,高、中、低剂量组分别添加硒化刺五加多糖200、100、50 mg/kg·bw,小鼠连续灌胃28 d。比较各组小鼠的体重和采食量变化及脏器指数,采用HE染色观察小鼠肝脏病变。使用试剂盒分析血清、心、肝、脾和肾组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷草转氨酶(Glutamine Transferase,AST)和谷丙转氨酶(Alglutamine Transferase,ALT)的含量。与D-gal模型组相比,硒化刺五加多糖组均能显著提高小鼠体重(P<0.05),且硒化刺五加多糖高剂量组能显著提高小鼠脏器指数(P<0.05);HE染色发现,硒化刺五加多糖能修复D-半乳糖对小鼠肝脏组织造成的损伤;硒化刺五加多糖高剂量组可显著提高小鼠血清、心、肝、脾、肾组织中SOD、GSH-Px、CAT酶的活性(P<0.05),并显著降低MDA、AST、ALT含量(P<0.05),且高剂量组表现最突出(P<0.01)。Se-ASPS能够明显地保护机体对抗D-gal带来的氧化损伤。

桑葚中性多糖结构及其对D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用

目的探究桑葚中性多糖的结构特征及其对D-半乳糖致衰老小鼠的保护作用。方法采用水提醇沉法提取桑葚多糖,DEAE-纤维素柱和Sepharose CL-6B色谱柱纯化,获得中性多糖。采用高效液相色谱(HPLC)和红外光谱(FT-IR)法对中性多糖的分子质量、单糖组成及特征官能团进行分析。通过腹腔注射D-半乳糖建立过氧化损伤小鼠模型,灌胃给予中性多糖(50、100、200 mg/kg),检测小鼠血清和肝组织SOD、T-AOC、CAT、GSH-Px活性及MDA水平。结果桑葚中性多糖纯度为76.18%,分子量为1.068×10^(4)Da,主要由葡萄糖(76.9%)、半乳糖(6.0%)、阿拉伯糖(17.1%)组成,可提高小鼠血清和肝组织SOD、GSH-Px、CAT、T-AOC酶活性,减少MDA水平。结论桑葚中性多糖能有效改善D-半乳糖诱导的氧化损伤,从而起到抗衰老作用。

金线莲多糖体外抗氧化活性及其对D-半乳糖诱导肝脏损伤小鼠的保护作用

目的评价金线莲多糖(ARP)及其近缘品台湾银线兰多糖(AFP)、血叶兰多糖(LDP)的体外抗氧化活性,初步探讨金线莲多糖对D-半乳糖诱导肝脏损伤小鼠的保护作用。方法①体外实验:以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和超氧阴离子(•O^(2-))自由基清除率为指标,以抗环血酸(VC)为阳性对照,评价ARP、AFP、LDP的体外抗氧化活性。②体内实验:将60只ICR雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、低剂量组、中剂量组和高剂量组各10只。除正常组外其余5组每日按200 mg/kg颈背部皮下注射D-半乳糖溶液,正常组每日颈背部皮下注射同剂量生理盐水;阳性组按100 mg/(kg∙d)予维生素C药液灌胃,低、中、高剂量组分别按250、500、1000 mg/(kg∙d)予金线莲多糖药液灌胃,正常组及模型组按20 mL/(kg∙d)予生理盐水灌胃,连续干预42 d。ELISA测定小鼠肝组织丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果①体外实验:与VC比较,除3.0 mg/mL ARP外,各浓度ARP、AFP、LDP DPPH、ABTS、•O^(2-)自由基清除率均明显降低(P<0.05);与ARP比较,除0.5 mg/mL AFP外,各浓度AFP、LDP DPPH、ABTS、•O^(2-)自由基清除率均明显降低(P<0.05)。②体内实验:与正常组比较,模型组ALT、AST、MDA含量均明显升高(P<0.05),GSH-Px、T-SOD含量均明显降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组ALT、AST、MDA含量均明显降低(P<0.05),GSH-Px、T-SOD含量均明显升高(P<0.05)。结论ARP体外抗氧化活性优于AFP和LDP,且ARP能通过调节肝脏氧化应激水平缓解D-半乳糖诱导氧化应激小鼠的肝脏氧化损伤。

莼菜多糖对D-半乳糖致衰老模型大鼠抗氧化作用研究

目的:本研究选用D-半乳糖所致的衰老大鼠为试验对象,研究莼菜多糖是否具备体内抗氧化的效果。方法:采用D-半乳糖致衰老法对健康大鼠造模,分组给药,给药期结束后分别取大鼠血清、肝脏、大脑样本组织液,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD水平,用5,5-双硫代对硝基苯甲酸(DTNB)显色法检测GSH-Px水平,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA水平。结果:跟模型组相比,莼菜多糖能明显提升各组衰老大鼠血清、肝脏、大脑中SOD水平和GSH-Px水平,能明显降低MDA水平(P<0.01或P<0.05)。其中,莼菜黏液多糖的效果尤为明显。结论:莼菜多糖能在一定程度上提高机体的抗氧化能力。

狗肝菜多糖减轻D-氨基半乳糖与脂多糖诱导的大鼠急性肝损伤

目的:观察壮药狗肝菜多糖对D-氨基半乳糖(D-GalN)及脂多糖(LPS)所致大鼠急性重症肝炎的影响。方法:将48只雄性Wistar大鼠随机分成模型、狗肝菜多糖高、低剂量和对照组;狗肝菜多糖高剂量组(300mg·kg-1)、低剂量组(150mg·kg-1)在造模前灌胃给药6d,其它各组用生理盐水对照;末次给药后1h除对照组外均在腹腔内注射D-GalN(500mg.kg-1)和LPS(20μg/kg)建立大鼠急性重症肝炎模型,对照组用生理盐水对照。于6h、12h分别观察并计算各组动物死亡率;存活动物于6h行眶后静脉窦采血用于检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β);12h摘除眼球采血用于检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β和一氧化氮(NO);分光光度法检测血清ALT、AST、NO含量,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β水平。12h后全部处死存活动物,肝组织切片观察肝脏病理形态学变化。结果:6h各组动物均存活;与模型组相比,狗肝菜处理组12h死亡率明显低于模型组。模型组血清ALT、AST活力和TNF-α、IL-1β、NO水平均升高,狗肝菜多糖高、低剂量组血清指标均明显低于模型组。模型肝组织大片坏死、淤血,狗肝菜多糖高、低剂量组组织损伤程度明显降低,以高剂量组效果最佳。结论:狗肝菜多糖能减轻D-GalN/LPS诱导的肝损伤,可能通过降低炎性介质TNF-α、IL-1β和NO的水平发挥作用。

石见穿多糖对脂多糖和D-氨基半乳糖胺联合诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的研究石见穿多糖(PSSC)对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖胺(Ga IN)诱导小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及可能机制。方法将昆明小鼠随机分为正常组、模型组、PSSC 30和100 mg·kg^(-1)给药组。给药组每日1次,连续给药1周。给药结束后,除正常组外,其余各组ip给予LPS 10μg·kg^(-1)和Gal N700 mg·kg^(-1),制备小鼠ALF模型。HE染色法检测肝组织病理变化;用试剂盒法检测血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)及肝过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平;DCFH-DA荧光探针法检测肝组织活性氧(ROS)的相对含量;ELISA法测定血清及肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL^(-1)β)和IL-6的含量;胱天蛋白酶3活性测试试剂盒检测小鼠肝组织匀浆中胱天蛋白酶3的活性。结果与正常对照组相比,模型组小鼠肝细胞排列杂乱,胞质皱缩,细胞边界模糊,可见较大量的炎症细胞浸润和明显的肝组织内出血,病理评分明显升高(P<0.01);MDA和ROS含量分别升高至正常对照组的2.2倍和4.3倍(P<0.01),GSH含量下降至51%(P<0.01),抗氧化酶SOD,CAT和GSH-Px的活性分别降低至74%,36%和42%(P<0.01),TNF-α,IL^(-1)β和IL-6的水平有明显提高(P<0.01),胱天蛋白酶3活性升高至正常对照组的5.3倍(P<0.01)。与模型组相比,PSSC组小鼠存活比例明显升高(P<0.01);小鼠肝组织病理评分降低(P<0.01);MDA和ROS含量升高(P<0.01),GSH含量下降(P<0.01);TNF-α,IL^(-1)β和IL-6的含量降低(P<0.01);胱天蛋白酶3活性降低(P<0.01)。结论 PSSC对LPS和Gal N联合诱导的小鼠ALF具有良好的缓解作用,该作用可能与降低肝氧化应激、抑制肝炎症反应和细胞凋亡相关。

D-氨基半乳糖/脂多糖诱导急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的电镜观察

目的通过透射电镜观察急性肝衰竭大鼠肝脏超微结构,以了解肝细胞凋亡的形态学变化。方法给予雌性Wistar大鼠D-氨基半乳糖/脂多糖联合腹腔注射,计算其死亡率及生存时间,动态观察给药后4、8、12小时肝功能和组织病理学变化,并以TUNEL法检测和电镜观察原位细胞凋亡。结果实验组80%大鼠死于急性肝衰竭,平均生存时间为15.6±1.8小时。给药后4小时电镜观察,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞浆包含体形成,部分细胞核呈早期凋亡表现,细胞内凋亡小体形成;8小时时,肝细胞凋亡明显增多并呈不同阶段表现,凋亡肝细胞内线粒体病变程度不一;TUNEL检测给药后8小时肝细胞,凋亡指数达高峰,与电镜观察结果一致。结论肝细胞凋亡为D-氨基半乳糖/脂多糖致急性肝衰竭大鼠肝细胞的主要病理形态学表现,这可能为该类型肝衰竭的主要病理学变化基础。

D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠慢性肝损伤模型的建立

目的研究D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠慢性肝损伤模型建立的方法。方法 30 mg/mLD-氨基半乳糖和2μg/mL脂多糖混合溶液,腹腔注射,每2天1次,连续8周。监测小鼠饮食和体重变化;取血测定小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;取肝组织,HE和Masson染色,观察小鼠肝组织结构、细胞形态及纤维化程度。结果模型组ALT水平升高,肝细胞变性、坏死等病变,组织纤维化明显增生。结论 D-氨基半乳糖联合脂多糖可诱导小鼠的慢性肝损伤模型。

抑制糖原合成酶激酶-3β活性减少肝细胞凋亡保护D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭损伤

目的研究细胞信号分子糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)对D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)联合诱导的小鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡的影响。方法腹腔注射D-GalN/LPS建立小鼠急性肝衰竭模型。实验动物分为对照组、模型组、SB216763干预组(建模前2 h腹腔注射)。检测血清ALT、AST,TUNEL法测定肝细胞凋亡,免疫荧光染色法及比色法检测Caspase-3活性,Western印迹检测Cleaved Caspase-3蛋白表达。多组样本均数的两两比较采用一步法ANOVA分析。结果 GSK-3β活性升高促进了在小鼠急性肝衰竭的发生和发展:抑制GSK-3β活性可以显著改善肝脏功能,血清ALT、AST水平明显下降。SB216763干预组ALT与AST水平分别为(961.1±356.0)IU/L和(2 709.9±423.9)IU/L,SB216763干预组与模型组相比,Caspase-3活性降低,TUNEL方法检测肝细胞凋亡减少,并且Cleaved Caspase-3的蛋白表达降低。结论在D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭中,抑制GSK-3β活性可能通过抑制肝细胞凋亡而改善肝损伤。因此,对信号分子GSK-3β活性进行干预有可能为急性肝衰竭的治疗提供一个新的靶点。

丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的大鼠急性肝损伤保护作用机制研究

目的探讨丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖(D-GaIN)/脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其可能的作用机制。方法将110只SD大鼠随机分为对照组、模型组、小剂量、中剂量和大剂量丹栀逍遥散干预组,每组22只。采用D-GaIN)/LPS腹腔注射建立ALI模型,分别给予生理盐水或药物灌胃干预。采用ELISA法检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)、白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用放射免疫分析法检测血清透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原(Ⅲ-PC)水平。结果模型组血清AST、ALT、TBIL和MDA水平分别为(12081.3±587.7)U/L、(7658.7±742.2)U/L、(104.3±10.3)μmol/L和(8.9±1.1)mmol/mL,显著高于对照组【分别为(171.9±17.2)U/L、(60.5±6.2)U/L、(2.4±0.2)μmol/L和(2.5±0.3)mmol/mL,P<0.05】;模型组血清SOD和GSH-PX水平分别为(14.3±1.7)U/mL和(7.1±0.7)μmol/L,显著低于对照组【分别为(38.6±4.4)U/mL和(21.9±2.2)μmol/L】,而各剂量药物干预组血清SOD和GSH-PX水平显著高于模型组(P<0.05);模型组血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平分别为(194.3±20.5)ng/mL、(24.7±2.5)ng/ml和(864.5±87.3)ng/mL,显著高于对照组【分别为(90.1±10.3)ng/mL、(5.2±1.0)ng/mL和(30.2±4.1)ng/mL】,而各剂量药物干预组血清细胞因子水平显著低于模型组(P<0.05);模型组血清HA、LN、Ⅲ-PC分别为(286.3±29.1)ng/ml、(297.4±30.5)ng/ml、(257.1±26.7)ng/ml,显著高于对照组【分别为(55.1±6.2)ng/mL、(75.1±7.6)ng/mL、(61.9±6.2)ng/mL】,而各剂量药物干预组血清肝纤维化指标水平显著低于模型组(P<0.05)。结论丹栀逍遥散对D-GaIN/LPS诱导的ALI大鼠肝功能损伤有保护作用,可能与其可明显抑制机体氧化应激反应和炎症反应有关。

束缚应激对D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的探讨束缚应激对D-氨基半乳糖联合脂多糖(D–galactosamine and lipopolysaccharide combination,D+L)诱导的小鼠肝损伤的保护作用。方法正常BALB/c小鼠随机分为正常对照组(con)、应激对照组(str)、模型组(D+L)、束缚应激组(D+L+str)。con组小鼠常规饲养;str组小鼠给予定时定量的束缚应激;D+L组小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖和脂多糖的混合溶液,1次/2天;D+L+str组小鼠腹腔注射等量D+L混合液后,给予与str组相同的束缚应激。第8周,各组小鼠取血检测血清AST、ALT,肝脏固定后HE及Masson染色观察小鼠肝脏结构、细胞形态及纤维化程度。结果第8周D+L+str组与D+L组小鼠相比,血清ALT和AST显著降低(P<0.01),AST/ALT显著增高(P<0.01);HE及Masson染色显示,D+L组小鼠肝小叶结构紊乱,出现结节性增生及大量上皮细胞核浓缩、溶解、坏死,枯否氏细胞浸润,而D+L+str组未见明显病理变化;纤维化程度评分显示,D+L+str组与D+L组小鼠相比,病理评分与纤维显色吸光度值均显著降低(P<0.05)。结论束缚应激对D+L诱导的小鼠肝损伤具有一定保护作用。

人血白蛋白及D-氨基半乳糖／脂多糖联合诱导建立大鼠慢加急性肝衰竭模型

慢加急性肝衰竭（Acute—on—chronic liver failure，ACLF）至今国内外尚无统一定义。国外部分学者把将其描述为既往有相对功能稳定的慢性肝病基础，由脓毒症、静脉曲张破裂出血、重叠嗜肝病毒感染、酒精或药物等毒物损伤等因素诱发的在2～4周内出现肝脏功能急性失代偿。我国由中华医学会肝病学会重型肝病与人工肝学组、

D-氨基半乳糖与脂多糖对小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

目的观察部分肝切除联合D-氨基半乳糖(D-GaIN)、脂多糖对肝损伤后再生修复的影响。方法 40只BALB/c雄性小鼠随机均分为2组。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组:腹腔注射D-GaIN(500 mg/kg),1 h后注射脂多糖(50μg/kg);肝脏部分切除组:生理盐水代替D-GaIN和脂多糖,同样方法注射;两组小鼠在第2次腹腔注射24 h后行肝脏1/3切除。观察两组小鼠术后肝脏体质量比值、肝再生率、肝细胞损伤、增殖与肝卵圆干细胞增生。结果肝脏部分切除组术后第9天肝大体结构基本恢复正常,肝再生率为(22.26±105.93)%,而D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组第14天肝质量较术前仍偏小,肝再生率为(9.49±32.55)%,P<0.001。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组术后肝窦和中央静脉充血,库普弗细胞增多;肝脏部分切除组术后第7天有明显肝细胞增殖,D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝细胞增殖甚少。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝脏术后第3天开始出现肝卵圆干细胞增生,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤。结论 D-GaIN联合脂多糖可部分抑制肝部分切除后小鼠成熟肝细胞增殖,D-GaIN/脂多糖/肝部分切除可诱导肝卵圆干细胞增生。

红鳘鱼胶胶原蛋白对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤的抗衰老作用研究

以红鳘鱼胶为原料,酸酶法提取胶原蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、氨基酸组成分析等方法进行理化性质分析,并以D-半乳糖建立衰老小鼠模型,探究其对小鼠皮肤含水量、羟脯氨酸含量、皮肤病理形态和抗氧化活性的影响。结果表明,胶原蛋白由2条α链与1条β链组成,为典型的Ⅰ型胶原蛋白,以甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸为特征氨基酸,分别占总氨基酸含量13.890%,8.601%,7.650%和7.124%,且不含色氨酸;动物实验结果表明,经D-半乳糖造模后,MN组小鼠皮肤粗糙、松弛,皱纹数量增多,相较于CN组皮肤水分含量降低了13.52%,羟脯氨酸含量降低了26.20%,抗氧化能力降低,小鼠皮肤真皮层变薄,胶原纤维、弹性纤维含量降低,部分明显断开;红鳘鱼胶胶原蛋白干预后,能够显著改善由于D-半乳糖造成的小鼠背部皮肤水分流失,增强小鼠皮肤组织氧化应激抵抗力,胶原蛋白组皮肤结构基本恢复,皮肤胶原纤维和弹力纤维含量升高,Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比例升高了9.79%。综上分析,通过红鳘鱼胶制备的胶原蛋白可延缓D-半乳糖引起的皮肤衰老,可为胶原蛋白在化妆品领域的高值化利用提供依据。

脂多糖/氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型的建立和评价

目的建立脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)体外诱导肝细胞损伤模型.方法体外培养小鼠原代肝细胞,待其稳定贴壁生长后,加入(0.1、0.5、1、5)ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)和5 mg/mL D-GalN进行处理,全自动生化分析仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性反映肝细胞损伤.诱导骨髓来源巨噬细胞成熟,通过1μg/mL LPS刺激巨噬细胞产生TNF-α;巨噬细胞培养上清联合5 mg/mL D-GalN或50 ng/mL放线菌素D(ActD)处理原代肝细胞24 h,检测ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.原代肝细胞和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)共培养,LPS联合D-GalN或ActD对共培养体系处理24h,检测共培养细胞上清ALT活性、显微镜观察细胞损伤情况.结果TNF-α和D-GalN联合处理原代肝细胞,细胞培养上清ALT活性升高,表明肝细胞发生损伤.LPS刺激BMDM表达TNF-α明显增加,BMDM上清联合D-GalN能引起肝细胞培养上清ALT活性升高和肝细胞皱缩、破碎.肝细胞和BMDM共培养体系中,LPS联合D-GalN能够引起肝细胞损伤;但LPS联合ActD不能引起肝细胞损伤,显微镜观察发现巨噬细胞大量变圆、皱缩,提示巨噬细胞早于肝细胞发生死亡.结论LPS/D-GalN能在体外诱导肝细胞损伤;在利用BMDM和原代肝细胞共培养体系评价损伤效应时,应当用D-GalN而不是ActD作为转录抑制剂.

茵虎清肝方对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的急性肝衰竭模型大鼠肝损伤的影响

目的观察茵虎清肝方对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的急性肝衰竭模型大鼠肝损伤的影响并探讨其作用机制。方法 60只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、实验组。采用腹腔注射D-氨基半乳糖脂多糖建立急性肝衰竭大鼠模型。阳性对照组给予安宫牛黄丸灌胃、实验组给予茵虎清肝方药液灌胃。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)以及总胆红素(TBIL)水平,观察肝脏组织病理学变化,采用ELISA检测检测肝脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、I白细胞介素-6(L-6)表达以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的变化,检测肝脏纤维化指标透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(Ⅲ-PC)和Ⅳ型胶原及肝细胞凋亡情况。结果模型组肝细胞排列紊乱、细胞水肿变性坏死,肝索紊乱,炎性细胞浸润,纤维组织增生,肝窦区扩张并充血。给予药物干预后,阳性组和实验组大鼠的肝细胞形态结构稍紊乱,肝细胞肿胀减轻,坏死肝细胞减少,结节状也少,纤维组织减少。模型组大鼠的ALT、GOT、TBIL、肝脏指数以及肝纤维化指标明显升高(P <0.05)。给予药物干预后,阳性组和实验组的ALT、GOT、TBIL、肝脏指数、HA、LN、Ⅲ-PC以及Ⅳ-C水平明显低于模型组,两组间差异有统计学意义(P <0.05)。模型组大鼠的SOD和GSH含量明显降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和MDA含量明显升高;药物干预后,阳性组和实验组大鼠SOD和GSH含量明显升高(P <0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平和MDA含量明显降低(P <0.05)。阳性组和实验组大鼠的SOD、GSH和MDA含量、TNF-α、IL-1β以及IL-6水平差异有统计学意义(P <0.05)。结论茵虎清肝方通过抑制炎症反应、减少氧化应激,阻断肝脏纤维化对D-氨基半乳糖脂多糖诱导的大鼠急性肝衰竭发挥保护作用。

白芍多糖对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究白芍多糖(Paeoniae Radix Alba polysaccharide,PRPY)对D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:使用PRPY预先口服给药21 d,采用D-半乳糖胺/脂多糖诱导小鼠急性肝损伤,检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)、肝组织中超氧岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性并结合肝组织病理学检查评价药效。结果:白芍多糖高剂量组能显著降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST水平(P<0.01),提高肝组织中SOD、GSH-Px水平同时降低MDA水平(P<0.01),低剂量组则无统计学意义(P>0.05)。肝组织切片病理学检查提示,PRPY可以减轻肝脏组织病理性变化。结论:白芍多糖预先给药对D-半乳糖胺/脂多糖所致的小鼠肝损伤具有一定的预防保护作用,其机制与提高体内氧自由基清除能力相关。

蕨麻多糖保护D-氨基半乳糖急性肝损伤小鼠的作用机制

目的考察蕨麻多糖(PAP)对D-氨基半乳糖(D-GlaN)诱导的急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用机制。方法 60只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、联苯双酯组(阳性对照)以及PAP 50、100、200mg/kg各剂量组,每组10只。先分别给予生理盐水、联苯双酯以及不同剂量受试药PAP,然后除正常对照组注射生理盐水外,其余5组均于给药7d后用8%D-GlaN腹腔注射,建立D-GlaN急性肝损伤模型。24h后处死,测定小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)等指标。结果模型对照组小鼠肝组织中的MDA含量升高,SOD和GSH-Px活性降低,GSH含量降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联苯双酯以及50、100、200mg/kg各剂量PAP均可明显降低D-GlaN急性肝损伤小鼠肝组织中的MDA含量,提高SOD和GSH-Px的活性,增加GSH含量,与模型对照组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 PAP对D-GlaN急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用可能与其清除自由基、保护细胞膜和抗脂质过氧化有关。