外源茉莉酸对脂氧合酶基因LOX3敲除的粳稻防御响应的影响

【目的】揭示外源茉莉酸(Jasmonic acid,JA)对脂氧合酶基因LOX3敲除水稻株防御响应的影响,为利用外源JA等激发子提高农作物因抗性相关基因丧失导致的水稻防御响应降低问题提供基础数据。【方法】以感病粳稻丽江新团黑谷(LTH)及其LOX3敲除水稻株系(Δlox3#1、Δlox3#10和Δlox3#20)为材料,开展水稻株高、分蘖数和百粒重等表型分析、过氧化物酶(POD)、活性氧(ROS)和木质素等抗菌化合物活性(含量)测定,以及防御相关基因表达分析;进一步对供试水稻进行稻瘟菌接种,调查供试水稻稻瘟病症状,检测稻瘟菌接种水稻中抗菌化合物活性(含量)及防御相关基因表达等,并观察稻瘟菌在水稻中的侵染进程;在此基础上,使用外源JA处理稻瘟菌接种36和48 hpi时的Δlox3敲除水稻株和LTH,分析JA对水稻稻瘟病症状及稻瘟菌侵染的水稻中抗菌化合物活性(含量)和防御相关基因表达等的影响,同时观察JA对稻瘟菌侵染进程的影响。【结果】Δlox3敲除水稻株种子发芽速度快于野生型,但株高、分蘖数和百粒重等与野生型相近;稻瘟菌接种的Δlox3敲除水稻株稻瘟病症状较稻瘟菌接种的野生型水稻严重,且胼胝质数、POD活性及木质素含量降低,ROS含量和死细胞数增加,OsWRKY45、OsPR1a和OsPOX1基因下调幅度和稻瘟菌菌丝定殖量明显高于稻瘟菌接种野生型水稻;外源JA可有效减缓稻瘟菌接种36和48 hpi的Δlox3敲除水稻株稻瘟病症状,且JA提高了稻瘟菌接种36和48 hpi的Δlox3敲除水稻株中胼胝质数、POD活性和木质素含量以及防御相关基因OsWRKY45、OsPR1a和OsPOX1表达水平,而降低了OsRbohB表达量及ROS含量和细胞死亡数,同时限制了稻瘟菌菌丝扩展;其中JA对稻瘟菌接种48 hpi的Δlox3敲除水稻株稻瘟病症状减轻效果优于JA对稻瘟菌接种36 hpi的Δlox3敲除水稻株,主要体现在JA使稻瘟菌接种48 hpi的Δlox3敲除水稻株中抗菌化合物增加幅度、防御相关基因表达水平、细胞死亡数和稻瘟菌菌丝扩展受限等优于JA处理稻瘟菌接种36 hpi的Δlox3敲除水稻株。【结论】LOX3基因敲除提升了水稻种子发芽速度而降低了水稻抗瘟性,外源JA则减缓LOX3敲除导致的水稻防御响应降低,提高了水稻抗瘟性。JA在减缓农作物因抗性基因持久性短而造成的抗性降低或丧失方面具有潜在的应用前景。

脂氧合酶对甜瓜果实后熟软化生理及相关基因表达的影响

为探究甜瓜果实在采后贮藏过程中脂氧合酶对果实后熟软化生理及相关基因表达的影响,以西州蜜17号为试验材料,通过对甜瓜果实贮藏期间脂氧合酶活性、乙烯释放量、果实硬度、呼吸强度、果胶酶活性、淀粉酶活性以及相关基因表达量进行测定,研究甜瓜果实采后脂氧合酶代谢、乙烯产生、后熟软化生理及相关基因表达的作用关系。分别将甜瓜果实在20℃贮藏(对照组)、经1-MCP处理后20℃贮藏、2℃贮藏,分析甜瓜果实中LOX活性与乙烯释放量的变化趋势。结果表明,在甜瓜果实后熟软化过程中,LOX活性上升先于乙烯释放量的增加,而在乙烯释放量与呼吸强度跃变后,LOX活性逐渐下降。同时,果实中果胶酶与淀粉酶活性及其基因表达量在跃变现象发生后显著增加,果实硬度随之迅速下降,说明果胶酶与淀粉酶基因表达增强和酶活性升高是甜瓜果实发生软化的关键因素。此外,LOX活性升高能够启动乙烯释放量的增加,促使果实发生呼吸跃变并进入后熟阶段,但乙烯对LOX却没有调控作用。由此可知,LOX活性对果胶和淀粉的变化没有直接影响,而是通过启动乙烯的释放来调节果胶和淀粉的代谢反应,使果实发生软化。

星星草脂氧合酶基因家族鉴定及生物信息学分析

星星草具有较强的耐盐碱特性,是改良土壤盐碱化的优良牧草。脂氧合酶(lipoxygenase,LOXs)广泛存在于动植物中,催化多不饱和脂肪酸的双加氧反应,最终生成各种氧脂素,从而在植物生长发育、响应逆境胁迫中发挥重要的生物学功能。目前,星星草中的LOXs家族基因仍未见报道。本研究利用生物信息学方法对PutLOXs基因家族成员进行鉴定,并对其理化性质、亚细胞定位和系统进化进行了分析。结果表明,星星草基因组中共有8个LOX基因,它们均具有lipoxygenase homology 2(简称LH2)和lipoxygenase结构域,均不包含跨膜结构域,预测定位于细胞质或叶绿体。系统发生分析表明PutLOXs蛋白分为9-LOX和13-LOX两个亚家族,并且与水稻和玉米这类单子叶植物的LOXs蛋白系统发生关系更近。本研究将为后期深入分析星星草耐盐碱分子机制提供理论依据。

胡麻脂氧合酶基因LuLOX1的克隆与表达分析

胡麻的籽粒富含多不饱和脂肪酸-亚麻酸,易被脂氧合酶(LOX)氧化,导致油脂的酸败。因此,油脂的稳定性和风味是影响胡麻油质量的重要因素。脂氧合酶是一类非血红素双加氧酶,其催化不饱和脂肪酸如亚油酸和亚麻酸的氢过氧化反应。本研究旨在阐明在胡麻种子发育时期脂氧合酶基因(LuLOX1)的表达、酶活性与品质的关系。本试验利用基于亚麻全基因组DNA测序数据,对LuLOX1基因进行克隆,利用RT-PCR方法进行LuLOX1基因表达分析,采用分光光度计法进行LOX酶活性测定。结果显示,LuLOX1基因的cDNA全长为2 607 bp,编码868个氨基酸,LuLOX1蛋白分子质量和等电点分别为98.87 kD、6.36。LuLOX1在种子发育早期高表达,之后呈下降的趋势,成熟期几乎检测不到该基因的表达。LuLOX1的酶活性变化与LuLOX1基因表达模式一致。该研究结果表明,LuLOX1可能参与了种子发育过程中脂肪酸氧化的调控。本研究为进一步研究其功能,通过脂氧合酶调控改进胡麻油脂品质奠定了基础。

血红素氧合酶1介导阿托伐他汀在巨噬细胞极化和胆固醇蓄积中的作用

背景:研究表明,阿托伐他汀可以上调血红素氧合酶1表达,增强细胞抗炎症及抗氧化损伤能力。但阿托伐他汀是否可以通过诱导血红素氧合酶1表达调控巨噬细胞极化、抑制炎症、减少胆固醇蓄积尚不明确。目的:探讨阿托伐他汀通过诱导血红素氧合酶1表达对氧化修饰型低密度脂蛋白刺激的RAW264.7巨噬细胞极化、炎症状态及胆固醇水平的影响和相关机制。方法:先将体外培养RAW264.7细胞随机分为6组,分别给予不同浓度的阿托伐他汀孵育24 h,检测血红素氧合酶1蛋白表达量及细胞活性,摸索阿托伐他汀的最适剂量用于后续研究。另将RAW264.7细胞随机分为对照组、阿托伐他汀组、血红素氧合酶1抑制组,分别用纯培养基、阿托伐他汀20μmol/L及阿托伐他汀20μmol/L+锌原卟啉Ⅸ10μmol/L预先孵育细胞24 h,再加入50 mg/L的氧化修饰型低密度脂蛋白孵育48 h。流式细胞术检测巨噬细胞极化结果;ELISA法检测转化生长因子β、白细胞介素10、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α等炎症因子的分泌水平;Western blot检测血红素氧合酶1、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62、PPARγ、ABCA1的表达量;氧化酶法检测细胞内胆固醇含量并用油红O染色评价胞内脂滴的蓄积程度。结果与结论:①阿托伐他汀可呈剂量依赖性诱导巨噬细胞血红素氧合酶1蛋白表达;②氧化修饰型低密度脂蛋白可诱导巨噬细胞主要向M1极化并分泌促炎因子,增加胞内胆固醇蓄积;③与对照组相比,阿托伐他汀干预后巨噬细胞血红素氧合酶1蛋白表达增加,细胞转向M2型极化且主要分泌转化生长因子β、白细胞介素10等抗炎因子,同时,PPARγ、ABCA1、LC3II/I等反映胆固醇外排及自噬的信号分子表达增加,胞内胆固醇及脂滴含量均显著减少(P﹤0.05);④同步加入锌原卟啉Ⅸ预处理的血红素氧合酶1抑制组则显著逆转了阿托伐他汀组的上述改变;⑤结果表明,阿托伐他汀可能通过上调血红素氧合酶1的表达促进氧化修饰型低密度脂蛋白刺激的巨噬细胞向M2型极化、抑制炎症,并通过上调PPARγ/ABCA1信号通路和增强自噬等增加胞内胆固醇流出,降低细胞内脂质蓄积。

脂氧合酶基因LOX6克隆及其表达与鲜切芋头褐变的相关性

细胞膜脂质过氧化是引起鲜切果蔬褐变的重要原因,脂氧合酶(LOX)在膜脂过氧化反应中具有重要作用。为探究脂氧合酶基因LOX6表达与鲜切芋头褐变的相关性,本研究以芋头球茎cDNA为模板,克隆了LOX6基因的cDNA全长序列,并分析了其在鲜切芋头褐变过程中的表达模式。结果表明,芋头LOX6编码序列全长2 751 bp,编码916个氨基酸残基。不同植物LOX6氨基酸序列之间的相似性不是很高,芋头LOX6与同属天南星科的马蹄莲ZaLOX6的亲缘关系最近。随着鲜切芋头褐变加重,LOX6表达量逐渐增加,LOX6表达水平与褐变指标△E呈显著正相关(R2=0.72);外源香草酸处理显著抑制鲜切芋头褐变,且显著下调LOX6基因的表达。表明LOX6表达与鲜切芋头褐变具有明显相关性,抑制其表达可抑制鲜切芋头褐变。LOX6基因启动子中含有丰富的逆境响应相关元件,表明鲜切处理诱导LOX6表达可能是促进鲜切芋头褐变的重要原因。本研究结果可为不易褐变的芋头品种培育提供重要的基因资源,并为优化鲜切芋头褐变防控技术提供帮助。

血红素氧合酶1基因-413A/T位点多态性与血脂异常个体冠心病患病风险密切相关

目的检测血红素氧合酶1基因启动子区-413A/T位点多态性,阐明血红素氧合酶1基因多态性与冠心病易感性的关联。方法选择经冠状动脉造影确诊的冠心病患者200例为病例组,冠状动脉无明显狭窄、年龄、性别与病例组相仿的120例个体为对照。启动子区直接测序方法检测-413A/T单核苷酸多态性基因型。以冠心病危险因素作为协变量,统计血红素氧合酶1基因-413A/T位点多态性与冠心病的相关性。结果研究人群-413位点为单核苷酸多态性位点,且携带TT基因型的血脂异常患者冠心病患病风险明显减少(校正后OR=0.179,95%CI=0.05～0.642)。结论血红素氧合酶1基因启动子区-413A/T可能是评价血脂异常个体冠心病易感性风险的重要标记。

脂蛋白脂酶基因和对氧磷酶1基因联合作用与脑梗死发病的相关性

目的探讨脂蛋白脂酶(LPL)、对氧磷酶1(PON1)基因联合作用与脑梗死发病的相关性。方法选取LPL基因2个SNP和PON1基因2个标签SNP,采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术,对705例脑梗死患者和431例对照组人群进行检测,应用UNPHASED软件、等位基因条件分析的方法,分析基因的联合作用与脑梗死的相关性。结果 LPL基因rs328位点G等位基因分布在动脉粥样硬化性脑梗死组与对照组差异显著(χ2=4.83,P=0.034,OR=1.47,95%CI=1.03～2.13);rs326位点G等位基因分布在动脉粥样硬化性脑梗死组与对照组差异显著(χ2=3.597,P=0.047,OR=1.64,95%CI=1.12～1.84);PON1基因上的rs2299262位点与LPL基因上的rs328位点联合作用与脑梗死的发病具有相关性(χ2=6.26,df=2,P=0.043)。结论 LPL基因rs328位点G等位基因携带者患大动脉粥样硬化性脑梗死的风险高于非携带者。LPL基因rs326位点G等位基因携带者患大动脉粥样硬化性脑梗死的风险高于非携带者。PON1基因上的rs2299262位点与LPL基因上的rs328位点联合作用与脑梗死的发病具有相关性。

脂氧合酶基因家族成员与果实成熟衰老研究进展

综述了LOX在果实成熟衰老进程中的最新研究进展,主要包括LOX与乙烯合成、果实软化、香气物质合成以及LOX基因家族成员的表达和功能研究。

基于EST库的猕猴桃脂氧合酶基因家族成员的克隆

利用猕猴桃EST库及相关生物信息学手段,从果肉组织克隆了LOX基因家族成员6个,命名为AdLox1-6。AdLox1、AdLox2、AdLox3和AdLox4为全长cDNA,编码区长度分别为2739、2595、2739和2709bp,AdLox5和AdLox6为cDNA片段,长度为1359和1557bp。猕猴桃AdLox2和AdLox5氨基酸序列同源性最高,约74%,而AdLox3和AdLox5仅为49%。生物信息学分析表明,AdLox1、AdLox3、AdLox4和AdLox6可能具有13-LOX活性,在N端含有额外约60个氨基酸残基,而AdLox2和AdLox5则属于9-LOX类型。猕猴桃AdLox1与番茄TomLoxD具有最高氨基酸序列同源性(约80%),AdLox2和AdLox5与TomLoxA高度聚类,序列同源性分别为68%和75%,AdLox4和AdLox6与TomLoxC的氨基酸序列同源性分别为62%和63%,AdLox3与番茄LOX基因序列同源性低于55%。

油茶脂氧合酶基因全长cDNA的克隆与序列分析

为深入了解脂氧合酶基因在油茶果实成熟过程中的功能及其对油茶油脂品质的影响,本研究以油茶种子的转录组数据库中的脂氧合酶基因(lipoxygenase,LOX)的部分cDNA序列为基础,采用RT-PCR和RACE技术从油茶种子中克隆到此基因的全长cDNA,并其进行了序列分析。该基因全长cDNA为2 698 bp,包括5’非编码区161 bp、3'非编码区131 bp以及一个长2 406 bp的编码区和16 bp的polyA尾巴。该基因编码蛋白质的分子量约为91.65 kDa,等电点为5.255。同时该蛋白二级结构以α-螺旋为主,具有跨膜结构,主要分布在细胞内的叶绿体和细胞质中。经过比对分析,发现油茶LOX基因序列与其他物种LOX基因同源性较高,其编码的氨基酸序列与茶树、葡萄、辣椒、马铃薯的LOX氨基酸序列的同源性高达99%,与油橄榄、烟草、番茄、猕猴桃同源性达到了98%。

黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2的克隆及表达分析

【目的】以华北型黄瓜种质26号为材料克隆黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2的cDNA全长并分析其序列特征,在此基础上研究该基因在果实发育进程中的表达模式、酶活性变化及相应的C6醛类物质含量,为研究脂氧合酶基因在黄瓜果实醛类香气物质形成中的作用机制奠定基础。【方法】以华北型黄瓜种质26号为材料,通过RT-PCR和RACE技术克隆黄瓜的脂氧合酶基因CsLOX2的cDNA全长并分析其生物信息学特征,对CsLOX2在果实发育进程中的表达模式进行Real-time PCR检测,通过气质联用(GC-MS)技术测定相应的C6醛类香气物质的含量并利用分光光度法测定LOX酶活性。【结果】华北型黄瓜种质26号的CsLOX2基因cDNA全长2 878 bp,ORF区为2 640 bp,编码879个氨基酸,推导的蛋白质分子量为99.39 kD,等电点为6.28。通过氨基酸序列比对发现,该基因编码的氨基酸序列具有脂氧合酶家族的3个重要特征区域及植物LOX中皆具有的6个高度保守的组氨酸,该序列与其它物种的脂氧合酶氨基酸序列具有较高的同源性。根据其N端序列特征推测CsLOX2属于I类LOX,具有13-LOX活性。Real time-PCR分析结果表明,该基因在花后3 d表达量最高,此后下降,至花后15 d最低;脂氧合酶的活性自开花当天逐渐上升,至花后12 d达到最高,此后下降;C6醛类香气含量在果实发育始期较高,随果实发育进程逐渐下降,至花后12 d最低。【结论】利用RACE技术克隆了华北型黄瓜种质26号脂氧合酶基因CsLOX2的cDNA全长,序列分析表明该基因具有植物LOXs的特征结构域。CsLOX2基因表达高峰先于脂氧合酶活性高峰的出现,C6醛类香气含量在果实发育始期较高,随果实发育进程逐渐下降。该研究结果将为进一步探讨脂氧合酶基因在黄瓜果实醛类香气物质形成中的作用机制奠定基础。

猕猴桃成熟果实中脂氧合酶基因的克隆

采用ＰＣＲ扩增方法，从成熟猕猴桃果实组织中克隆到一个８２４ｂｐ的脂氧合酶（ＬＯＸ）基因片段（ｐＫＬＣ１），该片段含有２７５个氨基酸组成的开放阅读框架，它与拟南芥菜、黄瓜、豌豆、土豆、水稻、大豆、烟草和番茄的核苷酸同源性为５９．０％～７４．６％，氨基酸同源性为６３．１％～７６．３％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明，ｐＫＬＣ１片段为一低拷贝数基因家族所编码。

水稻脂氧合酶-3基因启动子的特性分析

从栽培水稻品种越光中克隆了水稻脂氧合酶-3基因(Lox-3)的启动子,长度为1343bp,其序列与日本晴对应的序列完全相同。生物信息学分析表明,该启动子序列中包含受信号诱导的元件(G-box)、温度响应元件(CCGAAA)和水分胁迫响应元件(CACATG)等顺式作用元件;进一步构建了Lox-3基因启动子与gus和gfp基因的融合表达载体并获得转基因植株,发现报告基因在转基因植株的根、茎、叶、花药、种胚及种皮中均有表达,在萌发种子的胚和胚芽中也有表达,但在胚乳中不表达。此外,经ABA、NaCl及人工陈化处理后对报告基因的表达进行了定量分析,发现这些非生物胁迫可能通过诱导启动子顺式元件致使报告基因表达活性增强。

红阳猕猴桃成熟过程中脂氧合酶基因的表达与香气成分变化关系的研究

研究了红阳猕猴桃在成熟过程中的香气成分变化,及脂氧合酶基因(Lipoxygenase,LOX,EC1.13.11.12)表达量的差异对香气成分的影响.通过测定白利糖度(Brix)表征红阳猕猴桃在成熟过程中的不同成熟度;采用顶空-固相微萃取/气相色谱-质谱联用仪对红阳猕猴桃在不同成熟阶段的香气成分进行分析;利用实时定量PCR技术测定LOX基因家族6个成员(AcLox1、AcLox2、AcLox3、AcLox4、AcLox5,AcLox6)的表达量并初步分析其与红阳猕猴桃香气成分变化之间的关系.结果表明,随着成熟度增加,主要香气成分酯类的含量显著增加,醇类和醛类成分的含量显著减少;AcLox1和AcLox5的表达量显著提高,而AcLox2、AcLox3、AcLox4、AcLox6的表达量则呈现下降趋势.

四川不同产区烟叶脂氧合酶活性及基因表达水平的差异

为烟叶香气物质形成机制的研究提供参考,以云烟87和红花大金元2个烤烟品种为试验材料,在四川6个产区采用田间试验研究烤烟旺长期、现蕾期和成熟期烟叶的脂氧合酶活性、基因表达量差异及其相关性。结果表明:在四川6个产区2个烤烟品种不同生育期的脂氧合酶活性及其基因相对表达量存在差异,但变化趋势相同,并多在现蕾期达最高,且各产区云烟87和红花大金元烤烟不同生育期烟叶的LOX酶活性差异多达显著水平。在旺长期和现蕾期云烟87烟叶LOX基因的相对表达量与LOX酶活性呈极显著正相关,相关系数分别为0.96和0.97;在成熟期呈不显著正相关,相关系数为0.14。在旺长期、现蕾期和成熟期红花大金元烟叶的LOX基因相对表达量与LOX酶活性均呈极显著正相关,相关系数分别为0.98、0.95和0.97。烟叶脂氧合酶活性与其基因相对表达量呈正相关关系,且在旺长期、现蕾期和成熟期其相关性均达到极显著水平。

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1从而负调控细胞因子分泌

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白（LAMP）能否诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1（HO-1），从而影响细胞因子的产生。方法体外培养胎盘滋养层细胞，用0．5—5wg／mLLAMP作用4-12h。实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子2（Nrf2）的核转位；2’，7’-二氯二氢荧光黄二乙酸酯（H2DCFDA）检测活性氧（ROS）产生；采用N-乙酰半胱氨酸（NAC）或Nrf2 siRNA处理滋养层细胞，观察其对HO-1表达的影响。采用HO-1的激动剂钴原卟啉（CoPP），抑制剂锌原卟啉（ZnPP）或HO-1 siRNA处理细胞，ELISA检测处理前后LAMP对诱导肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白细胞介素1β（IL-1β）分泌的影响。结果LAMP能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白表达，并能诱导其产生ROS以及促进Nrf2核转位。ROS抑制剂NAC预处理后，可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量。同时，Nrf2 siRNA转染后，HO-1表达显著减少。采用ZnPP处理滋养层细胞，或RNA干扰HO-1表达后，可促进LAMP诱导滋养层细胞分泌TNF—α和IL-1β，而CoPP处理能进一步降低TNF—α和IL-1β水平。结论LAMP能通过ROS／Nrf2诱导滋养层细胞表达HO-1，从而抑制细胞因子的过度分泌。

15-脂氧合酶-1在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并探讨15-LOX-1表达与胃癌临床病理因素的关系。方法采用RT-PCR、westernblot和免疫组织化学方法检测胃癌组织及相匹配的癌旁正常组织中15-LOX-1mR-NA和蛋白的表达。结果15-LOX-1mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。15-LOX-1蛋白表达水平与胃癌中肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期呈明显的负相关(P<0.05)。结论15-LOX-1蛋白可能对胃癌的发生发展有一定抑制作用。检测胃癌中15-LOX-1的表达情况对评估患者的预后可能具有意义。

脂多糖诱导大鼠主动脉血红素氧合酶-1表达及其对血管反应性的影响

目的 :探讨血红素 HO 1 CO cGMP通路对内毒素血症大鼠主动脉血管张力的影响及其分子机制。方法 :用离体血管环张力测定技术 ,观察静脉注射脂多糖 (LPS) 6h ,大鼠胸主动脉环 (TARs)对苯肾上腺素 (PE)累积收缩反应。分别用一氧化碳 (CO)供体正铁血红素 (He) ,血红素氧合酶 1 (HO 1 )抑制剂锌原卟啉 (ZnPP IX) ,鸟苷酸环化酶 (sGC)抑制剂亚甲兰 (MB)预孵育后 ,测定TARs对PE收缩反应的变化。分别测定主动脉中CO含量 ,HO 1活性 ,Westernblot测定HO 1蛋白含量 ,RT PCR检测HO 1mRNA表达的改变。结果 :LPS组TARs对PE累积收缩反应明显降低 ,ZnPP IX可部分逆转低收缩反应 ,MB可完全逆转低收缩反应 ,而用He可加重低收缩反应状态 ;LPS组动脉组织中CO的含量上升 ,HO 1活性、蛋白表达量和mRNA表达均明显增加。结论 :LPS可使主动脉HO 1基因表达上调 ,蛋白含量及酶活性明显增加 ,表明启动血红素 HO 1 CO cGMP通路 。

支原体脂肽经TLR2,6/c-Src/PI3K通路诱导单核细胞表达血红素氧合酶-1

目的:观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(Macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(Hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法:体外培养THP-1细胞,用不同浓度的MALP-2作用12 h,Western blot检测HO-1的表达。THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育,或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞,以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用;Western blot检测c-Src和Akt磷酸化情况,同时,分别采用c-Src siRNA或PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察c-Src及PI3K在HO-1表达中的作用。结果:MALP-2处理后可磷酸化c-Src,而TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,c-Src磷酸化水平显著降低;同时,c-Src siRNA可降低Akt磷酸化水平,而PI3K抑制剂LY294002处理后可明显降低HO-1的表达。结论:MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1,其机制可能受TLR2,6/c-Src/PI3K通路调控。