脂联素受体1调控小胶质细胞参与阿尔兹海默病发病机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease, AD)是一种进行性加重的神经系统退行性疾病,是最为常见的痴呆症类型。越来越多的研究表明,小胶质细胞在AD病理生理过程中发挥重要功能,但小胶质细胞参与AD发病的具体机制尚不完全清楚。最近,脂联素(adiponectin, APN)/脂联素受体1(adiponectin receptor 1, AdipoR1)信号被证明具有抗炎作用,并与学习和记忆密切相关。研究发现,AdipoR1可表达于小胶质细胞,其可能通过调节小胶质细胞的功能活动来参与AD的发生和发展。因此,本文旨在对APN、AdipoR1和小胶质细胞在AD的发病和治疗中的作用以及AdipoR1参与调节小胶质细胞功能的研究进展进行综述。

自发性高血压大鼠血清脂联素和心肌脂联素受体1的表达及胰岛素抵抗程度与心室重构的关系研究

目的观察自发性高血压大鼠(SHR)血清脂联素(APN)、心肌脂联素受体1(AdipoR1)的表达及胰岛素抵抗(IR)程度,探讨3者与血压升高、心室重构的关系。方法选取22周龄SHR和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠各8只(SHR组、WKY组)为研究对象,测定血清APN、血清空腹胰岛素(FINS),免疫组化法测定心肌AdipoR1的分布及蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定心肌AdipoR1 mRNA表达。结果 (1)与同周龄WKY组相比,SHR组体质量(BW)减低,收缩压(SBP)、全心重量(HW)、左心室重量(LVW)、心脏重量指数(HWI)、左心室重量指数(LVWI)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)增高,差异均有统计学意义(P<0.05);两组FBG差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与WKY组相比,SHR组血清APN表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)SHR组心肌AdipoR1阳性染色减少,与WKY组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(4)SHR组心肌AdipoR1 mRNA表达低于WKY组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(5)Pearson直线相关显示,大鼠SBP与血清APN、AdipoR1、AdipoR1 mRNA呈负相关,与HWI、LVWI、HOMA-IR呈正相关;多元线性逐步回归分析显示,血清APN和HOMA-IR是大鼠SBP的影响因素。(6)Pearson直线相关显示,大鼠LVWI与血清APN、AdipoR1、AdipoR1 mRNA呈负相关,与SBP、HWI、HOMA-IR呈正相关;多元线性逐步回归分析显示,心肌AdipoR1、心肌AdipoR1 mRNA、HWI、SBP是大鼠LVWI的影响因素。结论 SHR存在明显的心室重构,血清APN及心肌AdipoR1表达下降、IR程度增加;SHR心室重构可能与血清APN及心肌AdipoR 1表达下降有关。

有氧运动对ApoE基因缺陷小鼠主动脉脂联素受体1蛋白表达的影响

目的:研究运动对ApoE-/-小鼠主动脉脂联素受体1蛋白表达的影响。方法:8周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为安静组(C)和运动组(E)。两组小鼠均饲以高脂饲料,C组不训练,E组进行14周跑台运动。14周末取材比较两组小鼠主动脉管壁的病理变化,检测比较其脂肪组织脂联素mRNA表达水平、血清脂联素水平及主动脉脂联素受体1蛋白表达水平。结果:与C组小鼠相比,E组小鼠主动脉管壁纤维弹力板和内膜较完好,脂肪组织脂联素mRNA表达、血清水平及主动脉脂联素受体1蛋白表达均显著增加。结论:14周有氧运动显著提高了小鼠脂肪组织脂联素mRNA表达、血清脂联素水平及主动脉脂联素受体1的蛋白表达,这可能是有氧运动防治动脉粥样硬化的重要机制之一。

苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠心肌脂联素受体1表达及心功能的影响

目的探讨苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠心功能及心肌组织中脂联素受体1(Adipo R1)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组以及苦瓜总皂苷治疗组,模型建立成功后,苦瓜总皂苷治疗组给予苦瓜总皂苷(20 mg/kg.d)灌胃治疗,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,分别于治疗4、8周后处死大鼠各半,测定血糖、胰岛素、血脂以及心功能,HE染色检测心脏病理学,RT-PCR以及Western Blot检测心脏组织中Adipo R1 m RNA和蛋白的表达。结果造模成功后,糖尿病组大鼠血糖、血脂(TG、TC和FFA)以及心功能指标(CK、CK-MB、LDH和HBDH)明显升高(P<0.05),胰岛素含量明显降低(P<0.05),治疗4周后,除胰岛素明显升高外(P<0.05),各生化指标均明显下降(P<0.05),治疗8周后进一步改善;HE染色可见,糖尿病大鼠心脏有轻微的损伤,苦瓜总皂苷对其有一定的调节作用;造模成功后模型组心肌Adipo R1 m RNA水平和蛋白表达相较于正常组明显升高(P<0.05),苦瓜总皂苷治疗后其Adipo R1表达显著降低(P<0.05)。结论苦瓜总皂苷可通过降低2型糖尿病大鼠心脏组织中Adipo R1的表达,调节血脂,改善心脏功能,最终保护心肌细胞。

脂联素受体1基因在大鼠脂肪组织中的表达及其与肥胖易感性的关系

目的探讨高脂高能量饮食(HFHCD)诱导下肥胖易感(OP)大鼠与肥胖抗性(OR)大鼠腹膜后脂肪组织脂联素受体1(AdipoR1)基因mRNA表达的差异及其与肥胖易感性的关系。方法雄性SD大鼠18只,以高脂高能量鼠料饲养2周后,按体质量增值大小分组,增重最多的6只为OP组,增重最少的6只为OR组。OP、OR大鼠继续饲以4周后,观察各大鼠体质量变化和腹膜后脂肪组织湿重,采用RT-PCR技术检测脂肪组织AdipoR1基因mRNA表达水平。结果1.HFHCD诱导下,OP组大鼠体质量、腹膜后脂肪组织湿重均明显高于OR组(t′=4.48 P<0.01);2.OP组大鼠腹膜后脂肪组织中AdipoR1 mRNA表达水平低于OR组,但两者差异无统计学意义(t=2.23 P>0.05);3.大鼠腹膜后脂肪组织湿重与AdipoR1 mRNA的表达水平存在显著负相关(r=0.735 P<0.05)。结论AdipoR1表达于脂肪组织。相同饮食条件下,个体发生肥胖的易感性是影响AdipoR1水平的重要因素。

人脂联素受体1和2的真核表达

目的扩增和表达人脂联素受体1(AdipoR1)和人脂联素受体2(AdipoR2)基因。方法利用RT-PCR方法扩增AdipoR1和AdipoR2全长cDNA,将AdipoR1和AdipoR2的cDNA构建到真核表达载体pcDNA3.1,重组质粒转染HEK293细胞,通过免疫荧光技术标记HEK293细胞的AdipoR1和AdipoR2融合蛋白,共聚焦显微镜观察AdipoR1和AdipoR2在细胞中的定位。结果成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-adipoR1和pcDNA3.1-adipoR2,重组质粒转染HEK293细胞后,定位于HEK293细胞膜上。结论AdipoR1和AdipoR2重组质粒的构建和在HEK293细胞中的成功表达,为进一步研究其与胰岛素抵抗的关系创造了条件。

球状脂联素抑制波动性高血糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡与脂联素受体1有关

目的探讨球状脂联素在抑制波动性高血糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的机制。方法不同条件下体外培养人脐静脉内皮细胞5天。实验分为对照组(葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖25 mmol/L)、葡萄糖交替组(葡萄糖5.5/25 mmol/L,每8 h更换培养液一次)、高渗组(甘露醇25 mmol/L)和高渗交替组(甘露醇5.5/25 mmol/L,每8 h更换培养液一次)。葡萄糖交替组中部分细胞用不同浓度(0、0.5、1.0和3 mg/L)球状脂联素干预,用脂联素受体1特异性小干扰RNA作用内皮细胞。采用流式细胞仪检测细胞凋亡及RT-PCR检测脂联素受体1和受体2的mRNA表达。结果与对照组比较,高糖组和葡萄糖交替组细胞凋亡明显增加,脂联素受体1 mRNA的表达显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,葡萄糖交替组细胞凋亡显著增加,脂联素受体1 mRNA的表达显著降低(P<0.01)。不同浓度(0、0.5、1.0和3 mg/L)球状脂联素作用内皮细胞,发现3 mg/L球状脂联素能显著抑制内皮细胞凋亡(P<0.01),并能显著拮抗波动性高血糖诱导的脂联素受体1 mRNA表达的下降(P<0.01)。不同组间内皮细胞脂联素受体2 mRNA表达差异无显著性。siRNA作用内皮细胞后球状脂联素这种抑制凋亡作用显著减弱(P<0.01)。结论与持续性高血糖条件比较,波动性高血糖显著降低人脐静脉内皮细胞脂联素受体1 mRNA的表达,而对脂联素受体2 mRNA的表达无影响。球状脂联素可能通过脂联素受体1拮抗波动性高血糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。

替米沙坦对2型糖尿病大鼠主动脉脂联素受体1、MCP-1和NF-κB表达的影响

目的观察替米沙坦对2型糖尿病大鼠主动脉脂联素受体1(AdipoR 1),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨替米沙坦对糖尿病大血管病变保护作用及机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组),糖尿病组(DM组)及糖尿病替米沙坦治疗组(DT组)。用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。成模后,DT组予以替米沙坦(5 mg/kg.d)灌胃12周。12周后,用酶联免疫法检测血浆脂联素水平,用R T-PCR方法检测主动脉脂联素受体1 mR NA表达,用免疫组织化学法检测主动脉MCP-1和NF-κB蛋白表达。结果与NC组比较,DM组大鼠血浆脂联素水平和主动脉脂联素受体-1 mRNA表达显著降低,主动脉MCP-1和NF-κB表达显著增加,主动脉病理改变加重。经替米沙坦治疗后,DT组糖尿病大鼠血浆脂联素水平和主动脉脂联素受体1 mRNA表达显著增加,主动脉MCP-1和NF-κB表达显著降低,主动脉病理改变减轻。结论替米沙坦上调2型糖尿病大鼠主动脉脂联素受体1的表达,降低主动脉MCP-1和NF-κB的表达,减轻动脉粥样硬化程度,对糖尿病大鼠大血管产生保护作用。

吡格列酮对2型糖尿病大鼠骨骼肌脂联素受体1表达的影响

目的观察吡格列酮对2型糖尿病大鼠血清脂联素以及骨骼肌脂联素受体1(AdipoR1)表达的影响,探讨吡格列酮对2型糖尿病胰岛素抵抗的改善作用及机制。方法 40只8周龄健康雌性SD大鼠,随机分为正常对照组(n=10)、糖尿病组(n=15)及吡格列酮组(n=15)。用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,成模后吡格列酮组给予10 mg/(kg.d)吡格列酮灌胃,正常对照组和糖尿病组给予同体积生理盐水灌胃,共12周。3个月后股静脉取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清脂联素水平,留取大鼠骨骼肌,光、电镜观察骨骼肌结构,免疫组织化学染色法测定骨骼肌AdipoR1蛋白的表达。结果与正常对照组(1.73±0.32 mg/L)比较,糖尿病组血清脂联素(1.01±0.27 mg/L)水平显著降低,而吡格列酮组(1.34±0.43 mg/L)较糖尿病组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。骨骼肌AdipoR1免疫组织化学染色正常对照组着色深且广泛,糖尿病组较正常对照组染色浅,吡格列酮组较糖尿病组染色深,但较正常对照组浅。光镜及电镜结果显示大鼠骨骼肌结构未见明显异常。结论 2型糖尿病大鼠血清脂联素水平及骨骼肌AdipoR1表达降低并导致糖脂代谢紊乱及胰岛素抵抗。吡格列酮可上调血清脂联素及骨骼肌AdipoR1的表达,从而调节糖脂代谢,改善胰岛素抵抗。

沉默脂联素受体1对脂多糖诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖凋亡的影响

目的 :观察脂联素受体1(adiponectin receptor1,AdipoR1)沉默对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡的影响。方法:(1)利用免疫荧光、Western blot鉴定并验证shRNA技术对构建的AdipoR1沉默MH7A(sh-AdipoR1组)细胞的干扰效率;(2)分别用CCK8试剂盒、流式细胞仪检测LPS(100 ng/m L)对sh-AdipoR1组及空载病毒对照(sh-NC组)细胞增殖及凋亡的影响;(3)利用实时定量聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,realtime PCR)检测LPS对sh-AdipoR1及sh-NC组细胞中凋亡相关基因BCL-2、BCL-XL、BAX、BAK表达的影响。同时设置无LPS刺激的sh-NC、sh-AdipoR1组作为对照。结果:(1)荧光显微镜下可见sh-AdipoR1组细胞荧光蛋白表达效率趋近于100%,Western blot检测结果显示:与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组AdipoR1蛋白的表达显著下降(P<0.05),表明AdipoR1沉默的细胞构建成功;(2)无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组细胞增殖速率及凋亡细胞比例无明显差异;LPS刺激可显著增加sh-NC组和sh-AdipoR1组细胞相对增殖速率及凋亡细胞比例(P<0.05);在LPS作用24、48 h,sh-AdipoR1组细胞增殖速率均显著低于sh-NC组(P<0.05),而sh-AdipoR1组细胞凋亡率显著高于sh-NC组(P<0.05);(3)real-time PCR结果显示,无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL与促进凋亡基因BAK、BAX的相对表达量均无显著差异(P>0.05);LPS刺激可降低抑凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达,增加促凋亡基因BAX、BAK表达(P<0.05);在LPS诱导下与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达下降,促凋亡基因BAX、BAK表达显著升高(P<0.05)。结论:AdipoR1基因的沉默可抑制LPS诱导的MH7A细胞增殖,促进细胞凋亡,并提示AdipoR1相关信号通路可能在类风湿关节炎发生发展中起到重要作用,阻断该途径可有效阻断LPS诱导的MH7A细胞炎症反应。

乳腺癌中的脂联素受体1表达及其信号通路激活对癌细胞的作用机制研究

目的探讨人能量代谢相关基因脂联素受体1(AdipoR1)在乳腺癌中的表达及其信号通路激活对乳腺癌细胞的作用机制。方法采用已发表的基因表达数据库数据,分析AdipoR1在各病理亚型中的不同表达,以及AdipoR1基因表达与HER-2表达的相关性。采用免疫印迹法(Western blotting)检测AdipoR1在MCF-7、MDA-MB-231和SKBR3等ER+、HER-2+及ER-癌细胞株中的表达;采用Western blotting法检测MCF-7细胞在脂联素不同时间长度的作用下,细胞内信号蛋白AMPK及S6激酶(S6K)的活化。结果 AdipoR1在正常乳腺组织样乳癌中基因表达最低,与其他各组病理亚型乳癌有显著性差异(P<0.05)。在乳腺癌中,AdipoR1基因表达与HER-2基因呈正相关(Pearson,r=0.134)。AdipoR1广泛表达于ER+、HER-2+及ER-乳腺癌细胞系中。在低浓度(0.5μg/ml)脂联素作用下,AMPK及mTOR的底物蛋白S6K在15min发生磷酸化活化,磷酸化信号随着时间延长而加强,30min时信号强度达到最高峰;之后开始下降,但在1h仍能检测到磷酸化。结论 AdipoR1基因表达水平在各乳腺癌病理亚型不同,该受体在各类乳腺癌细胞株中广泛表达。乳腺癌中的脂联素信号通路激活,可活化AMPK及mTOR信号通路,从而影响肿瘤细胞的能量代谢、蛋白合成及细胞增殖过程。

脂联素和脂联素受体1在不同病程糖尿病大鼠心肌缺血预适应中的变化

目的:探讨脂联素(APN)和脂联素受体1(Ad-R1)在不同病程糖尿病大鼠离体心肌缺血再灌注(IR)损伤和缺血预适应(IPC)保护作用中的变化。方法:分别用链脲佐菌素和高脂饮食+链脲佐菌素制备1型糖尿病(TIDM)和2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,并分别分为4周和8周2个病程组,采用Langendorff法建立离体心脏灌流模型,每组进一步分为正常对照(Con)组、IR组和IPC组3个亚组,检测冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)活性,采用ELISA法检测血清和心肌组织APN水平,采用Western blot法检测心肌组织Ad-R1蛋白表达,测定心肌梗死面积,透射电镜观察心室乳头肌超微结构,并比较上述指标在各组中的差异。结果:与对应的IR组相比,4周时IPC组LDH和CK活性显著降低(P<0.01),心肌梗死区域面积明显减少,而8周时DM组的各项检测指标无明显改变。血清APN含量在糖尿病大鼠减低,尤以T2DM降低为甚(P<0.05),正常大鼠心肌组织APN含量和Ad-R1表达水平在Con、IR和IPC组之间无差异;T1DM模型大鼠心肌组织APN含量在各亚组间无变化,4周和8周心肌组织Ad-R1表达量IR组较Con组明显增加(P<0.01),IPC组较对应IR组Ad-R1表达量降低(P<0.01);T2DM模型大鼠心肌组织APN含量4周和8周的IR组较Con组明显减少(P<0.05),IPC组较对应IR组,4周组的APN显著升高,8周组无显著差异,心肌Ad-R1表达量4周和8周的IR组较Con组明显增加(P<0.05),4周的IPC组较对应IR组Ad-R1表达量降低(P<0.05),8周的IPC组较对应IR组Ad-R1表达量无改变。结论:T1DM和T2DM模型大鼠4周组存在IPC保护作用,8周组IPC保护作用基本消失;心肌组织APN和Ad-R1可能参与了T2DM大鼠的IPC保护作用。

脂联素受体1基因-102T/G多态位点与山西省汉族人2型糖尿病的关系

目的研究脂联素受体1(AdipoR1)基因-102T/G多态位点与山西汉族人2型糖尿病的关系。方法应用序列特异性引物-聚合酶链反应技术(PCR-SSP)检测50例2型糖尿病患者和50名健康对照者AdipoR1-102T/G单核苷酸多态性位点基因型,并测定所选人群的临床指标。结果①基因型及等位基因频率分布在2型糖尿病患者和健康对照组人群中差异无统计学意义(P>0.05)。②健康对照组人群中,G等位基因携带者空腹血糖较TT基因型者低(P<0.01)。③2型糖尿病患者中,G等位基因携带者空腹胰岛素(P<0.01)、胰岛素抵抗指数(P<0.05)及空腹血糖(P<0.05)较TT基因型者低。结论AdipoR1基因与山西汉族人群糖代谢及胰岛素抵抗相关,与2型糖尿病无关。

中国3种特有小型猪品系脂联素受体1基因外显子5的多态性分析

目的探讨我国三个特有的小型猪品系-中国农大小型猪，五指山小型猪，广西巴马小型猪脂联素受体1基因多态性分布，为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA，针对脂联素受体1基因外显子5～内含子5的部分序列进行PCR扩增，对产物进行鉴定和测序，分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出5个sNPs——sNP1：G138A，发生在所有的小型猪品系中，并导致第45位的氨基酸由甘氨酸（Gly）转变为谷氨酸（Glu）；SNP2：G185A，所有的纯合突变均发生在五指山小型猪品系中（4／6，66．67％），而所有的杂合突变则发生在中国农大小型猪品系中（3／10，30％）；SNP3：G200A，全部发生在中国农大小型猪品系中，且均为杂合突变（3／10，30％）；SNP4：C295T，发生在广西巴马小型猪品系中的突变既有杂合突变（1／6，16．67％）也有纯合突变（2／6，33．33％），发生在中国农大小型猪品系中的突变全为杂合突变（2／10，20％）；SNP5：T337G，只出现在中国农大小型猪品系中，且为杂合突变（1／10，10％）。结论SNP1，在所有测定的小型猪品系中检出，这可能是所测小型猪共有的特性。SNP2，可能是小型猪品系之间的差异。SNP3和SNP4，可能是小型猪品系之间的差异，也可能是个体的差异。SNP5，可能是个体差异。

福辛普利对自发性高血压大鼠主动脉脂联素受体1表达的影响

目的:探讨福辛普利对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉脂联素受体1表达的影响。方法:24只14周龄SHR大鼠随机分成高血压组、福辛普利10 mg组和福辛普利20 mg组;8只同系魏凯式(WKY)大鼠做对照组。从14周龄起,WKY组和SHR组给予蒸馏水灌胃,福辛普利10 mg组和福辛普利20 mg组分别给予福辛普利10 mg/(kg.d)和20 mg/(kg.d)灌胃。8周后采血测定脂联素浓度,取血管组织HE染色后测定中膜厚度(MT)与胸主动脉内径(LD)比值,通过免疫组化法检测脂联素受体1蛋白的表达。结果:8周后,与高血压组相比,福辛普利低剂量组和高剂量组血压水平明显降低,高血压血管重构改善,血清脂联素水平以及主动脉脂联素受体1蛋白的表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SHR大鼠主动脉脂联素受体1表达下调,福辛普利可通过升高SHR大鼠胸主动脉脂联素受体1的表达而改善血管重构。

自发性高血压大鼠心室重构及脂联素受体1的表达

目的观察自发性高血压大鼠(SHR)心室重构情况和心肌脂联素受体1(AdipoR1)及其mRNA的表达水平。方法 8只12 w龄雄性自发性高血压大鼠为实验组(SHR组),8只12周龄雄性京都Wistar大鼠为对照组(WKY组)。喂养12 w后,各组大鼠分别超声心动图测定左室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、二尖瓣口舒张早期峰值流速(E峰)、舒张晚期血流峰值流速(A峰)并计算E/A比值;计算左室重量指数(LVWI);HE染色和Masson染色观察心肌组织形态学改变,并测定心肌胶原容积分数(CVF)和羟脯氨酸(Hyp)的含量;RT-PCR方法检测心肌组织AdipoR1 mRNA表达水平;Western印迹方法检测心肌组织AdipoR1蛋白表达水平。结果与WKY组相比,SHR组IVST、LVPWT、LVWI均增大;LVEDD和E/A均减小;心肌细胞排列紊乱,间质成纤维细胞肥大增生,CVF和Hyp的含量均增多;AdipoR1 mRNA及AdipoR1蛋白表达均显著降低。结论 SHR大鼠有心室重构发生,心肌AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白表达均水平下调,提示SHR大鼠心室重构发生与AdipoR1的变化有关。

白术多糖通过影响miR-320c调控脂联素受体1的表达保护高糖诱导的肾小球足细胞损伤

目的探讨白术多糖(AMP)对高糖诱导的肾小球足细胞(HPC)损伤的影响及作用机制。方法HPC分为对照组(NG组)、高糖组(HG组)、HG+25 mg/L AMP组(HG+AMP-L组)、HG+50 mg/L AMP组(HG+AMP-M组)和HG+100 mg/L AMP组(HG+AMP-H组),Annexin V-FITC/PI双染实验检测细胞凋亡率,Western印迹检测Synaptopodin、desmin、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和ADIPOR1蛋白表达水平,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-320c和ADIPOR1 mRNA表达水平。高糖诱导miR-320c表达抑制或过表达ADIPOR1的HPC细胞,同时使用100 mg/L的AMP作用于高糖诱导的过表达miR-320c的HPC,相同方法检测HPC凋亡率、Synaptopodin、desmin、Bcl-2、Bax和ADIPOR1蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-320c与ADIPOR1之间靶向关系。结果高糖诱导可使HPC凋亡率、desmin和Bax蛋白及miR-320c表达升高(P<0.05),Synaptopodin和Bcl-2蛋白及ADIPOR1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。AMP可使高糖诱导的HPC凋亡率、desmin和Bax蛋白及miR-320c表达降低(P<0.05),Synaptopodin和Bcl-2蛋白及ADIPOR1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。抑制miR-320c表达或过表达ADIPOR1可使高糖诱导的HPC凋亡率、desmin和Bax蛋白表达降低(P<0.05),Synaptopodin和Bcl-2蛋白及ADIPOR1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。miR-320c靶向负调控ADIPOR1表达。miR-320c过表达逆转了AMP(100 mg/L)对高糖诱导的HPC凋亡率、desmin、Synaptopodin、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结论AMD可保护高糖诱导的HPC损伤,其作用机制与下调miR-320c上调ADIPOR1表达有关。

罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾脏脂联素受体1表达的影响

目的观察罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾脏脂联素受体1(AdipoR1)表达的影响,探讨罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为A组(健康对照组)、B组(糖尿病组)和C组(糖尿病罗格列酮治疗组)。用高脂高糖饲料加小剂量链尿佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型。造模成功后,C组给予罗格列酮(3mg·kg-1·d-1)灌胃12周。实验结束时,用免疫组织化学法测定肾脏组织中AdipoR1和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肾脏AdipoR1 mRNA表达。结果与A组比较,B组糖尿病大鼠血糖、血脂、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率、肾脏指数和TGF-β1表达均显著升高(P<0.05),罗格列酮干预后,C组上述指标均较B组显著降低(P<0.05)。B组糖尿病大鼠肾组织AdipoR1 mRNA表达显著低于A组(P<0.01);罗格列酮干预后,C组大鼠AdipoR1 mRNA表达较B组显著升高(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,B组糖尿病大鼠肾脏AdipoR1表达较A组显著降低(P<0.01),经罗格列酮干预后,C组大鼠肾脏AdipoR1表达较B组显著升高(P<0.01)。结论2型糖尿病大鼠肾脏AdipoR1表达降低。罗格列酮通过上调肾脏AdipoR1表达,降低TGF-β1表达,减轻肾脏肥大,产生肾脏保护作用。

高迁移率族蛋白B1、肿瘤坏死因子受体1、脂联素受体1与2型糖尿病下肢血管病变的关系

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、脂联素受体1(ADIPOR1)水平与2型糖尿病(T2DM)患者发生下肢血管病变的关系。方法收集2014年12月至2018年12月重庆市大足区人民医院收治的186例T2DM患者临床资料,根据有无下肢血管病变分为下肢血管病变组116例和非下肢血管病变组70例。另选取同期健康体检者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测各组患者血清HMGB1、TNFR1、ADIPOR1水平,并分析其与T2DM发生下肢血管病变的关系;采用Logistic回归模型分析影响T2DM患者下肢血管病变的危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析HMGB1、TNFR1、ADIPOR1水平对T2DM患者下肢血管病变的预测价值。结果与非下肢血管病变组和对照组相比,下肢血管病变组的血清空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白A1c(HbA1c)、HMGB1、TNFR1水平均较高,ADIPOR1水平较低(P<0.05)。多因素分析结果显示,FPG升高、血清HMGB1水平升高、血清TNFR1水平升高及血清ADIPOR1水平降低均是T2DM患者发生下肢血管病变的独立危险因素(P<0.05)。相关性分析结果显示:血清HMGB1水平与FPG、HbA1c、TG水平均呈正相关(P<0.05);血清TNFR1水平与FPG、HbA1c、LDL-C水平均呈正相关(P<0.05);ADIPOR1水平与FPG、HbA1c、TG水平均呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,HMGB1、TNFR1、ADIPOR1水平预测T2DM患者发生下肢血管病变的曲线下面积(AUC)为0.885、0.781、0.723。结论HMGB1、TNFR1、ADIPOR1在T2DM下肢血管病变患者血清中异常表达,且其水平与T2DM患者下肢血管病变有关,且对T2DM患者下肢血管病变具有一定的预测价值。

芪地糖肾颗粒对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗、脂代谢及AdipoR1、AMPK蛋白的影响

目的:探究芪地糖肾颗粒对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗、脂代谢以及脂联素受体1(AdipoR1)、腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白等相关指标的影响。方法:取50只健康大鼠,分为健康组,模型组,低、中、高剂量组,除健康组外均建立糖尿病模型。建模后低、中、高剂量组分别灌胃芪地糖肾颗粒1.31、2.62、5.24 g/kg;健康组、模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,均干预30 d。采用ELISA检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG),酶联免疫法测定空腹血糖(FBG),放免法测定空腹胰岛素(FINS),免疫印迹与PCR分别检测脂联素受体1(AdipoR1)、腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白、肾小管间质p38激活丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)。结果:与健康组比较,模型组大鼠血清中HDL-C及AdipoR1、AMPK、p38MAPK蛋白/mRNA降低,LDL-C、TC、TG、FBC、FINS均升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量组大鼠血清中HDL-C及AdipoR1、AMPK、p38MAPK蛋白/mRNA升高,LDL-C、TC、TG及FBC、FINS均降低(P<0.05);与低剂量组比较,中剂量组大鼠血清中HDL-C及AdipoR1、AMPK、p38MAPK蛋白/mRNA升高,LDL-C、TC、TG及FBC、FINS均降低(P<0.05);与中剂量组比较,高剂量组大鼠血清中HDL-C及AdipoR1、AMPK、p38MAPK蛋白/mRNA升高,LDL-C、TC、TG及FBC、FINS均降低(P<0.05)。结论:芪地糖肾颗粒可改善2型糖尿病的脂质代谢及胰岛素抵抗,可能与提高AdipoR1、AMPK、p38MAPK表达相关。