脂多糖内毒素联合甲基泼尼松龙建立骨坏死动物模型的血管内外变化

目的通过对白兔先采用单次低剂量的脂多糖内毒素注射和随后三次高剂量的甲基泼尼松龙注射,利用不同的成像方式及病理学检查,来研究由激素性骨坏死动物模型的血管内外改变。方法实验组:11只32周龄雄性白兔;对照组:8只32周龄雄性白兔。实验组单次静脉内注射内毒素(10μg/kg),24 h后,肌肉注射甲基泼尼松龙(20 mg/kg),重复3次。MRI动态观察内毒素注射前后双侧股骨的局部骨内灌注情况。收集内毒素注射前后的血液样本并做血液学检查。解剖和脱钙后的双侧股骨做显微CT下的微血管成像。对激素性骨坏死,血管内血栓形成和血管外骨髓脂肪细胞进行组织病理学检查。结果实验组91%的兔(10/11)出现骨坏死,且实验期间没有死亡。在骨坏死阳性白兔中,无论是干骺端和骨骺均发现了骨坏死病变的典型特征。在骨坏死阳性白兔所有骨样本中均未发现软骨下骨的塌陷。所有对照组骨样品中没有观察到组织病理学的改变。结论注射内毒素和随后高剂量注射甲基泼尼松龙所诱导的激素性股骨坏死实验动物中发现血管内和血管外均有改变。实施此诱导方案所产生的骨坏死高患病率且低死亡率,提示其在激素性骨坏死实验研究中有一定的可行性。

高压氧对脂多糖内毒素致急性肺损伤大鼠的抗炎作用

目的探讨高压氧（HBO）对脂多糖内毒素致急性肺损伤大鼠的抗炎作用及治疗效果。方法选择46只Sprague—Dawley大鼠，雌雄各半，分为空白组10只、模型组12只、HBO治疗组24只。模型组和HBO治疗组采用尾静脉注射内毒素（5mg／kg体重）制作大鼠急性肺损伤模型；HBO治疗组大鼠造模后给予HBO治疗，压力0．2MPa（2．0ATA），进舱后洗舱5min，升压5min，稳压吸氧40min，减压10min出舱；空白组注射同等剂量生理盐水。各组分别于处理后第3小时和第6小时进行白细胞计数、动脉血气分析、白细胞介素8（IL-8）水平检测及计算肺湿重／干重比等，并在光镜下观察肺组织病理变化。结果HBO治疗组与模型组比较，血氧分压提高，肺湿重／干重比、白细胞及中性粒细胞数、IL-8水平均下降，病理组织切片可见炎性细胞浸润较少。结论HBO治疗急性肺损伤，不仅可以改善组织缺氧，还可产生一定的抗炎作用，从而对急性肺损伤发挥疗效。

川芎嗪对内毒素脂多糖诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其机制

目的:探讨川芎嗪对内毒素脂多糖(LPS)诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其调控机制。方法:利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立体外大鼠血脑屏障模型,随机分为正常对照组、川芎嗪对照组、LPS干预组和川芎嗪治疗组。采用γ计数仪检测^(125)I-BSA通透量观察体外血脑屏障模型通透性的改变,Western印迹法检测紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)表达量的变化。结果:LPS使体外血脑屏障模型对^(125)I-BSA的通透量明显增加,脑微血管内皮细胞ZO-1蛋白表达下降,川芎嗪治疗组能明显拮抗LPS的上述作用。结论:川芎嗪对LPS诱导的体外血脑屏障通透性增高具有保护作用,其机制与它能影响血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达有关。

内毒素脂多糖对培养肾小管上皮细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察肾小管上皮细胞 (Tubularepitheliacell,TEC)在含内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)微环境中细胞凋亡和功能改变 ,探讨LPS直接损害肾小管的机制。方法 在含内毒素LPS的介质中体外培养肾小管上皮细胞 ,检测不同时相细胞凋亡、增殖能力及分泌肿瘤坏死因子 α(Tumornecrosisfactorα ,TNF α)能力的变化。结果 LPS有明显的抑制TEC增殖 ,促进TEC分泌TNF α ,且随着LPS浓度的增大 ,其作用更为明显 ;LPS还具有明显促细胞凋亡作用 ,呈剂量依赖性 ;相关分析表明 ,细胞凋亡与LPS促TEC分泌TNF α的量有明显正相关。结论 LPS可抑制TEC增殖 ,促进细胞凋亡 ,可能是通过TNF α而起作用 ,这可能是LPS导致脓毒症性肾衰或急性间质性肾炎小管间质损害的机制之一。

内毒素脂多糖刺激大鼠牙髓的组织病理学反应

目的：研究牙髓在厌氧菌内毒素侵袭过程中的防御机制，建立内毒素性牙髓炎症模型。方法：采用大肠杆菌内毒素脂多糖（ＬＰＳ）涂布大鼠磨牙牙髓的方法，观察牙髓在ＬＰＳ刺激后的组织病理学反应。结果：浓度为５ｍｇ／ｍｌ的ＬＰＳ处理穿髓点处牙髓３０ｍｉｎ，牙髓早期表现为急性化脓性炎症组织像，１周后炎症扩散至大部分冠髓。至第５周，冠髓及大部分根髓坏死，而对照组牙髓内已无炎细胞浸润。结论：本组结果提示尽管牙髓组织有较强的自身防御、修复能力，但如不及时去除抗原物质，最终仍会导致牙髓坏死。

内毒素脂多糖促进人牙髓成纤维细胞凋亡及其对caspase-3活性的影响

目的观察内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对体外培养的人牙髓成纤维细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性的影响。方法不同浓度(0μg、100μg、200μg、400μg/mL)的LPS作用细胞,采用噻唑蓝比色法检测LPS对细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;化学比色法检测细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化。结果不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P<0.01),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;Hoechst33258荧光染色显示,给药组部分细胞呈典型的凋亡表现;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的LPS作用细胞48h,细胞的凋亡率分别为9.2%,23.8%,31.4%;caspase-3活性检测显示,其活性呈剂量依赖性增高,LPS浓度达到400μg/mL时,其活性为对照组的3.4倍。结论LPS可显著地抑制人牙髓成纤维细胞增殖、诱导细胞凋亡、升高caspase-3活性,并呈明显的量效关系。

丝裂原激活蛋白激酶在内毒素脂多糖诱导大鼠施万细胞一氧化氮合酶表达中的作用

目的主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法先用3种MAPK的特异性抑制剂PD98059(ERK1/2)、SB202190(P38MAPK)和SP600125(JNK)以不同浓度预处理细胞1h,再用LPS作用施万细胞4h后,用RT-PCR检测细胞中iNOS mRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达;Western blotting观察iNOS蛋白水平的表达变化;通过测定细胞培养液中亚硝酸盐含量来观察NO的水平。结果LPS可显著激活施万细胞中MAPK信号通路诱导iNOS表达。MAPK的抑制剂预处理细胞后,可显著抑制细胞iNOS mRNA和NO的合成及IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达。结论MAPK信号通路参与了LPS介导的大鼠施万细胞iNOS基因表达和NO产生,通过阻断细胞内信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新思路。

内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响

目的研究内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响。方法培养HPLFs细胞,将细胞分为LPS刺激0 mg/L(对照组)、1 mg/L(实验Ⅰ组)、10 mg/L(实验Ⅱ组),应用ELISA法检测IL-6、TNF-α因子的表达情况。结果 LPS刺激6 h时,HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示:Ⅰ、Ⅱ组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS刺激12 h时,HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示:Ⅰ、Ⅱ组也显著高于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。HPLFs细胞中TNF-α、IL-6的表达随LPS刺激浓度呈剂量依赖性;且对照组、及Ⅰ组、Ⅱ组经LPS刺激12 h的TNF-α、IL-6表达均显著高于刺激6 h,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论内毒素脂多糖(LPS)能够刺激人牙周膜成纤维细胞分泌TNF-α、IL-6炎症因子。

四株口腔厌氧菌内毒素脂多糖的化学组分研究

采用化学、色谱、凝胶电泳等方法,对经酚水法提取、苯酚-氯仿-石油醚法进一步纯化的4株口腔厌氧菌内毒素脂多糖进行了化学组分分析,结果发现4种内毒素物理和外观性状良好,纯度高,4种内毒素主要由糖类、脂肪酸类和磷组成;糖类由氨基糖、酸性糖KDO和中性糖组成;脂肪酸由饱和、不饱和、分枝和羟基脂肪酸组成。SDS—PAGE分析表明,4种内毒素均为半粗糙型,具有内源异质性。

人牙髓细胞受内毒素脂多糖、肿瘤坏死因子、复合树脂浸出液刺激后的MTT值研究

目的 :观察人牙髓细胞 (humandentalpulpcells,HDP)热休克模型及正常HDP受到LPS、TNF -α及复合树脂浸出液的细胞毒刺激后的MTT值。方法 :用LPS、TNF -α各三种浓度及 75 0ml/LDurafill复合树脂浸出液分别处理HDP及其热休克模型 ,72h后计算各组相对增殖率 (RGR)。结果 :热处理板与非热处理板相比RGR有显著差异 ;同一处理因素随浓度增加RGR有下降趋势 ,且在低浓度与高浓度之间有显著差异。结论 :在受到LPS、TNF -α及复合树脂浸出液的细胞毒作用后 ,经过热休克处理的HDP的MTT值显著高于未经热处理的HDP ,提示热处理可能提高HDP的抗细胞毒能力。

大鼠内毒素脂多糖刺激性牙髓炎中免疫反应细胞的动态变化

目的 研究牙髓在内毒素脂多糖刺激过程中的防御反应机制。方法 通过已建立的大鼠内毒素脂 多糖刺激性牙髓炎模型,利用3种单克隆抗体(ED1、ED2、OX6)和免疫组化手段,观察内毒素脂多糖感染性牙髓中 巨噬细胞、Ia抗原表达细胞的动态变化。结果 牙髓中组织细胞(ED2+细胞)在早期感受内毒素脂多糖(LPS)入 侵的同时,与Ia抗原表达细胞(OX6+细胞)和来自于血中的巨噬细胞一起参与了抵抗外来抗原刺激的防御反应。 Ia抗原表达细胞在LPS刺激后3d增加至最多,以后逐渐下降。以来源于血中的巨噬细胞为主的ED1+细胞,在整 个炎症过程中均可见大量浸润,细胞体积由小变大,形态由纺锤形,树枝状等变成圆形或椭圆形。结论 内毒素脂 多糖入侵牙髓后,牙髓中的组织细胞动员Ia抗原表达细胞和巨噬细胞,开展以非特异性免疫为基础的抗原特异性 免疫反应。

牙髓拟杆菌ATCC35406内毒素脂多糖对肿瘤坏死因子(TNF)的诱导活性

采用Kramer的肿瘤坏死因子(TNF)体外活性检测法,对纯化的牙髓拟杆菌ATCC35406内毒素脂多糖的TNF诱导活性进行检测。结果发现0.1μg内毒素即可刺激ICR小鼠产生TNF,在一定剂量范围内,TNF活性呈剂量反应曲线。但当内毒素剂量高于25μg后TNF活性曲线趋于平坦。单纯BCG加盐水不能诱导TNF产生。实验表明,牙髓似杆菌ATCC35406内毒素可显著地诱导TNF产生。

星蒌承气汤治疗中风病痰热腑实证疗效及对患者生物学指标和血浆内毒素脂多糖的影响

目的:探讨星蒌承气汤对中风病痰热腑实证患者生物学指标及血浆内毒素脂多糖(LPS)的影响,为其临床应用提供参考。方法:选择96例中风病痰热腑实证患者,随机分为对照组和观察组各48例。两组患者均给予西医常规治疗,观察组在此基础上给予星蒌承气汤联合治疗,均治疗14 d。比较两组患者治疗前后神经功能缺损评分(NIHSS)、巴氏指数(Barthel)评分、中风症候要素积分差异,分析两组患者治疗前后血清生物学指标及血浆内毒素脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化,比较两组疗效。结果:观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血清核苷二磷酸激酶A水平、血浆LPS、TNF-α、IL-6水平、NIHSS评分及内风、内火、痰湿、血瘀、气虚、阴虚等中风证候要素积分均明显降低,血清人帕金森蛋白7水平及Barthel评分均明显升高,且观察组上述指标改善更为明显(均P<0.05)。结论:星蒌承气汤可减轻中风病痰热腑实证患者炎性反应,改善其生物学指标及神经功能。

铅对革兰氏阴性菌内毒素脂多糖介导原代小胶质细胞氧化应激反应的影响

目的:通过观察乙酸铅[lead acetate,Pb(Ac)_(2)]对革兰氏阴性菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导大鼠原代小胶质细胞氧化应激反应的影响,探索中枢神经系统小胶质细胞对铅与内毒素产生的反应或后果。方法:随机将培养后的小胶质细胞分为阴性对照组(Control组)、LPS组(100 ng/ml LPS)、不同浓度Pb(Ac)_(2)组1(20、50、100μM)、LPS+Pb(Ac)_(2)组[20、50、100 μM Pb(Ac)_(2)+100 ng/ml LPS]及不同浓度Pb(Ac)_(2)组2(10、20、50、100、200、500、1000、2000μM),置37℃、5%CO_(2)培养箱中孵育24h或36h,采用光学或免疫荧光显微镜观察或鉴定细胞,用MTT法检测铅作用后细胞存活率,用Griess Assay检测细胞分泌一氧化氮(nitric oxide,NO)情况、Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达水平。结果:LPS单用介导小胶质细胞24 h后,可使NO、iNOS水平上调(P<0.05);LPS与Pb(Ac)2共孵育后,NO水平下调(P<0.05),且iNOS与NO有一致性下调趋势;细胞生长状况随着铅浓度增加而出现损害现象,如细胞聚集、胞膜不完整、轮廓不清、粘合成团,核仁模糊不清;小胶质细胞存活率随Pb(Ac)_(2)浓度的增加而下降。结论:LPS可导致原代小胶质细胞发生氧化应激反应,与Pb(Ac)_(2)合用见氧化应激产物下调,似乎呈“保护”作用,但细胞形态学及细胞存活率呈现不良变化,与NO或iNOS的减少有“分离现象”。

油酸-内毒素序贯致伤大鼠血浆和肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化

目的 探讨促炎症细胞因子 :肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 1β(IL 1β)和白细胞介素 6(IL 6)水平的变化 ,在全身炎症反应和急性肺损伤中的作用。方法 采用油酸加内毒素脂多糖 (LPS)序贯致伤大鼠 ,在油酸致伤后 1、4、12和 2 4h实施小剂量LPS第 2次致伤 ,收集血浆和肺泡灌洗液 ,采用酶联免疫法 (ELISA)检测TNF α、IL 1β和IL 6蛋白含量。以单油酸致伤和单小剂量LPS致伤作为对照组进行比较分析。结果 TNF α和IL 1β在油酸致伤 4hLPS第 2次致伤后水平最高 ,IL 6的最高水平在油酸 12h加LPS致伤组 ;2次序贯致伤后IL 1β水平变化最大 ,增高最显著 ,血浆浓度达到 ( 15 2 6± 3 9.69)pg ml ,肺泡灌洗液内浓度为 ( 840 .4± 95 .2 9)pg ml。结合肺组织病理学研究 ,肺组织损伤最严重大鼠 ,血浆和肺泡灌洗液TNF α、IL 1β和IL 6水平最高。 结论 TNF α和IL 1β是早期释放的促炎症细胞因子 ,其中IL 1β的血浆和肺泡灌洗液中水平最高 ,它可能在全身炎症反应发生、发展和急性肺损伤中起非常重要的作用。

内毒素在小鼠过敏性哮喘模型所起作用的实验研究

目的建立小鼠过敏性哮喘模型,在过敏原的致敏和激发阶段给予不同剂量内毒素(即脂多糖LPS),探讨内毒素在哮喘模型中的作用机制。方法建立BALB/c小鼠哮喘模型,设立实验组和对照组开展后续实验。实验组包括:鸡卵清白蛋白(OVA)致敏,OVA激发组;OVA致敏,LPS激发组;OVA致敏,OVA+LPS联合激发组;LPS暴露于OVA致敏前,OVA激发组;对照组包括试剂对照组和健康对照组。各实验组的LPS剂量均分为高、中、低三个剂量组。通过测定小鼠气道阻力和肺顺应性来反映其肺功能改变;流式细胞术(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数,表征CD4+CD2+5调节性T淋巴细胞(以下简称Treg细胞)的相对比例;荧光实时聚合酶链反应定量测定肺脏和脾脏Foxp3mRNA表达的水平;ELISA法测定血浆总IgE和OVA特异性IgE水平,抗体夹心ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中Th2细胞因子(IL-4和IL-5)的水平;计数BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞等各类白细胞所占百分比;常规病理切片观察肺组织改变情况。结果结果表明,与哮喘模型组小鼠相比,在LPS各处理组中,总体上能诱导Treg细胞的产生,改善肺功能,降低IgE滴度,降低Th2介导的免疫反应,同时诱导肺部炎症。尤其是在致敏阶段腹腔注射内毒素可以缓解由过敏原诱导的气道炎症和改善肺功能,诱导肺组织和脾组织Foxp3mRNA表达的增加。结论LPS抑制了Th2介导的过敏反应,可能与Foxp3表达量的增加相关,后者诱导Treg细胞增殖,对哮喘症状起到缓解作用。

二草清肝汤对内毒素性肝损害防护作用的实验研究

目的:探讨中药二草清肝汤对内毒素/脂多糖(LPS)性肝损害的防护机制。方法:采用LPS腹腔注射(10mg/kg)制备小鼠内毒素血症肝损害模型,BALB/c小鼠200只随机分为正常对照组、LPS组、二草清肝汤小剂量组和二草清肝汤大剂量组;光镜观察肝组织病理学改变,全自动生化分析仪检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度,免疫组织化学法检测Toll样受体4(TLR4)表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TLR4 mRNA表达水平。结果:二草清肝汤能明显提高小鼠存活率,肝组织病理损害程度减轻;二草清肝汤小剂量组及大剂量组小鼠的IL-12、TNF-α水平显著低于LPS组,差异有显著性意义(均P(0.05);二草清肝汤小剂量组和大剂量组小鼠肝组织TLR4 mRNA水平也明显低于LPS组,差异均有显著性意义(均P(0.05),但二草清肝汤大、小剂量组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论:二草清肝汤能明显减轻LPS所致的肝损害,其机制可能与其下调肝脏各种细胞的TLR4表达,同时下调IL-12、TNF-α的水平有关。

LRG介导内毒素预处理诱导的脑保护作用

目的:通过测定不同组大鼠脑缺血/再灌注损伤模型中脂多糖应答分子(LRG)表达水平的变化与炎症因子含量及大鼠脑梗死容积之间的关系,探讨内毒素重复预处理诱导脑保护效应的机制。方法:将66只SD大鼠随机分为假手术组、缺血对照组和内毒素预处理组,每组22只。采用戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,采用大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO)制备大鼠大脑缺血/再灌注模型。采用免疫印迹法结合图像分析软件半定量计算LRG分子表达水平的变化,酶联免疫法测定脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的含量,用氯化三苯四唑(TTC)染色法和计算机图像分析系统计算大鼠大脑梗死容积。结果:相比于缺血对照组,内毒素重复预处理组大鼠大脑LRG分子表达水平明显上调,TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低,IL-10的含量明显增高,同时,内毒素预处理组较缺血对照组神经功能评分明显升高,脑梗死容积明显缩小。结论:内毒素重复预处理通过上调LRG分子表达,促进致炎-抑炎因子之间的动态平衡介导脑保护作用。

内毒素对肉鸡肠黏膜及肝线粒体复活体Ⅰ活性的影响及氨基胍的保护效应

本研究采用30日龄黄羽肉鸡90只,随机分成内毒素处理组(LPS组,5mg/kg)、氨基胍治疗组(AG+LPS组)和生理盐水对照组。每组分别在处理后1、3、5、7h和9h时间点杀鸡取样。取肠黏膜、肝组织匀浆,提取线粒体。分别检测肠黏膜和肝脏线粒体复活体Ⅰ活性。结果显示,LPS在各时间段显著降低了肉鸡肠黏膜和肝脏线粒体复合体Ⅰ的活性(P<0.05)。注射AG 1h时,肉鸡肠黏膜和肝脏线粒体复合体Ⅰ的活性未发生变化(P>0.05),3h时却显著增加(P<0.05);5h、7h时,趋于正常(P>0.05);9h时,显著降低(P<0.05)。表明LPS诱导了线粒体的损伤,引起了线粒体内的复活体Ⅰ活性的紊乱,能量代谢障碍,组织机能发生改变;AG对LPS具有明显的颉颃作用,对机体起到保护作用。

窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响研究

目的动物实验观察窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响,探讨牙髓组织在LPS刺激后的信号转导途径。方法在8头小型猪磨牙和前磨牙上制备不同深度窝洞,窝洞分为牙釉质深层组、牙本质浅层组、牙本质深层组。封入一定量的内毒素,分别于术后3天、7天、14天、28天处死动物取牙,采用免疫组织化学染色的方法,观察小型猪磨牙和前磨牙窝洞内封入内毒素后牙髓组织中TLR4的表达和分布。结果小型猪正常牙髓中未见TLR4阳性细胞。内毒素实验组随着窝洞深度增加,TLR4阳性细胞数增加。在深窝洞组3d窝洞下方牙髓组织中TLR4阳性细胞多为中性粒细胞表达,其他实验组多为单核细胞表达。结论牙髓组织中TLR4的表达提示内毒素通过牙本质渗透至牙髓,通过LPS信号受体TLR4在牙髓组织的炎症发展过程中发挥作用。