地衣芽孢杆菌CP-16脂类水解酶的研究

本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜p H、p H稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响,同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示,获得的脂类水解酶基因大小为747 bp,编码248个氨基酸,在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4,其分子质量约为28.3 ku,酯酶活性为0.42 U/m L,适宜p H为6.5,适宜温度为50℃;在p H 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上,在低于50℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子(Fe^(2+))、钠离子(Na^+)、锰离子(Mn^(2+))、钙离子(Ca^(2+))对重组酶L-4相对活性具有激发作用,钡离子(Ba^(2+))、锌离子(Zn^(2+))、铜离子(Cu^(2+))、镍离子(Ni^(2+))对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时,重组酶L-4在二甲基亚砜(DMSO)和甲醇中保存97%和85%的相对活性,在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性,在异丙醇中保存不到20%的相对活性,而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物,可提高角蛋白酶K对底物的水解效率,促进率为4.32%。由此可见,脂类水解酶可降解羽毛表层脂质,可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。

嗜麦芽窄食单胞菌OUC_Est10全基因组测序及脂类水解酶多样性分析（英文）

【目的】本研究的目的是研究嗜麦芽窄食单胞菌OUC_Est10中脂类水解酶的多样性。【方法】使用离子交换层析、全基因组测序和异源表达三种方法研究嗜麦芽窄食单胞菌OUC_Est10中脂类水解酶的多样性。【结果】离子交换层析结果显示嗜麦芽窄食单胞菌OUC_Est10可以分泌多种脂类水解酶。通过全基因组测序,我们给出了该菌的全基因组序列,该基因组大小为4668743 bp,GC含量为66.25%。通过详细的基因组序列分析,我们从该基因组中找到33个可能具有脂类水解酶活性的假定基因。通过异源表达OUC_Est10中的5个假定脂类水解酶基因,来研究其催化特性的多样性,结果显示这些脂类水解酶具有不同的催化特性。【结论】我们证明了嗜麦芽窄食单胞菌OUC_Est10拥有多样的脂类水解酶,这暗示了它在不同领域中的应用潜力。

PTEN基因在人和树鼠句肝细胞癌组织中低表达

目的:研究人和树鼠句肝癌和癌旁组织中PTEN基因的表达情况以及与肝癌侵袭转移的关系。方法:用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测人肝癌、癌旁组织和正常组织以及树鼠句肝癌和癌旁组织中PTEN mRNA和PTEN蛋白的表达情况。结果:PTEN mRNA在人的正常组织、癌旁组织、肝癌组织中的表达依次降低,差异有统计学意义,t值分别为-0.955和-10.065,P值均<0.001;树鼠句肝癌组织中PTEN mRNA的表达显著低于癌旁组织中的表达,t=-3.25,P=0.004。PTEN蛋白的表达在人的癌旁组织显著高于肝癌组织,t=-2.163,P=0.038;在树鼠句则无差别,t=0.757,P=0.459。结论:PTEN基因的表达缺失可能与肝癌的发生有关;用树鼠句进行肝癌发病学的研究基本上是可行的。

PTEN蛋白表达缺失在非小细胞肺癌患者预后中的意义

[目的]探讨PTEN蛋白表达缺失在非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后中的意义.[方法]应用免疫组织化学SP法检测20例正常肺组织和102例NSCLC癌组织中PTEN蛋白的表达,NSCLC患者随访时间3～60个月.[结果]NSCLC癌组织中PTEN蛋白表达缺失率为46.1%(47/102),而正常组织为阳性.PTEN蛋白表达缺失与肿瘤组织分化程度、临床分期以及有无淋巴结和远处转移相关.PTEN蛋白表达缺失者5年生存率和中位生存时间显著低于阳性者(Log rank 检验χ2=21.06,P<0.0001).Cox多因素分析PTEN蛋白表达与患者预后相关.[结论]PTEN蛋白表达缺失与NSCLC发展有关,是预测NSCLC患者不良预后的独立危险因素.

海洋微生物酶研究进展

海洋中蕴含着丰富的微生物资源,海洋微生物逐渐成为新型酶制剂的重要来源。多种海洋微生物如细菌、放线菌和真菌能够产生活性酶。对海洋微生物来源的多糖酶、脂类水解酶、蛋白酶和漆酶等的研究进展进行了综述,以期为海洋微生物资源利用研究提供参考。

MMP-2和PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metaloproteinase-2,MMP-2)和PTEN蛋白在膀胱癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学PV-6000通用型二步法检测65例膀胱癌及10例正常膀胱组织中MMP-2和PTEN蛋白的表达。结果:MMP-2在正常膀胱组织中不表达,在65例膀胱癌组织中的阳性表达率为56.9%;随着肿瘤细胞病理分级、临床分期的增加,MMP-2阳性表达率逐渐增高,各组间比较差异有统计学意义,P<0.05。PTEN蛋白在正常膀胱组织中均呈阳性表达,在65例膀胱癌组织中的阳性表达率为46.2%;随着癌细胞病理分级、临床分期的增加,PTEN蛋白阳性表达率逐渐减低,各组间比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:MMP-2和PTEN蛋白异常表达与膀胱癌的发生发展关系密切,检测两者在膀胱癌组织中的表达,可作为判断膀胱癌发生发展的有用指标。

肺癌组织中PTEN P63和P27蛋白的表达及意义

目的检测10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、P63和P27蛋白在肺癌组织中的表达,分析其与肺癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测PTEN、P63和P27蛋白在肺癌组织和正常肺组织中的表达情况。结果PTEN、P63和P27在肺癌组织中的阳性表达率分别为27.3%(18/66)、33.3%(22/66)和21.2%(14/66),与三者在正常肺组织中的阳性表达率90.0%、70.0%和70.0%比较差异有统计学意义(P<0.01)。PTEN和P63在高、中分化鳞癌及低分化鳞癌的阳性表达率分别为55.6%和0.0%(P<0.01)。PTEN和P63、PTEN和P27、P63和P27的共同阳性表达率分别为13.6%、6.1%和9.1%,PTEN与P63表达呈正相关性(P<0.01)。Cox多因素分析显示PTEN和P27在模型中呈负相关,患者的预后危险度相对较小,具有统计学意义。结论PTEN、P63和P27蛋白在肺癌组织中较肺正常支气管黏膜上皮表达率低,显示其失表达可能在肺癌的发生中起一定作用。PTEN和P63表达率在高、中分化鳞癌显著高于低分化鳞癌,显示PTEN和P63的表达与肺鳞癌的分化程度有关。PTEN和P63的表达呈正相关性,二者可能有协同作用。PTEN、P63和P27蛋白检测有可能作为诊断肺癌和评价肺癌恶性程度及预后的重要指标。

磷酸酶与张力蛋白同源物基因过度表达抑制乳鼠心脏成纤维细胞增殖

目的将携带有张力蛋白同源物基因(PTEN)的重组腺病毒载体转染乳鼠心脏成纤维细胞,观察心脏成纤维细胞过度表达野生型PTEN对其增殖的影响。方法分离培养心脏成纤维细胞,以携带有绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-PTEN转染上述细胞,荧光倒置显微镜下观察GFP表达情况,确定最佳感染倍数(MOI)。原代心脏成纤维细胞接种至96孔板,转染Ad-PTEN[Ad-PTEN转染组(MOI根据生长曲线确定)],并设正常对照组(加入等体积培养基),以MTT的方法检测其吸光度(A),以反映细胞增殖情况,将转染效率达到90%以上成纤维细胞及正常对数生长期成纤维细胞消化,制成单细胞悬液,流式细胞仪分别检测细胞周期,以吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)法分别检测Ad-PTEN转染组和正常对照组细胞凋亡情况;结果MTT测定的结果:48 h后Ad-PTEN转染组的A显著低于该时间点正常对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果发现Ad-PTEN转染的成纤维细胞出现G1期阻滞;AO/EB法检测发现Ad-PTEN转染的成纤维细胞其细胞凋亡率与正常对照组细胞无显著差异;结论PTEN基因过度表达将引起乳鼠心脏成纤维细胞增殖受抑制,该现象与细胞周期G1期阻滞有关。

FHIT、PTEN蛋白在胃癌中的表达及意义

目的:探讨脆性组氨酸三联体(FH IT)基因和张力蛋白同源、第10染色体丢失的磷酸酶基因蛋白(PTEN)在胃癌中的表达及其与临床病理因素的关系。方法:采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测了80例胃癌组织及癌旁组织中FH IT和PTEN基因蛋白的表达。结果:80例胃癌组织中FH IT和PTEN蛋白阳性表达率分别为45%和51.3%,在癌旁组织中分别均为100%,其差异均有统计学意义(P<0.05)。FH IT蛋白的表达与胃癌的分化程度、浆膜浸润、淋巴转移无关(P>0.05),而与肿瘤分期有关(P<0.05)。PTEN蛋白的表达与胃癌的分化程度、浆膜浸润、淋巴转移、肿瘤分期均有关(P<0.05)。结论:FH IT和PTEN基因蛋白缺失在胃癌发生发展起重要作用,二者可作为判断胃癌生物学行为和临床预后的参考指标。