脂筏特征蛋白2对肝内胆管细胞癌生物学行为的调控作用

目的观察脂筏特征蛋白2(FLOT2)在肝内胆管细胞癌中的表达,探讨FLOT2对肝内胆管细胞癌增殖,迁移的作用。方法收集2021年9月至2022年12月郑州大学人民医院健康体检人员20例、肝内胆管结石(HL)+肝炎(HA)患者20例和肝内胆管细胞癌患者10例共50例检测血液样本,行蛋白组学检测,结合GEPIA2数据库分析FLOT2在肝内胆管细胞癌中的表达。构建小干扰RNA(siRNA)沉默肝内胆管癌细胞HuCCT1中的目的基因,以NC-FLOT2为对照组,si-FLOT2为实验组,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测肝内胆管癌细胞中FLOT2的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力及细胞毒性,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡程度,组间比较采用t检验。结果蛋白组学表明在肝内胆管细胞癌患者中,FLOT2表达较正常人群升高。qPCR实验中,HuCCT1细胞NC组表达量为(0.77±0.10),实验组表达明显下降,分别为0.29±0.09、0.15±0.01、0.11±0.02(t=11.634、11.725、13.432,P均<0.01)。Western blot实验表明,对照组FLOT2条带灰度值为(0.91±0.03),实验组表达降低(0.41±0.14,t=5.160,P<0.05)。划痕实验中下调FLOT2可降低肝内胆管癌细胞迁移能力,48 h后划痕愈合率对照组为(0.89±0.09)%,实验组分别为(0.49±0.08)%、(0.50±0.06)%、(0.60±0.07)%(t=11.170、5.626、3.838,P均<0.01)。CCK-8增殖实验对照组为5.49±0.53,实验组(4.19±0.22,t=7.164,P<0.05;3.33±0.25、1.83±0.28,t=10.065、10.593,P均<0.01)。凋亡实验中,实验组凋亡率[(6.92±0.89)%],敲低FLOT2后实验组较对照组凋亡明显增多[(10.03±0.31)%,t=-6.828,P<0.05;(12.43±0.83)%、(13.87±0.38)%,t=-11.709、-12.101,P均<0.01]。CCK-8毒性实验表明,RBE和HuCCT1对吉西他滨的IC50分别为(8.90±1.28)、(34.31±7.40)μg/ml,RBE对吉西他滨的IC50明显低于HuCCT1(t=-7.077,P<0.05)。qPCR结果表明,HuCCT1中FLOT2表达量明显高于RBE[(0.004±0.001)、(0.019±0.005),t=-5.187,P<0.05]。敲低FLOT2后,HuCCT1细胞株对吉西他滨的IC50值明显降低,实验组IC50[(7.30±0.60)、(6.52±0.61)、(7.03±1.08)μg/ml,t=-17.173、-15.079、-18.737,P均<0.01]。结论FLOT2在肝内胆管细胞癌中表达升高,并影响肝内胆管癌细胞HuCCT1的增殖、迁移、凋亡和耐药能力。