环氧合酶-2抑制剂对佐剂性关节炎大鼠胃黏膜的影响

目的 探究选择性环氧合酶(COX)-2抑制剂是否加重佐剂性关节炎大鼠胃黏膜损伤及其机制。方法 将32只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、关节炎组、正常给药组和关节炎给药组,给予选择性COX-2抑制剂塞来昔布灌胃4 w,取大鼠胃组织行苏木素-伊红(HE)染色损伤评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前列腺素(PG)E2,实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测COX-1、COX-2 mRNA。结果 与空白对照组比较,关节炎组、关节炎给药组胃黏膜PGE2均显著降低(P<0.05),胃黏膜损伤评分均显著增加(P<0.05);正常给药组胃黏膜PGE2、胃黏膜损伤评分与空白对照组比较无显著差异(P>0.05);关节炎组胃黏膜COX-1、COX-2均较空白对照组显著增加(P<0.05),正常给药组胃黏膜COX-1、COX-2与空白对照组相比均无显著差异(P>0.05);与关节炎组比较,关节炎给药组胃黏膜PGE2、COX-1、COX-2及胃黏膜损伤评分均无显著差异(P>0.05)。结论 在治疗剂量下,塞来昔布不会造成正常大鼠胃黏膜损伤,也不会加重佐剂性关节炎大鼠胃黏膜的损伤;佐剂性关节炎大鼠存在胃黏膜损伤;佐剂性关节炎大鼠胃黏膜损伤可能与黏膜局部PGE2下降相关,COX-1、COX-2表达增加可能与关节炎所致全身慢性炎症有关。

脂氧合酶抑制剂对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响。方法:在不同浓度的NDGA干预下对HepG2细胞进行体外培养;应用MTT比色法观察NDGA对HepG2增殖的影响;逆转录PCR(RT-PCR)测定不同浓度NDGA干预下丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1、MEK2、细胞外信号调节激酶(ERK)1、ERK2mRNA表达强度。结果:NDGA可抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性;NDGA干预后HepG2细胞中MEK1、MEK2、ERK1、ERK2mRNA的表达强度随着浓度的增加呈递减趋势;不同浓度NDGA干预均显著降低MEK1mRNA的表达强度(P<0.05),在NDGA干预浓度为100μmol/L及200μmol/L时可显著降低MEK2、ERK1、ERK2 mRNA表达强度(P<0.05)。结论:NDGA可抑制HepG2细胞增殖,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关。

5-脂氧合酶及其抑制剂

5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是生物体内一种重要的双加氧酶.5-LOX是催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)生成白三烯类(leukotrienes,LTs)的关键酶.LTs是重要的炎症介质,并且在许多疾病中发挥着重要作用.近年来,很多学者致力于5-LOX的研究,从而为5-LOX抑制剂的研发提供理论依据.本文对5-LOX的分子结构、细胞内定位、表达与活性调控及其抑制剂的研究进展进行综述.

环氧合酶-2和5-脂氧化酶双重抑制剂的研究进展

传统的非甾体抗炎药和选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂在治疗炎症过程中引发胃肠道及肾脏不良反应,制约了其临床应用。COX-2和5-脂氧化酶(5-LOX)双重抑制剂同时抑制前列腺素(PGs)和炎症介质白三烯类(LTs)的生物合成,比单一的抑制剂抗炎效果好、安全性高,是一类有发展前景的新型非甾体抗炎药。笔者简要介绍COX-2/5-LOX双重抑制剂的研究进展,并讨论其作用机制及构效关系。

酚类抑制剂抗5-脂氧合酶的分子对接研究

目的:研究抗5-脂氧合酶酚类抑制剂的结构活性关系及作用机制。方法:构建7个抗5-脂氧合酶阳性酚类抑制剂分子库,利用Autodock 4.2和iGEMDOCK 2.1软件包对受体与抑制剂进行模拟对接研究并计算结合自由能。结果:用Autodock 4.2、iGEMDOCK 2.1计算得到的结合自由能与抑制剂的抑制活性之间都存在良好的相关性,它们的决定系数(R2)依次为0.856 64和0.784 41,标准误差(SD)分别为0.430 92和5.323 35,P值分别为0.002 79和0.007 98;配体与受体之间形成的氢键在决定配体在受体活性部位的构象及定位中起重要作用,但两者结合的主要驱动力为范德华作用力;具有碳氧双键及与该双键共轭的碳碳双键的多环酚类化合物有较强的抗5-脂氧合酶活性。结论:Autodock 4.2比iGEMDOCK 2.1预测抗5-脂氧合酶酚类抑制剂的能力强;具有碳氧双键及与该双键共轭的碳碳双键的多环酚类化合物有较强的抗5-脂氧合酶活性。

脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞诱导凋亡机制研究

目的探讨脂氧合酶抑制剂NDGA体外诱导HT-29结肠癌细胞凋亡机制。方法RT-PCR检测NDGA处理后HT-29结肠癌细胞5-脂氧合酶信使核糖核酸(5-LOXmRNA)和端粒酶催化活性亚单位(hTERTmRNA)表达水平变化,激光共焦显微镜观察细胞内游离钙变化。结果结肠癌HT-29细胞5-LOXmRNA和hTERTmRNA呈阳性表达,随着NDGA药物浓度的增大,细胞凋亡率的上升,5-LOXm-RNA和hTERTmRNA表达水平逐步下降。细胞内钙浓度同步上升。结论NDGA诱导凋亡是多方面因素共同作用的结果,5-LOX、端粒酶、游离钙都可能参与其诱导凋亡的过程。

脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞诱导凋亡的研究

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、凋亡影响。方法: 应用MTT法绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞的超微结构变化, 检测凋亡小体;流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化。结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞凋亡率逐步上升,癌细胞阻滞于G0／G1期。应用扫描电镜可见凋亡小体形成。结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,凋亡率随药物浓度加大逐步升高。具有剂量依赖效应。

5-脂氧合酶抑制剂对黑色素瘤细胞产生金属蛋白酶的抑制作用

目的 观察 5 -脂氧合酶抑制剂对黑色素瘤细胞产生金属蛋白酶的作用。方法 以Transwellchamber测定a375细胞的侵袭性 ;以免疫酶联吸附及明胶酶谱法测定a375细胞产生MMP 2、MMP 9的量。结果 在 5～ 2 0 μmol·L-1 浓度范围内 ,5 脂氧合酶抑制剂NDGA、AA86 1和MK886剂量依赖性地降低a375细胞对人工基底膜的侵袭性 ,并剂量依赖性地抑制a375细胞产生MMP 2、MMP 9。结论 5 脂氧合酶抑制剂能抑制a375细胞产生金属蛋白酶 。

脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞VEGF和CD44V6表达影响的研究

目的探讨NDGA对乳腺癌MCF-7细胞VEGF和CD44V6表达的影响。方法将乳腺癌MCF-7细胞系培养至对数生长期,分别以0、1、10、100μmol/L的NDGA处理48h后,RT-PCR法检测细胞VEGFmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞CD44V6的表达情况。结果在1、10、100μmol/L的NDGA作用下,3组VEGFmRNA和CD44V6的表达显著低于对照组(F=2996.13,P<0.001;F=3435.08,P<0.001)。结论NDGA明显下调MCF-7细胞VEGFmRNA和CD44V6的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭转移能力。

脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶和bcl-2的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶和bcl-2表达的影响。方法:将乳腺癌MCF-7细胞系培养呈对数生长期,分别以0、1、10、100μmol/L的NDGA处理48h后,RT-PCR法检测细胞端粒酶hTERTmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞bcl-2的表达情况。结果:在1、10、100μmol/L的NDGA作用下,3组hTERTmRNA和bcl-2的表达均显著低于对照组(P〈0.001)。结论:NDGA能够下调MCF-7细胞端粒酶hTERTmRNA及bcl-2的表达,进而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。

芦笋保鲜技术研究及脂氧合酶抑制剂的保鲜应用初探

在冷藏加湿的基础上,通过对于芦笋贮藏过程中的失重率、叶绿素的含量,以及芦笋的木质化、散尖程度等感官指标的测定,比较了不同的处理方式对于芦笋的保鲜效果。在保持环境气体组成O210%、5%CO2的基础上,采用脱除乙烯和脂氧合酶抑制剂处理,可以有效保持芦笋的品质,延长货架期。

脂氧合酶抑制剂NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生物学特性的影响

目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长的影响。方法采用MTT比色法、群体倍增时间、HE染色、TUNEL染色法等观察和检测NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖与凋亡的影响。结果NDGA(5～100μmol/L)可显著抑制SK-N-SH细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。结论脂氧合酶抑制剂NDGA可于体外抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖,并诱导其凋亡。

环氧合酶/5-脂氧合酶双重抑制剂的研究进展

非甾体类抗炎药(NSAID)广泛用于各种炎症的治疗。长期使用经典的NSAID会产生严重的副作用,尤其是胃肠道副作用。为避免经典的NSAID的副作用,开发出了选择性COX-2抑制剂,但长期使用选择性COX-2抑制剂对心血管系统有副作用。COX/5-LOX双重抑制剂通过同时阻断炎症介质前列腺素和白三烯的形成,产生协同的抗炎作用,有望提高疗效,同时避免COX抑制剂引发的副作用。本文对COX/5-LOX双重抑制剂的抗炎镇痛作用机制,以及研究现状进行综述。

肝X受体激动剂对高脂载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉壁一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原和纤溶酶原激活物抑制剂1表达的影响

目的研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317对高脂载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉壁一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原、纤溶酶原激活物抑制剂1表达的影响。方法以高脂饲养载脂蛋白E基因缺陷小鼠为动脉粥样硬化模型,分为无药对照组、3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯干预组[10 mg/(kg.d)]和T-0901317干预组[10 mg/(kg.d)],每组6只小鼠,灌胃6周。用免疫组织化学SP法检测主动脉壁中诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原、纤溶酶原激活物抑制剂1蛋白的表达。结果药物干预的两组主动脉壁中诱导型一氧化氮合酶的表达均显著低于对照组(P<0.01),而血管内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶的表达均显著高于对照组(P<0.01)。各组增殖细胞核抗原和纤溶酶原激活物抑制剂1的表达无显著性差异(P>0.05)。结论肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317均可促进血管内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶的表达,抑制动脉壁中诱导型一氧化氮合酶的表达。提示肝X受体激动剂还可通过调脂以外的其它途径,如抑制炎症反应和保护内皮功能等方面,发挥其抗动脉粥样硬化作用。

5-脂氧合酶抑制剂对黑素瘤细胞黏附的作用

目的:研究5-脂氧合酶抑制剂对黑素瘤细胞a375黏附的作用。方法:体外培养人黑素瘤细胞a375,分别以环氧合酶抑制剂吲哚美辛,5-脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)、AA861及MK886孵育2 h,以光密度法测定a375细胞对细胞外基质蛋白的黏附,以流式细胞仪测定a375细胞整合素的表达,以双抗体夹心法测定a375细胞核因子NF-kB的含量。结果:吲哚美辛对a375细胞与细胞外基质蛋白黏附、细胞整合素表达及细胞核因子NF-KB含量没有明显影响。NDGA、AA861及MK886剂量依赖性地抑制a375细胞对Ⅳ型胶原的黏附及NF-kB活化,显著降低细胞整合素β1表达量。5-脂氧合酶抑制剂作用浓度为20 μmol/L时,NDGA、AA861、MK886处理组细胞黏附率分别为对照组的(52.3±11.7)％、(48.7±9.9)％、(50.8±8.4)V0,整合素β1表达量分别为55.3％、54.9％、47.6％,NF-KB活化率分别为67.7％、72.6％、58.3％,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:5-脂氧合酶抑制剂通过抑制黑素瘤细胞NF-kB活化,降低整合素β1的表达量,抑制a375细胞对Ⅳ型胶原的黏附。

脂氧合酶抑制剂抑制HepG2细胞增殖的研究

目的探讨脂氧合酶抑制刑对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞，应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞，利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成试验观察NDGA对HepG2细胞增殖的影响。结果NDGA对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用，不同浓度的NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27．34％、41．76％、57．08％和69．17％，其IC50值为109．13μmol／L。细胞克隆形成率分别为21．63％。17．33％，12．53％，7．97％，明显低于对照组的31．70％。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖。

脂氧合酶抑制剂的研究进展

脂氧合酶是一类广泛存在于动植物中的非血红素铁蛋白,其对内源性多不饱和脂肪酸双加氧作用产生的白三烯等生物活性因子和对外源化学物协同氧化酶活性的氧化活化产物,与人体的肿瘤、炎症、哮喘、动脉硬化等疾病以及化学物的毒作用密切相关。脂氧合酶抑制剂有异羟肟酸类、去甲二氢愈创木酸类、黄酮类和脂氧合酶激活蛋白抑制剂,他们均能有效地抑制脂氧合酶的代谢活性;研究证明这些抑制剂能抑制有关活性因子和毒性产物的产生,临床应用能防治有关疾病,保护人体健康。

新型5-脂氧合酶激活蛋白抑制剂的设计、合成及活性评价

设计、合成5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)抑制剂,并评价其活性。基于靶向FLAP蛋白结构采用计算机辅助药物设计,筛选并合成了一系列FLAP抑制剂,利用^(1)HNMR、^(13)CNMR和TOF-MS表征结构。通过酶联免疫双抗夹心法测定了其对FLAP的抑制活性,并计算半数有效抑制浓度(IC_(50))。设计了558个不同芳基、不同碳链长度的2,2-二甲基-5-烷基-5取代氨基-1,3-二氧六环衍生物,通过氧化反应、格氏反应、Appel反应、胺代反应合成11个化合物,经^(1)HNMR、^(13)CNMR和TOF-MS确认结构。酶抑制实验表明N-(3-甲氧基苄基)-2,2-二甲基-5-十八烷基-1,3-二烷-5-胺对FLAP的抑制活性强于阳性药MK-591(IC_(50)=^(13).78 nmol/L),其IC_(50)达到10.52 nmol/L,具有发展成为FLAP抑制剂的潜力。合成的新型FLAP抑制剂表现出对FLAP较强的抑制作用,在炎症相关疾病的治疗中有潜在应用价值。

SGLT-2抑制剂通过Nrf2/HO-1信号通路对2型糖尿病合并高血压大鼠动脉重构的干预作用

目的探究钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)-2抑制剂通过核因子-E2相关因子(Nrf)2/血红素氧合酶(HO)-1信号通路对2型糖尿病合并高血压大鼠基底动脉重构的干预作用。方法用自发性高血压大鼠(SHR)高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病合并高血压大鼠模型,造模成功后分为对照组、模型组和试验组各15只,实验组采用1 mg/(kg·d)达格列净灌胃,模型组和对照组给予等量生理盐水灌胃。8 w后血糖仪检测各组血糖水平,苏木素-伊红(HE)染色检测各组基底动脉病理情况,免疫荧光法检测基底动脉核增殖指数(Ki67)表达水平,Western印迹检测点各组基底动脉Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组血糖显著升高,基底动脉动脉血管壁厚管腔内径管腔外径和中膜面积均明显增加,Ki67表达显著增加,基底动脉平滑肌细胞排列紊乱,出现线粒体空泡化等现象,Nrf2及HO-1表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,试验组血糖水平下降,基底动脉动脉血管壁厚管腔内径管腔外径和中膜面积均明显降低,Ki67表达水平显著降低,超微结构病理学结构有所好转,Nrf2及HO-1表达水平显著上升(P<0.05)。结论SGLT-2抑制剂可以对2型糖尿病合并高血压大鼠基底动脉重构发挥干预作用,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路的调控相关。

12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素对软骨细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法取8周雄性SD大鼠膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法提取软骨细胞并体外培养。设置对照组、SNP凋亡组和Baicalein给药组,以0.5 m M SNP作用24小时诱导软骨细胞凋亡,以5 M,25 M,50 M,100 M不同浓度的Baicalein作用细胞,确定最适浓度,对照组仅加入同体积溶剂(蒸馏水)。CCK8法检测药物对细胞毒性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫荧光观测凋亡诱导因子(AIF)在软骨细胞中的定位。结果 Baicalein在各浓度下对软骨细胞无明显毒性,与对照组相比,凋亡组软骨细胞活性明显下降(<0.01),与凋亡组相比,给药组细胞活性浓度依赖性地升高(<0.01);流式检测显示对照组软骨细胞早期凋亡率3.16%,凋亡组27.8%,100 M Baicalein给药组14.1%;免疫荧光检测显示,凋亡组AIF出现核内移位,100 M Baicalein给药组AIF核移位受到抑制。结论 Baicalein通过抑制12/15-脂氧合酶活性,进而抑制AIF从线粒体中的释放及核转位,发挥抗软骨细胞凋亡作用。