剑尾鱼卵黄脂磷蛋白的纯化及免疫分析

采用Sephacryl S-300凝胶过滤层析柱和HiTrap Q阴离子交换柱从卵黄生成期的雌性剑尾鱼（Xiphophorus helleri）卵巢组织提纯了卵黄脂磷蛋白（Lv）。已确定被纯化的剑尾鱼Lv在Native-PAGE（4％～7．5％）电泳中分子量为530kD左右。Native-PAGE（4％～7．5％）电泳后的凝胶分别进行糖蛋白染色、脂蛋白染色及磷蛋白染色。结果表明，剑尾鱼Lv是一种富含糖、脂、磷的蛋白。用纯化的剑尾鱼Lv免疫大白鼠获得鼠源多克隆抗血清。用免疫双扩散的方法测定Lv抗血清的效价为1：32。Western-blotting检测显示抗血清的特异性较好；卵黄蛋白原（Vtg）和Lv抗血清之间存在明显的免疫交叉反应，表明Vtg和Lv两者具有相同的免疫原性。免疫双扩散检测表明，抗Lv血清表现出明显的雌性特异性和种的特异性。

唐鱼卵黄脂磷蛋白的纯化鉴定与免疫原性分析

采用Native-PAGE和SDS-PAGE方法从性成熟雌性唐鱼（Tanichthys albonubes）卵巢组织提纯了卵黄脂磷蛋白（Lv）．已确定被纯化的唐鱼Lv在Native-PAGE（4％～7．5％）电泳中分子量（Mr）为314×10^3．用纯化的唐鱼Lv免疫大白鼠获得鼠源多克隆抗血清．以Native-PAGE和SDS-PAGE制备的唐鱼Lv及裂解后的组分作为抗原所制备的抗血清，与经17β-雌二醇（E2）诱导的雄性唐鱼、去除卵巢的雌性唐鱼以及唐鱼卵巢的匀浆液能发生免疫反应，并且印迹位置与雌性特异蛋白卵黄蛋白原（Vtg）的位置相当．但是两种血清和未经E2诱导的雄鱼整体匀浆液并无反应，显示Lv及其大分子亚基的抗血清与Vtg和Lv两种蛋白足特异的．结果表明，唐鱼Lv裂解组分的抗血清可用于检测唐鱼的Vtg．

瓦氏黄颡鱼卵黄脂磷蛋白(Lv)的纯化、性质鉴定及其抗血清的研制

采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从瓦氏黄颡鱼Ⅳ期卵巢粗提液中分离、纯化出卵黄脂磷蛋白(Lv),采用糖、磷、脂蛋白染色技术验证分离、纯化的蛋白为Lv,该Lv在非变性条件下分子量约为230ku,在SDS变性条件下分子量约为106ku。纯化的瓦氏黄颡鱼Lv经检测显示含有类胡萝卜素,但没有二硫键,对热相对稳定。利用纯化的瓦氏黄颡鱼Lv,制备了兔抗瓦氏黄颡鱼Lv多克隆抗血清。通过双向免疫扩散法测得Lv抗血清的效价为1∶32,还发现瓦氏黄颡鱼卵黄蛋白原(Vtg)和Lv之间有明显的免疫交叉反应性,说明两者具有相同的免疫原性;Western-blotting检测显示抗血清的特异性较好,并能特异性地识别Vtg。

黑龙江茴鱼卵黄脂磷蛋白分离纯化及抗血清的研制

采用SephadexG-200凝胶过滤层析法,对黑龙江茴鱼卵黄蛋白粗提液进行分离纯化,层析洗脱共得到3个蛋白峰。用聚丙烯凝胶电泳、免疫扩散等方法研究表明:黑龙江茴鱼卵黄蛋白(Yolk protein)含有分子量分别为567.2,486.3,157.5 kDa的3种蛋白,由分子量分别为80.7,68.7,46.8,39,30,20.9,16.7,14.9,14.1 kDa的9个蛋白亚基组成;峰2蛋白为卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin,Lv),分子量为486.3 kDa,由分子量为80.7,30,14.9,14.1 kDa的4个蛋白亚基组成;纯化的黑龙江茴鱼Lv免疫新西兰大白兔获得兔源多克隆抗血清,用免疫扩散的方法测定Lv抗血清效价为1∶64;免疫双扩散检测表明,抗Lv血清表现出明显的雌性特异性。

中华鲟卵黄脂磷蛋白的分离纯化及性质分析

采用Sephacryl S-300凝胶过滤和DEAE Fast Flow阴离子交换两种层析法分离纯化中华鲟(Acipenser sinensis)卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv),对每个峰进行SDS-PAGE电泳及油红O、甲基绿和Schiff试剂特异染色,峰Ⅱ蛋白均呈阳性,表明峰Ⅱ蛋白为中华鲟卵中的一种卵黄脂磷蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明其由一种分子质量为43.5 ku的亚基构成。对中华鲟Lv氨基酸组成进行研究,证明其是一种含有相对较多天冬氨酸、谷氨酸、缬氨酸和亮氨酸的蛋白。

西伯利亚鲟卵黄脂磷蛋白的分离纯化及性质

卵黄是鱼类胚胎发生期的主要营养物质,卵黄的含量和质量对于早期幼体维持生命和生长发育至关重要。本研究采用Sephacryl S-300凝胶过滤层析法和蛋白质电泳技术分离纯化西伯利亚鲟(Acipenser baerii)卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv),层析洗脱共得到7个蛋白峰。对每个峰进行SDS-PAGE电泳及油红O、甲基绿和Schiff试剂特异染色,峰b蛋白均呈阳性,表明峰b蛋白为西伯利亚鲟卵中的一种卵黄脂磷蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,其由3个亚基构成,相对分子质量分别为30.6ku、40.8ku和76.7ku。对西伯利亚鲟Lv氨基酸组成进行分析,证明是一种含有相对较多天冬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、丝氨酸、缬氨酸和亮氨酸的蛋白,并且所含鲜味氨基酸含量比其他鱼偏高。

尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白的分离纯化与性质鉴定

采用Sephacryl S-300过滤层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析相结合的方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)成熟卵子匀浆液中分离纯化出了一种高分子量的蛋白。该蛋白能被Schiff试剂、甲基绿和苏丹黑B着色,Western blot显示能被金鱼卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)多克隆抗血清特异性识别,在非变性条件下分子量约为560 k D,在SDS变性条件下分子量约为112 k D,结果表明分离纯化的蛋白是一种含有糖、磷、脂基团的蛋白,符合鱼类Lv的性质,且与金鱼Lv有免疫交叉反应,从蛋白的性质和免疫原性以及分子量大小等角度判断,本研究获得的高纯度蛋白为尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白;纯化的罗非鱼Lv在反复冻融、37℃及60℃处理条件下均未出现降解,表明罗非鱼Lv比鱼类卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vtg)更为稳定。研究结果为罗非鱼Lv抗体的制备奠定了基础。

鲫卵黄脂磷蛋白的纯化鉴定及其夹心ELISA的建立

鲫(Carassius carassius)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vtg)是检测水体环境雌激素活性常用的生物标志物。本研究利用凝胶过滤结合离子交换层析与选择性沉淀结合离子交换层析2种方法,从鲫卵巢匀浆液中纯化得到了卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv),经鉴定该蛋白含有糖、磷、脂基团,天然分子量约为521 kD,SDS变性电泳显示分子量为117 kD和103 kD的2个亚基。Western blot结果显示,金鱼(Carassius auratus)Lv抗体和斑马鱼(Danio rerio)Lv抗体都能与鲫Lv发生很好的交叉反应。利用纯化的鲫Lv与金鱼Lv抗体和斑马鱼Lv抗体建立了2种夹心ELISA,发现金鱼Lv和鲫Lv的结合曲线基本重合,并且利用鲫Lv与金鱼Lv抗体建立的夹心ELISA工作范围为15.6~1000 ng/mL,检出限约为6.8 ng/mL,显著低于利用斑马鱼Lv抗体建立的夹心ELISA,结合此前研究者建立的鲫Vtg竞争ELISA,为鲫Vtg指标的测定提供了可靠方法。

斑马鱼卵黄脂磷蛋白在早期胚胎中促进L1-ORF2诱导的EGFP报告基因表达

为了探讨长散布核元件-1(long interspersed nuclear element-1,L1)在胚胎早期高表达的分子机制,将人L1的第二个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)(L1-ORF2,该文中简称ORF2),插入到pEGFP-C1质粒(C1)的EGFP基因下游,生成C1-ORF2表达载体,插入的ORF2可以影响EGFP报告基因的表达。将C1-ORF2等表达载体注射到斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎中,结果表明,在所使用的表达载体中,只有插入ORF2的表达载体诱导EGFP报告基因高表达。C1-ORF2表达载体诱导的EGFP荧光强度随着胚胎的发育而显著降低。EGFP荧光报告蛋白在C1-ORF2中的表达受到组蛋白的抑制,0 h胚胎溶卵液(简称胚胎溶卵液)能减弱组蛋白对EGFP表达的抑制作用,从胚胎溶卵液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)的作用强于胚胎溶卵液。凝胶阻滞实验表明,ORF2 DNA能与胚胎溶卵液蛋白、组蛋白和Lv结合。改变组蛋白、Lv和ORF2片段三者的添加顺序,结果证明Lv可以结合ORF2片段和组蛋白,从而干扰组蛋白与ORF2的结合。进一步研究发现,Lv增加了C1-ORF2 DNA对DNase I消化的敏感性。该研究获得以下结论:Lv可以与所有检测的DNA片段结合,但与ORF2的结合比与其他DNA片段的结合亲和力更高。Lv通过提高ORF2 DNA染色质的易接近性,激活ORF2诱导的斑马鱼早期胚胎EGFP基因的表达。

卵黄脂磷蛋白通过网格蛋白介导的内吞作用进入培养的人成纤维细胞

为了探究从斑马鱼(Danio rerio)胚胎裂解液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)进入培养的人成纤维细胞的分子途径,该研究用Sephadex G-200色谱柱结合QAE-Sephadex A50阴离子交换色谱柱从斑马鱼0 h胚胎裂解液中分离纯化出Lv。FITC标记的Lv(FITC-Lv)预先分别与Hepes、牛组蛋白、鱼精蛋白、卵磷脂、0 h胚胎胰蛋白酶水解物或者斑马鱼胚胎裂解液孵育,再加入至opti-MEM培养基中培养人成纤维细胞,培养一定时间后,用荧光倒置显微镜观察,发现Hepes和组蛋白可以促进Lv进入细胞。制霉菌素是陷窝介导的内吞作用(caveolae-mediated endocytosis)的抑制剂,氯丙嗪和蔗糖是网格蛋白介导的内吞作用(clathrin-mediated endocytosis)的抑制剂,阿米洛利是巨胞饮作用(macropinocytosis)的抑制剂。为了证实Lv进入细胞的分子途径,在FITC标记Lv与人成纤维细胞的培养体系中,分别加入上述抑制剂。结果发现氯丙嗪和蔗糖可以抑制Lv进入细胞。该研究获得如下结论:纯化的斑马鱼Lv单独不能进入细胞,在组蛋白的协同作用下,Lv通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞。该研究将为进一步研究Lv进入细胞发挥生物学功能奠定基础。

脂蛋白相关磷酯酶A2在急性脑血栓形成诊断中的价值

目的探讨脂蛋白相关磷酯酶(Lp-PL)A2对急性脑血栓形成(CT)的诊断价值。方法选取通过病史、症状和体查拟诊为疑似脑CT患者115例,再采用诊断金标准分为脑CT(65例)和非脑CT组(50例),所有研究对象均采用,ELISA法测定Lp-PLA2,采用循证检验医学的方法统计各诊断价值性能指标。结果脑CT组Lp-PLA2为(250.6±145.6)ng/ml,较非脑CT组〔(152.9±59.0)ng/ml〕浓度非常显著升高(P<0.001)。Lp-PLA2对脑CT具有最高诊断效率的诊断界值为173.5 ng/ml,在该界值的诊断灵敏度为67.7%,特异性为84.0%,阳性预测值84.6%,阴性预测值66.7%,阳性似然比4.23,阴性似然比0.38,诊断效率74.8%。根据拟诊率50.5%,计算获得Lp-PLA2对脑CT的诊断概率81.2%,误诊概率18.8%,漏诊概率27.8%,排除概率72.2%。结论单一指标Lp-PLA2对急性脑CT的诊断价值为中等。

冠状动脉狭窄患者血浆脂蛋白相关性磷脂酶A_2相关因素分析

目的探讨冠状动脉狭窄患者血浆脂蛋白相关性磷脂酶A_2(Lp-PLA_2)水平升高的影响因素。方法选择2015年10月至2017年5月该院收治的具有心绞痛且怀疑冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者263例,根据冠状动脉造影结果分为对照组(无狭窄或狭窄程度小于20%,35例)、粥样硬化组(主要冠状动脉狭窄程度20%～<50%,21例)、单支病变组(狭窄程度大于或等于50%的单支病变,66例)、双支病变组(狭窄程度大于或等于50%的双支病变,46例)和三支病变组(狭窄程度大于或等于50%的三支或三支以上病变,95例)。分析Lp-PLA_2水平与CHD危险因素血脂、脂蛋白及血糖等的相互关系。结果从冠状动脉狭窄单支病变开始Lp-PLA_2水平显著增加,与Lp-PLA_2呈正相关的因素为患者年龄、载脂蛋白B(ApoB)、血糖(r=0.155、0.179、0.260,P=0.025、0.003、0.001),与Lp-PLA_2呈负相关的因素为高密度脂蛋白胆固醇、ApoA1、游离三碘甲状腺原氨酸(r=-0.264、-0.312、-0.332,P=0.001、0.001、0.007);年龄、ApoB与Lp-PLA_2独立相关(B=2.85、123.67,Beta=0.315、0.275,P=0.026、0.026)。结论从冠状动脉狭窄单支病变开始LpPLA_2水平显著增加,且与患者年龄和ApoB独立相关。

脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病关系的Meta分析

目的对脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病的相关性进行Meta分析。方法制定文献的纳入标准及检索策略,计算机检索PubMed、ElsevierSDOS系统、外文医学核心期刊、维普中文科技数据库、万方数据库和中国期刊全文数据库中的文献,收集脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病相关性的病例对照研究,剔除不符合要求的文献,应用STATA10.0和RevMan5.0软件进行Meta分析。结果共7篇文献符合纳入标准,包括6718例病例和3824例对照。Meta分析结果显示脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V位点VV/AA和VA/AA与冠心病的关系的合并OR值(95%CI)分别为0.98(0.66～1.46)和0.98(0.89～1.07),均无统计学意义(P>0.05)。按种族进行分组后,亚洲人群和欧洲人群脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V位点VV/AA与冠心病易感性的关系研究的合并OR值(95%CI)分别为1.15(0.50～2.61)和0.89(0.68～1.17),均无统计学意义(P>0.05);亚洲人群和欧洲人群VA/AA与冠心病易感性的关系研究的合并OR值(95%CI)分别为1.11(0.96～1.27)和0.88(0.66～1.18),无统计学意义(P>0.05)。结论根据目前研究结论 ,未发现脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病易感性有关。

老年急性脑梗死患者血浆脂蛋白相关磷酯酶a2水平变化及其临床意义

目的探讨通过检测血浆脂蛋白相关磷酯酶a2(Lp-LPA2)的水平变化评价老年急性脑梗死患者的病情。方法选取2011年1月至2013年1月在该院入院治疗的103例老年急性脑梗死患者作为观察组,选取91例健康老人作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定两组的血浆Lp-LPA2水平。采用Spearman相关分析老年急性脑梗死患者的血浆Lp-LPA2水平与神经功能缺损评分(NIHSS)评分的关系。再根据梗死体积将患者分为大体积梗死、中体积梗死和小体积梗死3个亚组患者,以及根据患者的神经功能损伤程度将患者分为重度神经损伤、中度神经损伤和轻度神经损伤三个亚组。再分别分析血浆Lp-LPA2与梗死体积和神经功能损伤程度的相关性。结果急性脑梗死患者的血浆Lp-LPA2水平明显高于对照组(P<0.05);各亚组血浆脂蛋白相关Lp-LPA2水平也存在显著性差异(P<0.05)。结论老年急性脑梗死患者的血浆Lp-LPA2水平明显高于健康时的水平,可通过测定血浆脂蛋白相关磷酯酶a2的水平帮助判定患者的病情。

脂蛋白相关磷酯酶A2、D二聚体、C反应蛋白及外周血嗜中性粒细胞绝对值联合检测对急性脑血栓形成的诊断价值

目的：探讨脂蛋白相关磷酯酶A2（Lipoprotein Associated Phospholipase A2,Lp-PLA2）、D二聚体（D Dimer,DD）、高敏C-反应蛋白（Hypersensitive C Reative Protein,hsCRP）、外周血嗜中性粒细胞绝对值（Neutrophils Absolute Value，Neu）联合检测对急性脑血栓形成（Cerebral Thrombosis，CT）的诊断价值。方法：选取2014年1月至2014年8月佛山市第二人民医院神经内科/外科门诊初诊患者,通过病史、症状和体查拟诊为疑似脑CT患者，再采用诊断金标准将疑似患者（研究对象）确诊分为脑CT（65例）和非脑CT组（50例）。LP-PLA2测定用双抗体夹心ELISA法，DD和hsCRP测定用免疫比浊法，Neu测定用血细胞分析仪法。采用循证检验医学的方法统计各联合指标的诊断价值性能指标。结果：脑CT组Lp-PLA2、DD的ln值、hsCRP的ln值及Neu明显高于非脑CT组[（250.62±145.60）ng/ml vs （152.94±59.01）ng/ml；（2.84±0.33）ng/ml vs （2.06±0.26）ng/ml；（0.55±0.22）mg/l vs （0.24±0.08） mg/l；（4.23±2.05）＆#215;10-9/L vs （3.02±1.38）＆#215;10-9/l，P〈0.05]。Lp-PLA2、DD、hsCRP和Neu对脑CT具有最高诊断正确率的诊断界值分别为173.5ng/ml、330.0ng/ml、1.99mg/ml和3.27＆#215;109/L，依据指标联合诊断价值四格表获得指标并联和串联的各诊断价值参数，4指标并联灵敏度95.4%（漏诊率4.6%）为最高，4指标串联特异性98.0%（误诊率2.0%）为最高，综合考虑单一指标的检测成本和操作方便性，DD和Neu并联灵敏度90.8%（漏诊率9.2%）为最佳，DD和hsCRP串联的特异性94.0%（误诊率4.0%）为最佳。结论：在目前所选择研究指标中,DD＋Neu并联是最佳脑CT筛查联合指标，DD＋hsCRP串联是最佳脑CT确诊联合指标。

烧伤脓毒症患者危险因素及脂蛋白相关磷酯酶过氧化脂质预测价值分析

目的探讨烧伤脓毒症患者的危险因素,并分析研究血清脂蛋白相关磷酯酶A2(Lp-PLA2)、过氧化脂质(LPO)对烧伤脓毒症患者预后的临床意义。方法采用前瞻性研究方法,选取2013年1月至2016年12月烧伤患者163例作为病例组,依据烧伤脓毒症诊断标准分为脓毒症组(51例)和非脓毒症组(112例);脓毒症患者根据其预后情况分为存活组(33例)和死亡组(18例),同时选取沦州市人民医院同期健康体检的人群作为对照组(80例)。通过单因素及多因素Logistic回归分析探讨烧伤患者并发脓毒症的危险因素。入院时检测研究对象的血清Lp-PLA2和LPO水平,通过受试者工作特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)评价血清Lp-PLA2和LPO在烧伤脓毒症患者预后评估中的作用。结果烧伤体表总面积(TBSA,OR=1.72,95%CI1.15~2.54)、Ⅲ度烧伤面积(OR=2.46,95%CI1.65~3.42)、入院时间(OR=1.18,95%CI1.16~1.22)、吸入性损伤(OR=6.79,95%CI2.30~11.36)是烧伤合并脓毒症的危险因素。对照组患者血清Lp-PLA2、LPO水平分别为(123.8±39.6)ng/mL、[5.2(4.7,6.0)]nmol/mL,病例组患者血清Lp-PLA2、LPO水平分别为(289.5±50.7)ng/mL、[8.1(6.7,16.6)]nmol/mL,病例组患者血清Lp-PLA2、LPO水平高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组患者血清Lp-PLA2、LPO水平分别为(353.1±66.5)ng/mL、[13.8(9.2,19.6)]nmol/mL,非脓毒症组患者血清Lp-PLA2、LPO水平分别为(266.3±45.6)ng/mL、[7.4(5.9,14.2)]nmol/mL,脓毒症患者血清Lp-PLA2、LPO水平高于非脓毒症组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);存活组患者血清Lp-PLA2、LPO水平分别为(336.7±61.4)ng/mL、[10.9(7.1,16.3)]nmol/mL,死亡组患者血清Lp-PLA2、LPO水平分别为(380.9±70.2)ng/mL、[15.7(9.8,22.1)]nmol/mL,存活组患者血清Lp-PLA2、LPO水平低于死亡组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清Lp-PLA2、LPO和两者联合检测烧伤脓毒症患者预后的曲线下面积分别为0.820、0.689、0.872,敏感度分别为0.778、0.833、0.833,特异度分别为0.758、0.545、0.818。结论烧伤体表总面积、Ⅲ度烧伤面积、入院时间、吸入性损伤是烧伤合并脓毒症的危险因素。血清Lp-PLA2、LPO对烧伤脓毒症患者预后具有一定的判断价值,但两者联合检测的效果优于单独检测。

血清HCY、sd-LDL及脂蛋白相关磷酯酶A2检测在缺血性脑卒中的临床应用价值分析

目的分析血清HCY、sd-LDL及脂蛋白相关磷酯酶A2联合检测对诊断缺血性脑卒中患者的临床价值。方法选取2020年1月—2021年1月在该院住院治疗的缺血性脑卒中患者约200例作为实验组,并选择同期进入该院体检的200名健康人群作为对照组,并对两组患者进行检测,最终评估两组患者血清HCY、sd-LDL及脂蛋白相关磷酯酶A2联合检测的诊断情况。结果实验组患者的血清HCY为(16.54±1.24)μmol/L、sd-LDL为(110.64±21.64)mg/dl、脂蛋白相关磷酯酶A2为(198.67±6.45)μg/L;对照组患者的血清HCY为(12.34±1.35)μmol/L、sd-LDL为(91.24±14.34)mg/dl、脂蛋白相关磷酯酶A2为(96.65±7.54)μg/L,实验组数值均高于对照组,差异有统计学意义(t=32.403、10.568、145.406,P<0.05)。结论对缺血性脑卒中患者检测血清HCY、sd-LDL及脂蛋白相关磷酯酶A2,可以帮助医生更好地诊断患者的实际情况,且缺血性脑卒中患者的各项指标均显著高于正常数值,其具有较高的临床使用价值。

唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法的建立

目的探索建立唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法。方法以卵黄脂磷蛋白(Lv)抗血清为抗体,以纯化的Lv作为抗原建立间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测雄性唐鱼(Tanichthys albonubes)整体匀浆液中的卵黄蛋白原(Vtg)。结果利用ELISA方法测定了经17-β雌二醇(E2)和不同浓度DDTs暴露21 d诱导的雄鱼整体匀浆液中的Vtg含量,可以直接在1块或在不同的酶标板上准确地进行比较。经0.055 mg/mL E2诱导的雄鱼整体匀浆液中Vtg含量为4148.33μg/g;当暴露DDTs浓度为0.0275、0.0137和0.0067 mg/mL时,雄鱼整体匀浆液中Vtg含量分别为1109.43、911.16和1322.79μg/g,与丙酮溶剂对照组462.79μg/g比较差异存在显著性(P<0.05)。结论建立了唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法 ,本方法的检测灵敏度为8.1 ng/mL,批内误差为8.59%,批间误差为6.28%,工作范围为3.26～209.25 ng/mL。在该范围内,标准曲线具有良好的线性和重复性。

剑尾鱼卵黄蛋白原的ELISA检测

以卵黄脂磷蛋白（lipovitellin,Lv）抗血清为抗体,以纯化的卵黄蛋白原（vitellogenin,Vtg）为抗原,建立了间接酶联免疫吸附反应（ELISA）方法检测剑尾鱼（Xiphophorus helleri）雄鱼整体匀浆液中ρ（Vtg）.结果表明,该方法的检测灵敏度为7.8 ng/mL,批内变异系数为5.094%,批间变异系数为5.540%,工作范围为32.5～2 000 ng/mL,在该范围内,标准曲线具有良好的线性和重复性.由于该方法可直接在1块或在不同的酶标板上准确地进行比较,因而可利用ELISA方法测定经诱导雄鱼整体匀浆液中ρ（Vtg）水平.结果显示,50μg/L 17-β雌二醇（E2）诱导21 d的雄性剑尾鱼有明显的Vtg产生;10μg/L E2诱导剑尾鱼亦有Vtg产生,但较50μg/L E2诱导组低;1μg/L E2诱导组及对照组剑尾鱼没有Vtg产生,检测孔OD450/对照OD450（P/N）值小于2.1.