5-脂氧化酶、血管内皮生长因子与乳腺癌的研究进展

花生四稀酸（arachidonic acid，AA）是含二十碳的不饱和脂肪酸，在环氧化酶（cyclooxygenase，COX）和脂氧化酶（lipoxygenase，LOX）作用下代谢产生前列腺素（PGs）、羟基二十碳四稀酸（HETE）和白三稀（LTs）等类花生酸（eicosanoids）物质。现已证明类花生酸物质在肿瘤的发生发展和转移中起着重要作用^[1]。LOX-5是AA代谢的重要限速酶。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一个特异性作用于血管内皮细胞的蛋白，是目前发现的促进新生血管形成的最重要的促进因子，

哮喘儿童白三烯受体调节剂临床疗效与白三烯C4合成酶及5-脂氧化酶基因的相关性

目的探讨白三烯C4合成酶(LTC4S)与5-脂氧化酶(ALOX5)基因多态性与白三烯受体拮抗剂临床疗效的关系。方法 2011年6月至2013年6月门诊72例中度持续哮喘患儿分为两组,分别予吸入型糖皮质激素激素(ICS)、ICS联合白三烯受体拮抗剂(LTRA)治疗12周,然后交叉治疗12周;采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法(PCRRFLP),对LTC4S RS730012、ALOX5 RS2115819位点进行基因分型;分析患儿治疗前后肺功能及儿童哮喘控制测试问卷(C-ACT)评分与基因多态性的关系。结果经ICS联合LTRA治疗后,LTC4S RS730012基因组中的A/C、C/C基因型患儿的75%肺活量时的用力呼气流速(FEF75)改善率显著优于A/A型,差异均有统计学意义(P<0.01);A/A基因型患儿在治疗前后改善情况的差异无统计学意义。ICS联合LTRA治疗前后,ALOX5 RS2115819基因组中的不同基因型患儿间的肺功能指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LTC4S RS730012不同基因型患儿在哮喘治疗后小气道功能改善有差异,与LTRA相关。

从环氧化酶和5-脂氧化酶途径探讨虎杖痛风颗粒的抗炎机制

目的:观察虎杖痛风颗粒对环氧化酶(cyclooxygenase,COX)和5-脂氧化酶(5-lipoxygenase,5-LOX)活性的影响,探讨虎杖痛风颗粒抗炎的可能机制。方法:健康志愿者全血标本加入钙离子载体 A23187予以刺激,以阿司匹林为对照,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血栓素 B_2(thromboxane B_2,TXB_2)含量考察不同浓度的虎杖痛风颗粒溶液对 COX-1活性的影响;健康志愿者全血经阿司匹林灭活 COX-1后,予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,以塞来昔布为对照,通过 ELISA 检测前列环素 I_2(prostaglandin I_2,PGI_2)含量考察不同浓度虎杖痛风颗粒溶液对 COX-2活性的影响;大鼠皮下植入含0.5%花生四烯酸溶液的棉球,收集渗液中的多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN),采用反相高效液相色谱法测定白细胞三烯 B_4(leukotriene B_4,LTB_4)含量考察不同剂量虎杖痛风颗粒对5-LOX 活性的影响。结果:低浓度虎杖痛风颗粒组 TXB_2浓度较高浓度虎杖痛风颗粒组和阿司匹林组升高(P<0.05);高、低浓度虎杖痛风颗粒组 PGI_2浓度较塞来昔布组明显升高(P<0.05),高、低浓度虎杖痛风颗粒组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);空白对照组 LTB_4含量较高、低剂量虎杖痛风颗粒组和地塞米松组高(P<0.05)。结论:虎杖痛风颗粒能通过抑制 COX 和5-LOX 的活性减少 TXB_2、PGI_2和 LTB_4等炎症介质的释放。

GnRH-α辅助腹腔镜对中重度子宫内膜异位症患者5-脂氧化酶、脂氧素A4的影响

目的探讨促性腺激素释放激素(Gn RH-α)辅助腹腔镜治疗中、重度子宫内膜异位症患者的临床疗效及其对5-脂氧化酶(5-LOX)、脂氧素A4(LXA4)表达的影响。方法选取2014~2016年在郑州大学第二附属医院就诊的78例子宫内膜异位症患者随机纳入观察组(腹腔镜联合Gn RH-α)及对照组(单用腹腔镜),每组39例;观察治疗前后两组患者手术基本情况、各项VAS评分、临床疗效、性激素水平及5-LOX、LXA4水平。结果观察组在手术用时、术中出血量、术后肛门首次排气时间及住院时间均少于对照组,且在缓解慢性盆腔痛、痛经及性交痛的效果优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);此外,在治疗有效率比较中观察组(84.6%)高于对照组(61.5%),同时,治疗后观察组的性激素水平(FSH、LH、E2)改善效果优于对照组,观察组5-LOX(173.9±17.3)pg/ml、LXA4(439.5±48.3)pg/ml表达水平均高于对照组的(152.4±15.5)pg/ml、(367.1±42.4)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论促性腺激素释放激素有助于提高机体5-LOX、LXA4表达水平,调节性激素水平,从而提高腹腔镜在子宫内膜异位中的治疗效果。

环氧合酶-2和5-脂氧化酶双重抑制剂的研究进展

传统的非甾体抗炎药和选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂在治疗炎症过程中引发胃肠道及肾脏不良反应,制约了其临床应用。COX-2和5-脂氧化酶(5-LOX)双重抑制剂同时抑制前列腺素(PGs)和炎症介质白三烯类(LTs)的生物合成,比单一的抑制剂抗炎效果好、安全性高,是一类有发展前景的新型非甾体抗炎药。笔者简要介绍COX-2/5-LOX双重抑制剂的研究进展,并讨论其作用机制及构效关系。

5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备

目的建立5-脂氧化酶(5-LO)转基因小鼠进行动脉粥样硬化的发病分子机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8 kb)导入BDF1受精卵雄原核并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、Southern blot检测,对9、20、24号转基因小鼠分别提取腹腔细胞、骨髓细胞及脾、肾组织总RNA和蛋白,并采用RT-PCR、Western blot方法进行转录水平检测和蛋白表达检测。结果共产生25只子代小鼠,经PCR和Southern检测获得7只阳性小鼠,经RT-PCR和Western blot检测结果表明,9、20、24号转基因小鼠腹腔细胞、骨髓细胞、脾、肾5-LO和5-脂氧化酶激活蛋白(FLAP)在RNA和蛋白水平表达均高于正常BDF1对照小鼠,且统计学分析腹腔细胞、骨髓细胞表达均具有显著差异(P<0.05)。结论成功建立5-LO转基因小鼠模型。

5-脂氧化酶与动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化(AS)及其并发症是当今世界上导致死亡的最常见的病因之一。AS发病机制有多种学说,其中动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病的学说已为广大学者所接受。白三烯(LTs)是促进炎症反应的脂类调控因子,在心血管组织中具有强烈的致炎作用,5-脂氧化酶(5-LO)能够氧化花生四烯酸生成LTs等花生酸类物质。近年对动脉粥样硬化的研究中发现5-LO途径及其下游产物LTs对AS的形成、发展及动脉粥样硬化斑块的不稳定性有重要作用。本文结合国内外文献,对5-LO基因结构、蛋白结构和代谢活性等生物学特性以及5-LO及其下游产物与动脉粥样硬化发生、发展的关系进行了总结,对了解和研究动脉粥样硬化疾病及其治疗具有重要意义。

5-脂氧化酶通路与动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是多种心脑血管疾病的基础,其实质是一种慢性炎症性疾病。5-脂氧化酶(5-LO)通路是炎性反应的关键环节,近年来研究表明,5-LO通路是动脉粥样硬化的发病机制之一,并与粥样硬化斑块易损性有密切关系。5-LO通路可能通过多种途径参与动脉粥样硬化的形成和发展。现结合国内外文献,就5-LO通路与动脉粥样硬化及斑块易损性的研究进展进行综述。

5-脂氧化酶、白三烯在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达

目的探讨5-脂氧化酶(5-LO)、白三烯B4(LTB4)、白三烯C4(LTC4)在动脉粥样硬化大鼠主动脉及血液中的表达及其意义。方法选取正常雄性SD大鼠25只,随机分为正常对照组和动脉粥样硬化组。正常对照组普通饲料喂养,动脉粥样硬化组高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化大鼠模型,14周后处死大鼠,采血,全自动生化仪检测血脂,ELISA法检测血清及主动脉中5-脂氧化酶、白三烯B4、白三烯C4的含量。结果动脉粥样硬化组血脂较正常组明显升高(P<0.01),动脉粥样硬化组血液中及主动脉中5-脂氧化酶、白三烯B4、白三烯C4的含量较正常组升高(P<0.05)。结论 5-LO、LTB4、LTC4在动脉粥样硬化大鼠主动脉及血液中表达均增高,5-LO/LTS通路可能是动脉粥样硬化潜在的干预靶点。

5-脂氧化酶与动脉粥样硬化性疾病

动脉粥样硬化是一种慢性疾病．可引起冠心病、脑梗死等。由于病因复杂，病变发展缓慢，对于动脉粥样硬化病因、发病机制还不完全了解。目前，动脉硬化作为一种慢性炎症反应得到大家的广泛认同．炎症反应的机制是目前研究的热点。

5-脂氧化酶转基因小鼠表型初步研究

目的建立5-脂氧化酶（5-LO）高表达转基因小鼠模型，为动脉粥样硬化（AS）发病分子机制的研究提供有应用价值的动物模型。方法对5-LO转基因及正常对照小鼠分别选用RT—PCR、免疫组织化学、血脂、血压监测等方法进行分析实验。结果5-LO及大鼠5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）免疫组织化学实验结果显示，在肾和肺中5-LO及FLAP的表达，转基因小鼠高于正常对照组小鼠：RT—PCR实验结果显示，转基因小鼠与正常对照小鼠比较在骨髓细胞、腹腔细胞、脾脏、肾脏中白三烯介质及其受体均有不同程度的高表达。其中，两种小鼠的腹腔细胞和骨髓细胞中白三烯A4（LTA4）、白三烯B4（LTB4）和半胱酰胺-白三烯受体2（Cys—LTR2）的表达存在差异（P〈0．05），脾和肾脏中LTB4、白三烯C4（LTC4）及Cys—LTR2的表达存在差异（P〈0．05），肾脏中半胱酰胺-白三烯受体1（Cys-LTR1）的表达存在差异（P〈0．05）。C反应蛋白（CRP）、白介素-1β（IL-1β）、血小板衍生因子（PDGF）、坏死因子-κB（NF-κB）等细胞因子检测结果显示，在肾组织中转基因小鼠的各项指标显著高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血压测定结果显示，转基因小鼠高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血脂检测结果显示，两种小鼠未见明显差异（P〉0．05）。结论成功建立5-LO高表达转基因小鼠模型。

5-脂氧化酶抑制剂酮洛芬酰胺的QSAR研究

用半经验量子软件MOPAC2012,PM7水平上,对20种酮洛芬酰胺化合物分子进行几何优化,计算EHOMO、ELUMO、Hf、MR等量子化学参数,将计算得到的量子化学参数与酮洛芬酰胺对5-脂氧化酶(5-LOX)抑制活性进行关联,并通过有进有出的逐步回归分析,筛选了影响抑制5-LOX的主要因素,建立了定量构效关系模型,最优模型为:PIC_(50)=13.234+0.002Hf+0.010TE+0.948 EHOMO,r^2=0.806,F=22.174,N=20,r2CV=0.671,s=0.139。利用VIF检验各参数相关性,用LOO法对所建模型进行显著性及预测能力的检验。计算结果显示,影响化合物抑制5-LOX的主要因素是化合物的生成热、总能量、最高占有轨道能级。该研究可为研制COX-2和5-LOX双重抑制酮洛芬衍生物提供理论指导。

5脂氧化酶在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨5脂氧化酶(5-LOX)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测74例乳腺癌、24例癌旁组织及18例正常乳腺组织中5-LOX蛋白的表达;分析5-LOX与乳腺癌临床病理特征的关系。结果:乳腺癌组织5-LOX的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常乳腺组织(P<0.01)。5-LOX表达与乳腺癌肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05);与患者年龄、雌激素及孕激素受体无关。结论:5-LOX蛋白与乳腺癌的发生、发展和转移有关,有可能作为独立指标判断乳腺癌预后。

系统性红斑狼疮患者外周血多形核粒细胞磷脂酶A2、5-脂氧化酶和白三烯A4水解酶mRNA的表达

目的:探讨磷脂酶A2(cPLA2)、5-脂氧化酶(5-LO)和白三烯A4水解酶(LTA4-H)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血多形核粒细胞(PMNs)中的表达水平,及其在SLE发病机制中的作用及意义。方法:应用反转录(RT)-PCR检测28例活动期SLE患者和25名正常人PMNs中cPLA2、5-LO和LTA4-HmRNA的表达水平。结果:活动期SLE患者cPLA2、5-LO和LTA4-H的阳性表达率与正常对照组相比差异无统计学意义;但活动期SLE患者PMNs中的5-LOmRNA的平均表达水平(0.891±0.263)明显高于正常对照组(0.641±0.138),LTA4-HmRNA的平均表达水平(0.6582±0.2804)也明显高于正常对照组(0.3392±0.0751),二者差异均有显著性(P<0.01);活动期SLE组cPLA2的平均表达水平(0.630±0.268)与正常对照组(0.504±0.192)处于同一表达水平,差异无显著性。结论:活动期SLE患者外周血多形核粒细胞中5-LO和LTA4-HmRNA的表达增加,通过诱导白三烯B4(leukotrieneB4,LTB4)的产生参与SLE的发病过程。为特异性5-LO抑制剂或LTB4受体拮抗剂治疗SLE提供了理论依据。

丹参酮ⅡA磺酸钠对百草枯中毒大鼠肺组织5-脂氧化酶表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠（sodiumtanshinone11Asulfonate，STS）对百草枯中毒大鼠血清肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor-a，TNF-a）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白三烯B4（1eukotrieneB4，LTB4）浓度、肺组织5-脂氧化酶（5-lipoxygenase，5-LOX）蛋白及mRNA表达的影响。方法75只Sprague—Dawley（SD）雄性大鼠随机分成对照组、百草枯组、STS组，每组25只。对照组腹腔注射生理盐水2mL，百草枯组给予生理盐水稀释百草枯50mg／kg至2mL灌胃染毒，STS组在百草枯染毒后给予STS25me,／kg腹腔注射，连续注射3d。各组分别于制模后72h处死大鼠，心脏取血；腹主动脉取血行血气PO，检测；留取肺组织标本，采用HE染色，光镜下观察肺组织病理变化；酶联免疫法检测血清TNF-a、IL-6及LTB4浓度；Westernblot检测5-LOX蛋白表达量；实时荧光定量PCR法检测5-LOXmRNA表达量。结果①HE染色对照组大鼠肺组织结构清晰，肺泡无水肿；百草枯组大鼠肺内大量的炎性细胞浸润，肺间隔水肿断裂；STS组大鼠肺间质及肺泡充血水肿明显减轻，少量炎性细胞浸润。②百草枯组（52．76±3．85）mmHg及STS组（69．12±4．52）mmHg大鼠动脉血气PO，均显著低于对照组（86．45±5．23）mmHg（P〈0．01）；STS组动脉血气P02显著高于百草枯组（P〈0．01）。③百草枯组及STS组大鼠血清TNF-a、IL-6、LTB4浓度显著高于对照组（P〈0．01）；STS组大鼠血清TNF-a、IL-6、LTB4浓度显著低于百草枯组（P〈0．01）。④百草枯组（0．978±0．045）大鼠肺组织5-LOX蛋白表达量均显著高于对照组（0．780±0．022）及STS组（0．712±0．065）（P〈0．01）；而STS组大鼠肺组织5-LOX蛋白表达量低于对照组（P〈0．05）。⑤百草枯组（3．241±0．330）及STS组（2．045±0．234）大鼠肺组织5-LOXmRNA表达量均显著高于对照组（1．332±0．118）（P〈0．01）；STS组大鼠肺组织5-LOXmRNA表达量显著低于百草枯组（P〈0．01）。结论STS可能通过抑制5-LOX表达和IJTB4的释放，减轻炎症级联反应，防止百草枯中毒大鼠肺损伤发生。

5-脂氧化酶通路在非酒精性脂肪性肝炎中的作用和机制

目的探讨5-脂氧化酶(5-LO)通路在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用。方法将4周龄ApoE-/-雄性小鼠16只随机分为两组:对照组(普通饲料)、NASH模型组(高脂高胆固醇饲料)。连续喂养12周后,肝组织油红染色观察脂肪变,采用HE染色进行NAFLD活动度评分(NAFLD activity score,NAS)。荧光定量RT-PCR检测5-LO、BLT1等mRNA表达,Western Bot法检测5-LO蛋白,酶联免疫法检测肝脏白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)。结果高脂高胆固醇饮食12周能诱导ApoE-/-小鼠出现NASH表现,建模成功。NASH模型组较对照组肝组织5-LO mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01),肝匀浆LTB4水平[(71.09±18.23)pg/mL vs(46.71±11.71)pg/mL]升高(P<0.01),其受体BLT1 mRNA水平显著升高(P<0.01),中性粒细胞趋化因子和相应受体MIP2、CXCR2以及黏附分子ICAM1、VCAM1 mRNA的表达均较对照组明显升高(P<0.01)。结论 5-LO炎症通路通过上调中性粒细胞粘附浸润相关因子,诱导中性粒细胞浸润,促进非酒精性脂肪性肝炎进展。

非甾体抗炎药环氧化酶/5-脂氧化酶双重抑制剂的研究进展

非甾体抗炎药具有解热、镇痛、抗炎和抗风湿等作用。现有的非甾体抗炎药大多存在胃肠道不良反应或心脏病发作和心肌梗死等方面的副作用,而环氧化酶/5-脂氧化酶双重抑制剂不仅具有较强的解热、镇痛、抗炎和抗风湿等作用,而且未发现有心脏病发作、心肌梗死和胃肠道损伤的危险,因此环氧化酶/5-脂氧化酶双重抑制剂已成为研究新一代非甾体抗炎药的途径。

阿托伐他汀对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化血管5-脂氧化酶通路的影响

目的探究阿托伐他汀对动脉粥样硬化载脂蛋白E基因缺陷(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化血管5-脂氧化酶通路的影响。方法选取40只6周龄ApoE^-/-小鼠,随机分为空白对照组、模型组、低剂量阿托伐他汀组、高剂量阿托伐他汀组。对照组给予普通饲料喂养,造模ApoE^-/-小鼠给予高脂饲料喂养,低剂量阿托伐他汀组使用阿托伐他汀2.5 mg/(kg·d)灌胃处理,高剂量阿托伐他汀组使用阿托伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃处理,空白对照组和模型组使用等量的生理盐水灌胃处理。测量斑块面积(PA)、血管管腔面积(LA),计算校正斑块面积(PA/LA);使用全自动生化分析仪测量甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)含量;使用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清中白三烯B4(LTB4)、白三烯D4(LTD4)和白介素-6(IL-6)水平;使用Western blot检测细胞间粘附因子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)蛋白和5-脂氧化酶(5-LO)表达情况。结果相比空白对照组,模型组小鼠PA值、PA/LA值,TG、TC、LDL-C、LTB4、LTD4、IL-6含量,5-LO、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平显著升高,LA值显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);相比模型组,阿托伐他汀组小鼠PA值、PA/LA值,血清TG、TC、LDL-C、LTB4、LTD4、IL-6含量,5-LO、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平显著降低,且高剂量组显著低于低剂量组,LA值显著升高,且高剂量组显著高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿托伐他汀可以降低动脉粥样硬化ApoE^-/-小鼠血清内相关炎症因子及5-脂氧化酶通路相关蛋白,抑制5-脂氧化酶通路,进而抑制动脉粥样硬化病变的发展,且在一定浓度内呈浓度依赖性。

5-脂氧化酶代谢通路与动脉粥样硬化的关系

5-脂氧化酶催化花生四烯酸生成5-羟基廿碳四烯酸和白三烯等花生酸类物质,其中后者是炎症反应和变态反应的调停者。近年来研究发现5-脂氧化酶代谢途径与动脉粥样硬化密切相关,本文结合国内外文献,就5-脂氧化酶代谢途径与动脉粥样硬化的关系作一综述。

不同作用机制的5-脂氧化酶抑制剂筛选方法的建立和应用

目的拟建立体外高通量的用于筛选不同作用机制的5-脂氧化酶(5-lipoxygenase,5-LOX)抑制剂的方法。方法以花生四烯酸为底物,2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸为荧光反应物,建立荧光测活方法,并通过不加Fe3+和外加10mmol/LFe3+的方法建立两种不同的5-LOX酶反应体系。结果 5-脂氧化酶在不加Fe3+和外加10mmol/LFe^(3+)的反应体系中的信号/本底(S/B)值分别为5.02和37.81,两种反应的Z'因子值均约为0.7。5-脂氧化酶铁离子螯合抑制剂齐留通在未加Fe^(3+)的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC_(50)值为0.21μm,在外加10mmol/L Fe^(3+)的反应体系对酶无抑制作用。非铁离子螯合抑制剂去甲二氢愈创木酸在两种反应体系对酶均有抑制作用,其IC_(50)值分别为0.52和0.93μM。利用该方法从微生物代谢产物中筛选到两个活性化合物WF-5239和Trivaric acid,其中化合物WF-5239在未加Fe^(3+)的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC_(50)值为2μmol/L,在外加10mmol/L Fe^(3+)的反应体系对酶无抑制作用,推测可能为铁离子螯合型抑制剂。化合物Trivaric acid在两个筛选体系对酶的抑制作用基本一致,其IC_(50)值均约为5.36μmol/L,推测可能为非铁离子螯合型抑制剂。结论本研究建立了灵敏、稳定的可用于筛选不同作用机制5-LOX抑制剂的方法。