脂肪干细胞基质胶在糖尿病创面治疗中的研究进展

随着糖尿病发病率的增加,由慢性持续性高血糖所引起的难愈性创面长期困扰着糖尿病患者。脂肪细胞外基质/基质血管组分凝胶(SVF-gel)中因含有高度浓缩的细胞外基质和基质血管组分(SVF),在为细胞及细胞因子功能的发挥提供最适微环境的同时,具有促进创面血管新生、抑制炎症反应和刺激上皮细胞增殖分化等功能,最终达到修复难愈性创面的目的。文章主要就SVF胶的制备、成分以及在糖尿病创面治疗中的机制和应用进行综述。

水飞蓟宾通过调节MEK/ERK通路和基质金属蛋白酶活性抑制小鼠3T3-F442A前脂肪细胞的成脂分化

目的研究水飞蓟宾(Silibinin)对小鼠3T3-F442A前脂肪细胞分化的影响及作用机制。方法采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测0~400μmol/L的Silibinin在24、48、72 h对3T3-F442A脂肪细胞增殖的影响;通过油红O染色法观察Silibinin对3T3-F442A脂肪细胞脂肪生成的影响;采用RT-qPCR技术、Western blot和ELISA实验检测Silibinin对3T3-F442A脂肪细胞分化相关转录因子CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)α、C/EBPβ、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂肪细胞蛋白2(aP2)、脂肪生成相关血管内皮生长因子(VEGF)-α和VEGF受体2(VEGFR-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)和磷酸化MEK(p-MEK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)表达的影响。结果MTT实验显示,与对照组相比,经过100、200、400μmol/L Silibinin处理后,3T3-F442A前脂肪细胞的细胞增殖率下降(P<0.001);油红O染色实验显示,与对照组相比,160μmol/L Silibinin实验组中的细胞红色脂滴堆积明显减少;RT-qPCR实验显示,与对照组相比,经过160μmol/L Silibinin处理后的3T3-F442A脂肪细胞,C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、aP2、VEGF-α、VEGFR-2、MMP-2和MMP-9的mRNA表达量下调(P<0.001);Western blot实验显示,与对照组相比,经过160μmol/L Silibinin处理后的3T3-F442A脂肪细胞,C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ和aP2的蛋白表达量下调(P<0.001),p-MEK/MEK和p-ERK/ERK蛋白的磷酸化水平下调(P<0.001);ELISA实验显示,经过160μmol/L Silibinin处理后的3T3-F442A脂肪细胞,细胞上清液中的MMP-2和MMP-9的蛋白浓度下调(P<0.001)。结论Silibinin通过抑制MEK/ERK通路和MMP活性抑制3T3-F442A前脂肪细胞分化与脂肪生成。

温度护理干预在脂肪来源干细胞基质胶面部填充术中的应用

目的:探讨温度护理干预对脂肪来源干细胞基质胶面部填充术效果的影响。方法:选取2019年1月-2020年12月于西安交通大学第一附属医院接受脂肪来源干细胞基质胶(Stromal vascular fraction-gel,SVF-gel)注射面部脂肪填充术20例患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和干预组,各10例。对照组采用常规护理,干预组实施温度护理干预,比较两组护理效果。结果:两组体温比较,差异有统计学意义(F组间=371.431,P组间<0.001);T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)干预组体温均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);两组体温均有随时间变化的趋势(F时间=230.426,P时间<0.001);分组与时间有交互效应(F交互=55.439,P交互<0.001)。干预组寒战发生率为10.00%,对照组寒战发生率70.00%,干预组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组热舒适度出PACU时评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预组患者护理满意率为100.00%明显高于对照组的50.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:温度护理干预可有效保持SVF-gel移植术中患者体温的恒定,提高患者舒适度和护理满意度,减少了低温和寒颤发生。促进了患者早日康复。

黄芪-当归6种活性成分配伍对大鼠血管外膜成纤维细胞合成细胞外基质的影响

目的观察黄芪-当归活性成分阿魏酸(ferulic acid,FA)、毛蕊异黄酮苷(calycosinglucoside,CG)、芒柄花素(formononetin,FMN)、黄芪皂苷Ⅰ(astragaloside Ⅰ,ASⅠ)、黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,ASⅣ)、毛蕊异黄酮(calycosin,CAL)配伍对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞(vascular adventitia fibroblasts,VAF)合成细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法以AngⅡ诱导VAF增殖模型,采用目标成分“敲除/敲入”的方法,将细胞分为空白组、模型组、IC10配伍组、某一活性成分敲除组、某一活性成分敲入组,分别检测细胞及培养液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,COLⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen type Ⅲ,COLⅢ)含量,并检测细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达,研究黄芪-当归6种活性成分配伍对VAF合成ECM的影响。结果黄芪-当归6种活性成分配伍抑制VAF合成FN、LN、COLⅠ、COLⅢ(P<0.01)。FA、CG、FMN、ASⅠ敲入后抑制FN、LN合成的作用增强(P<0.05或P<0.01),FA、CAL、FMN、ASⅠ、ASⅣ敲入后抑制COLⅠ、COLⅢ合成的作用增强(P<0.05或P<0.01)。黄芪-当归6种活性成分配伍促进MMP2、TIMP2的表达(P<0.01),FA、CG、FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进MMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01),FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进TIMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01);黄芪-当归6种活性成分配伍抑制TGF-β1表达(P<0.05),FA、CG、FMN敲入后抑制TGF-β1表达的作用增强(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪-当归6种活性成分配伍可抑制VAF合成ECM,其作用可能是通过调节TGF-β1、MMP2、TIMP2发挥的。

基质血管成分与体外扩增的脂肪来源干细胞促进移植脂肪成活的对比研究

目的:比较血管基质成分(st romal vascul ar fract i on,SVF)与体外扩增的脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st emcel l s,ASCs)对移植脂肪成活的促进作用。方法:用手术方法切取家兔腹股沟脂肪,进行ASCs体外分离培养;取第3代ASCs分别进行成脂、成骨诱导实验,CD29和CD31流式鉴定;制备SVF,进行CD29和CD31流式鉴定;脂肪移植裸鼠实验分为3组:SVF、ASCs、和空白对照组(DMEM/F12),每组4只裸鼠,沿背部脊柱两侧对称部位4个移植位点,每组共16个注射移植位点,每点0.3ml脂肪颗粒(adi pose granul e,AG)+0.2ml细胞成分;术后4m时取材称重、固定行HE染色观察移植脂肪组织结构,行CD31免疫组化染色观察新生血管及其密度。结果:家兔ASCs体外分离培养成功,为贴壁生长,第3代细胞形态均呈长梭形。成脂诱导实验油红O染色显示形成脂滴,成骨诱导实验茜素红染色显示形成钙化结节。流式鉴定显示SVF:CD29:17.0%,CD31:1.3%;ASCs:CD29:96.2%,CD31:3.8%。SVF、ASCs和空白对照组各组移植脂肪成活量分别为0.2096±0.0024g,0.1798±0.0033g,0.1350±0.0020g,两两比较差异均有统计学意义,P<0.05。HE染色显示SVF组移植脂肪成活较好,组织结构完整,脂滴大小均一,可见脂肪组织中间有丰富的血管存在;ASCs组移植脂肪成活尚可,组织结构尚完整,脂滴大小一般均一,可见脂肪组织中有结缔组织纤维间隔和新生血管形成;空白对照组结缔组织纤维间隔明显增多,脂滴大小不一,有少量较大空泡形成。各组移植脂肪新生血管密度分别32.6±2.1条/mm2,29.3±1.6条/mm2,23.3±1.9条/mm2,两两比较均有统计学意义,P<0.05。结论:新鲜的干细胞成分SVF比体外扩增的ASCs能更好的促进移植脂肪成活。

脂肪组织中血管基质部分(SVF)的细胞成分及应用

目前．脂肪组织因其在能量调控、炎症反应和免疫应答方面的作用已被认为是一个内分泌器官。此外，它还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一，而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的血管基质部分中。脂肪组织中的血管基质部分（SVF）是脂肪组织经胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞后得到的。正因为SVF易于从脂肪组织中提取并含有丰富的、可塑性极强的脂肪组织来源的间充质干细胞（Adipose tissue—derived mesenchymal stem cells、ASC）。这使得揭示SVF的细胞成分（以下简称为SVFc）及阐明其相应的生物学功能显得意义深远。

脂肪组织及其衍生成分在创面修复和血管化中的作用

背景:软组织损伤修复过程中,局部的血管化对创面愈合和功能恢复至关重要。脂肪组织被认为是人体最大的干细胞来源库,目前已开发出多种不同的脂肪成分被用于研究和治疗,其促进血管再生和软组织修复的能力被广泛研究。目的:综述血管化在软组织损伤修复中的研究进展,总结脂肪组织及其衍生成分的制备方法及其在血管化和软组织损伤修复中的应用。证实脂肪组织及其衍生成分在血管和软组织工程中具有卓越的研究价值和临床应用前景。方法:利用PubMed、Web of Science和CNKI数据库检索2010年1月至2023年2月发表的相关文献,中文检索词为“软组织修复,伤口愈合,血管化,血管新生,脂肪组织,间质血管成分细胞,脂肪源微血管片段,纳米脂肪,脂肪干细胞基质胶”,英文检索词为“soft tissue repair,wound healing,vascularization,angiogenesis,adipose tissue,stromal vascular fraction,adipose tissue-derived microvascular fragment,nanofat,adipose extracellular matrix/stromal vascular fraction gel”,并纳入少量年份久远的经典文献。通过阅读标题和摘要进行初筛,排除与文章主题不相关的文献,最终纳入69篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)创面愈合是一项重要的生理过程,主要发生在组织受到损伤时,如创伤、手术、烧伤、肿瘤、感染以及血管性疾病引起的组织损伤缺损等;(2)创伤部位足够的血管化对组织修复、局部稳态的重新构建和功能恢复至关重要;(3)脂肪组织被认为是人体最大的干细胞来源库,目前已有多种不同的脂肪成分被用于研究和治疗;(4)由于其本身具有的成分和制备优势,脂肪组织将在未来的组织工程研究和治疗中继续扮演重要角色。

自体脂肪基质细胞胶对剖宫产术后腹部切口愈合的效果评价

目的观察局部皮下注射自体脂肪基质细胞胶对剖宫产术后腹部切口的愈合效果。方法随机选取行剖宫产术的产妇120例为研究对象,按照1∶1比例随机分为治疗组和对照组,各60例。两组均采用剖宫产进行分娩,治疗组术后于切口周围局部皮下注射自体脂肪基质细胞胶治疗,对照组术后常规护理。对比两组患者术后住院天数、术后42 d瘢痕宽度、术后3个月及6个月的瘢痕指数、术后切口愈合级别以及患者满意度。结果治疗组术后住院天数短于对照组,术后3个月、6个月瘢痕指数评分均低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组术后42 d的瘢痕宽度及术后切口愈合级别比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗组患者的满意度得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论局部皮下注射自体脂肪基质细胞胶可减少剖宫产术后腹部切口瘢痕形成,有助于促进伤口愈合,缩短患者的住院天数,提高患者满意度。

基质金属蛋白酶-9、脂肪细胞因子chemerin水平对卒中后认知功能障碍的诊断效能分析

目的:分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、脂肪细胞因子chemerin水平对卒中后认知功能障碍(PSCI)的诊断效能。方法:回顾性分析2019年1月至2020年10月该院收治的90例缺血性卒中患者的临床资料,卒中后随访6个月,将发生认知功能障碍的32例患者设为PSCI组,将未发生认知功能障碍的68例患者设为普通卒中组(IS组)。另选取同期该院体检的50名健康人为对照组,比较三组血清MMP-9、chemerin水平,采用Pearson相关性分析法分析二者与PSCI的相关性,并应用受试者工作特征(ROC)曲线分析MMP-9、chemerin水平对PSCI的诊断价值。结果:PSCI组、IS组血清MMP-9、chemerin水平明显高于对照组,且PSCI组高于IS组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,血清MMP-9、chemerin水平与PSCI发生率呈正相关(r>0,P<0.05)。血清MMP-9、chemerin水平诊断PSCI的曲线下面积分别为0.852、0.835,均大于0.7,具有一定的诊断价值。结论:血清MMP-9、chemerin水平与缺血性卒中患者PSCI发生率呈正相关,二者诊断PSCI的AUC均大于0.7,可用于PSCI的辅助诊断。

脂肪来源的基质血管成分细胞辅助脂肪移植在面部年轻化中的应用

目的探讨脂肪来源的基质血管成分细胞(SVF)在面部年轻化中的应用效果。方法选取2015年4月至2016年11月期间来长春海峡医学美容医院改善面部年轻化的40例女性为研究对象,按照简单随机抽样法分为治疗组和对照组,每组20例,两组患者均接受常规治疗,治疗组接受SVF辅助脂肪移植治疗,对照组接受单纯脂肪移植,比较两组患者面部除皱及并发症情况,并采用专业的皮肤图像分析系统对患者治疗前后的皱纹,纹理进行监测,并对所有数据进行统计学分析。结果治疗前,治疗组的老化评分为(2.95±0.308)分,皱纹评分为(65.75±0.654)分,纹理评分为(52.48±0.356)分,斑点评分为(63.56±0.635)分;对照组老化评分为(2.95±0.224)分;皱纹评分为(64.63±0.864)分,纹理评分为(51.56±0.421)分,斑点评分为(35.44±0.345)分。治疗后,治疗组老化评分为(0.95±0.515)分,皱纹评分为(41.65±0.425)分,纹理评分为(30.46±0.451)分,斑点评分为(49.56±0.654)分;对照组老化评分为(2.05±0.510)分,皱纹评分为(48.73±0.542)分,纹理评分为(35.44±0.345)分,斑点评分为(56.35±0.541)分。治疗前后对照组的老化评分和斑点评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗前后对照组的皱纹评分、纹理评分比较差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗后治疗组患者的老化评分、皱纹评分、纹理评分均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前后的斑点评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组面部老化评分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组面部斑点评分、皱纹评分和纹理评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SVF细胞辅助脂肪移植技术一定程度上可改善皮肤状态,尤其在皮肤斑点及皮肤毛孔的改善方面效果更好。

酒精性脂肪肝细胞外基质成分及其降解酶测定的临床意义

酒精是引起肝损伤、肝纤维化的重要因素之一，我国酒精性肝病(ALD)发生率虽不如西方国家高，但并非少见，且近年来有上升趋势。临床上ALD以脂肪肝最为常见，它可经肝纤维化发展为肝硬变。有关酒精性脂肪肝(AFL)时细胞外基质(ECM)

大黄素对体外大鼠骨髓基质细胞向脂肪细胞方向分化的影响

目的观察大黄素对骨髓基质细胞向脂肪细胞方向分化的影响,以探讨大黄素对骨质疏松发生时伴随的脂肪增多现象中所起的作用。方法16只3mon龄SD大鼠随机分成4组:对照组、激素组、复方碳酸钙治疗组、大黄素治疗组。给药90d后收集骨髓基质细胞。应用油红O染色法及RTPCR的方法判断是否成功诱导骨髓基质细胞向脂肪细胞方向分化,同时观察大黄素对骨髓基质细胞成脂分化后脂肪细胞的数目和脂蛋白脂酶mRNA表达的影响。结果体内灌胃给予泼尼松的激素组大鼠的骨髓基质细胞体外培养时分化为脂肪细胞的能力明显增强。复方碳酸钙组和大黄素组大鼠骨髓基质细胞分化为脂肪细胞的能力较激素组明显下降,其中大黄素下调脂蛋白脂酶mRNA表达的作用强于复方碳酸钙。结论体内给予糖皮质激素后,骨髓基质细胞体外培养时自发向脂肪细胞方向分化的能力和经体外诱导后向脂肪细胞方向分化的能力都明显增强,大黄素可能有对抗糖皮质激素成脂诱导的作用。

人体脂肪基质细胞分离培养及其成骨潜能

目的 :分离人体脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型。方法 :将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行机械分割 ,通过Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪基质细胞 ,在BGJb 培养基中原代培养 10d ,消化传代后用含体积分数 10 %FBS及 10 - 8mol/L地塞米松 ,50mg/L左旋抗坏血酸 ,10nmol/L维生素D3 ,10mmol/Lβ 磷酸甘油钠的DMEM /F12培养基中诱导培养 14d ,观察细胞形态 ,绘制细胞生长曲线并对其成骨表型进行鉴定。结果 :脂肪基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长 ,其中的成体干细胞经诱导培养后体积明显增大 ,胞核大面圆 ,胞浆丰富 ,群体倍增时间为 66h。Gomori萘酚磷酸酯法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒 ,vonKossa染色表明聚集的细胞团能形成矿化结节。结论 :脂肪基质细胞中的成体干细胞经过矿化诱导培养后可向成骨细胞分化 。

脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

目的 研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性 ,为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化 ,以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果 从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞 ,在体外生长形态类似成纤维细胞 ,可以维持在未分化状态稳定增殖 ,体外扩增可超过 10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化 ,分化的细胞早期表达巢蛋白 ,后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝 ,在最适合的诱导条件下约 60 %～85 %的细胞表达这两种神经元的标志物。

角膜基质细胞诱导分化的脂肪间充质干细胞羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制

背景角膜化学烧伤是致盲眼病之一，先前的各种疗法在临床上的应用均受到一定的限制，而脂肪间充质干细胞（ADSCs）移植疗法受到密切关注。目的观察诱导分化的ADSCs羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制。方法无菌条件下剪取兔角膜，用悬浮基质片法分离并培养兔角膜基质细胞（CSCs）。取兔腹股沟脂肪组织，以酶消化法（质量分数0．25％胰蛋白酶）分离及培养兔ADSCs，并用流式细胞术鉴定ADSCs表面抗原的表达。将CSCs与ADSCs共培养，采用免疫荧光技术和逆转录PCR（RT-PCR）鉴定CSCs诱导后ADSCs向角膜基质样细胞分化的表达，分别将诱导或未诱导的ADSCs种植于羊膜上制备成细胞羊膜片。选择60只新西兰白兔，右眼用浸有质量分数1％NaOH的滤纸贴敷于角膜中央50S制备兔角膜碱烧伤模型，按随机数字表法将模型眼随机分为诱导ADSCs＋羊膜移植组、未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组及模型组。分别于术后1周、2周和1个月在裂隙灯显微镜下观察各组兔模型眼角膜的混浊程度和新生血管形成情况，并对角膜炎症进行评分，采用ELISA法检测术后1个月角膜组织匀浆中CD45、叮干扰素（IFN-γ）、白细胞介素．10（IL-10）蛋白及房水中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的质量浓度。结果从脂肪组织分离培养的ADSCs表面抗原CDl05、CD29、CD44的阳性表达率分别为90．23％、88．56％、98．88％；分离培养的CSCs波形蛋白呈阳性表达；CSCs与ADSCs共培养后多数细胞双标记染色阳性。苏木精一伊红染色显示，ADSCs种植于羊膜后生长良好。术后1个月，模型组角膜混浊呈瓷白色，新生血管面积最大，而诱导ADSCs＋羊膜移植组角膜透明，新生血管最少。术后1个月，诱导ADSCs＋羊膜移植组、未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组兔角膜混浊程度评分分别为1．65±0．18、2．05±0．17、2．68±0．25和2．904-0．18，新生血管面积分别为（10．59±1．78）、（22．58±1．63）、（37．98±1．90）和（45．37±1．65）mm^2，术后1周、2周及1个月4个组间角膜混浊程度评分和角膜新生血管（CNV）面积的差异均有统计学意义（F=280．826、330．172、465．707，均P=0．000；F=60．020、670．811、1510．231，均P=0．000），其中诱导ADSCs＋羊膜移植组角膜炎症评分睨显低于其他3个组，CNV面积小于其他3个组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。术后1个月，4个组间角膜组织匀浆中CD45、IL-10、IFN-γ质量浓度的差异均有统计学意义（F=916．545、1739．358、462．134，均P=0．000），其中与未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组比较，诱导ADSCs＋羊膜移植组CD45、IFN-γ质量浓度明显降低，而IL-10质量浓度明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。4个组兔房水中VEGF质量浓度的总体比较差异有统计学意义（F=129．126，P=0．000），其中诱导ADSCs＋羊膜移植组兔房水中VEGF质量浓度明显低于未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论CSCs诱导的ADSCs羊膜片移植法治疗兔角膜碱烧伤有较好的疗效，其作用机制可能是ADSCs在CECs诱导下分化为具有角膜上皮细胞特征的细胞，同时羊膜可减轻免疫炎症反应，抑制新生血管形成。

脱细胞异体真皮基质与人脂肪干细胞的生物相容性

背景:脱细胞异体真皮基质具有优良的生物相容性和组织细胞诱导功能。目的:评价人脂肪干细胞与脱细胞异体真皮基质的生物相容性。方法:取健康成年人吸脂术后的脂肪组织分离脂肪干细胞,并行原代与传代培养,传至第3代,将细胞与脱细胞异体真皮基质联合体外培养3,7d,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架材料上的黏附、生长及增殖情况,并计算细胞在材料上的黏附率;XTT比色法检测细胞的生长增殖情况。结果与结论:脂肪干细胞在支架材料上分布均匀,24h内细胞开始伸展、黏附,二三天完全伸展变形,以梭形为主,呈网状排列;随着培养时间延长,支架上的细胞逐渐增多;人脂肪干细胞细胞与脱细胞异体真皮基质混合培养后平均黏附率为95.03%,并保持正常的生长增殖速度,表明支架对细胞具有良好的黏附性;脱细胞异体真皮基质材料与人脂肪干细胞复合后相容性良好。

脂肪基质干细胞的分离培养及其作为软骨种子细胞的研究

目的研究人体脂肪基质干细胞(ADSC)分离培养的方法,探讨其在体外向成软骨细胞诱导分化的能力。方法取临床吸脂所得脂肪组织,胶原酶消化分离后,接种于培养基中进行原代培养,传至一代时换软骨诱导培养液进行成软骨诱导分化,定期通过阿尔辛蓝染色、天狼猩红染色及免疫组化等方法进行证实。结果ADSC在体外成软骨诱导后,可向软骨细胞分化,经诱导的细胞可分泌软骨细胞特异性的Ⅱ型胶原以及硫酸蛋白多糖。结论在适当诱导条件下,ADSCs有向软骨细胞分化的潜能,为软骨组织工程种子细胞来源的研究提供了新方法。

脂肪基质细胞诱导分化为神经元细胞的实验

背景:寻找合适的种子细胞是移植治疗脑血管疾病及其他中枢神经系统疾病的关键。目的:观察人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元细胞的能力。方法:脂肪组织取自要求去除腹部多余脂肪的健康成人,供者无传染性疾病和内分泌疾病。分离培养脂肪组织来源的基质细胞,采用神经诱导培养基加GM1对其进行诱导培养。倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,免疫组织化学法鉴定神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2的表达情况。结果与结论:①经神经诱导培养基加GM1诱导后,分化后的细胞大部分呈典型的神经元样细胞形态。②倒置相差显微镜下可见,于诱导后1h出现神经巢蛋白表达阳性,5h出现神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2表达阳性。提示脂肪基质细胞可分化为神经元细胞,分化后的神经元细胞具有表达神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2的功能。

人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的探讨人脂肪组织来源的基质细胞(adiposetissue-derivedstromalcells,ADSCs)向神经元样细胞分化的可能性,为神经移植探索新的细胞来源。方法采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs,含血清的培养基进行培养,胰蛋白酶消化传代,采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化,采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果成功培养出ADSCs来源的基质细胞,细胞在体外生长形态类似成纤维细胞,可维持在未分化状态并稳定增殖,体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白,大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和β管蛋白;应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松,可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化,其中0.1%～0.2%的细胞分化为神经元样细胞,40%～50%分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态,并能表达神经元标志物;部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞,并能克服间充质细胞的限制,分化为神经元样细胞,但这种细胞是否为有功能的神经元,还需深入研究。

来源于脂肪组织的基质细胞向成骨细胞分化

目的 :研究来源于脂肪组织的基质细胞体外培养和向成骨细胞分化条件。方法 :常规方法培养脂肪组织来源的基质细胞 ,向成骨细胞分化诱导 ,应用免疫细胞化学方法对细胞进行鉴定 ,碱性磷酸酶法对分化的成骨细胞鉴定。结果 :从成年人的脂肪组织中分离出基质细胞 ,在体外生长形态类似成纤维细胞 ,可以维持在未分化状态稳定增殖 ,体外可持续扩增和传代。在一定的条件下可诱导分化为成骨细胞 ,分化的细胞表达碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原 ,在培养皿中也发现钙化斑。结论 :脂肪组织中存在的基质细胞能分化为成骨细胞 。