不同鸭品种脂肪型脂肪酸结合蛋白基因部分序列多态性差异研究

为了解地方鸭品种脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因点突变信息、群体遗传结构和遗传参数差异,设计了1对引物扩增A-FABP基因外显子3和内含子2部分序列,采用PCR-SSCP方法检测9个地方鸭品种单核苷酸突变,并分析基因型、等位基因频率和群体遗传参数的差异。结果显示:在9个鸭品种之间发生了6个点突变,4个点突变在内含子2中,2个点突变在外显子3中,为同义突变。9个鸭品种均以D等位基因频率最高,E为靖西大麻鸭的第二等位基因,而其他8个鸭品种的第二等位基因为C。χ2检验显示靖西大麻鸭的基因型分布与巢湖鸭、临武鸭存在显著性差异(P<0.05),与其他品种存在极显著差异(P<0.01)。巢湖鸭的多态信息含量高于0.5,其他8个鸭品种的多态信息含量在0.25~0.5之间。攸县麻鸭偏离了哈代温伯格平衡状态。A-FABP基因在不同鸭品种中具有较丰富的多态性,为鸭品种资源保护和新品种培育提供参考。

牦牛脂肪型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)多态性分析

脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)属脂肪酸结合蛋白家族(FABPs)成员,参与调节哺乳动物细胞内脂肪浓度,进而影响肌肉内脂肪含量(IMF),因此A-FABP可作为影响IMF的候选基因。本研究采用PCR-SSCP技术检测甘南牦牛、青海牦牛、天祝白牦牛(Bos grunniens)A-FABP基因部分第3内含子、第4外显子及部分3'-UTR区单核苷酸多态性(SNPs),分析检测区域分子遗传特征。结果表明,3类群牦牛引物扩增区域发现5种等位基因A-E;同普通牛A-FABP基因序列比对发现6处SNPs,其中第4外显子区存在c.4222A>G的同义突变;3'-UTR区c.*94T>A只存在于牦牛群体,是其区别于普通牛的遗传特征之一。各等位基因在群体间分布差异较大,其中天祝白牦牛只发现3种等位基因,而青海牦牛发现4种等位基因,这可能与牦牛类群的地域分布及选育程度有关。3类群牦牛A-FABP基因检测位点表现为中度多态(PIC为0.29～0.36),有效等位基因数较高,可作为潜在的牦牛肉质性状分子标记位点。

北京油鸡和矮脚鸡心脏型、脂肪型脂肪酸结合蛋白基因多态性的研究

根据不同物种间同一基因核苷酸序列的保守性及相似性,设计特异性引物,利用聚合酶链式反应技术(PCR),扩增鸡心脏型脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因第二内含子序列;根据已经发表的鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白(A FABP)基因mRNA序列,设计特异性引物,扩增鸡A FABP基因第三内含子序列。选用HhaⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、XmnⅠ和HindⅢ8种限制性内切酶对扩增产物分别进行单酶切,发现H FABP基因第二内含子HhaⅠPCR RFLP及A FABP基因第三内含子HinfⅠPCR RFLP。

中国环颈雉脂肪型脂肪酸结合蛋白基因遗传特性研究

采用PCR-SSCP方法检测中国环颈雉脂肪型脂肪酸结合蛋白基因的多态性,探索中国环颈雉脂肪型脂肪酸结合蛋白的遗传特性,为中国环颈雉的育种提供理论依据。结果表明,在中国环颈雉群体脂肪型脂肪酸结合蛋白基因4个位点上均检测出多态性,存在3种基因型,分布极显著地偏离了Hardy-Weinberg平衡,分析得到16种单倍型、21种复合单倍型。

鸭脂肪酸结合蛋白基因的克隆和序列多态性分析

根据鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因序列设计1对引物对鸭基因组进行PCR扩增,将扩增出的475 bp片段进行克隆和测序,序列分析表明该基因片段包含部分外显子2、3和完整的内含子2序列,与鸡、鹅、猪的A-FABP基因分别有84%、94%和77%的同源性。在此基础上又设计3对引物利用PCR-SSCP方法对获得的序列进行多态性研究。结果引物P3在樱桃谷鸭、山麻鸭等品种中发现4处单碱基突变,分别为:241处“A-T”突变;243处的“T-C”突变;258处的“T-C”突变;299处的“C-T”突变。这些点突变共产生了3种基因型,且基因型分布在各鸭品种间有显著差异。

MiR-24对3T3-L1脂肪细胞分化及脂肪型脂肪酸结合蛋白表达的调节作用

目的探讨microRNAs对脂肪细胞分化过程的调节作用分子机制及其对脂肪特异性基因——脂肪型脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein,FABP4)表达的影响。方法用microRNAs微阵列分析法筛选和鉴定3T3-L1脂肪细胞分化相关性microRNAs,构建脂肪细胞分化相关性micro-RNAs的高表达质粒,通过脂质体介导转染3T3-L1前体脂肪细胞,观察脂肪相关性microRNAs对脂肪细胞分化过程的影响,Westernblot和RT-PCR分别检测FABP4蛋白及其mR-NA在脂肪细胞分化过程中的表达变化。结果3T3-L1脂肪细胞分化过程中microRNA表达谱发生明显改变,其中35个microRNAs下调,miR-24最明显;17个microRNAs上调,miR-21最明显;用不同脂肪相关性microRNAs转染3T3-L1前体脂肪细胞并高表达后,发现miR-24明显抑制脂肪细胞的分化与成熟,而miR-21则无影响;miR-24明显抑制FABP4蛋白表达,但对其mRNA无影响,miR-21对FABP4的蛋白和mRNA表达都没有影响。结论3T3-L1脂肪细胞分化过程中存在脂肪细胞分化相关性microRNAs;miR-24脂肪细胞分化过程及其脂肪特异蛋白FABP4表达有重要的调节作用。

心脏型脂肪酸结合蛋白基因多态性在湖北白猪中的初步研究

利用PCR-RFLP技术,对心脏型脂肪酸结合蛋白基因3个位点在湖北白猪中的的多态性进行了初步研究。结果表明,(1)在HinfⅠ-RFLP位点上,湖北白猪与报道的外来猪种和地方猪种的检测结果不同,全部为HH纯合子型;(2)在HaeⅢ-RFLP位点上,湖北白猪主要为dd型,d等位基因频率为0.947;(3)在Msp Ⅰ-RFLP位点上,主要为aa型,a等位基因频率为0.615。检测结果为进一步分析H-FABP基因在湖北白猪中的遗传变异及与肌内脂肪含量的关系和该分子标记在湖北白猪育种中的应用,开展湖北白猪优质系选育及优质猪配套组合的筛选奠定了基础。

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因在家蚕细胞及幼虫中的表达

目的： 在家蚕细胞和幼虫中表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（ Ｓｊ１４） 基因。方法： 将该基因克隆于昆虫病毒转移载体ｐ Ｂａｃ Ｐ Ａ Ｋ Ｈｉｓ１ 中， 再与修饰的家蚕核型多角体病毒（ Ｂｍ Ｎ Ｐ Ｖ） 线性化 Ｄ Ｎ Ａ 共转染家蚕细胞，经体内重组得重组病毒 Ｂｍ Ｓｊ１４ ， 再将 Ｂｍ Ｓｊ１４ 感染家蚕细胞和幼虫以表达 Ｓｊ１４ ， 用 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ测定表达产物的抗原性。结果： Ｂｍ Ｓｊ１４ 感染家蚕细胞和幼虫后 Ｓｊ１４ 获得较高表达； 表达产物ｒ Ｓｊ１４ （ Ｈｉｓ） 为１８ｋ Ｄａ 的融合蛋白， 在家蚕细胞中的产量约为１００ μｇ／１ ×１０６ 细胞， 在培养上清中产量为３３ μｇ／ｍｌ； 在家蚕血淋巴中得量为４ ｍｇ／ｍｌ； 在家蚕幼虫组织的得量为４６ ｍｇ／ｇ 组织。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 显示ｒ Ｓｊ１４ （ Ｈｉｓ） 具有较高抗原性。结论： Ｓｊ１４ 在家蚕细胞和幼虫中获得高效表达且表达产物具有较高抗原性。

鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆和测序分析

根据哺乳动物脂肪酸结合蛋白基因序列设计一对引物对鸡基因组进行PCR扩增 ,将 16 3bp扩增片段进行克隆和测序 ,并与猪的脂肪酸结合蛋白 (fattyacidbindingprotein ,FABP)基因序列进行同源性比较 ,该基因片段与猪的心脏脂肪酸结合蛋白 (heartfattyacidbindingprotein ,H FABP)基因有 6 8%的同源性 ,与猪的脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocytefattyacidbindingprotein ,A FABP)基因有 75 %的同源性 ,演绎成氨基酸之后与猪的脂肪型脂肪酸结合蛋白相应的氨基酸有 75 %的同源性。

脂肪酸结合蛋白及其主要家族基因的研究进展

脂肪酸结合蛋白(FABPs)是胞内脂质结合蛋白超家族成员,存在于脊椎动物和非脊椎动物的细胞内,在细胞内长链脂肪酸的摄取、转运及代谢调节中发挥着重要作用。其中心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)是该家族中较常见的4种,分别在不同组织中表达。本文对FABPs的研究概况及该家族主要基因的结构、染色体定位、遗传多样性与性状之间的关系进行论述。

猪心脏脂肪酸结合蛋白基因多态性检测及与肉质性状的关联分析

随着人们生活水平的提高,对肉品质的要求也越来越高。在影响猪肉品质的众多因素中,遗传因素起到了很重要的作用。心脏脂肪酸结合蛋白基因(H-FABP)作为影响猪肉质性状的重要候选基因,曾在多个猪种上进行研究。本实验以3个安徽地方品种和1个杂交品种为材料(圩猪、皖南花猪、皖南黑猪、皖南黑猪与巴克夏的二元杂),将各品种的DNA分别混池,通过PCR扩增H-FABP基因的5′端调控区和全部4个外显子,进行测序检测SNPs,分别在5′端调控区和第2外显子各检测到1个SNP。这两个SNP位点与粗蛋白质、总脂肪、游离脂肪和16种氨基酸含量表型值关联分析表明,5′端调控区的SNP多态性与全部19个性状的关联结果未达显著水平(P>0.05),第2外显子处SNP多态仅与谷氨酸含量显著关联(P<0.05)。

草鱼脂肪酸结合蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据GenBank上已发表的其他物种的脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein,FABP)基因序列设计1对引物,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)cDNA文库中扩增出脂肪酸结合蛋白基因,定向克隆于表达质粒载体pET32A中构建成pET32A-FABP重组体,将重组体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,以终浓度1 mmol·L-1的IPTG对其进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE电泳分析表明,与阴性对照相比,阳性克隆在分子量33 kDa处有1条明显的蛋白带,大小与预期结果一致.经光密度分析可知,目的蛋白约占总可溶性蛋白的49.5%.这为进一步研究脂肪酸结合蛋白生物学特性以及FABP基因对脂肪代谢调控规律奠定了基础.

鸡细胞外脂肪酸结合蛋白基因编码区的单核苷酸多态与腹脂性状的相关研究

以明星肉鸡和丝毛乌骨鸡杂交产生的F2鸡群为实验材料,以鸡细胞外脂肪酸结合蛋白基因为影响鸡脂肪性状的候选基因,对该基因编码区和部分内含子用PCR—SSCP(单链构象多态)法进行单核苷酸多态性检测.其中在检测的内含子中有3处碱基突变;在第5外显子中有一处沉默突变.对鸡腹脂性状进行最小二乘分析,结果表明第9对引物扩增的具有HH型基因片段的鸡与GG,II型相比有较低的腹脂重和腹脂率(P<0.001),表明该基因对于鸡腹脂蓄积具有很大的影响或与控制腹脂性状的主基因连锁.

猪心脏脂肪酸结合蛋白基因PCR-RFLP分子标记研究

利用PCR-RFLP分子标记技术,检测了杜洛克、长白、大白、内江、荣昌、汉江黑、汉白、八眉和野猪共计265头猪心脏脂肪酸结合蛋白基因5′上游区和第二内含子区的遗传变异.结果表明,在Hinfl-RFLP位点上,上述猪种和野猪均存在多态性,等位基因H的频率分别为0.750 0,0.718 8,0.916 7,0.333 3,0.125 0,0.690 9,0.116 7,0.850 0和0.937 5;除汉江黑猪(P＜0.05)和野猪(P＜0.01)外,其余的猪种基因频率和基因型频率都处于Hardy-Weinderg平衡状态(P＞0.05);大白、八眉、汉江黑、汉白和野猪表现为低度多态(PIC＜0.25),杜洛克、长白、内江和荣昌猪为中度多态性(0.25＜PIC＜0.5);而在HaeⅢ-RFLP和MspI-RFLP位点上,仅内江猪、荣昌猪、汉江黑猪和八眉猪为单态.

日本血吸虫大陆株脂肪酸结合蛋白SjFABPc编码区基因的体外扩增及克隆

目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（SjFABPc）抗原的编码区基因序列，将其克隆到真核表达质位pcDNA3中，为进一步对其进行核酸疫苗研究奠定基础。方法特定寡核苷酸引物的设计与合成；异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法分离日本血吸虫成虫RNA，RT－PCR扩增目的基因；分子克隆常规操作将扩增产物亚克隆至中间载体pUC18中，然后走向克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果RT－PCR特异性扩增出SjFABPc编码区基因序列，其片段大小为440hp；经酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pUC－SjFABPc和pCD－SjFABPc中含有所扩增的基因序列。结论RT－PCR扩增的SjFABPc抗原编码区基因序列与预期长度相村合；成功地构建了含目的基因的真核表达质粒pCD－SjFABPc。从而，为进一步对其进行DNA免疫系列研究工作奠定了基础。

脂肪酸结合蛋白、载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病并发冠心病的关系

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者脂肪酸结合蛋白(FABP2)及载脂蛋白E(ApoE)与冠心病(CHD)的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-PFLP)技术分别检测T2DM并发CHD组及T2DM非CHD组FABP2、ApoE基因型,并检测T2DM并发CHD组不同等位基因携带者血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HLD-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。结果T2DM并发CHD组FABP2A/T突变频率高于非冠心病组(P<0.05),T等位基因携带者与A等位基因携带者相比TG、TC、LDL-C浓度升高,血HDL-C浓度降低,有显著性差异(P<0.05);T2DM并CHD组ε4等位基因频率明显高于对照组(P<0.01),ε4等位基因携带者与ε3等位基因携带者相比TC、LDL-C浓度升高,HDL-C浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05),FABP与ApoE基因连锁分析,FABP2T基因和ApoEε4基因连锁时,T2DM并发CHD的几率增加(P<0.05)。结论FABP2T基因及ApoE/ε4等位基因增高T2DM并发CHD的遗传易感性。

腹膜透析患者血清脂肪型脂肪酸结合蛋白、腹型肥胖及糖脂代谢相关性研究

目的探讨腹膜透析患者血清脂肪型脂肪酸结合蛋白(AFABP)与糖脂代谢的相关性。方法检测20例非糖尿病腹膜透析患者(腹膜透析组)和20例健康者(健康组)的空腹AFABP、空腹胰岛素、空腹血糖、血脂、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及身体质量指数(BMI),计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、腰围身高比值(WHtR),并将AFABP与上述指标进行相关性分析。结果腹膜透析组空腹AFABP、HOMA-IR、hs-CRP、甘油三酯(TG)、脂蛋白A(Lpa)、低密度脂蛋白(LDL)水平均较健康组显著升高,AFABP水平与空腹血糖(r=0.512,P=0.001)及HOMA-IR(r=0.392,P=0.018)呈正相关,与WHtR呈负相关(r=-5.14,P=0.024)。结论腹膜透析患者主要表现为腹型肥胖,存在不同程度的糖脂代谢紊乱,血清AFABP水平可作为监测腹膜透析患者糖代谢异常的指标之一。

藏绵羊脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR、T-A克隆技术获得了藏绵羊H-FABP基因,并对克隆序列进行分析.结果显示,藏绵羊H-FABP编码基因全长402bp,编码133个氨基酸.将藏绵羊H-FABP基因及氨基酸序列分别与Gene Bank中公布的山羊、水牛、家牛、野牦牛、猪、马、狗7种动物进行序列一致率比对,结果显示,藏绵羊与所选的7种动物的H-FABP基因序列一致率在90.8%～99.5%之间,H-FABP氨基酸序列一致率在93.2%～100%之间.其中,藏绵羊与藏山羊H-FABP基因存在2个位点核苷酸差异:114位碱基位点A→G和第129位碱基位点T→C,但两个位点的核苷酸差异均为同义密码子,藏绵羊与山羊H-FABP氨基酸无差异.

猪脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因BsmI位点多态性与肌内脂肪含量的相关研究

本研究利用PCR-RFLPs标记技术,对中国地方猪种雅南猪、大河猪、培育品种大河乌猪以及三元杂交群体DLY共113头个体的脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因的内含子Ⅰ区域进行了分析研究,发现BsmΙ酶切位点具有多态性,并分为3种基因型(即AA、BB和AB型),通过构建固定效应模型,分析了基因型与肌内脂肪含量的关系。结果表明:基因型AA的肌内脂肪含量极显著的高于基因型AB和BB(P<0.01)。

凡纳滨对虾脂肪酸结合蛋白基因全长cDNA的克隆及序列分析

克隆了凡纳滨对虾脂肪酸结合蛋白基因全长cDNA并进行了序列分析。该基因由1042bp的碱基组成,开放阅读框长411bp,编码由136个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在113bp(5'端)和518bp(3'段)的非翻译区。聚类分析表明,凡纳滨对虾脂肪酸结合蛋白氨基酸序列与斑节对虾脂肪酸结合蛋白紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为刀额新对虾、意大利蜜蜂、斑马鱼、大西洋鲑、鸡、猪和人。通过半定量RT-PCR对该基因在不同组织的表达分析表明,该基因在抗IHHNV对虾肠、胃、肝胰腺和肌肉组织中表达较高,在心肌中表达较低,在眼柄中不表达。比较该基因在抗IHHNV对虾和IHHNV易感对虾心、肝胰腺、肠、胃、眼柄和肌肉组织表达发现,该基因在两种对虾心、肠、胃和肌肉组织中的表达无明显差异,但在肝胰腺中抗IHHNV对虾的表达量明显高于IHHNV易感对虾的表达量,说明该基因参与抗性对虾抑制IHHNV感染的免疫过程。