小鼠脂联素受体-1的生物信息学分析及其抗体制备

本文旨在根据小鼠脂联素受体-1(adiponectin receptor-1,AdipoR-1)的分子结构,制备抗AdipoR-1的多克隆抗体,为AdipoR-1的进一步研究创造条件。利用生物信息学分析预测小鼠AdipoR-1的理化特性、跨膜结构和抗原表位,结合AdipoR-1和AdipoR-2氨基酸序列相似性比对结果,设计出一段由16个氨基酸组成的多肽,用此肽段免疫大鼠得到多克隆抗体,利用ELISA、Westernblot等方法鉴定其特异性和滴度,并将该抗体用于正常及高胆固醇血症小鼠肌肉组织AdipoR-1的表达检测。结果表明,此抗体效价较高、特异性强。以上结果提示,生物信息学分析能较好地预测小鼠AdipoR-1的抗原表位,并成功制备高特异性的多克隆抗体。

番石榴苷通过激活AdipoR-1/AMPK信号通路减轻大鼠肝细胞瘤H4ⅡE细胞脂质沉积的作用机制研究

目的:观察番石榴苷(guaijaverin, GAN)对油酸诱导的大鼠H4ⅡE细胞脂质沉积的作用,并从的油酸诱导大鼠H4ⅡE细胞脂质沉积模型,采用0.3 mM的番石榴苷干预24小时,采用GPO?DAOS评估细胞甘油三酯的含量,以DCTM法检测总蛋白含量,以甘油三酯/蛋白含量评估脂质沉积的情况;同时采用western blotting法检测肝细胞内乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA arboxylase,ACC)以及其各自磷酸化蛋白表达水平;以实时荧光定量PCR法检测细胞AdipoR-1mRNA含量。结果:番石榴苷具有减少肝细胞内脂质沉积、提高AMPK、ACC磷酸化水平、提高AdipoR-1 mRNA相对表达量的作用,且其减少肝细胞内脂质沉积作用可被AMPK阻滞剂Compound C所逆转。结论:番石榴苷可改善油酸诱导的大鼠H4ⅡE细胞内脂质沉积,其作用机制与通过激活AdipoR-1/AMPK信号通路有关。

特发性脊柱侧弯脂联素与软骨细胞增殖

[目的]探讨脂联素是否对特发性脊柱侧弯(idiopathic scoliosis,IS)患者关节突软骨细胞的增殖和肥大过程产生影响。[方法]酶联免疫吸附测定法检测IS患者和正常人组的血浆脂联素水平;提取IS患者和正常人组的关节突原代软骨细胞,用蛋白质免疫印迹方法检测脂联素及其受体Adipo R1、软骨细胞标志蛋白ColⅡ和肥大标志物Col X的表达情况。不同浓度脂联素刺激IS组软骨细胞,检测相关蛋白的表达情况。[结果]IS患者血浆脂联素水平显著高于正常人组[(19.3±11.5)μg/ml vs(9.5±8.4)μg/ml,P<0.05],且IS组女性[(19.3±11.5)μg/ml vs(11.9±8.8)μg/ml,P<0.05]和男性患者[(9.3±4.5)μg/ml vs(3.7±3.3)μg/ml,P<0.05]的血浆脂联素水平分别显著高于正常人组女性和男性的水平。IS患者软骨细胞中脂联素[(1.4±0.3)vs(1.0±0.1),P<0.05]、Adipo R1[(1.3±0.3)vs(1.0±0.2),P<0.05]和ColⅡ[(1.8±0.7)vs(1.0±0.7),P<0.05]的蛋白水平显著高于正常人组,而Col X[(0.2±0.1)vs(1.0±0.8),P<0.05]的蛋白水平则低于正常人组。不同浓度脂联素刺激IS组软骨细胞后,Adipo Q、AdipoR1的表达水平呈浓度依赖性升高(P<0.05),ColⅡ和抗凋亡因子Bcl2的蛋白水平也显著升高(P<0.05),而ColX、Bax蛋白水平则显著降低(P<0.05)。[结论]血浆中升高的脂联素水平可能通过上调AdipoR1、Bcl2和ColⅡ,以及下调Bax和Col X来促进IS患者软骨细胞的增殖并抑制其肥大进程。

脂联素受体在胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系

目的探讨血清脂联素水平、脂联素受体-1（AdipoR1）和脂联素受体-2（AdipoR2）的表达与胃癌患者的临床病理学以及总生存率之间的关系。方法用Westernblot法检测AdipoR1和AdipoR2在胃癌细胞MKN45、TMK-1、NUGC3以及NUGCA的表达，并检测脂联素在体外的抗增殖效应。检测1013例胃癌患者的血清脂联素水平，并用免疫化学染色检测AdipoR1和AdipoR2的表达。结果MKN45和NUGC3细胞表达的AdipoR1水平明显高于NUGCA细胞，而各个细胞中Adipo1t2的表达差异无统计学意义。脂联素浓度为10mg／L时在MKN45和NUGC3细胞中会产生抗增殖效应。血清脂联素水平与临床病理学特征无明显相关，但是AdipoR1阴性表达的患者与AdipoR1阳性表达的患者比较淋巴转移（24／32，P〈0．05）和腹膜扩散会增加明显，差异有统计学意义（9／32，P〈0．05）。此外，AdipoR2表达阳性的患者和AdipoR2表达阴性的患者之间只有在病理组织学类型方面差异有统计学意义（P〈0．01）。在生存率分析方面，AdipoR1阳性表达组的患者与AdipoR1阴性表达组的患者比较可以延长存活率，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在胃癌中脂联素可以通过AdipoR1抑制细胞增殖。